วิชาพันธุศาสตร์และวิวัฒนาการ : แบบฝึกหัดเรื่อง DNA technology

ชื่อ_________________________________________________
ข เลขที่ ____________ ห้อง _____________
4/1
กฤษฎา
2

ตอนที่ 1 DNA Cloning: นักวิจัยต้องการเพิ่มปริมาณยีนทีส

่ ร้างฮอร์โมนอินซูลินเพื่อฉีดให้คนไข้ที่เป็น
โรคเบาหวานชนิดที่ 2 ด้วยเทคนิค DNA Cloning ให้นักเรียนพิจารณาภาพการตัดต่อยีน และเติมขั้นตอนในภาพ
ให้สมบูรณ์

เ ยว น เ อใ เลย ด
ด DNA วย enzyme ว

สามารถ เ า น
ไ
A. เลี้ยงแบคทีเรียที่มียีนอินซูลิน
และผลิตอินซูลน
ิ
↓

-
B.ถ่ายดีเอ็นเอลูกผสม
(Recombinant DNA) เข้าสูเ่ ซลล์
D. แบคทีเรีย
<

C. เชือ
่ ม DNA จากสองแหล่งเข้า
B, ด้วยกัน โดยใช้ DNA ligase

E. ฮอร์โมนอินซูลินพร้อมฉีดให้
A.
คนไข้

D. ตัด Plasmid DNA ด้วย

F
restriction enzyme

F. แยกอินซูลน
ิ ให้มีความบริสุทธิ์
& พร้อมใช้งาน
ตั
ด้
ติ
สุ
ตั
คู่กั
ดี
ข้
พื่
ด้
กั
ห้
 ตอนที่ 2 Polymerase chain reaction: PCR story board
ให้นักเรียนวาดภาพปฏิกิริยาในแต่ละขั้นของกระบวนการ Polymerase chain reaction

Denaturing
ขั้น____________________________________
อุณหภูม_ิ ______________________________
90- 95c

iiiiiiiiiiiiiiiiiii เหตุการณ์ที่เกิดขึ้น
ท ใ DNA สาย แยก น เ นสาย เ ยว
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

↳1 1 1 3 1 1 1 1 1 1

Anneanling
ขั้น____________________________________
อุณหภูม_ิ ______________________________
45-
60%), 12 S
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 เหตุการณ์ที่เกิดขึ้น
11 I E

DNA primer เ า เกาะDNA นแบบ

DNA primer

1 1 1 1 1 1 1 1 3 1 1 1 1 1 1

ขั้น____________________________________
Extension
polymerase
·NA อุณหภูม_ิ ______________________________
72 C
↑30- 60 S.
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
เหตุการณ์ที่เกิดขึ้น
1 1 1 1 1 1 1
1
เ ม nucleotide อจาก
iiiiiiiiiiiii primerจาก 5'=y'
ศ

โดย เอนไซ Taq DNA polymerase วย

ป ยาpolymerization

2
35-40 รอบ
-
คู่
ต้
ทิ
ต่
ด้
ป็
ติ
ดี่
ฏิ
ำ
กิ
กั
ริ
ห้
ม์
ข้
 องค์ประกอบของกระบวนการ Polymerase chain reaction (PCR) คือ

องค์ประกอบ หน้าที่

DNA template เ น DNA นแบบ เ อ ใเ มป มาณ

dNTP เ น วเ ม สาย DNAให โดย อ จาก

primer
เ ม Nucleotide วย ป ยา polymerization
Taq DNA polymerase

ว นแบบ ใ nucleotide วให เ ามา อ

Primer

หากเปรียบเทียบกระบวนการ PCR กับ DNA replication

DNA replication PCR

ขั้น________________________________
Replication fork formation ขั้น Denature
· Helicose ท ลาย bond H- ใช้การเพิ่มอุณหภูมิให้สูง (95C) เพื่อทําลายพันธะ H-
bond ระหว่างสาย DNA
· สาย
- สาย เ ยว

·สาย - สาย เ ยว

ขั้น________________________________
Primer Binding ขั้น Annealing
เอนไซม์ Primase สร้างโมเลกุล RNA สายสั้น ๆ (RNA >ลด
ณห เห อ
45- C
60%

primer) เพือ
่ เข้าเกาะกับสาย DNA ต้นแบบ
·DNA primer เ า DNA น
เกาะ แบน

ขั้น Elongation ขั้น________________________________

Extension
เอนไซม์ DNA polymerase เข้าเกาะกับ RNA primer
· Taa polymerase เ า อความยาว ของ
เพือ
่ ต่อความยาว DNA จากทิศทาง 5’ -> 3’
DN A
· phosphordiester bond เ อ อ ความยาว
·> 2
ANA
ต้
ต่
ด้
ต้
ตั
ตั
ต่
อุ
คู่
คู่
ตี
ต่
ต่
พื่
ดี่
ดี่
ต็
ป็
ต้
ช้
ป็
ข้
ริ
ห้
ฏิ
พิ่
ลื
ม่
กิ
ตั
ริ
ภู
มิ
ม่
ำ
ข้
ข้
พื่
 ในปฏิกิริยา Polymerase chain reaction แต่ละรอบเป็นการเพิ่มปริมาณ DNA เท่าตัว หากเริ่มต้นที่ 1 โมเลกุล ให้
นักเรียนเติมจํานวนของโมเลกุล DNA ที่ได้แต่ละรอบลงในตารางให้ถูกต้อง

PCR cycle 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Copies of DNA I'l

1 2 2 1 ¢

24 8 It 3264 125 226 22 1024 2 2 2

PCR cycle 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
2 9 3อ
Copies of DNA 2. It is agreat stars at 2
2 2ย
2 2 2

3อ
ดังนั้นเมื่อทําปฏิกิริยา Polymerase chain reaction จํานวน 30 รอบ จะได้ DNA เป็น ________________________
2

โมเลกุล และให้นักเรียน plot กราฟ ระหว่างปริมาณ DNA และจํานวนรอบของปฏิกิริยา PCR

230
-

2.

2.

2.

! 24 225 น
วั