AST (SGOT) LIQUID

REAGENT
INTENDED USE
For the in vitro quantitative determination of Aspartate Aminotransferase (AST) in Bilirubin: No significant interference ( 10%) from bilirubin up to 22.7 mg/dL. PERFORMANCE
serum. Lipemia: No significant interference ( 10%) from lipemia up to 533 mg/dL Linearity:
measured as triglycerides. When run as recommended the assay is linear from 1.2 to 600 U/L.
SUMMARY AND EXPLANATION 1 2. See Young, et al.7or other interfering substances.
AST is widely distributed with high concentrations in the heart, liver, skeletal muscle, Method Comparison:
kidney and erythrocytes. Damage or disease to any of these tissues such as myocardial ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT PROVIDED Studies performed between this procedure and a similar methodology yielded the
infarction, viral hepatitis, liver necrosis, cirrhosis and muscular dystrophy may result in 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature (37°C) and following results:
raised serum levels of AST. measuring absorbance at 340nm. Number of samples pairs: 55
2. Deionized water and related equipment, e.g.: pipettes Range of samples: 12.0 – 278.0 (U/L)
METHODOLOGY 3. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups Correlation Coefficient: 0.9987
In 1955 Karmen2 developed a kinetic assay procedure for AST which was based upon the 4. Control material such as those provided by JAS Diagnostics. Slope: 0.9601
use of malate dehydrogenase and NADH. Henry3in 1960 and Amador and Wacker4 in Intercept: -4.1 (U/L)
1962 later presented optimized procedures. These modifications increased accuracy and ASSAY PROCEDURE
lowered the effect of interfering substances. The IFCC5 published a recommended These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select automated Precision:
method that Included P-5-P in 1986. The present method is based on IFCC instruments. Refer to your specific JAS instrument application instructions available Within Run Level 1 Level 2 Level 3
recommendations but does not contain P-5-P, due that the diagnostic significance of AST upon request. Mean (U/L) 26.3 157.0 278.7
is under investigation S.D. (U/L) 0.7 0.5 1.0
SYSTEM PARAMETERS C.V. (%) 2.7 0.3 0.4
PRINCIPLE AST Total
AST Temperature: 37°C S.D. (U/L) 1.0 1.4 3.3
L-Aspartate + 2-Oxoglutarate Oxaloacetate +L- Glutamate Wavelength: 340 nm C.V. (%) 3.6 0.9 1.2
Assay Type: Rate/Kinetic
MDH Direction: Decrease Sensitivity:
Oxaloacetate+NADH L-Malate + NAD Sample / Rgt Ratio: 1: 10 The sensitivity for this reagent when run as recommended is 0.245 mA / min per
e.g. Sample Vol. 0.10mL (100L) U/L.
Aspartate aminotransferase (AST) catalyzes the transfer of the amino group from L- Reagent Vol. 1.0 mL
aspartate to 2-oxoglutarate to yield oxalacetate and L-glutamate. The oxaloacetate Delay/Lag Time: 30 Sec Note:Performance established on the Synchron CX.
undergoes reduction with simultaneous oxidation of NADH to NAD in the malate Read Time: 1-3 Min
dehydrogenase (MDH) catalyzed indicator reaction. The resulting rate of decrease in
absorbance at 340nm is directly proportional to the AST activity. Lactate dehydrogenase PROCEDURE NOTES REFERENCES
(LDH) is added to prevent interference from endogenous pyruvate which is normally 1. Samples with values above 600 U/L should be diluted 1:1 with saline, re-assayed 1. Zilva JF, Pannall PR: Plasma Enzymes in Diagnosis in Clinical Chemistry in
present in serum. and the results multiplied by two. Diagnosis and Treatment. Lloyd-Luke London.1979: Chap15:338-9
2. Karmen, A., et al, J. Clin, Invest. 34:126 (1955).
REAGENT COMPOSITION CALCULATION 3. Henry, R.J. et al, Am.J. Clin. Path. 34:381(1960).
Active Ingredients Concentrations One Unit (U/L) is defined as the amount of enzyme that catalyzes the transformation of 4. Amador, E., Wacker, W., Clin. Chem. 8:343 (1962).
2-Oxoglutarate 13 mM one micromole of substrate per minute under specified conditions. For example: 5. Expert Panel of Enzymes of the International Federation of Clinical Chemistry, Clin
L-Aspartate 220 mM
.Chem. 24: 497-510 (1986).
NADH >0.12 mM AST (U/L) = Abs. /min x 1.10 x 1000 =Abs/min x1768 6. Henry, R.J., Clinical Chemistry: Principles and Technics, 2nd Edition, Hagerstown
LDH (microbial) >1500 U/L 6.22 x 0.l0 x 1.0 (MD), Harper & Row, p. 882 (1974).
MDH (microbial) >100 U/L Where 7. Young, D.S., et al, Clin. Chem, 21:1D (1975).
pH (7.6 – 8.1) Abs. /min. = Average absorbance change per minute 8. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders, p.
1.10 = Total reaction volume (ml) 682 (1976).
PRECAUTIONS 1000 = Conversion of U/mL to U/L
This reagent is for in vitro diagnostic use only. 6.22 = Millimolar absorptivity of NADH
0.10 = Sample Volume (mL)
REAGENT PREPARATION 1.0 = Light path in cm JAS Diagnostics, Inc.
Reagent is supplied ready to use.
7220 NW 58th St., Miami Florida 33166
Example: Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
REAGENT STORAGE If the average absorbance change per minute = 0.12 Then 0.12 x 1768 = 212 U/L www.jasdiagnostics.com
1. Store the reagent at 2-8°C.
2. The reagent is stable until the expiration date when stored at 2-8°C. NOTES:
1. To convert to nkat/L multiply U/L by 16.67. Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
REAGENT DETERIORATION 2. If any of the test parameters are altered, a new factor must be calculated using the Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
DO NOT USE REAGENT IF: above formula. Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
1. The initial absorbance, read against water at 340nm, is below 1.000.
Email: mail@obelis.net
2. The reagent fails to meet stated parameters of performance. CALIBRATION
The procedure is standardized by means of the millimolar absorptivity of NADH taken as
SPECIMEN COLLECTION AND HANDLING6 6.22 at 340nm under the test conditions described.
1. Non-hemolyzed serum is recommended. Red blood cells contain AST.
2. AST in serum is reported stable for seven days when refrigerated, one month frozen, QUALITY CONTROL
and three days when stored at room temperature. The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with
known values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5)
INTERFERENCE
1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, bilirubin, and EXPECTED RANGE 8
lipemia were carried out, the following results were obtained: 5-34 U/L (37°C)
Hemoglobin: Use non-hemolyzed serum, as red blood cells contain AST. No It is strongly recommended that each laboratory establish its own reference range.
significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 400 mg/dL

PI: AST2.JS01 REV: 06/12/07

 AST (SGOT)
LIQUIDO

Bilirubin: No interferencia significativa ( 10%) hasta 22.7mg/dL.

USO Lipemia: No interferencia significativa ( 10%) hasta 533 mg/dL medido como NOTAS:
Para la determinación cuantitativa in vitro de Aspartato Aminotransferasa (AST) en triglicéridos. 1. Para convertir a nkat/L multiplicar UI/L por 16.67.
suero. 2. Refierase a Young, et al.7 para otras sustancias de interferencia. 2. Si alguno de los parámetros de la prueba son alterados, un nuevo factor debe ser
calculado usando la formula anterior.
SIGNIFICADO CLINICO1 EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO
El AST es ampliamente distribuido con altas concentraciones en el corazón, hígado, 1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura de 37° C constante y CALIBRACIÓN
músculos esqueléticos, riñones y eritrocitos. Daños o enfermedades en cualquiera de medir absorbancia a 340 NM. El procedimiento es estandarizado por promedios de la absorción mili molar de NADH
estos tejidos tales como infarto al miocardio, hepatitis viral, necrosis del hígado, cirrosis 2. Agua desionizada y equipo relacionado, Ej. Pipetas tomada como 6.22 a 340 NM bajo las condiciones de la prueba descrita.
o distrofia muscular pueden resultar en el aumento en los niveles de AST en suero. 3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo: Copas de muestras
4. Material control como los proporcionados por JAS. QUALITY CONTROL
MÉTODO La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
Karmen 2 desarrolló un procedimiento de ensayo cinético en 1955 el cual se basa en el PROCEDIMIENTO PARA USO MANUAL. valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
uso de malato deshidrogenasa y NADH. Procedimientos optimizados fueron presentados 1. Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles y muestras
por Henry 3 en 1960 y Amador y Wacker 4 en 1962. Estas modificaciones aumentaron la desconocidas. VALORES ESPERADOS 8
exactitud y disminuyeron los efectos de interferencia de sustancias. La IFCC 5 en 1986 2. Coloque 1000µL de reactivo en cada tubo de prueba e incubar a la temperatura de 5-34 UI/L a 37°C
publicó un método el cual incluye P-5-P. El presente método se basa en las 37ºC por 5 minutos. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores normales.
recomendaciones de la IFCC pero no contiene P-5-P debido a que el significado 3. Calibrar el espectrofotómetro con un blanco de agua (desionizada) a 340nm.
diagnóstico de AST se encuentra bajo estudio. 4. Adicione 100µL de muestra problema y suero control a su correspondiente tubo de DESEMPEÑO
PRINCIPIO prueba, mezclar e incubar por 1 minuto. Exactamente a los 60 segundos después de Linealidad:
la adición de la muestra tome una medición de absorbancia a 340 NM y regístrela Cuando se evalúa de acuerdo a las recomendaciones del ensayo, será linear de 1.2 hasta
L-Aspartato + 2-Oxoglutarato AST Oxalacetato + L-Glutamato como A1. 600 U/L.
5. Continúe la incubación del la muestra de prueba a 37ºC y en exactamente 180
segundos después de la primera lectura, tome la segunda lectura y regístrela como Comparación del Método:
Oxalacetato + NADH MDH L-Malato + NAD A2. Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados con este
6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto procedimiento y uno similar:
(∆ Abs. / min.) = (A2 - A1) Numero de muestras pares: 55
La AST cataliza la transferencia del grupo amino de L-aspartate a 2-oxuglutarato para 3 Rango de muestras 12.0 – 278.0 (U/L)
producir oxalacetato y L-glutamato. Oxalacetato pasa por una reducción con la 7. El ∆ Abs. /min. Multiplicada por el factor 1768 (ver cálculos) es el resultado en UI/L. Coeficiente de correlación 0.9987
oxidación simultanea de NADH a NAD en la reacción catalizada de malato Pendiente 0.9601
deshidrogenasa (MDH). La proporción resultante de reducción en absorbancia a 340 nm Nota: Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente Intercepto -4.1 (U/L)
es directamente proporcional a la actividad de AST. El lactato deshidrogenasa (LDH) se para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos.
añade para prevenir la interferencia de piruvato endógeno el cual normalmente se Muestra con valor sobre los 600 UI/L deben ser diluidos 1:1 con solución salina, re- Precisión:
encuentra presente en el suero. ensayados y el resultado multiplicado por dos Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
Promedio (U/L) 26.3 157.0 278.7
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO D.S. (U/L) 0.7 0.5 1.0
Ingredientes Activos Concentración Para este procedimiento siga las instrucciones contenidas en el manual de operación del C.V. (%) 3.6 0.9 1.2
2-Oxoglutarato 13mM
L-Aspartato 220mM
analizador. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de los reactivos JAS
NADH >0.12 mM para los analizadores más comunes. Estas instrucciones son para ser utilizadas como guía Total: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
LDH >1500 U/L general para la adaptación al instrumento automatizado. D.S. (U/L) 1.0 1.4 3.3
MDH >100 U/L C.V. (%) 3.6 0.9 1.2
Tris Buffer PARÁMETROS
PH (7.6 – 8.1) Sensitividad:
AST
Temperatura: 37°C La sensitividad de este reactivo cuando usado segun recomendado es 0.245 mA / min
PRECAUCIONES
Longitud de Onda 340 NM por U/L
Este reactivo es solo para uso de diagnostico in vitro.
Tipo de Ensayo: Ratio/Cinético
Dirección: Decreciente Nota: Datos obtenidos mediante pruebas realizadas en el Synchron CX.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO
Relación: Muestra/Reactivo 1:10
El reactivo es líquido y está listo para usarse.
Volumen de Muestra 0.10mL (100L) REFERENCIAS:
Volumen de Reactivo 1.0 mL 1. Zilva JF, Pannall PR: Plasma Enzymes in Diagnosis in Clinical Chemistry in Diagnosis and
CONSERVACIÓN DEL REACTIVO Treatment. Lloyd-Luke London.1979: Chap15:338-9
Tiempo de espera: 30 seg.
1. Almacenar el reactivo a temperatura de 2-8°C (refrigeración). 2. Karmen, A., et al, J. Clin, Invest. 34:126 (1955).
Tiempo de Lectura: 1- 3 minutos
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad, si se mantiene en refrigeración (2- 3. Henry, R.J. et al, Am.J. Clin. Path. 34:381(1960).
8°C). 4. Amador, E., Wacker, W., Clin. Chem. 8:343 (1962).
CÁLCULOS: 5. Expert Panel of Enzymes of the International Federation of Clinical Chemistry, Clin .Chem. 24: 497-
Una unidad (U/L) es definida como la cantidad de enzima que cataliza la transformación 510 (1986).
DETERIORO DEL REACTIVO 6. Henry, R.J., Clinical Chemistry: Principles and Technics, 2nd Edition, Hagerstown (MD), Harper &
de un micromol del sustrato por minuto bajo las condiciones especificadas. Por ejemplo:
No utilice el reactivo si: Row, p. 882 (1974).
1. Tiene una absorbancia inicial menor de 1.000 a 340 NM. 7. Young, D.S., et al, Clin. Chem, 21:1D (1975).
Actividad AST (U/L)= (∆ Abs/min) x 1.10 x 1000 = (∆Abs) x Factor (1768) 8. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, Philadelphia, W.B. Saunders, p. 682 (1976).
2. El reactivo falla en el desempeño de los parámetros establecidos.
6.22 x 0.10 x 1.0
Donde:
COLECCIÓN Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA6
∆Abs/min = Cambio promedio absorbancia por minuto JAS Diagnostics, Inc.
1. No se deben utilizar muestras hemolizadas. Las células rojas contienen AST.
1.10 = Volumen total de reacción (mL) 7220 NW 58th St., Miami Florida 33166
2. La AST en suero es estable por 3 días a temperatura ambiente, 7 días en refrigeración Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
1000 = Factor de Conversión de U/mL a U/L
y 1mes en congelación. www.jasdiagnostics.com
6.22 = La absorción mili molar de NADH
0.10 = Volumen de muestras (mL) Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
INTERFERENCIA
1.0 = paso de luz en cm. Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
1. Se llevaron a cabo estudios para la determinación del nivel de interferencia para
Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
hemoglobina, bilirubina y lipemia, se obtuvieron los siguientes resultados: Email: mail@obelis.net
Ejemplo:
Hemoglobin: Usada en suero no bemolizado, ya que las células rojas contienen AST.
Si el promedio del cambio de absorbancia por minuto es: 0.12 entonces 0.12 x 1768 =
No interferencia significativa ( 10%) hasta 400 mg/dL.
212 U/L
PI: AST2.JS01 REV: 06/12/07