3 주차 일반생물학 및 실험(1) 결과 보고서

1. Title & Date

단백질 정량

2022 년 9 월 28 일

2. Objective

BSA 를 이용하여 우유 안의 단백질 함량을 예측한다.

3. Result

먼저 BSA 시료를 이용하여 standard curve 를 그려 미지 시료의 단백질 함량을 예측하기 위해 필요한
그래프를 얻어낸다.

시료의 양 (µl) 0 10 20 40 60 80 100

농도 (µg/ml) 0 0.0500 0.1000 0.2000 0.3000 0.4000 0.5000
흡광도 값 0.000 0.134 0.253 0.471 0.654 0.861 0.976

Standard Curve
1.2

1
f(x) = 1.97450511945393 x + 0.0412167235494881
0.8 R² = 0.991222039652753
흡광도

0.6

0.4

0.2

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6

농도 (mg/ml)

추세선으로 나온 함수 y = 1.9745x 에 우유의 흡광도 값을 대입하면 우유 안의 단백질

농도를 계산할 수 있다. (y 절편은 농도 0 일 때 흡광도 0 이어야 하기 때문에 생략)

희석 정도 0 1/5000 1/2500 1/1000 1/500 1/100

흡광도 값 0.001 0.016 0.039 0.061 0.137 0.489
흡광도 보정값 0.000 0.015 0.038 0.060 0.136 0.488
단백질 농도(mg/ml) 0 0.0076 0.019 0.030 0.068 0.247
4.
 Discussion

1mg/ml BSA(bovine serum albumin)는 단백질 함량을 알고 있는 용액이기 때문에, 이를

이용해서 단백질 함량 그래프를 그릴 수 있었다. 이 그래프에 흡광도를 대입한다면
단백질의 농도를 구할 수 있다.

실험 과정에서 오차가 크게 발생하여, 구한 우유의 단백질 농도가 우유 농도에 비례하지

않았다. 오차의 원인을 분석해보자면, 첫 번째로 standard curve 자체에 문제가 있을 수
있다. R2 값이 0.9912 로, 그래프 자체에 조금의 오차가 있었다. 두 번째로, 우유는 순수한
단백질 용액이 아니기 때문에 단백질 외의 다른 성분에도 반응했을 가능성이 있다.
마지막으로, 용액을 담는 과정이나 큐벳에 이물질 또는 기포가 있어 측정을 방해했을
가능성이 있다.

5. Further Study

1) BSA 이외의 Bradford 기준 단백질로는 BGG(bovine gamma globulin)이 있다. Gamma

globulin 은 혈청 안에 있는 단백질의 한 종류인데, 그 중에서도 BGG 라고 명명한
gamma globulin 을 기준 단백질로 사용한다. 기준 단백질은 모두 세포기관을 구성하는
단백질 위주로 이루어진다.

2) 첫 번째로 UV 흡광 측정법이 있다. 단백질의 기본 구조인 아미노산 중에서, 벤젠 고리를

포함하는 아미노산은 UV 파장에서 빛을 최대로 흡수하는 것을 이용한 방법이다.
단백질을 희석한 용액을 280nm 빛으로 spectrophotometer 로 촬영한다. 이 방법은 특정
아미노산만을 측정하는 방법이기 때문에 정확도가 낮다는 단점이 있다.

두 번째로 Lowry assay 가 있다. 구리 이온과 Folin-Ciocalteu 시약을 이용하는데, 알칼리

환경에서 구리 이온이 환원되는 과정에서 펩타이드 본드와 결합하게 되고, 구리와
펩타이드가 결합한 것에 시약이 환원되면서 700nm 부근에서 푸른빛을 띄게 된다.
따라서 700nm 부근에서 촬영하게 되면, 단백질을 측정할 수 있다. 이 방법은 위
방법보다 정확도가 훨씬 높지만, 알칼리 환경에서 이루어져야 하기에 pH 에 민감하고,
준비과정이 훨씬 복잡하다는 단점이 있다.

세 번째로 BCA assay 가 있다. 뷰렛 구조가 구리 이온과 착화합물을 형성하면 550nm

부근에서 빛을 흡수하기 때문에, 550nm 부근에서 spectrophotometer 를 찍어 측정할 수
있다. 이 방법은 파장 범위 이외에는 본 실험과 제일 동일한 방법이다.

6. Reference
https://ko.wikipedia.org/wiki/브래드퍼드_단백질_정량법

https://dawinbio.com/product-information/?
q=YToxOntzOjEyOiJrZXl3b3JkX3R5cGUiO3M6MzoiYWxsIjt9&bmode=view&idx=3071998&t=board

https://ko.moleculardevices.com/technology/absorbance