ALKALINE PHOSPHATASE

(LIQUID) REAGENT

INTENDED USE INTERFERENCES CALIBRATION

For the in vitro quantitative determination of Alkaline Phosphatase in human serum. 1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, lipernia, were The procedure is standardized by means of the millimolar absorptivity of p-Nitrophenol
carried out, the following results were obtained: (18.75 at 405nm) under the specified conditions. Results are based on the change in
SUMMARY AND EXPLAINATION 1,2 Hemoglobin: absorbance per unit of time; all parameters must be known and controlled.
Alkaline phosphatase is a hydrolytic enzyme found in serum in numerous distinct forms No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 100 mg/dL.
which originate mainly from bone and liver. Physiological increases are found during bone Grossly hemolyzed samples should not be used. QUALITY CONTROL
growth in childhood and in pregnancy, while pathological increases are largely associated Bilirubin: The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with known
with hepatobiliary and bone diseases. Elevated activities are also observed in infectious No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 22.7 mg/dL. values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5)
hepatitis, bone disease, osteornalacia (rickets), bone metastases and hyperparathyroidism. Lipemia:
No significant interference ( 10%) from lipernia up to 1020 mg/dL measured as EXPECTED VALUES (37-C) 7,8
METHODOLOGY triglycerides. Women 20-50 years 42 - 98 U/L.
Alkaline phosphatase in serum is determined by measuring the rate of hydrolysis of 2. A number of drugs and substances may affect the accuracy of this test. See Young, et Men 20-50 years 53 - 128 U/L.
various phosphate esters under specified conditions. p-Nitrophenyl Phosphate is one such al.6 Women >60 years 53 - 141 U/L.
phosphate ester and was introduced as a substrate by Fujita in 1939.3 Bessey, Lon and Men >60 years 56 - 119 U/L.
Brock published an endpoint procedure In 19464 while Bowers and McComb reported a ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT Children have a higher normal value. It is strongly suggested that each laboratory establish
kinetic procedure in 1966.5 The JAS method is based on the kinetic photometric test, PROVIDED its own normal range.
according to the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature (37°C) and
(IFCC). measuring absorbance at 405nm. PERFORMANCE
2. Deionized water and related equipment, e.g.: pipettes Linearity:
PRINCIPLE 3. Analyzer specific consurnables, e.g.: sample cups When run as recommended the assay is linear from 2 to 1500 U/L.
Alk. Phos. 4. Control material such as those provided by JAS Diagnostics.
p-Nitrophenylphosphate + H20 Phosphate + p-Nitrophenol Method Comparison:
ASSAY PROCEDURE Studies performed between this procedure and a similar procedure yielded the following
These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select automated results:
REAGENT COMPOSITION instruments. Refer to your specific JAS instrument application instructions available upon Number of samples pairs: 48
Active Ingredients Concentrations request. Data Range: 41.0 – 286.0 (U/L) )
Reagent l Correlation Coefficient: 0.9957
2-Amino-2-methyl-l-propanol 0.35 M SYSTEM PARAMETERS Slope: 1.0423
Magnesium Sulfate 2.0 mM Alkaline Phosphatase Intercept: 11.7 (U/L)
Zinc Sulphate 1.0 mM Temperature: 37°C
HEDTA 2.0 mM Wavelength: 405 nm Precision:
Reagent 2 Assay Type: Rate/Kinetic Within Run Level 1 Level 2 Level 3
p –Nitrophenylphosphate 16.0 mM Direction: Increase Mean (U/L) 78.5 199.9 343.4
pH (10.3 – 10.5) e.g. Sample Vol. 0.020 mL (20 L) S.D. (U/L) 0.9 1.1 1.9
Concentrations are those in the working reagent. C.V. (%) 1.1 0.5 0.6
Reagent 1 Vol. 1.0 mL (1000 L)
Reagent 2 Vol. 0.250 mL (250 L)
PRECAUTIONS AND WARNINGS: Total Level 1 Level 2 Level 3
Delay/Lag Time: 1 Min
1. For in vitro diagnostic use only. S.D. (U/L) 2.9 5.0 5.8
Read time: 3 Min
2. DO NOT pipette by mouth. Avoid contact with skin and eyes. If spilt, thoroughly wash C.V. (%) 3.7 2.5 1.7
affected area with water. For further information, consult the JAS Alkaline Phosphatase Procedure Notes:
Reagent Material Safety Data Sheet. Sensitivity:
1. The reagent and sample volumes may be altered proportionally to accommodate
3. Reagent contains Sodium Azide as a preservative. In a dry state may react with copper The sensitivity for this reagent when run as recommended is 0.227 mA / min per U/L.
various instrument requirements.
or lead plumbing to form explosive metal azides. Upon disposal, flush with large 2. Samples with values above 1500 U/L should be diluted 1:1 with saline, re-assayed and
amounts of water to prevent azide build up. Note:Performance established on the Synchron CX.
the results multiplied by two.
4. Do not use the reagent after the expiration date printed on the label. 3. If the spectrophotometer being used is equipped with a temperature controlled cuvette, REFERENCES
the reaction mixture may be left in the cuvette while the absorbance readings are taken. 1 . Thomas L. Clinical laboratory Diagnostics. I't ed.
REAGENT PREPARATION
Frankfurt: TH-Books Veriagsgeselischaft; 36-46 (1998).
Reagents are supplied in a two vial, ready to use, liquid form. CALCULATIONS 2. Tietz, N., Textbook of Clinical Chemistry 3d ed,
For some analyzers, the reagents can be combined to make a working solution by mixing 4 One Unit (U/L) Is defined as the amount of enzyme that catalyzes the transformation of Philadelphia, W.B. Saunders, 1999 pp, 617-721
parts of Reagent 1 with 1 part of Reagent 2 (e.g., 20mL Rgt 1 to 5mL Rgt 2).For one micromole of substrate per minute under the specified conditions. 3. Fujita, H., J. Biochem, (Japan) 30:69 (1969).
instructions on use, consult the specific JAS Instrument Application Sheet for your 4. Bessey, O.A., Lowry, OH., Brook, M.J., J. Biol. Chem. 164:321 (1964).
5. Bowers, G.N., Jr., McComb, R.B., Clin. Chem. 12:70 (1966).
instrument. I U/L = ∆Abs./mIn. x 1000 x 1.270 = ∆Abs./min. x 3387 6. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1 D (1975).
18.75 x 1.0 x 0.020 7. Burtis CA, Aswood ER. Eds. Tietz textbook of clinical chemistry 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders
REAGENT STORAGE Where: (1999) p 1829.
1. Store the reagents at 2-8°C (refrigerated). ∆Abs /min. = Absorbance change 8. Soldin JS, Hicks JM. Pediatric reference ranges. Washington: AACC Press, (1996) p5.
2. The reagents are stable until the expiration date when stored at 2-8°C. 1000 = Conversion of U/ml to U/L
3. Working reagent is stable for 4 weeks when stored at (2-8°C). JAS Diagnostics, Inc.
1.270 = Total reaction volume (mL)
4. Do not freeze the reagents. 14100 NW 57th Court. Miami Lakes FL 33014
18.75 = Millimolar absorptivity of p-Nitrophenol
5. Reagent 2 should be protected from light. Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
1 = Light path in cm
www.jasdiagnostics.com
0.020 = Sample volume (mL)
REAGENT DETERIORATION
DO NOT USE THE REAGENT IF: Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
Example: If your Abs / min. = 0.06 then 0.06 x 3387=205 U/L.
1. The reagent is turbid. Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
2. The reagent has an optical density greater than 1.0 at 405 nm. Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
NOTE:
Email: mail@obelis.net
1. If test parameters are altered the factor has to be recalculated using the above formula.
SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE
2. To convert to Sl units (nkat/L) multiply U/L by 0.01667.
1. Use non-hemolyzed serum or heparin plasma
2. Serum samples should be stored at 2-8ºC and run within seven days.
PI: ALP2.JS02 REV: 10/19/09
 FOSFATASA ALCALINA
(LIQUIDA)
Uso Lipemia –
Para la determinación cuantitativa in vitro de Fosfatasa Alcalina en suero humano. No interferencia significativa ( + 10%) para lipemia hasta 1020 mg/dL medido como CALIBRACIÓN
triglicéridos. El procedimiento es estandarizado por promedio de la absortividad milimolar de p-Nitropenol
Resumen y Explicación 1,2 2. Un número de drogas y substancias pueden afectar la precisión de esta prueba. Ver Young, et (18.75 a 405nm) bajo las condiciones especificadas. Los resultados son basados en el cambio de
La Fosfatasa Alcalina es una enzima hydrolitica encontrada en suero en distintas formas las cuales al. 6 absorbancia por unidad de tiempo, todos los parametros deben ser conocidos y controlados.
se originan mayormente desde el hueso o el hígado. Aumentos fisiológicos son encontrados
durante el crecimiento del hueso en la niñez y en el embarazo, mientras aumentos patológicos son EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO Y NO SUMINISTRADO CONTROL DE CALIDAD:
asociados con hepatolobiliary y enfermedades del hueso. Actividades elevadas son también 1. Un analizador de química clínica capaz de Mantener una temperatura constante (37°C) y medir La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con valores
observadas en hepatitis infecciosas, enfermedades del hueso, osteornalacia (rickets), metástasis del una absorbancia a 405nm. conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
hueso y hyperparathyriodismo. 2. Agua desonzada y equipo relacionado, eg: Pipetas
3. Consumibles específicos para el analizador Ej. Copas de Muestras RESULTADOS ESPERADOS (37°C) 7,8
Método 4. Material control como el JAS Control Adultos: 20-50 anos >60 anos
Fosfatasa Alcalina en suero es determinada por la medición de la proporción de hidrólisis de varios Mujeres 42-98 U/L 53-141 U/L
esteres fosfatos bajo condiciones especificas. P-Nitrophenyl Fosfato es uno de esos esteres fosfatos Hombres 53-128 U/L 56-119 U/L
PROCEDIMIENTO PARA USO MANUAL
y fue introducido como un substrato por Fujita en 1939. 3 Bessey, Lon y Brock publicaron un 1. Prepare el reactivo según indicado. Niños tienen un valor normal más alto. Es altamente sugerido que cada laboratorio establezca sus
procedimiento de punto final en 1946 4 mientras Bowers y McComb reportaron un procedimiento propios rangos normales.
2. Añada 1.0 ml de reactivo en los tubos correspondientes y pre-caliente a 37°C por 5 minutos.
cinético en 1966. 5 El método de JAS es basado en un procedimiento fotométrico cinético, de 3. Lelle el espectrofotometro a cero con agua a 405 nm.
acuerdo a la Federación Internacional de Química Clínica y Medicina de Laboratorio (IFCC) DESEMPEÑO:
4. Transfiera 0.025 ml (25 ul) de muestra al reactivo, mezcle e incube a 37°C por un minuto.
5. Despues de un minuto, lea y registre la absorbancia. Regrese el tubo a 37°C. Repita las lecturas Linealidad:
PRINCIPIO Cuando es evaluado según recomendado el ensayo es lineal de 2 – 1500 U/L
cada minuto por los proximos dos minutos.*
p-Nitrophenylphosphate + H2O Alk. Phos.
Phosphate + p-Nitrophenol
6. Calcule el promedio de la diferencia en absorbancia por minuto (Abs/Min.).
7. La Abs/Min multiplicada por el factor 2187 (Vea Calculos) le dara resultados en IU/L. Comparación del Método
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Estudios entre este procedimiento y uno similar obtuvo los siguientes resultados:
8. Muestras con valores mayor que 1000 IU/L deben ser diluidas con un volumen igual de salina,
Ingredientes Activos Concentraciones Numero de muestras: 48
re-ensayadas y los resultados multiplicados por dos.
Reactivo 1 Rangos 41.0 – 286.0 (U/L)
2-Amino-2-methyl-l-propanol 0.35mM Coeficiente de Correlación 0.9957
*NOTA: Si el espectrofotometro esta equipado con una cubeta de temperatura controlada, la
Magnesium Sulfate 2.0mM Pendiente 1.0423
mezcla de reaccion puede mantenerse en la cubeta mientras las lecturas de absorbancia son
Zinc Sulphate 1.0mM Intercepto 11.7 (U/L)
registradas.
HEDTA 2.0mM
Reactivo 2 Precisión:
PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO
p-Nitrophenylphosphate 16.0mM Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Estas instrucciones son guías generales para adaptar a instrumentos automatizados. Referirse a las
pH (10.3 – 10.5) Promedio 78.5 199.9 343.4
Programaciones especificas para instrumentos disponibles en JAS.
Concentraciones son aquellas en el reactivo de trabajo S.D. (U/L) 0.9 1.1 1.9
Parámetros de Sistema
Fosfatasa Alcalina C.V.(%) 1.1 0.5 0.6
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES:
1. Solo para uso de diagnostico In Vitro. Temperatura 37°C
Largo de Onda 405nm Total Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
2. No pipetear con la boca. Evite contacto con la piel y ojos. Si ocurre derrame, lavar el área S.D. (U/L) 2.9 5.0 5.8
afectada con agua abundante. Para información adicional, favor de consultar la Hoja de Datos Tipo de ensayo: Rate/Cinético
Dirección: Aumentativo C.V.(%) 3.7 2.5 1.7
de Seguridad de Material del Reactivo de Fosfatasa Alcalina Liquida de JAS.
3. El reactivo contiene Ácido de Sodio como preservativo. En forma seca puede reaccionar con Ej. Volumen de Muestra 0.020 mL (20µL)
tubería de cobre o plomo para formar ácidos metálicos explosivos. Al descartar, enjuagar con Volumen Reactivo 1 1.0 mL (1000µL)
Volumen Reactivo 2 0.250 mL (250µL) Sensitividad
cantidades grandes de agua para prevenir el crecimiento de ácidos. La sensitividad para este reactivo usado según recomendado es 0.227 Abs. /min. por U/L
4. No usar el reactivo después de la fecha de caducidad en la etiqueta. Retraso 1 Minuto
Lectura 3 Minutos
Nota: Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO
El reactivo es suplido en dos viales listos para usarse en forma liquida. Notas:
1. Los volúmenes de reactivo y muestras pueden ser alterados proporcionalmente para acomodar REFERENCIAS
Para algunos analizadores, el reactivo puede ser combinado para obtener una solución de trabajo 1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. O’I ed. Frankfurt:THJ-Books Veriagsgeselischaft;
mezclando 4 partes del Reactivo 1 con 1 parte del Reactivo 2 (Ej. 20 mL Reactivo 1 y 5mL reactivo requerimientos del instrumento.
2. Muestras con valores mayores de 1500 U/L deben ser diluidas 1:1 con salina, re ensayadas y el 36-46 (1998).
2) Para instrucciones de uso, consultar las programaciones específicas para el instrumento.
resultado multiplicarlo por 2. 2. Tietz, N., Textbook of Clinical Chemistry 3d ed, Philadelphia, W.B. Saunders, 1999 pp, 617-
3. Si el espectrofotómetro a usarse es equipado con cubetas con temperatura controlada, la mezcla 721.
ALMACENAJE
1. Conserve el reactivo a 2-8 °C ( Refrigerado) de reacción debe ser dejada de la cubeta mientras lee la lectura de la absorbancia. 3. Fujita, H.,J. Biochem, (Japan) 30:69 (1969).
2. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad cuando son conservados a 2-8°C. 4. Bessey, O.A., Lowry, OH., Brook, M.J., J.Biol. Chem. 164:321 (1964).
3. Reactivo o solución de trabajo es estable por semanas cuando es conservado a 2-8°C. CÁLCULOS 5. Bowers, G.N., Jr., McComb, R.B., Clin.Chem. 12:70 (1966).
4. No congelar los reactivos. Una unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la transformación de un 6. Young,D.S., et al, Clin. Chem. 21:1 D (1975).
5. Reactivo 2 debe estar protegido de la luz. micro mole de substrato por minuto bajo las condiciones específicas. 7. Burtis CA, AswoodER. Eds. Tietz Textbook of Clinical Chemistry 3rd ed. Philadelphia: W.B.
Saunders (1999) p 1829.
Deterioro del Reactivo 1U/L = = Abs./min x 1.270 x 1000 = Abs./min x 3387 8. Soldin JS, Hicks JM. Pediatric reference ranges Washington: AACC Press, (1999) p5.
No usar el reactivo si: 18.75 x 0.020 x 1.0
1. El reactivo esta turbio. Donde:
2. El reactivo tiene una densidad óptica mayor de 1.0 a 405nm. Abs./min = Cambio en Absorbancia JAS Diagnostics, Inc.
1000 = Conversión de U/mL a U/L 14100 NW 57th Court. Miami Lakes FL 33014
COLECCIÓN Y ALMACENAJE DE MUESTRAS 1.270 = Volumen de reacción Total (mL) Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
1. Usar suero no hemolizado o plasma heparina. 18.75 = Mili molar absortividad of p-Nitro penol www.jasdiagnostics.com
2. Muestras de suero deben ser conservadas a 2-8 °C y analizadas antes de 7 días. 1 = Paso de luz en cm.
0.020 = Volumen de muestra (mL)
INTERFERENCIAS Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
1. Estudios para determinar el nivel de interferencia para hemoglobina, bilirrubina, lipemia y han Ejemplo: Si el Abs./min =0.06, entonces 0.06 X 3387 = 205 U/L Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
obtenido los siguientes resultados: Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
Hemoglobina – Nota: Email: mail@obelis.net
No interferencia significativa ( + 10%) para hemoglobina hasta 100 mg/dL. 1. Si los parámetros de la prueba son alterados el factor tiene que ser recalculado usando la
Muestras hemolizadas no deben ser utilizadas. formula anterior
Bilirrubina- 2. Para convertir unidades SI (nkat/L) multiplicar U/L por 0.01667.
No interferencia significativa ( + 10%) para bilirrubina hasta 22.7 mg/dL.
PI: ALP2.JS02 REV: 10/19/09