STAL 2043 MIKROBIOLOGI MARIN

NAMA: NUR UMAIRA BINTI ROSLAN

NO. MATRIK: A180062

KUMPULAN: A

PENSYARAH: DR SURIYANTI

1
1.0 PENGENALAN
Pencairan bersiri merupakan sebuah ciri pencairan berurutan yang dilakukan untuk mengubah
kepekatan larutan dengan factor pencairan yang berkaitan. Kadar pencairan pada setiap
langkah adalah konsisten, menghasilkan kepekatan janjang geometri (geometric progression)
dalam bentuk logaritma. Pencairan bersiri perlu dilakukan sebelum melakukan kaedah plat
penyebaran. Plat penyebaran adalah teknik menyadur sampel cecair yang mengandungi
bakteria supaya bakteria mudah dikira dan diasingkan. Plat penyebaran yang berjaya akan
mempunyai bilangan koloni bakteria terpencil yang boleh dikira secara sama rata pada plat.
Teknik plat coretan digunakan untuk mengasingan kultur tulen (kebanyakannya bakteria),
daripada populasi bercampur. Inokulum yang dicoretkan di atas permukaan agar adalah untuk
mengurangkan bilangan bakteria. Sesetengah sel bakteria individu dipisahkan dan dijarakkan
di antara satu sama lain. Terdapat kaedah yang perlu dilakukan untuk memindahkan organisma
dari satu medium ke medium yang lain. Ianya untuk memastikan tiada bahan cemar yang tidak
di-ingini daripada memasuki sampel atau kultur. Kaedah ini dipanggil sebagai teknik aseptik.
Prosedur biasa adalah seperti yang dinyatakan di bawah:
1. Alat inokulasi dipanskan dengan menggunakan penunu Bunsen.
2. Penutup/penutup botol/ palam kapas dibuka dan dipanaskan mulut bekas yang
mengandungi kultur.
3. Untuk dapatkan kultur,gelung inokulasi digunakan.
4. Penutup/ penutup botol/ palam kapas dibuka dan dipanaskan leher dan mulut bekas
yang mengandungi medium baru.
Seterusnya,pewarnaan Gram ialah pewarnaan pembezaan mikrobiologi yang paling penting
dan digunakan secara meluas. Ujian ini membezakan bakteria kepada Bakteria Gram-Positif
dan Gram-Negatif, serta membantu dalam pengelasan dan pembezaan mikroorganisma. Calitan
bakteria mesti disediakan sebelum melaksanakan teknik pewarnaan. Walaupun tidak sukar,
kaedah tersebut memerlukan penjagaan yang secukupnya. Pewarnaan pembezaan memerlukan
sekurang-kurangnya tiga reagen kimia yang digunakan secara berurutan pada “heat-fixed
smear”. Krystal Violet ialah pewarnaan utama yang digunakan untuk mewarnakan kedua-dua
bakteria Gram-positif dan Gram-negatif. Kemudian, iodin bertindak sebagai penetap pewarna
(mordant) yang membetulkan kesan ungu dalam bakteria. 95% Etil Alkohol digunakan untuk
menyahwarna bakteria Gram-negatif. Alkohol melarutkan membran luar dan mengganggu
peptidoglikan yang nipis.Safranin pula digunakan sebagai pewarna balas, yang memberi warna
merah jambu kepada bakteria Gram-negatif.

2.0 OBJEKTIF
1. Untuk mengira bilangan pertumbuhan bakteria marin.
2. Untuk menghasilkan kultur tulen bakteria marin.
3. Untuk melakukan pewarnaan pembezaan bakteria marin.

2
3.0 KAEDAH

a) Plat Penyebaran
1. 0.1 ml sampel alga telah dipindahkan secara aseptik pada bahagian tengah plat agar
nutrien.
2. Penyebar kayu hoki kaca disterilkan di atas penunu bunsen. Penyebar kayu hoki
disejukkan terlebih dahulu sebelum digunakan untuk menyebarkan kultur.
3. Penutup piring petri dibuka dan penyebar kayu hoki kaca digunakan untuk
menyebarkan 0.1 ml kultur bakteria yang telah dicairkan dengan segera.
4. Masa diberikan untuk kultur yang telah disebarkan untuk menyerap ke dalam gel dan
dikeringkan sebelum plat diterbalikkan dan di inkubasi pada suhu 30°C selama 24 jam.

b) Teknik Aseptik Dan Pemindahan Kultur

1. Plat agar nutrient dilabel dibahagian bawah plat dengan nama kultur dan ID.
2. Gelung inokulasi dipanaskan sehingga kemerahan yang dipegang pada sudut kira-kira
60 darjah dan disejukkan.
3. Penutup piring petri dibuka sedikit lalu gelung inokulasi dimasukkan dan koloni
tunggal didapatkan pada medium. Gelung inokulasi disejukkan secukupnya sebelum
memperoleh kultur.
4. Kultur yang diperoleh di pindahkan ke atas permukaan medium agar yang baru dengan
satu coretan yang selanjar.
5. Gelung dipanaskan dan dibiarkan sejuk sebelum coretan kedua dilakukan. Coretan
yang kedua dilakukan dengan coretan sekali daripada dua kali merentasi coretan
sebelumnya.
6. Gelung dipanaskan dan disejukkan.
7. Langkah 4 dan 5 diulang sehingga coretan yang ke-empat.
8. Plat di inkubasi pada 37°C selama 24 jam.
9. Corak pertumbuhan bakteria diperhatikan.

c) Pewarnaan Gram
1. Slaid kaca yang bersih diperoleh.
2. Teknik steril digunakan untuk menyediakan sapuan setiap koloni.
3. Kristal violet dicalitkan dengan perlahan dan dibiarkan selamat 1 minit.
4. Air paip digunakan untuk dibasuh secara perlahan.
5. Gram iodin dilumurkan dan dibiarkan selama 1 minit.
6. Air paip digunakan untuk dibasuh secara perlahan.
7. 95% etil alkohol digunakan untuk menyahwarnakan. Reagen ditambah setitik demi
setitik sehingga alkohol hampir jernih dan meninggalkan warna biru.
8. Air paip digunakan untuk dibasuh secara perlahan.
9. Safranin digunakan untuk calit balas selama 45 saat.
10. Dilap dengan kering dengan kertas bibulous dan diperiksa dibawah minyak.

3
4.0 HASIL DAN PERBINCANGAN

a) Plat Penyebaran

Beberapa koloni bakteria dapat dilihat

Koloni bakteria tidak dapat dilihat secara banyak, hal ini kerana berkemungkinan disebabkan
sampel yang mempunya kepekatan bakteria yang kurang. Selain itu, semasa proses plat
penyebaran, penyebar kayu hoki terlalu panas sehingga menyebabkan bakteria mati.

B) Teknik Aseptik Dan Pemindahan Kultur

Sumber inokulum Dipindahkan Pemerhatian

ke
Medium agar
yang baru

4
 1. Terangkan bagaimana prosedur dalam kaedah pencoretan akan menghasilkan
koloni terpencil tunggal.

- Apabila sampel asal dicairkan dengan mencoretkannya pada kuadran secara berturut-
turut, bilangan organisma akan berkurangan. Pada kuadran ketiga atau keempat, hanya
beberapa organisma yang akan dipindahkan dan menghasilkan koloni yang diskret.

2. Apakah sebab untuk menyalakan tiub sebelum dan selepas setiap pemindahan?

- Untuk menghalang bakteria and bahan cemar daripada udara sekeliling memasuki tiub.

3. Mengapakah gelung perlu dinyalakan sekurang-kurangnya sekali semasa

prosedur plat coretan?

- Untuk memastikan pengurangan bakteria setiap kali coretan dilakukan dan akan
menghasilkan koloni yang diskret. Selain itu, untuk mengelakkan pencemaran daripada
sekeliling daripada memasuki tiub.

c) Pewarnaan Gram

100x

5
5.0 KESIMPULAN
Bilangan koloni bakteria dapat dikira melalui kaedah plat penyebaran. Berdasarkan eksperimen
yang telah dilakukan, dua koloni bakteria telah tumbuh pada plat agar nutrien. Seterusnya,
bilangan sel bakteria dalam 1 ml sampel asal dapat dikira dengan menggunakan formula:
CFU/ml = (bilangan koloni x faktor pencairan) / isipadu plat kultur
= (2 x 10-3) / 1
= 0.002
Seterusnya, plat yang telah di inkubasi selama 24 jam dengan menggunakan kaedah pencoretan,
menunjukkan koloni yang tumbuh mempunyai rupa umum yang sama. Ia boleh dikatakan
bahawa ia merupakan satu jenis koloni yang sama.
Pewarnaan gram telah dilakukan selepas berjaya mendapatkan kultur tulen bakteria marin.
Hasil pewarnaan Gram dilihat di bawah mikroskop yang mempunyai kuasa objektif 100x.
bentuk sel bakteria yang dapat diperhatikan ialah bentuk “cocci” dan mempunyai susunan
“staphylococci”. Warna merah jambu yang dilihat menunjukkan bahawa bakteria tersebut
merupakan bakteria Gram Negatif.

6.0 RUJUKAN

Bio-Resource. (2011, november 21). Technical Resources in Biotechnology. Retrieved from

CFU Calculation: http://technologyinscience.blogspot.com/2011/11/cfu-colony-
forming-unit-calculation.html#.Ynl3WehBw2z[8Mei 2022].
IOWA State University. (2022). Microbiology. Retrieved from Spread Plate Method:
https://www.micro.iastate.edu/video/microbiology-004-spread-plate-
method#:~:text=The%20spread%20plate%20method%20is,evenly%20distributed%2
0on%20the%20plate.[8 Mei 2022].
Sapkota, A. (2022, april 17). Microbe Notes. Retrieved from Serial Dilution:
https://microbenotes.com/serial-dilution/[8 Mei 2022].
Tankeshwar, A. (2022). Microbe Online. Retrieved from Streak Plate Method: Principle,
Procedure, Uses : https://microbeonline.com/streak-plate-method-principle-purpose-
procedure-results/#Purpose_of_streaking[10 Mei 2022].
The Australian Wine Research Institute. (2022). Microbiological. Retrieved from Aseptic
Technique:
https://www.awri.com.au/industry_support/winemaking_resources/laboratory_method
s/microbiological/aseptic/[10 Mei 2022].
Virtual Microbiology. (n.d.). Retrieved from Streak Plates:
https://instr.bact.wisc.edu/book/displayarticle/6[10 Mei 2022].

6
Microbiology Clinique. (n.d.). Microbiological technique. Retrieved from Gram Staining:
https://microbiologie-clinique.com/gram-stain-principle-steps-
interpretation.html[10Mei 2022].