Sains Malaysiana 43(4)(2014): 559–566

Kesan Apigenin, Berberin dan Rutin terhadap Metabolisme

Kolesterol pada Sel Kanser Hep G2
(Effect of Apigenin, Berberine and Rutin on Cholesterol Metabolism in Hep G2 Cancer Cell)

MOHD KAMAL NIK HASSAN*, RASADAH MAT ALI, ZULKHAIRI HJ. AMOM, MOHD SHAHIDAN MOHD ARSHAD,
ZAMREE MD SHAH, KHAIRUL KAMILAH ABDUL KADIR & IHSAN SAFWAN KAMARAZAMAN

ABSTRAK
Dalam kajian ini, keupayaan Apigenin, Berberin dan Rutin untuk mengurangkan metabolisme kolesterol pada sel kanser
hepatoma manusia (Hep G2) telah ditentukan. Penilaian sitotoksik Apigenin, Berberin dan Rutin telah dilakukan dengan
mendedahkan Hep G2 kepada Apigenin, Berberin dan Rutin pada kepekatan antara 7.8 sehingga 1000 μg/mL selama
24 jam pada suhu 37oC dan 5% atmosfera CO2. Apigenin, Berberin dan Rutin masing-masing mempunyai kepekatan
perencat 20 (IC20) 7.8, 125 dan 1000 µg/mL. Keupayaan mengurangkan metabolisme kolesterol oleh Apigenin, Berberin
dan Rutin pada Hep G2 telah diuji dengan penyemaian Hep G2 dalam plat 6-telaga. Kumpulan rawatan Apigenin,
Berberin dan Rutin telah dirawat dengan kepekatan 7.8, 31.25 dan 62.5 μg/mL masing-masing dan didedah dengan
lipoprotein ketumpatan rendah (LDL) sebanyak 10 μL. Dalam kumpulan kawalan normal (NC), Hep G2 telah dieram dengan
media kultur sahaja. Sel diinkubasikan dan media telah diambil untuk analisis Apo A1, LCAT, LDLR dan FDFT1 dengan
menggunakan kit. Rutin didapati mampu merendahkan aktiviti HMGR secara signifikan (p<0.05) berbanding kawalan
normal. Apigenin dan Berberin mampu meningkatkan kepekatan APO A1. Ketiga – tiga sampel mampu meningkatkan
kepekatan LCAT pada sel yang dirawat. Selain itu, Apigenin mampu meningkatkan kepekatan LDLR. Keputusan ujian
untuk FDFT1 menunjukkan Berberin dan Rutin merendahkan kepekatan FDFT1 dan berbeza secara signifikan (p<0.05)
berbanding kawalan normal. Penemuan ini menunjukkan bahawa Apigenin, Berberin dan Rutin mempunyai potensi
dalam mengurangkan metabolisme kolesterol dalam sel Hep G2.

Kata kunci: Apigenin; Berberin; metabolisme kolesterol; Rutin

ABSTRACT
In this study, the ability of Apigenin, Berberine and Rutin to reduce cholesterol metabolism in human hepatoma cancer
cell line (Hep G2) was determined. Cytotoxic assessment of Apigenin, Berberine and Rutin were performed by exposing
the Hep G2 to Apigenin, Berberine and Rutin at concentrations ranging from 7.8 to 1000 μg/mL for 24 h at 37oC and
with 5% CO2 atmosphere. The inhibition concentration 20 (IC20) of Apigenin, Berberine and Rutin were 7.8, 125 and 1000
µg/mL, respectively. The ability of reducing cholesterol metabolism effects of Apigenin, Berberine and Rutin on Hep G2
was carried out by seeding the cell in 6-well plates. In the treated groups, Hep G2 was treated with Apigenin, Berberine
and Rutin (7.8, 31.25 and 62.5 μg/mL, respectively) and exposed to 10 µL low density lipoprotein (LDL). In the normal
control (NC) groups, Hep G2 was incubated with culture medium only. The cell was incubated and media was taken for
analysis of Apo A1, LCAT, LDLR and FDFT1 by using kit. Rutin was able to lower down HMGR activity significantly (p<0.05)
compared with normal control. Apigenin and Berberin were able to increase the concentration of APO A1. All the three
samples can increase the concentration of LCAT in treated cells. In addition, Apigenin can increase the concentration of
LDLR. The test results for FDFT1 showed that Berberin and Rutin can lower down FDFT1 concentrations and significantly
different (p<0.05) compared with normal controls. These findings suggested that Apigenin, Berberine and Rutin have
the potential in reducing cholesterol metabolism in Hep G2 cancer cell lines.

Keywords: Apigenin; Berberine; cholesterol metabolism; Rutin

PENGENALAN
Penyakit kardiovaskular seperti aterosklerosis didapati
kian meningkat dalam kalangan penduduk Malaysia
( KKM 2011). Pengambilan makanan berlebihan dan
amalan gaya hidup yang tidak sihat menyumbang
kepada meningkatnya jumlah pesakit kardiovaskular
(McMurray & Stewart 2000). Selain itu, tekanan dalam
menjalani kehidupan seharian contohnya pekerjaan yang
terlalu menekan perasaan dan kesibukan dengan urusan
kerja menyebabkan individu tersebut tidak mengambil
peduli terhadap tahap kesihatan mereka (Leeder et al.
2004). Aktiviti fizikal seperti bersenam yang kurang
dilakukan juga merupakan faktor yang menyumbang
kepada meningkatnya potensi untuk individu tersebut
mendapat penyakit kardiovaskular (Colditz 1999).
Penyakit kardiovaskular mempunyai kaitan yang sangat
560
rapat dengan pemakanan berkolesterol tinggi (Colditz
1999; Conlin 1999).
Kebelakangan ini, terdapat banyak kajian memfokuskan
kepada ekstrak tumbuhan bagi mendapatkan bahan kimia
yang berguna untuk meningkatkan taraf kesihatan manusia
sejagat (Chia et al. 2012; Vadakkemuriyil et al. 2012).
Ekstrak daripada tumbuhan seperti Apigenin, Berberin
dan Rutin didapati amat berguna untuk kesihatan dan
mempunyai nilai perubatan (Kulkarni & Dhir 2010; Ruela-
de-Sousa et al. 2010; Susan 2005; Verma et al. 2012).
Menurut kajian saintifik yang lepas, ketiga-tiga ekstrak ini
mempunyai kaitan dalam pengawalan lemak dan kolesterol
dalam badan manusia (Kulkarni & Dhir 2010; Ruela-de-
Sousa et al. 2010; Verma et al. 2012).
Apigenin (4 ‘,5,7-trihydroxyflavone), flavonoid diet
yang umum dan terdapat dalam jumlah yang banyak dalam
buah-buahan dan sayur-sayuran (Ruela-de-Sousa et al.
2010). Di samping dikenal pasti sebagai flavonoid yang
berpotensi untuk membunuh sel-sel kanser (Caltagirone
et al. 2000), Apigenin juga didapati boleh merencatkan
proses sintesis asid lemak (Wang et al. 1999).
Berberin adalah alkaloid tumbuhan (Imanshahidi &
Hosseinzadeh 2008). Berberin juga dilaporkan banyak
digunakan dalam perubatan Ayurvedic dan Cina (Kulkarni
& Dhir 2010). Ge et al. (2011) menyimpulkan bahawa
berberin hidroklorida mampu mengawal selia transkripsi
gen hepatik yang terlibat dalam metabolisme glukosa dan
asid lemak.
Rutin adalah flavonol glikosida (Nitra et al. 2004).
Rutin tulen adalah hablur berwarna kuning atau kuning-
hijau berbentuk jarum. Rutin terdiri daripada quersetin
dan rutinose disakarida (ramnosa dan glukosa) (Nitra
et al. 2004). Rutin boleh membantu untuk mencegah
aterogenesis dan mengurangkan sitotoksisiti kolesterol
LDL-teroksida (Verma et al. 2012). Rutin juga menstabilkan
vitamin C (Goulas & Manganaris 2012). Rutin boleh
ditemui dalam buah-buahan citrus seperti oren, lemon dan
limau (Chidambara et al. 2012), anggur (Iacopini et al.
2008), beri mulberi dan kranberi (Zhenchang et al. 2012).
Kajian ini dijalankan untuk melihat kemampuan
ekstrak Apigenin, Berberin dan Rutin dalam mengawal
metabolisme kolesterol pada sel hepatoma (Hep G2)
secara in vitro. Antara enzim dan molekul yang terlibat
dalam metabolisme kolesterol yang dikaji adalah HMG
Co-A Redaktase (HMGR), Apolipoprotein A1 (Apo A1),
Kolesterol Lesitin Asiltransferase ( LCAT ), Reseptor
Lipoprotein Ketumpatan Rendah (LDLR) dan Farnesil-
difosfat farnesiltransferase 1 (FDFT1).
BAHAN
Sebatian Apigenin, Berberin dan Rutin telah dibekalkan
oleh Program Kimia, FRIM. Sel kanser Hep G2 telah dibeli
dari American’s Type Cell Culture (ATCC). Pravastatin,
Penisilin-streptomisin, tripan biru, serum janin lembu
(FBS), dimetil sulfoksida (DMSO), 3-4,5 dimetil tiazol-2,
5 difenil tetrazolium bromida (MTT) dan penimbal garam
fosfat (PBS) telah dibeli dari Sigma, Amerika Syarikat.
Instrumen yang digunakan dalam kajian ini adalah
inkubator CO2 (Shelab, Jerman), hemositometer (La
Fontaine, Perancis), pam vakum, pipet pelbagai saluran
(RAININ, USA), pengempar (Hettich, Zentrifugen, Jerman),
takung pemanas air (Jeiotech, Korea), pembaca mikroplat
(UVM 340, Jerman), mikroskop berbalik (Nikon Gerhana
TS100) dan pengempar mikro.
KAEDAH
EKSTRAKSI SEBATIAN APIGENIN, BERBERIN DAN RUTIN
Proses ekstraksi ini dijalankan untuk mendapat sebatian
yang dikehendaki. Sumber sebatian ini adalah sayuran dan
beberapa jenis herba seperti Teh (Camellia sinensis) dan
Patawali (Tinospora crispa). Ekstraksi sebatian Apigenin
telah dijalankan mengikut kaedah Siniša et al. (2000)
dengan beberapa modifikasi. Ekstraksi sebatian Berberin
telah dijalankan mengikut kaedah Tsutomu et al. (1972).
Manakala proses ekstraksi Rutin adalah mengikut kaedah
Kyoung et al. (2005) dengan beberapa modifikasi.
KAJIAN SITOTOKSISITI: PENENTUAN IC20 APIGENIN,
BERBERIN DAN RUTIN
Sel telah dibenihkan dalam plat 96-telaga dalam jumlah
1 × sel 104 setiap telaga. Sel telah dihidupkan dengan
100 μL media RPMI 1640 selama 24 jam dalam inkubator
pada suhu 37oC dan 5% atmosfera CO2. Selepas 24 jam,
sel ini telah ditambah dengan 100 μL media dan didedah
kepada 100 μL Apigenin, Berberin dan Rutin dengan 10
kepekatan yang berbeza. Apigenin, Berberin dan Rutin
telah disediakan 1:2 pencairan bersiri iaitu 1000, 500,
250, 125, 62.5, 31.25, 15.6, 7.8 μg/mL. Kemudian, sel
telah diperhatikan selepas 24 jam. Pada akhir tempoh uji
kaji, asai MTT telah dilakukan ke atas sel. Sebanyak 20 μL
larutan MTT telah ditambah ke setiap plat telaga. Kemudian,
plat diinkubasi dalam inkubator CO2 pada 37oC selama 4
jam. Selepas pengeraman, 100 μL DMSO telah ditambah
kepada setiap telaga untuk melarutkan kristal ungu. Plat
telah dipindahkan kepada pembaca plat dan dibaca pada
570 nm. Graf peratusan sel hidup terhadap kepekatan
Apigenin, Berberin dan Rutin diplotkan dan penentuan IC50
telah dilakukan. Uji kaji telah dilakukan sebanyak tiga kali.
Analisis SPSS telah dilakukan untuk melihat pemerhatian
sitotoksik Apigenin, Berberin dan Rutin kepada Hep G2.
UJI KAJI MELIHAT KEBOLEHAN APIGENIN, BERBERIN DAN
RUTIN DALAM MERENDAHKAN AKTIVITI HMGR
Ujian HMGR dilakukan mengikut kaedah seperti yang
dinyatakan daripada buku panduan yang diberikan
bersama kit (CS1090, Sigma). Secara ringkas, penimbal
asai ditambah ke dalam kuvet. Kemudian, bagi kumpulan
kawalan pravastatin, perencat (pravastatin) telah ditambah

ke dalam kuvet untuk mengawal aktiviti enzim. NADPH
telah ditambah ke dalam kuvet diikuti dengan penambahan
larutan substrat (HMG-CoA) ke dalam kuvet tersebut.
Kemudian, HMG-CoA redaktase (HMGR) telah ditambahkan
dan dicampurkan sampel (Apigenin, Berberin atau
Rutin) dengan teliti. Kemudian, bacaan penyerapan telah
dilakukan secara kinetik selama 5 min menggunakan
spektrofotometer dengan panjang gelombang 340 nm.
PENYEDIAAN SAMPEL SEL: UJI KAJI UNTUK MELIHAT
PENGARUH APIGENIN, BERBERIN DAN RUTIN DALAM
MENGAWAL KEPEKATAN APO A1, LCAT, LDLR DAN FDFT1
PADA SEL HEP G2
Penyediaan sampel sel ini adalah berdasarkan kaedah
Hubert et al. (2001) dan Peter et al. (2010) dengan
beberapa modifikasi. Uji kaji ini telah dijalankan selepas
kepekatan yang berkesan Apigenin, Berberin dan Rutin
dikenal pasti. Sel dihidupkan dalam plat 6-telaga dan
diinkubasi dalam CO2 inkubator pada suhu 37oC selama
48 jam atau sehingga sel meliputi lantai telaga. Uji kaji
ini telah direka bentuk dengan menggunakan tiga jenis
kumpulan iaitu kawalan normal, kawalan pravastatin
dan kumpulan rawatan. Kawalan normal (NC) adalah sel
Hep G2 dan media kultur sahaja tanpa sebarang rawatan.
Kawalan pravastatin pula merupakan sel Hep G2 dan
media kultur ditambah dengan 3 × 10-7M pravastatin dan
10 μL LDL, manakala kumpulan rawatan adalah sel Hep
G2 dan media kultur ditambah dengan 10 μL LDL dan
rawatan sampel iaitu Apigenin atau Berberin atau Rutin
(masing-masing 7.82 μg/mL, 31.25 μg/mL dan 62.5).
Kemudian, plat diinkubasi selama 24 jam pada suhu
37oC dan 5% atmosfera CO2. Uji kaji telah dilakukan
sebanyak tiga kali.
UJI KAJI UNTUK MELIHAT PENGARUH APIGENIN, BERBERIN
DAN RUTIN DALAM MENGAWAL KEPEKATAN APO A1, LCAT,
LDLR DAN FDFT1 PADA SEL HEP G2
Selepas diinkubasi selama 24 jam, media daripada plat
telaga dikumpulkan. Media diambil untuk penentu ukuran
enzim dan molekul yang terlibat dalam metabolisme
kolesterol mengikut buku panduan yang telah diberikan
bersama kit tersebut. Apolipoprotein A1 (Apo A1)
telah ditentukan dengan menggunakan kit dari ELISA
kit AssayMax Apolipoprotein A1, nombor katalog
EA5301-1. Kolesterol Lesitin Asiltransferase (LCAT) telah
ditentukan dengan menggunakan kit dari Wuhan EIAAB
Science Co, LTD, nombor katalog: E98516 Hu. Reseptor
Lipoprotein Ketumpatan Rendah (LDLR) telah ditentukan
dengan menggunakan kit dari Wuhan EIAAB Science
Co, LTD, nombor katalog: E91008Hu. Farnesil-difosfat
farnesiltransferase 1 (FDFT1) telah ditentukan dengan
menggunakan kit dari Wuhan EIAAB Science Co, LTD,
nombor katalog: E1708h.
Langkah-langkah dalam menjalankan uji kaji tersebut
diringkaskan seperti berikut. Plat mikrotiter yang terdapat
dalam kit tersebut adalah pra-bersalut dengan antibodi
khusus kepada molekul yang dikaji masing-masing
561
(Apo A1, LCAT, LDL R dan FDFT1 ). Sebagai contoh
molekul dikaji adalah LCAT. Semasa tindak balas, LCAT
dalam sampel atau piawai bersaing dengan LCAT Biotin
berlabel yang beramaun tetap untuk tapak ke atas antibodi
monoklonal pra-bersalut khusus untuk LCAT. Konjugat,
sampel atau piawai yang berlebihan dibasuh daripada plat.
Seterusnya, Avidin terkonjugat Horseradish Peroksidase
(HRP) ditambah kepada setiap plat telaga mikroplat dan
diinkubasi. Kemudian, satu larutan substrat TMB telah
ditambah kepada setiap telaga. Tindak balas enzim-substrat
telah ditamatkan dengan penambahan larutan asid sulfurik
dan perubahan warna diukur pada panjang gelombang 450
± 2 nm. Kepekatan LCAT di dalam sampel telah ditentukan
dengan membandingkan OD sampel kepada lengkung
piawai.
ANALISIS STATISTIK
Analisis varians (ANOVA) dan Tukey HSD telah dijalankan
untuk membandingkan min antara kumpulan. Kepentingan
telah diterima pada p<0.05.
HASIL DAN PERBINCANGAN
KAJIAN SITOTOKSISITI: PENENTUAN IC20 APIGENIN,
BERBERIN DAN RUTIN
Rajah 1 menunjukkan Apigenin, Berberin dan Rutin
masing-masing mempunyai kepekatan perencat 20 (IC20)
7.8, 125 dan 1000 μg/mL. Dalam kajian lepas, Apigenin
telah dibuktikan sebagai antikanser (Ruela-de-Sousa et
al. 2010). Lien-Chai et al. (2006) melaporkan bahawa,
Apigenin bertindak sebagai anti-proliferatif terhadap
sel Hep G2 pada kepekatan 8.02 μg/mL selepas rawatan
selama 48 jam. Bagi mengelakkan toksisiti terhadap
sel Hep G2 yang menyebabkan metabolisme kolesterol
terganggu disebabkan kematian sel, kepekatan Apigenin
yang boleh digunakan untuk uji kaji seterusnya adalah
7.8 μg/mL. Bagi kepekatan Berberin, Diogo et al. (2011)
pernah melaporkan Berberin mempunyai potensi untuk
bertindak sebagai antikanser. Walau bagaimanapun,
daripada Rajah 1, dapat diperhatikan Berberin tidak
bertindak sebagai antiproliferatif terhadap sel Hep G2 pada
kepekatan yang rendah. Oleh itu, kepekatan 31.25 μg/mL
dipilih berdasarkan kajian lepas dilakukan oleh Abidi et al.
(2006) yang menggunakan kepekatan yang rendah untuk
mengkaji kesan Berberin terhadap Hep G2. Rajah 1 juga
menunjukkan bahawa Rutin tidak toksik terhadap sel Hep
G2, walaupun pada kepekatan 1000 μg/mL Rutin tidak
bertindak sebagai antiproliferatif terhadap sel kanser Hep
G2. Herba tumbuhan yang mengandungi Rutin dilaporkan
boleh bertindak sebagai antikanser pada kepekatan yang
tinggi (Hana et al. 2010). Walau bagaimanapun, Su-Tze
et al. (2011) melaporkan herba Zanthoxylum ailanthoides
yang mengandungi Rutin boleh bertindak sebagai
antiproliferatif pada kepekatan 73.06 μg/mL terhadap
‘Human Promyelocytic cell’ (HL-60). Oleh itu, kepekatan
bagi Rutin yang sesuai untuk digunakan adalah 62.5 μg/
562

Peratusan Sel Hidup (%)

Kepekatan Sampel (μg/mL)

RAJAH 1. Peratusan sel hidup di dalam plat 96-telaga terhadap kepekatan sample (Apigenin, Berberin dan Rutin). Sel Hep G2 telah
dihidupkan dengan 100 μL media RPMI 1640 dalam plat 96-telaga dalam jumlah 1 × sel 104 setiap telaga. Sel telah dirawat dengan
kepekatan tertentu Apigenin, Berberin dan Rutin selama 24 jam dalam inkubator pada suhu 37oC dan 5% atmosfera CO2

mL. Kepekatan ini adalah dipastikan tidak menyebabkan
nekrosis pada sel yang boleh mengganggu metabolisme
kolesterol pada sel Hep G2 di samping pengaruh rutin
terhadap metabolisme tersebut dapat diperhatikan.
UJI KAJI UNTUK MELIHAT KEBOLEHAN APIGENIN,
BERBERIN DAN RUTIN DALAM MERENDAHKAN
AKTIVITI HMGR
Rajah 2 menunjukkan Apigenin dan Berberin tidak
bertindak merendahkan aktiviti HMGR secara signifikan
(p<0.05) berbanding kawalan normal. Rutin boleh
bertindak merendahkan aktiviti HMGR dalam sel Hep
G2. Hasil ini adalah sama sepertimana dilaporkan oleh
Sun-Young et al. (2002) yang menyatakan Rutin mampu
menurunkan aktiviti HMGR pada tikus yang dirawat.
Walau bagaimanapun, jika dibandingkan hasil ujian, Rutin
adalah berbeza secara signifikan (p<0.05) dengan kawalan
pravastatin. HMGR adalah enzim yang sangat penting
dalam penghasilan kolesterol (Olle 1996). Dalam tapak
jalan mevalonate, HMGR bertindak menukarkan kolesterol
kepada mevalonate. Hasil ujian ini menunjukkan Rutin
hanya bertindak secara sederhana dalam merendahkan
aktiviti penghasilan kolesterol (Wen et al. 1992). Manakala
Apigenin dan Berberin tidak bertindak secara signifikan
dalam merendahkan aktiviti penghasilan kolesterol pada
sel Hep G2.
pravastatin. Apigenin juga menyebabkan penghasilan APO
A1 yang tinggi, walau bagaimanapun ia tidak signifikan
berbanding kawalan Pravastatin. Manakala Rutin pula
menyebabkan sel Hep G2 menghasilkan APO A1 yang
signifikan lebih banyak berbanding kawalan normal.
Apolipoprotein A1 adalah molekul yang sangat penting
untuk pembentukan lipoprotein berketumpatan tinggi
(HDL) (Myoungsook et al. 2001). Melalui pembentukan
molekul HDL oleh APO A1, proses pengangkutan kolesterol
berbalik dapat dilakukan. Pengangkutan kolesterol
berbalik adalah laluan untuk kolesterol diangkut dari
plak aterosklerosis atau lipid dari sel periferal kembali
ke hati dan dikumuhkan ke dalam najis melalui hempedu
(Stephen & Matthew 1997). Daripada hasil kajian,
didapati Apigenin, Berberin dan Rutin berpotensi tinggi
dalam membantu proses pengawalan kolesterol melalui
pengangkutan kolesterol berbalik.
LCAT Selain APO A1, LCAT juga adalah molekul penting
dalam proses pengangkutan kolesterol berbalik (Dominic
2012). Hasil kajian menunjukkan dalam keadaan kawalan
normal, sel Hep G2 juga merembeskan enzim LCAT. Rajah
4 menunjukkan rawatan Apigenin, Berberin dan Rutin telah
meningkatkan penghasilan enzim LCAT secara signifikan
berbanding kawalan normal. Kawalan pravastatin
menunjukkan jumlah LCAT tertinggi.

LDLR Penghasilan kolesterol secara endogenus bermula

UJI KAJI UNTUK MELIHAT PENGARUH APIGENIN, BERBERIN
DAN RUTIN DALAM MENGAWAL KEPEKATAN APO A1, LCAT,
LDLR DAN FDFT1 PADA SEL HEP G2
Apo A1 Rajah 3 menunjukkan Berberin menyebabkan sel
Hep G2 melepaskan APO A1 dalam jumlah yang signifikan
(p<0.05) berbanding kawalan normal dan kawalan
dari hati, kolesterol hepatik dilepaskan ke peredaran darah
sebagai lipoprotein berketumpatan sangat rendah (VLDL)
dan proses metabolisme terjadi apabila pembentukan
lipoprotein sisa berlaku selepas lipoprotein lipase membuang
trigliserida (TG) daripada VLDL. Lipoprotein sisa dikeluarkan
 563
Kepekatan HMGR (Units/mgP)

Sampel

RAJAH 2. Kepekatan HMGR di dalam media terhadap rawatan sampel (NC: tanpa rawatan. Pravastatin: Rawatan 3 × 10-7M
Pravastatin. Apigenin: Rawatan 7.82 μg/mL Apigenin. Berberin: Rawatan 31.25 μg/mL Berberin. Rutin: Rawatan 62.5 μg/mL
Rutin). a,bHuruf yang berbeza pada carta menunjukkan perbezaan yang bererti (p<0.05)
Kepekatan APO A1 (mg/mL)

Sampel

RAJAH 3. Kepekatan APO A1 di dalam media terhadap rawatan sampel (NC: tanpa rawatan. Pravastatin: Rawatan 3 × 10-7M
Pravastatin. Apigenin: Rawatan 7.82 μg/mL Apigenin. Berberin: Rawatan 31.25 μg/mL Berberin. Rutin: Rawatan 62.5 μg/mL
Rutin). a,bHuruf yang berbeza pada carta menunjukkan perbezaan yang bererti (p<0.05)
564

Kepekatan LCAT (U/I)

Sampel

4. Kepekatan LCAT di dalam media terhadap rawatan sampel (NC: tanpa rawatan. Pravastatin: Rawatan 3 × 10-7M
RAJAH
Pravastatin. Apigenin: Rawatan 7.82 μg/mL Apigenin. Berberin: Rawatan 31.25 μg/mL Berberin. Rutin: Rawatan 62.5 μg/mL
Rutin). a,bHuruf yang berbeza pada carta menunjukkan perbezaan yang bererti (p<0.05)

daripada aliran darah melalui reseptor LDL (LDL R) atau
terus dimetabolisme untuk menjadi LDL dan kemudian LDL
diambil oleh hati melalui reseptor LDLR (John 2002). Rajah
5 menunjukkan bahawa rawatan ketiga-tiga sebatian dapat
meninggikan penghasilan LDLR oleh Hep G2. Apigenin
Kepekatan LDLR (mg/mL)
menunjukkan kesan yang signifikan (p<0.05) dalam
meninggikan kepekatan LDLR berbanding kawalan normal.
Berberin juga menunjukkan kesan yang signifikan (p<0.05)
berbanding kawalan normal tetapi rendah secara signifikan
(p<0.05) berbanding kawalan pravastatin.

Sampel

RAJAH 5. Kepekatan LDLR di dalam media terhadap rawatan sampel (NC: tanpa rawatan. Pravastatin: Rawatan 3 × 10-7M
Pravastatin. Apigenin: Rawatan 7.82 μg/mL Apigenin. Berberin: Rawatan 31.25 μg/mL Berberin. Rutin: Rawatan 62.5 μg/mL
Rutin). a,bHuruf yang berbeza pada carta menunjukkan perbezaan yang bererti (p<0.05)

Kepekatan FDFT1 (U/I)
Sampel
6. Kepekatan FDFT1 di dalam media terhadap rawatan sampel (NC: tanpa rawatan. Pravastatin: Rawatan 3 × 10-7M
RAJAH
Pravastatin. Apigenin: Rawatan 7.82 μg/mL Apigenin. Berberin: Rawatan 31.25 μg/mL Berberin. Rutin: Rawatan 62.5 μg/mL
Rutin). a,bHuruf yang berbeza pada carta menunjukkan perbezaan yang bererti (p<0.05)
FDFT1 Amin et al. (1996) menjelaskan bahawa FDFT1
dianggap sebagai enzim penting yang menyebabkan
pembentukan squalene secara eksklusif disalurkan ke
dalam pembentukan kolesterol selepas melalui pelbagai
langkah. Rawatan yang dapat menurunkan kepekatan
FDFT1 dalam media adalah dianggap berguna untuk
menurunkan pembentukan kolesterol. Hasil kajian (Rajah
6) menunjukkan Rutin mampu secara signifikan (p<0.05)
merendahkan penghasilan enzim FDFT1 oleh Hep G2
berbanding kawalan normal. Rawatan Berberin adalah
tidak signifikan berbanding rawatan Pravastatin. Walau
bagaimanapun, Apigenin tidak berbeza secara signifikan
berbanding kawalan normal.
KESIMPULAN
Rawatan Apigenin, Berberin dan Rutin menunjukkan
kesan yang signifikan dalam menurunkan metabolisme
kolesterol. Kemampuan Rutin dalam menurunkan enzim
HMGR dan FDFT1 membolehkan ia mengawal pembentukan
kolesterol endogenus. Selain itu, rawatan ketiga-tiga
ekstrak ini menyebabkan kenaikan kepekatan APO A1,
LCAT dan LDLR menunjukkan kemungkinan ekstrak ini
boleh mengawal kolesterol dalam badan melalui tapak
jalan pengangkutan kolesterol berbalik.
RUJUKAN
Abidi, P., Chen, W., Kraemer, F.B., Li, H. & Liu, J. 2006. The
medicinal plant goldenseal is a natural LDL-lowering agent
with multiple bioactive components and new mechanism.
Journal of Lipid Research 47: 2134-2147.
Amin, D., Cornell, S.A., Perrone, M.H. & Bilder, G.E. 1996.
1-Hydroxy-3-(methylpentylamino)-propylidene-1,1-
565
bisphosphonic acid as a potent inhibitor of squalene synthase.
Arzneimittelforschung 46(8): 759-762.
Caltagirone, S., Rossi, C., Poggi, A., Ranelletti, F., Natali, P. &
Brunetti, M. 2000. Flavonoids apigenin and quercetin inhibit
melanoma growth and metastatic potential. International
Journal of Cancer 87: 595-600.
Chia, J.C., Thing, F.T., Shorong, S.L., Yuan, S.C. & I-Min,
L. 2012. Regulation of lipid disorders by ethanol extracts
from Zingiber zerumbet in high-fat diet-induced rats. Food
Chemistry 132(1): 460-467.
Chidambara, M.K.N., Jinhee, K., Amit, V. & Bhimanagouda,
S.P. 2012. Differential inhibition of human colon cancer cells
by structurally similar flavonoids of citrus. Food Chemistry
132(1): 27-34.
Colditz, G.A. 1999. Economic costs of obesity and inactivity.
Medicine Science and Sports Exercise 31: S663-667.
Conlin, P.R. 1999. The dietary approaches to stop hypertension
(Dash) clinical trial: Implications for lifestyle modifications
in the treatment of hypertensive patients. Cardiology Review
7: 284-288.
Diogo, C.V., Machado, N.G., Barbosa, I.A., Serafim, T.L.,
Burgeiro, A. & Oliveira, P.J. 2011. Berberine as a promising
safe anti-cancer agent - is there a role for mitochondria?
Current Drug Targets 12(6): 850-859.
Dominic, S.N. 2012. The role of lecithin: Cholesterol
acyltransferase in the modulation of cardiometabolic risks – A
clinical update and emerging insights from animal models.
Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular and Cell
Biology of Lipids 1821(4): 654-659.
Ge, Y., Zhang, Y., Li, R., Chen, W., Li, Y. & Chen, G. 2011.
Berberine regulated Gck, G6pc, Pck1 and Srebp-1c
expression and activated AMP-activated protein kinase in
primary rat hepatocytes. International Journal of Biological
Science 7(5): 673-684.
Goulas, V. & Manganaris, G.A. 2012. Exploring the phytochemical
content and the antioxidant potential of Citrus fruits grown
in Cyprus. Food Chemistry 131(1): 39-47.
566
Hana, K., Jeong, Y.M., Hyeonji, K., Dong-Sun, L., Moonjae, C.,
Hyung-Kyoon, C., Young, S.K., Ashik, M. & Somi, K.C.
2010. Antioxidant and antiproliferative activities of Mango
(Mangifera indica L.) flesh and peel. Food Chemistry 121(2):
429-436.
Hubert, S., Renana, S., Hedi, G., Markus, N., Heinrich, W.
& Winfried, M. 2001. Effect of atorvastatin, simvastatin,
and lovastatin on the metabolism of cholesterol and
triacylglycerides in Hep G2 cells. Biochemical Pharmacology
62: 1545-1555.
Iacopini, P., Baldi, M., Storchi, P. & Sebastiani, L. 2008. Catechin,
epicatechin, quercetin, rutin and resveratrol in red grape:
Content, in vitro antioxidant activity and interactions. Journal
of Food Composition Analysis 21: 589-598.
Imanshahidi, M. & Hosseinzadeh, H. 2008. Pharmacological
and therapeutic effects of Berberis vulgaris and its active
constituent, berberine. Phytotherapia Research 22(8): 999-
1012.
John, F.O. 2002. Molecular basis of cholesterol homeostasis:
Lessons from Tangier disease and ABCA1. TRENDS in
Molecular Medicine 8: 4.
KKM, Kementerian Kesihatan Malaysia. 2011. Portal Rasmi
Kementerian Kesihatan Malaysia. www.moh.gov.my/images/
gallery/stats/heal_fact/health_facts_2010_hor.pdf
Kulkarni, S.K. & Dhir, A. 2010. Berberine: A plant alkaloid with
therapeutic potential for central nervous system disorders.
Phytotherapia Research 24(3): 317-324.
Kyoung, H.K., Ki, W.L., Dong, Y.K., Hyung, H.P., Ik, B.K. &
Hyong, J.L. 2005. Optimal recovery of high-purity rutin
crystals from the whole plant of Fagopyrum esculentum
Moench (buckwheat) by extraction, fractionation, and
recrystallization. Bioresource Technology 96(15): 1709-1712.
Leeder, S., Raymond, S., Greenberg, H., Liu, H. & Esson, K.
2004. A Race against Time: The Challenge of Cardiovascular
Disease in Developing Countries. New York: Trustees of
Columbia University.
Lien-Chai, C., Lean, T.N., I-Cheng, L., Po-Lin, K. & Chun-
Ching, L. 2006. Anti-proliferative effect of apigenin and its
apoptotic induction in human Hep G2 cells. Cancer Letters
237: 207-214.
McMurray, J.J. & Stewart, S. 2000. Epidemiology, aetiology, and
prognosis of heart failure. Heart 83(5): 596-602.
Myoungsook, L., Jin, Q.K., Jongwon, K., Hyunhee, O. &
Miyoung, P. 2001. Studies on the plasma lipid profiles, and
LCAT and CETP activities according to hyperlipoproteinemia
phenotypes (HLP). Atherosclerosis 159(2): 381-389.
Nitra, N., Ank, H.L. & Kornkanok, I. 2004. Separation and
detection of the antioxidant flavonoids, rutin and quercetin
using HPLC coupled on-line with colorimetric detection of
antioxidant activity. Naresuan University Journal 12(2):
25-37.
Olle, L. 1996. HMG-CoA reductase inhibitors: Role in normal
and malignant cells. Oncology/Hematology 22: 197-212.
Peter, J.M., Barbara, L., Hubert, S., Stephen, K. & Karin, B.
2010. Effect of simvastatin on cholesterol metabolism in
C2C12 myotubes and Hep G2 cells, and consequences for
statin-induced myopathy. Biochemical Pharmacology 79:
1200-1209.
Siniša, Ð., Milorad, C. & Salameh, A. 2000. The extraction of
Apigenin and Luteolin from the sage salvia officinalis l.
from Jordan. University of Niš, FACTA UNIVERSITATIS:
Working and Living Environmental Protection 1(5): 87-93.
Stephen, A.H. & Matthew, J.M. 1997. Reverse cholesterol
transport - A review of the process and its clinical
implications. Clinical Biochemistry 30(7): 517-525.
Sun-Young, P., Song-Hae, B., Seon-Min, J., Yong, B.P., Soon-Jae,
L., Tae-Sook, J. & Myung-Sook, C. 2002. Effect of rutin and
tannic acid supplements on cholesterol metabolism in rats.
Nutrition Research 22: 283-295.
Susan, H.K. 2005. The use of rutin in a cat with idiopathic
chylothorax. Canada Veterinary Journal 46(8): 729-731.
Su-Tze, C., Hsui-Hui, C., Hsin-Yi, P., Meei-Jen, L. & Tian-Shung,
W. 2011. Isolation of substances with antiproliferative and
apoptosis-inducing activities against leukemia cells from
the leaves of Zanthoxylum ailanthoides Sieb. & Zucc.
Phytomedicine 18(5): 344-348.
Tsutomu, F., Kunihiko, S. & Akira, I. 1972. Isolation of berberine
from callus tissue of Coptis japonica. Phytochemistry 11(1):
175.
Vadakkemuriyil, D.N., Rajaram, P. & Ragupathi, G. 2012. Studies
on methanolic extract of Rauvolfia species from southern
Western Ghats of India – In vitro antioxidant properties,
characterization of nutrients and phytochemicals. Industrial
Crops and Products 39: 17-25.
Verma, P.R., Deshpande, S.A., Kamtham, Y.N. & Vaidya, L.B.
2012. Hypolipidemic and antihyperlipidemic effects from
an aqueous extract of Pachyptera hymenaea (DC.) leaves in
rats. Food Chemistry 132(3): 1251-1257.
Wang, I., Lin-Shiau, S. & Lin, J.K. 1999. Induction of apoptosis
by apigenin and related flavonoids through cytochrome
c release and activation of caspase-9 and caspase-3 in
leukaemia HL-60 cells. European Journal of Cancer 35:
1517-1525.
Wen, Q., Jacqaleline, I., Shu-Ren, W. & Recaredo, I. 1992.
Regulation of HMG-CoA reductase, apoprotein-B and LDL
receptor gene expression by the hypocholesterolemic drugs
simvastatin and ciprofibrate in Hep G2, human and rat
hepatocytes. Biochimica et Biophysica Acre 1127: 57-66.
Zhenchang, L., Yingzhen, Y., Lailiang, C. & Gan-Yuan, Z. 2012.
Poly-phenolic composition and content in the ripe berries of
wild Vitis species. Food Chemistry 132(2): 730-738.
Mohd Kamal Nik Hassan*, Rasadah Mat Ali, Mohd Shahidan
Mohd Arshad, Zamree Md Shah, Khairul Kamilah Abdul Kadir
& Ihsan Safwan Kamarazaman
Bahagian Hasilan Semula Jadi
Pusat Penyelidikan Perhutanan Malaysia
52109 Kepong, Kuala Lumpur
Malaysia
Zulkhairi Hj. Amom
Fakulti Sains Kesihatan
UiTM Kampus Puncak Alam
42300 Puncak Alam, Selangor
Malaysia
*Pengarang untuk surat-menyurat; email: mohdkamal@frim.
gov.my
Diserahkan: 12 Mac 2012
Diterima: 31 Julai 2013