họ đanget al.

Sự thật về tế bào vi khuẩn

(2020) 19:173
https://doi.org/10.1186/s12934-020-
Nhà máy tế bào vi
01436-8
sinh vật

REVIEW Open Access

trực khuẩn subtilis: nhà máy sản

xuất tế bào đa năng cho công
nghiệp, nông nghiệp, vật liệu sinh
học và y học
Nguyên Túc1,2, Chu Lưu2,3, Huân Phương2,3 và Đại Vĩ Trương2,3,4*

Abstract
Due to its clear inherited backgrounds as well as simple and diverse genetic manipulation systems,
Bacillus subtilis
is the key Gram-positive model bacterium for studies on physiology and metabolism. Furthermore,
due to its highly efficient protein secretion system and adaptable metabolism, it has been widely used
as a cell factory for microbial production of chemicals, enzymes, and antimicrobial materials for
industry, agriculture, and medicine. In this mini- review, we first summarize the basic genetic
manipulation tools and expression systems for this bacterium, including traditional methods and novel
engineering systems. Secondly, we briefly introduce its applications in the production of chemicals and
enzymes, and summarize its advantages, mainly focusing on some noteworthy products and recent
progress in the engineering of B. subtilis. Finally, this review also covers applications such as microbial
additives and antimicrobials, as well as biofilm systems and spore formation. We hope to provide an
Giới thiệu chu kỳ lên men ngắn hơn, thường là khoảng 48 giờ, trong
trực khuẩn subtilislà một loại vi khuẩn đất gram dương hiếu khi chu kỳ lên men củaSaccharomyces cerevisiaelà khoảng
khí, được sử dụng rộng rãi để sản xuất các protein dị loại [1]. 180 giờ [2,3]. Hơn nữa, sinh vật này có sẵn các hệ thống
Nó tiết ra nhiều enzyme để phân hủy nhiều loại chất nền, giúp biểu hiện xuất sắc với tính ổn định di truyền tốt và nó không
vi khuẩn tồn tại trong môi trường thay đổi liên tục. Loài này có ưu tiên codon mạnh. Khác vớiEscherichia coli,B.
và một số họ hàng gần của nó có khả năng tiết protein rất tốt, subtiliscó một màng tế bào đơn, tạo điều kiện thuận lợi cho
khiến chúng trở thành vật chủ quan trọng để sản xuất protein việc tiết protein, đơn giản hóa quy trình xử lý tiếp theo và
dược phẩm và enzyme công nghiệp. Vì những lý do này, nó giảm chi phí quy trình. Cuối cùng, loài này thường được
đã được sử dụng rộng rãi để sản xuất các protein dị loại. Hơn công nhận là an toàn (GRAS) [4,5].
nữa, nó có những đặc tính sinh lý tuyệt vời và khả năng trao Qua nhiều thập kỷ nghiên cứu, nhiều công cụ khác nhau
đổi chất có khả năng thích ứng cao, giúp dễ dàng trồng trọt để biến đổi gen củaB. subtilisđã được phát triển, bao gồm
trên chất nền rẻ tiền. Theo đó,B. subtilisphát triển nhanh và các chiến lược đánh dấu lựa chọn đối kháng cổ điển và được
phát triển gần đây, nhóm các hộp công cụ dựa trên cơ sở lặp
lại palindromic ngắn xen kẽ ngắn (CRISPR) -Cas9/Cpf1
*Thư tín:zhang_dw@tib.cas.cn được phát triển gần đây. Hệ thống bài tiết protein đa dạng
2
Viện Công nghệ sinh học công nghiệp Thiên Tân, Viện
Hàn lâm Khoa học Trung Quốc, Thiên Tân 300308, Trung
của nó, cũng như các thư viện chất xúc tác nhân tạo và vị trí
Quốc liên kết ribosome (RBS) được phát triển gần đây cũng rất
Danh sách đầy đủ thông tin tác giả có ở cuối bài viết hữu ích trong việc sản xuất các enzyme ngoại bào. mới được

© (Các) Tác giả năm 2020. Bài viết này được cấp phép theo Giấy phép Quốc tế Creative Commons Ghi công 4.0,
cho phép sử dụng, chia sẻ, chuyển thể, phân phối và sao chép dưới bất kỳ phương tiện hoặc định dạng nào, miễn
là bạn ghi công phù hợp cho tác giả gốc( s) và nguồn, cung cấp liên kết tới giấy phép Creative Commons và cho
biết liệu các thay đổi có được thực hiện hay không. Các hình ảnh hoặc tài liệu của bên thứ ba khác trong bài viết
này được bao gồm trong giấy phép Creative Commons của bài viết, trừ khi có quy định khác trong hạn mức tín
dụng cho tài liệu. Nếu tài liệu không có trong giấy phép Creative Commons của bài viết và mục đích sử dụng dự
định của bạn không được quy định pháp luật cho phép hoặc vượt quá mức sử dụng được phép, bạn sẽ cần phải
xin phép trực tiếp từ người giữ bản quyền. Để xem bản sao của giấy phép này, hãy truy cậphttp://creativeco
mmons.org/licenses/by/4.0/. Việc miễn trừ cống hiến cho miền công cộng Creative Commons
(http://creativecommons.org/publicdomain/ không/1.0/) áp dụng cho dữ liệu được cung cấp trong bài viết này, trừ
khi có quy định khác trong hạn mức tín dụng cho dữ liệu.
 Su et al. Microb (2020)
Phương pháp tích hợp băng cassette biểu hiện (MEXI) được
phát hiện dựa trên transposon của thủy thủ có thể tạo ra các
đột biến đột biến với mức độ biểu hiện GFP nội bào và AprE
ngoại bào cao hơn so với phương pháp thường được sử
dụngamyEphương pháp tích hợp [6], do đó cải thiện việc sản
xuất các protein dị loại. Ngoài vai trò là vật chủ xuất sắc
trong các lò phản ứng sinh học,B. subtilislà một chế phẩm
sinh học đa chức năng lý tưởng, có tiềm năng lớn trong việc
ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn gây bệnh và tăng cường
đồng hóa chất dinh dưỡng [7].B. subtiliscũng thường được sử
dụng làm nhà máy sản xuất tế bào công nghiệp, để sản xuất
vitamin, inositol, acetoin, hyaluronan và các hóa chất khác.
Nền tảng di truyền rõ ràng và các công cụ thao tác gen được
phát triển tốt của nó cho phép tái tạo quá trình trao đổi chất
trong tế bào của nó và sự sẵn có của các bộ sưu tập loại trực
tiếp khiến chúng trở nên hấp dẫn như các vật chủ kỹ thuật
trao đổi chất [số 8]. Yang Gu và cộng sự. đã thiết kế lại quá
trình chuyển hóa cacbon và oxi hóa khử trung tâm củaB.
subtilisvới cách tiếp cận “thúc đẩy kéo đẩy” mới, qua đó họ
điều khiển quá trình chuyển hóa carbon trung tâm, loại bỏ
tình trạng tràn trao đổi chất và đạt được sản lượng cao N-
acetyl-glucosamine (GlcNAc) [9]. Trong nông nghiệp, các
nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc bổ sung một lượng thích hợpB.
subtiliscó thể cải thiện đáng kể hàm lượng mùn và cacbon
trong phân trộn, do đó cải thiện chất lượng đất và thúc đẩy
tăng trưởng cây trồng [10].B. subtiliscũng có thể tạo thành
các màng sinh học phức tạp, có thể được sử dụng làm vật liệu
sinh học sống để sản xuất nhiều vật liệu sinh học chức năng,
như các yếu tố tăng trưởng bề mặt, kháng sinh, lysozyme và
peptide kháng khuẩn cho vật liệu y tế.
Trong bài viết này, chúng tôi đã xem xét những tiến bộ gần
đây trong kỹ thuật trao đổi chất và hệ thống biểu hiện protein,
cũng như các ứng dụng công nghiệp, nông nghiệp và vật liệu
sinh học củaB. subtilis. Cuối cùng, chúng tôi đã phân tích các
yếu tố cản trở việc áp dụng thêm chủng này và thảo luận về lý
do. Đánh giá này cung cấp tài liệu tham khảo cho các nhà
nghiên cứu muốn có được sự hiểu biết chung vềB. subtilisvà
các ứng dụng khác nhau của nó (Hình 2).1).
Thao tác di truyền củatrực khuẩn subtilis
BẰNGB. subtilisđược chọn làm vi khuẩn mẫu, các công cụ di
truyền đơn giản và hiệu quả đã được phát triển trong những
thập kỷ qua. Việc chỉnh sửa bộ gen cổ điển dựa vào việc chèn
một dấu hiệu có thể chọn lọc, thường là gen kháng kháng
sinh, vào nhiễm sắc thể của chủng mục tiêu [11]. Các hệ
thống thao tác di truyền không có sẹo được sử dụng phổ biến
nhất choB. subtilisdựa vào các điểm đánh dấu có thể lựa chọn
ngược (CSM) [12], trong khi các phương pháp khác bao gồm
hệ thống tái tổ hợp theo địa điểm cụ thể (SSR) [13] và hệ
thống CRISPR-Cas9 được phát triển gần đây [14].
CSM thường được sử dụng để xây dựng các chủng được
thiết kế không đánh dấu và đã được sử dụng để xây
dựngTrực khuẩnnhà máy sản xuất tế bào cho các ứng dụng
công nghiệp khác nhau.
Các dấu hiệu có thể chọn lọc nói chung có thể được chia
thành các dấu hiệu chọn lọc tích cực và tiêu cực, trong đó
các dấu hiệu chọn lọc trước đây là các dấu hiệu kháng kháng
sinh phổ biến nhất. Theo phương pháp cổ điển này, các
Page
chủng kháng kháng sinh được chọn lọc trên các đĩa thạch
thích hợp (Hình 2).2). Ngoài các dấu hiệu tích hợp về mặt di
truyền, Jeong et al. đã xây dựng một mạch gen tổng hợp bao
gồm hệ thống chọn lọc dựa trên plasmid, trong đó P xyl-lacIvà
gen kháng neomycin (tân) được tích hợp vào bộ gen, trong
khi Pkhoảng cách-cloramphenicol (con mèo) băng cassette điện
trở vàxylRgen nằm trên plasmid. Ở lần tái tổ hợp đầu tiên,
Pxyl-lacIVàtânđược tích hợp vào bộ gen như một điểm đánh
dấu có thể lựa chọn. Khi xyloza được thêm vào môi
trường,lacIgen được biểu hiện thì gen kháng cloramphenicol
bị ức chế. Do đó, tế bào sẽ chỉ tồn tại khi P xyl-lacIVàtânsẽ bị
xóa thông qua vòng tái hợp thứ hai. Cuối cùng, plasmid có
thể được loại bỏ sau vài vòng nuôi cấy mà không cần dùng
cloramphenicol [15]. Đây là một phương pháp có hiệu quả
cao trong kỹ thuật gen trongB. subtilis, và nó tránh đưa một
dấu hiệu chọn lọc vào bộ gen hoặc tránh sự biểu hiện được
kiểm soát chặt chẽ của một gen độc hại. Các dấu hiệu có thể
lựa chọn ngược khác thường được sử dụng trongB.
subtilisbao gồmhướng lên,bla,tìm kiếm, VàChào[11]. Fab-
ret et al. đã sử dụnghướng lêngen mã hóa uracil
phosphoribosyltransferase như một chất đánh dấu chọn lọc
đối kháng để đạt được sự truyền các đột biến điểm không
được gắn nhãn, xóa trong khung và số lượng lớn các lần xóa
trên nhiễm sắc thể [16]. Brans và cộng sự. đã phát triển một
phương pháp khác để loại bỏ một gen đơn lẻ và đưa vào một
gen mới bằng cách kết hợp việc sử dụngbla, một gen kháng
kháng sinh, mã hóa chất ức chếTrực khuẩn
licheniformisBlaP β-lactamase, với khả năng hỗ trợ lysine
có điều kiện
B. subtilissự căng thẳng [17]. Tuy nhiên, các chiến lược dựa
trên CSM yêu cầu sửa đổi trước máy chủ và có tỷ lệ thành
công thấp do biểu hiện rò rỉ của CSM.
Hệ thống tái tổ hợp theo vị trí cụ thể (SSR) là công cụ
mạnh mẽ để cắt bỏ chính xác các đoạn DNA. Những hệ
thống này, chẳng hạn nhưFLP/FRT[18] VàCre/loxP[13], có
hiệu suất tái tổ hợp cao hơn nhiều so với các hệ thống tái tổ
hợp nội sinh, khiến chúng trở thành công cụ lý tưởng cho
nhiều thao tác di truyền. Bằng cách kết hợp một đột
biếnCre/loxhệ thống với phương pháp PCR tổng hợp đoạn
dài [19], Yan và cộng sự. đã phát triển một cách nhanh
chóng và chính xácB. subtiliscông cụ kỹ thuật gen cho phép
thực hiện các hoạt động như bất hoạt gen mục tiêu, xóa đoạn
dài và xóa trong khung của gen mục tiêu [13].
Trong những năm gần đây, việc áp dụng hệ thống liên
quan đến CRISPR (Cas) trongB. subtilisđã làm phong phú
thêm hộp công cụ chỉnh sửa gen. Locus CRISPR lần đầu
tiên được phiên mã thành tiền chất axit ribonucleic CRISPR
(tiền crRNA), sau đó được cắt thành các đơn vị RNA nhỏ
dưới tác dụng của protein Cas hoặc endnuclease.
 Su et al. Microb (2020) Page

Các đơn vị RNA nhỏ này là các crRNA trưởng thành chứa người hiến; (3) Hệ thống tích hợp nhiễm sắc thể ổn định và
các trình tự đệm và các trình tự lặp lại một phần. Sự trưởng hiệu quả hơn hai hệ thống đầu tiên, nhưng nó đòi hỏi phải sử
thành của crRNA của hệ thống CRISPR/Cas loại II không chỉ dụng các chủng được thiết kế. Cas9 đã được tích hợp vào bộ
đòi hỏi sự tham gia của Cas9 và RNase mà còn cần sự hướng gen và sau đó hệ thống con khởi tạo araE/R được sử dụng để
dẫn của tracrRNA [20]. Các crRNA trưởng thành và xây dựng vectơ phân phối nhiều gRNA [22]. Hơn nữa, bộ
tracrRNA hình thành nên cấu trúc RNA sợi đôi thông qua công cụ CRISPR-Cas9 này đã được mở rộng sang can thiệp
việc ghép cặp bazơ bổ sung. Các song công thu được liên kết CRISPR (CRISPRi) để điều chỉnh mức độ phiên mã [21].
với protein Cas9 để tạo thành một phức hợp cắt có mục tiêu, Hệ thống CRISPRi bao gồm protein Cas9 (dCas9) và gRNA
đặc biệt là cắt các trình tự ngoại lai để đạt được mục tiêu xác đã ngừng hoạt động, cho phép nhắm mục tiêu dCsa9 tới bất
định và loại bỏ các gen ngoại lai xâm lấn như plasmid và vi kỳ mục tiêu nào
rút [21–23]. Hiện tại, có ba loại chiến lược chỉnh sửa bộ gen
dựa trên CRISPR/Cas9 được sử dụng rộng rãi trongB.
subtilis. (1) Hệ thống dựa trên plasmid đơn, trong đó Cas9,
RNA dẫn hướng đơn (gRNA), DNA cho và các yếu tố khác
được lắp ráp vào cùng một bộ khung mang, trong đó protein
Cas9 và gRNA
lần lượt được biểu hiện từ các chất xúc tiến cấu thành mạnh
hoặc cảm ứng; (2) Hệ thống dựa trên hai plasmid linh hoạt
hơn hệ thống dựa trên plasmid đơn lẻ. Trong hệ thống này,
Cas9, gRNA và DNA của người hiến được lắp ráp trên hai
plasmid khác nhau, lần lượt được sử dụng để tạo ra protein
Cas9 và cung cấp mô-đun phiên mã gRNA và mẫu DNA của
 Su et al. Microb (2020) Page

Fig. 2 Schematic overview of genome editing methods based on counter-selectable markers. Left: genome editing (gene
knockout as an example) with two integration steps. Step 1, an exogenous artificial DNA (plasmid or fragment) with up- and
downstream homologous sequences is integrated into the genome, replacing the target gene. The recombinant clone can be
selected under condition A. Step 2, under the selection condition B, the clone obtained in step 1 deleted the selectable marker
and repressor/toxin gene through a self-recombination with the DR (direct repeats). Right: Composition of the selectable

gen trên bộ gen dưới sự hướng dẫn của gRNA để ức chế quá
Biểu hiện gen ởtrực khuẩn subtilis
trình phiên mã của nó mà không gây ra sự đứt gãy chuỗi kép,
Để tăng cường và điều chỉnh mức độ biểu hiện gen một cách
điều này có thể được áp dụng để ức chế gen trong kỹ thuật
thích hợp trongB. subtilis, điều cần thiết là phải nghiên cứu
trao đổi chất [24]. Vì vậy và cộng sự. đã phát triển một kỹ
các yếu tố thúc đẩy điều chỉnh mức độ phiên mã [30]. Các
thuật kỹ thuật bộ gen có nguồn gốc từ CRISPR để tạo ra các
trình tự khởi đầu cấu thành và cảm ứng thường được áp
đoạn xóa bộ gen lớn một cách hiệu quả trongB. subtiliskhông
dụng để biểu hiện các gen dị loại trongB. subtilis[31]. Ngoài
đưa vào các dấu hiệu có thể chọn lọc ngược như gen kháng
các yếu tố khởi đầu, mức độ biểu hiện protein cũng bị ảnh
kháng sinh, điều mà trước đây đã hạn chế việc áp dụngB.
hưởng bởi sức mạnh của vị trí liên kết ribosome, trong khi
subtilistrong kỹ thuật thực phẩm [25]. Phương pháp này có
các plasmid với số lượng bản sao khác nhau cũng cung cấp
khả năng ứng dụng rộng rãi đối với nhiều loại đột biến định
các lựa chọn để điều chỉnh mức độ biểu hiện gen [31]. Các
hướng tại chỗ ởB. subtilis[24,26,27]. Tuy nhiên,
gen khác nhau có các đặc điểm biểu hiện cụ thể và sự biểu
CRISPR/Cas9 có hiệu quả thấp trong việc chỉnh sửa đa gen.
hiện của chúng phải được điều chỉnh ở mức thích hợp cho
Lưu và cộng sự. gần đây đã phát triển hệ thống chỉnh sửa bộ
một lộ trình trao đổi chất cụ thể, điều này đòi hỏi phải sử
gen qua trung gian CRISPR/Cas9n, sử dụng Cas9n để trao
dụng các chất xúc tiến có cường độ khác nhau cho các mục
đổi Cas9 tự nhiên của các cấu trúc hiện có để lấyB. subtilisvà
đích kỹ thuật [32]. Các nhà nghiên cứu đã mở rộng phạm vi
để chỉnh sửa lặp đi lặp lại bộ gen [28]. Hệ thống này hiệu quả
mức độ phiên mã gen mục tiêu bằng cách xây dựng các thư
hơn CRISPR/Cas9 trong nhiều loại chỉnh sửa gen khác nhau
viện khởi đầu. Trong một nghiên cứu gần đây, Liu et al. đã
và cho thấy hiệu quả cao hơn đối với việc xóa bộ gen lớn
xây dựng một thư viện trình khởi động tổng hợp với độ dốc
hoặc chỉnh sửa gen ghép kênh. Về mặt chỉnh sửa và điều
cường độ bằng cách phân tích dữ liệu bảng điểm vi mảng
chỉnh đa gen, hệ thống CRISPR/Cpf1 mới được phát triển là
củaB. subtilis168, có thể được sử dụng để tinh chỉnh rộng rãi
công cụ mạnh mẽ nhất trongB. subtilis. So với CRISPR/Cas9,
các con đường di truyền trongB. subtilis, tạo điều kiện thuận
CRISPR/Cpf1 có độ đặc hiệu nhắm mục tiêu cao hơn và có
lợi cho kỹ thuật biến dạng và sinh học tổng hợp [33]. Để cho
thể được sử dụng để chỉnh sửa gen trong tế bào người, tế bào
phép sự đồng biểu hiện hiệu quả và chính xác của nhiều gen
thực vật và nhiều vi khuẩn, đồng thời mang lại hiệu quả chỉnh
trong mạng lưới trao đổi chất, một đánh giá gần đây đã thảo
sửa đa gen cao hơn [29]. Trên thực tế, hệ thống này mang lại
luận về các thư viện xúc tiến xây dựng bằng phương pháp
hiệu quả lên tới 100% cho việc loại bỏ kép trong khung, cho
gây đột biến định hướng tại chỗ [34], chẳng hạn như PCR dễ
phép tạo ra các đột biến nhiều điểm (lên đến sáu) với hiệu
bị lỗi, đột biến bão hòa và thiết kế định hướng. Trình tự
suất 100% và có thể được sử dụng để kích hoạt và/hoặc ức
RBS có thể được sử dụng để tinh chỉnh biểu hiện gen ở cấp
chế đồng thời. nhiều gen [27].
độ dịch mã. Khi sử dụng các chất xúc tiến cảm ứng, các vị
trí liên kết ribosome khác nhau có thể được sử dụng để tinh
chỉnh phạm vi hoạt động biểu hiện gen. Ngoài ra, thẻ phân
giải protein có thể được sử dụng để kiểm soát tốc độ phân
hủy của
 Su et al. Microb (2020)
một protein ở cấp độ sau dịch mã [35]. Hộp công cụ biểu hiện
gen tổng hợp bao gồm các thư viện khởi động, thư viện RBS
và các thẻ phân giải protein khác nhau có thể thực hiện điều
hòa gen với phạm vi động 5 bậc độ lớn [36]. Các yếu tố khác
ngoài vùng khởi động và RBS cũng được sử dụng để điều
chỉnh biểu hiện gen trongB. subtilis. Thiên và cộng sự. đã tiến
hành và phân tích thống kê 96 trình tự mã hóa đầu cuối N
(NCS) được lựa chọn hợp lý từB. subtilis, ảnh hưởng đến sự
biểu hiện gen ở cấp độ dịch mã. Họ phát hiện ra rằng sự thay
thế NCS hiệu quả và thuận tiện hơn so với việc thay thế chất
khởi động để cải thiện biểu hiện gen [37]. Naseri và cộng sự.
thảo luận về việc xây dựng các thư viện phức tạp và các chiến
lược tối ưu hóa tổ hợp. Tuy nhiên, các ví dụ được đưa ra
trong đánh giá của họ chỉ ra rằngE coliVàS. cerevisiaeđược
sử dụng làm máy chủ thường xuyên hơnB. subtilis[38]. Do
đó, các nghiên cứu trong tương lai nên tập trung phát triển
các công cụ mới cho vi khuẩn mẫu Gram dương quan trọng
này.
Hệ thống bài tiết protein củatrực khuẩn subtilistrực
khuẩn subtiliscó khả năng biểu hiện và bài tiết protein mạnh
mẽ, điều này dẫn đến việc sử dụng rộng rãi nó trong sản
xuất các chế phẩm enzyme công nghiệp. Ngoài các chất xúc
tiến và hệ thống biểu hiện plasmid phong phú được mô tả ở
trên,B. subtiliscũng có một hệ thống bài tiết protein hiệu quả
để đáp ứng nhu cầu bài tiết các loại protein khác nhau. Có
ba con đường bài tiết protein cổ điển
Fig. 3 Schematic diagram of protein secretion pathways in B. subtilis. The mechanism of the non-classical secretion pathway is
Page
TRONGB. subtilis, con đường bài tiết protein chung (Sec),
con đường chuyển vị hai arginine (Tat) và các chất vận
chuyển cassette liên kết ATP (ABC) [39] (Quả sung.3). Con
đường Sec là kênh vận chuyển chính, có thể vận chuyển một
lượng lớn protein được xuất khẩu. Các yếu tố thiết yếu của
con đường Sec là hạt nhận dạng tín hiệu (SRP), translo-case
Sec, peptidase tín hiệu loại I và người đi kèm. Sau khi tổng
hợp protein tiền chất, có hai con đường đi qua con đường
Sec. Trong trường hợp đầu tiên, peptide tín hiệu được nhận
biết bởi hạt nhận dạng tín hiệu (SRP) với sự trợ giúp của
người đi kèm tế bào chất, sau đó được chuyển đến màng để
liên kết với FstY, protein thụ thể của SRP và được vận
chuyển đến kênh của phức hợp dịch mã Sec (kênh dịch mã).
Con đường thứ hai duy trì khả năng chuyển vị của protein
tiền thân bằng cách ngăn chặn sự gấp khúc hoàn toàn của nó
bằng cách sử dụng các chất đi kèm nội bào, và sau đó nó
được chuyển đến phức hợp dịch mã Sec. Tiếp theo, chuỗi
peptide tín hiệu đầu N bị cắt bởi các peptidase tín hiệu. Cuối
cùng, protein dịch chuyển được gấp lại trong không gian
ngoại bào với sự trợ giúp của những người đi kèm ngoại bào
[30,40]. Ngược lại với con đường Sec, dựa trên các chất nền
chưa được trải ra, con đường Tat vận chuyển các protein
được gấp chặt có chứa họa tiết arginine đôi được bảo tồn
trong các chuỗi peptide tín hiệu. Trước khi chuyển vị, các
tiền chất sẽ gấp nếp trong tế bào chất với sự trợ giúp của các
đồng yếu tố, và sau đó được
 Su et al. Microb (2020) Page

được bài tiết qua phức hợp protein Tat (Tat translo-case) sử
Ứng dụng công nghiệp của hóa chất được sản
dụng năng lượng từ gradient pH qua màng tế bào chất. Sau
xuất bởitrực khuẩn subtilis
khi dịch mã, peptidase tín hiệu loại I xử lý peptide tín hiệu và
Ứng dụng công nghiệp củaB. subtilisđã phát triển nhanh
cuối cùng, các protein trưởng thành gấp lại được tiết ra khỏi
chóng trong những thập kỷ qua và đã trở thành nhà máy sản
tế bào. Các chất vận chuyển băng cassette liên kết ATP
xuất tế bào vi sinh vật lớn cho nhiều sản phẩm công nghiệp
(ABC) chứa hai miền xuyên màng (TMD) xác định các vị trí
[44,45], bao gồm cả enzym [46], protein dị loại [31],
liên kết cơ chất và hai miền liên kết nucleotide hòa tan (NBD)
kháng sinh [47], vitamin [48] và axit amin [26]. Hóa chất
hoạt động như các miền vận động [30,39]. Chúng tương đối
được sản xuất bởiB. subtiliscũng đóng một vai trò quan
đặc trưng cho cơ chất của chúng và có thể xuất hoặc nhập các
trọng trong nhiều lĩnh vực khác nhau như thực phẩm, thức
phân tử khác nhau (ion, axit amin, peptide, kháng sinh,
ăn chăn nuôi, mỹ phẩm, hóa chất và dược phẩm. Ở đây,
polysacarit, protein, v.v.) [39].
chúng ta sẽ tập trung vào vitamin và các hóa chất khác được
Ngoài ba con đường bài tiết protein cổ điển được đề cập ở
sản xuất bởiB. subtilis, trong đó vitamin B2, vitamin K,lưỡi
trên, các nhà nghiên cứu cũng phát hiện ra rằng nhiều con
liềm-inositol, axit hyaluronic và N-acetylglucosamine sẽ
đường bài tiết phi cổ điển được sử dụng để tiết ra các protein
được thảo luận chi tiết. Bàn1cũng liệt kê một số hóa chất
phi cổ điển thiếu bất kỳ peptide tín hiệu hoặc mô típ bài tiết
tiêu biểu khác được sản xuất bởiB. subtilis.
nào đã biết [41]. Vương và cộng sự. đã sử dụng bốn protein
bài tiết phi cổ điển điển hình làm tín hiệu để chỉ đạo việc xuất
Vitamin là sản phẩm có giá trị cao
khẩu protein giống hạt nhân (Nsp) từB. subtilistế bào. Hai
Trong một nghiên cứu gần đây, các nhà máy sản xuất tế bào
trong số họ có thể hướng dẫn việc xuất khẩu phosphatase
vi sinh vật để sản xuất vitamin B đã được mô tả chi tiết
kiềm (PhoA) và một trong số họ có thể hướng dẫn việc tiết ra
[48].B. subtiliscó thể được sử dụng để sản xuất vitamin B 1,
protein báo cáo chịu nhiệt β-galactosidase (BgaB) [42]. Chen
B2, B5, B6, và B7và nhiều chủng sản xuất được xây dựng
và cộng sự. đã sử dụng d-psicose 3-epimerase (RDPE) để tiết
bằng kỹ thuật trao đổi chất hoặc sàng lọc và chọn lọc từ các
trực tiếp hai trong số năm protein lạ từ các vi khuẩn khác.
thư viện đột biến [48]. Vitamin B2 là một trong những sản
Các protein tổng hợp không chỉ giữ lại các hoạt động sinh
phẩm lên men vi sinh vật thành công nhất ở quy mô công
học hoặc enzyme tương ứng mà còn có hoạt tính RDPE [43]
nghiệp [49]. Còn được gọi là riboflavin (RF), Vitamin B 2 là
(Quả sung.3).
tiền chất của flavin mononucleotide và flavin adenine
dinucleotide [50], và nó được sử dụng rộng rãi vì chất chống
oxy hóa, tăng cường miễn dịch, chống ung thư, cũng như tác
dụng tăng cường thực phẩm và thức ăn chăn nuôi [51].
Chiến lược kỹ thuật trao đổi chất

Bảng 1 Các hóa chất đại diện được sản xuất bởiB. subtilis
Các sản chủng Đặc trưng tiêu đề Người
phẩm giới
thiệu
Riboflavin B. subtilis125 Việc bãi bỏ quy định củaxương sườncon đường tổng 4232±34,42 [50]
hợp operon và purine de novo
mg/L

Menaquinone- B. subtilis20- Sự biểu hiện quá mức củaCD tatADVàqcrA-C 410 mg/L [60]
7 QT
Scyllo-inositol B. XóaiolABCDEF,iolHIJ,iolXVàiolR, kết hợp với 27,6 g/L [61]
subtilisKU303
biểu hiện củaIolG,IolW,IolTVàPntAB
Axit hyaluronic B. subtilisE168TH Biểu hiện củakhông phảiA,tuaD,gtaB,glmU,glmM,glmS, VàH6LHyal 19,38 g/L
[64]
N-acetylglucosamineB. subtilis168 BNDR122 Xóađã làm P,bước
P,hoàn thành,gamR,cằn nhằn,đã làm B,ldh,alsRSD,pta, 131,6 g/L [67]
ackA,glcK, pckA,
pyk,lacAVàamyE,
kết hợp với biểu
thức củaGN
vô định hình B. subtilis1A1 biểu hiện quá mức củaPhải,đã từng làVàQuảng cáo 20 mg/L [96]
Axit poly-γ-glutamic B. subtilisZJU−7 Tối ưu hóa điều kiện nuôi cấy 101,1 g/L [97]
Acetoin B. subtilisCGMCC 13.141 Xóatìm kiếm,bdhAVàacoA 83,7 g/L [98]
Nhìn bạn kìa B. subtilis168 CLC6- WEDGE XóapykAVàaroI

4,67 g/L [99]

2,3-Butanediol B. subtilisF9 Xóahướng Chondroitin B. subtilisE168H Biểu hiện củakfoC-
lên,acoA,bdhA,pta, Vàldh, kết hợp với
biểu hiện củacũng như,alsD,nụC, kfoAVàkfiC-kfiA, kết hợp với sự điều chỉnh lại củatuaD
VàĐƯỜNG Heparosan B. subtilisE168H Biểu hiện củakfoC-
Isobutanol B. subtilisUL08 Xóacũng kfoAVàkfiC-kfiA, kết hợp với sự điều chỉnh lại củatuaD
như,ldh,pdhCVàpgi, kết hợp với biểu thức
củazwfVàĐƯỜNG
 Su et al. Microb (2020) Page
103,7 g/L [100]
5,22 g/L [102]
6,12 g/L [101]
5,82 g/L [102]
 Su et al. Microb (2020)
dựa trên con đường trao đổi chất riboflavin củaB.
subtilisthường dựa trên việc tối ưu hóa quá trình chuyển hóa
carbon trung tâm, biểu hiện quá mức và bãi bỏ quy định về
con đường tổng hợp RF và sinh tổng hợp purine, cũng như
ngăn chặn quá trình tổng hợp các sản phẩm phụ [52]. Nguồn
cung cấp tiền chất trong con đường sinh tổng hợp RF có thể
được tăng cường bằng cách chuyển hướng dòng cacbon thông
qua con đường PPP (con đường pentose phosphate) từ con
đường EMP (Embden-Meyerhof- Parnas) và tăng biểu hiện
của các gen sinh tổng hợp purine (mặc dùoperon), do đó làm
tăng sản xuất GTP [53,54]. Hiệu suất riboflavin trong quá
trình lên men theo mẻ sử dụngB. subtilisđạt tới 826,52 mg/L
[54]. Năng suất RF tuyệt vời củaB. subtiliscũng có thể là do
hiệu suất tuyệt vời của các hóa chất có chung tiền chất, chẳng
hạn như ribose, nucleoside purine và axit folic. Ngoài ra,
năng suất RF có thể tăng lên bằng cách cải thiện các đặc tính
của vật chủ. Các nghiên cứu gần đây cho thấy việc đưa
protein sốc nhiệt từ vi khuẩn ưa nhiệt vào có thể cải thiện khả
năng chịu nhiệt và khả năng chịu thẩm thấu củaB. subtilis,
cho phép nó lên men ở nhiệt độ cao hơn, do đó rút ngắn thời
gian lên men và cải thiện hiệu giá RF [55].
Ngoài vitamin nhóm B,B. subtiliscũng có thể sản xuất
menaquinone-7 (MK-7), một thành viên của vitamin K có giá
trị2 có thể thúc đẩy quá trình đông máu và khả năng tạo
xương, đồng thời còn được biết đến với các đặc tính dinh
dưỡng và dược lý khác. Trong quá trình lên men MK-7,
glycerol, glucose, sucrose hoặc tinh bột được sử dụng làm
nguồn carbon và chiết xuất nấm men, pepton, natri nitrat hoặc
pepton đậu nành làm nguồn nitơ [56]. Sử dụng ethanol để
chiết xuất MK-7 trực tiếp từ tế bào sau khi lên men tạo ra
hiệu suất MK-7 là 1,47 mg/g [57]. Wu và Ahn đã tối ưu hóa
các thành phần trung bình thông qua phương pháp bề mặt
phản hồi ba bước.
tăng
rằng lên 71,95±1,00
phương pháp đomg/L
mùi[58].
(RSM)Yang
và và
sảncộng sự. vitamin
lượng nhận thấy
K
biểu hiệnnếu một,Phải,Tiến sĩ,yacM,yacNVàglpD
tạo thành nút thắt cổ chai cho việc sản xuất MK-7. Đánh
bạidhbBcó thể thúc đẩy sản xuất MK-7 và nó được cải thiện
hơn nữa bằng cách áp dụng công nghệ lên men mật độ cao
[59]. Ngoài ra, MK-7 là thành phần quan trọng của màng vi
sinh vật, nơi nó đóng vai trò quan trọng trong quá trình vận
chuyển điện tử và quá trình phosphoryl oxy hóa. Cui và cộng
sự. điều hòa thành phần màng và vận chuyển điện tử bằng sự
đồng biểu hiện của protein màng tế bàoCD tatADvà
menaquinol-cytochrome lyaseqcrA-C, làm tăng hiệu giá của
MK-7 lên 410 mg/L trong bình lắc [60].
Scyllo-inositol (SI)
Scyllo-inositol (SI), một đồng phân lập thể của inositol, đang
được nghiên cứu như một tác nhân điều trị tiềm năng cho
bệnh Alzheimer. Tuy nhiên, hợp chất này ít hơn nhiều
phong phú hơn so với tương tự của nómyo-inositol (MI), là
đồng phân lập thể inositol dồi dào nhất trong tự nhiên và có
thể thu được từ cám gạo. Do đó, nhiều nghiên cứu đã nghiên
cứu các chiến lược chuyển đổi MI thành SI bằng cách sử
dụng vi sinh vật. Tanaka và cộng sự. đã tạo ra một chủng có
khả năng chuyển hóa inositol biến đổi bằng cách xóa tất cả
các gen liên quan đến chuyển hóa inositol và biểu hiện quá
mức các enzyme chủ chốt, IolG và IolW, trongB. subtilis,
Page
dẫn đến một nhà máy sản xuất tế bào có thể chuyển đổi MI
thành SI với hiệu suất cao hơn [61]. Thông qua việc biến đổi
gen của quá trình chuyển hóa inositol và con đường bài tiết
phytase củaB. subtilis, peptit tín hiệu củaB. subtilisđược tối
ưu hóa, chất vận chuyển MI chính, IolT, được biểu hiện quá
mức và khả năng hấp thụ chất nền được cải thiện. Đồng
thời,pntgen AB củaE coliđược giới thiệu để cải thiện việc
sản xuất NADPH, giúp cải thiện hoạt động của inositol
dehydrogenase, IolW. Những sửa đổi này đã tăng thành
công hiệu suất chuyển đổi của MI lên 30 g/L/48 giờ [62].
Axit hyaluronic (HA)
Axit hyaluronic (HA) là một glycosaminoglycan có giá trị
cao, được sử dụng rộng rãi trong các ngành công nghiệp y
sinh, dược phẩm, mỹ phẩm và thực phẩm. Đáng chú ý, các
chế phẩm HA có trọng lượng phân tử khác nhau cho tác
dụng khác nhau [63]. Bành Jin và cộng sự. điều hòa giảm
quá trình glycolysis bằng cách cùng biểu hiện các gen đã
xác định (tuaD,gtaB,glmU,glmM, VàglmS). Họ đã sử dụng
chiến lược kỹ thuật vị trí liên kết ribosome để điều chỉnh
mức độ tịnh tiến của hyaluronidase và tối ưu hóa con đường
tổng hợp HA, dẫn đến việc sản xuất cụ thể HA có trọng
lượng phân tử thấp [64]. Li và cộng sự. gần đây đã báo cáo
một chủng được thiết kế củaB. subtiliscó thể tạo ra HA với
trọng lượng phân tử và hiệu giá khác nhau ở nhiệt độ khác
nhau. Họ phát hiện ra rằng khi sinh khối tăng lên, trọng
lượng phân tử của HA được tạo ra giảm trong khi hiệu giá
tăng [63].
N-acetylglucosamine (GlcNAc)
Ngoài các sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên, các nhà khoa
học cũng đang giới thiệu những con đường mới vàoB.
subtilisđể sản xuất hóa chất mới. N-acetylglucosamine là
một dẫn xuất amin acetyl hóa của glucose, đóng vai trò quan
trọng trong việc duy trì và sửa chữa chức năng mô sụn và
khớp. Lưu và cộng sự. đã chia mạng sinh tổng hợp GlcNAc
thành mô-đun glycolysis, mô-đun sinh tổng hợp GlcNAc và
mô-đun sinh tổng hợp peptidoglycan. Bằng cách áp dụng kỹ
thuật quy trình mô-đun, họ đã tăng cường sản xuất GlcNAc
trongB. subtilistừ
1,85 đến 31,65 g/L [65]. Sau đó, bằng cách loại bỏ
acetolactate synthase (AlsS) và acetolactate decarboxylase
(AlsD), sự hình thành sản phẩm phụ trung tính acetoin đã
giảm và dòng carbon từ fructose-6-phosphate
 Su et al. Microb (2020)
hướng tới con đường tổng hợp GlcNAc đã tăng lên. Do đó,
hiệu giá và hiệu suất của GlcNAc tăng lên lần lượt là 48,9 g/L
và 0,32 g/g glucose [66]. Quá trình dị hóa GlcNAc ởB.
subtilisđược điều hòa bởi GlcN6P. Gần đây, Liu và cộng sự.
đã xây dựng một hệ thống ADC kết hợp bao gồm bộ cảm
biến sinh học phản ứng GlcN6P và CRIS-PRi. Bằng cách sử
dụng hệ thống này, một mạch phản hồi di truyền đã được xây
dựng để tinh chỉnh dòng trao đổi chất theo hướng tổng hợp
Glc-NAc và các môđun cạnh tranh, làm tăng hiệu giá của
GlcNAc trong lò phản ứng sinh học theo mẻ 15-L lên 131,6
g/L [67].
Enzym được sản xuất bởitrực khuẩn subtilis
Do sự phát triển nhanh chóng của nó trên các chất nền rẻ tiền,
khả năng tiết protein mạnh, không gây bệnh và quá trình xử
lý tiếp theo thuận lợi,B. subtilisđã trở thành vật chủ biểu hiện
lý tưởng để sản xuất các enzyme công nghiệp khác nhau.
Theo số liệu thống kê chưa đầy đủ, enzyme được sản xuất
bằngB. subtilischiếm 50% tổng thị trường enzyme [44].
Nhiều enzym đã được biểu hiện thành công trongB. subtilis,
bao gồm amylase, xylanase, lichenase, β-galactosidase [68],
cellulase [69], protease serine kiềm [42], và nhiều người
khác. Những enzyme này đóng vai trò quan trọng trong các
ngành công nghiệp thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, chất tẩy
rửa, dệt may, da, giấy và dược phẩm.46]. Do trạng thái
GRAS của nó, protease từB. subtiliscó thể được sử dụng
trong các ứng dụng thực phẩm khác nhau, chẳng hạn như
chuẩn bị thủy phân đậu nành, làm mềm thịt, chuẩn bị thủy
phân casein, đông tụ sữa và xử lý chất thải thực phẩm [70]. Ở
đây, chúng tôi sẽ giới thiệu các ví dụ minh họa về kỹ thuậtB.
subtiliscác nhà máy sản xuất enzyme như amylase, xylanase
và lichenase.
Alpha-amylase
Alpha-amylase (EC 3.2.1.1) xúc tác sự phân cắt liên kết α-
1,4-glucosidic, giải phóng glucose từ tinh bột. Nó được sử
dụng rộng rãi trong ngành dệt và giấy, vàB. subtilislà vật chủ
chính để sản xuất các α-amylase dị loại [71]. Ma và cộng sự.
sử dụng phương pháp gây đột biến huyết tương ở nhiệt độ
phòng và khí quyển, sau đó là một phương pháp sàng lọc mới
và kết hợp với chiến lược tối ưu hóa quá trình lên men, đã cải
thiện đáng kể năng suất amylase kiềm trongB. subtilis168
[72]. Các nghiên cứu khác tập trung vào việc điều chỉnh mức
độ vận chuyển và phiên mã protein bằng cách tích hợp các
peptide tín hiệu và kỹ thuật khởi động [73]. PrsA là chất xúc
tác gấp cuộn hiệu quả cho các protein được biểu hiện ở
dạngB. subtilis. Sự biểu hiện quá mức của PrsA bản địa từB.
subtiliscó thể cải thiện năng suất của amylase, nhưng đối với
amylase dị loại, cùng biểu hiện nguồn gốcnhũ hoagen có tác
dụng tốt hơn. QuesadaGanuza và cộng sự. đã phát triển một
biến thể PrsA tái tổ hợp mới, nó không chỉ làm tăng sản
lượng amylase trongB. subtilis, mà còn làm giảm áp lực bài
tiết của chủng [74]. Qua
tối ưu hóa peptide tín hiệu và đối tác biểu hiện quá mức, tiếp
theo là PCR dễ xảy ra lỗi và công nghệ sàng lọc thông lượng
cao để sàng lọc các đột biến được cải thiện, hoạt tính của α-
amylase đã được cải thiện lên 9201,1 U/mL [75].
Page
Xylanase
Xylanase (EC. 3.2.1.8) là các enzyme xúc tác quá trình thủy
phân các liên kết glycosid β-1,4 của xylan, giải phóng
oligosacarit và disacarit có chứa đường khử và xyloza [76].
Chúng có giá trị ứng dụng đáng kể trong công nghệ sinh học
và có thể được sử dụng để biến đổi vật liệu ligno-cellulose.
Xylanase được sử dụng trong sản xuất thức ăn chăn nuôi,
công nghiệp giấy, dệt may và sản xuất nhiên liệu sinh học.
Xylanase thương mại chủ yếu được sản xuất ởB. subtilis.
Sanchez-Alponti và cộng sự. đã tạo ra và mô tả các đột biến
đơn lẻ thay thế năm gốc trong xylanase ưa nhiệt trung bình
củaB. subtilisvới các dư lượng tương đồng từ các enzyme ưa
nhiệt. Khi năm đột biến được kết hợp trong một thư viện tổ
hợp ngẫu nhiên, người ta thu được một đột biến kép có hoạt
tính riêng và độ ổn định nhiệt được cải thiện [77]. Yardimci
và Cekmecelioglu đã sử dụng phương pháp bề mặt phản ứng
Box–Behnken để tối ưu hóa việc sản xuất xylanase trong
môi trường đồng nuôi cấyB. subtilisVàKluyveromyces
marxianus, giúp cải thiện năng suất xylanase gấp 4,4 lần
(đạt
49,5 IU/mL) so với nuôi cấy đơn lẻ ban đầu không được tối
ưu hóa [76].
Lichenase
Lichenase (EC. 3.2.1.73) là một end-hydrolase β-glucan
(MLG) liên kết hỗn hợp được tìm thấy ở cả vi sinh vật và
thực vật, đã trở thành trọng tâm nghiên cứu về tính khả thi
của sản xuất nhiên liệu sinh học [78]. Tuy nhiên, do tính ổn
định nhiệt kém nên nó không thích hợp cho việc chuyển hóa
sinh khối bằng xúc tác sinh học. Vương và cộng sự. đã sử
dụng quá trình tạo vòng qua trung gian SpyTag/Spy-
Catcher và tinh chế ITC không sắc ký để thu được cyclo-
lichenase có khả năng chịu nhiệt tốt, vượt trội so với
lichenase tuyến tính [78]. Ngoài ra, về mặt hoạt tính xúc tác
của enzyme, các nghiên cứu đã chỉ ra rằng sự lắp ráp các
tiểu đơn vị được tạo ra bởi miền xoắn ba collagen và các
oligome thiết yếu, chẳng hạn như comp và Foldon, có thể
gây ra quá trình tinh chỉnh enzyme mục tiêu, do đó cải thiện
hoạt động. của lichenase [79].
Ứng dụng củatrực khuẩn subtilistrong nông
nghiệp, vật liệu sinh học và y học
Bởi vì nó là một probiotic không gây bệnh,B. subtilisthường
được sử dụng như một chất phụ gia vi sinh vật để cải thiện
chức năng đường ruột ở động vật. Nó đã được tìm thấy thúc
đẩy tăng trưởng động vật và ngăn ngừa bệnh tật [80]. Nó có
thể được sản xuất dưới dạng nội bào tử, sau đó đi vào đường
ruột của động vật và nhanh chóng tái hoạt động để tiết ra
chất có hoạt tính cao.
 Su et al. Microb (2020)
protease, như lipase và amylase ở đường ruột trên, rất hữu ích
để phân hủy carbohydrate phức tạp trong thức ăn thực vật.
Hơn nữa,B. subtiliscó thể sản xuất các polypeptide có tác
dụng đối kháng các mầm bệnh đường ruột, cải thiện hiệu quả
khả năng tiêu hóa thức ăn. Ngoài ra, nó có thể được sử dụng
trong xử lý sinh học nước và ngăn ngừa bệnh tật ở các sinh
vật nuôi trồng thủy sản như tôm và cá [7]. Bởi vìB. subtilislà
một loại vi khuẩn hiếu khí, nó góp phần tạo ra môi trường kỵ
khí bằng cách tiêu thụ oxy trong ruột, từ đó thúc đẩy sự sinh
sản của vi khuẩn chiếm ưu thế trong ruột, duy trì sự cân bằng
sinh thái của ruột.
B. subtiliscó thể tiết ra nhiều loại peptide và bacteriocin
kháng khuẩn có trọng lượng phân tử thấp, chẳng hạn như
Surfactin [81], bacilysin [82] và subtilin [83], có giá trị tiềm
năng trong kỹ thuật y sinh, thực phẩm và nông nghiệp [84].
Peptide kháng khuẩn từB. subtilislà những công cụ trị liệu
đầy hứa hẹn vì hoạt động rộng rãi và hoạt động tiêu diệt
nhanh chóng của chúng chống lại nhiều loại mầm bệnh. Với
vấn đề ngày càng gia tăng về tình trạng kháng thuốc của vi
khuẩn do việc sử dụng kháng sinh thông thường không hợp
lý, các peptide kháng khuẩn sẽ đóng một vai trò quan trọng
hơn trong việc điều trị các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn
[85]. Peptide kháng khuẩn còn có ưu điểm là an toàn và thân
thiện với môi trường. Chúng được sử dụng rộng rãi làm phụ
gia thức ăn chăn nuôi trong nông nghiệp và chăn nuôi để tăng
cường tiêu hóa chất xơ và sức khỏe đường ruột của động
vật.B. subtiliscó thể cải thiện sự cân bằng của hệ thực vật
đường ruột và có khả năng cải thiện sức khỏe đường ruột và
hiệu quả hấp thu thức ăn. Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng việc
bổ sungB. subtilisbào tử vào thức ăn bò sữa có thể cải thiện
sản xuất sữa và protein [86]. Hơn nữa, việc thêmB.
subtiliskhẩu phần ăn của gà mái đẻ có thể cải thiện năng suất
cũng như chất lượng vỏ trứng do gà mái đẻ già tạo ra [87].
Màng sinh học là các cộng đồng có cấu trúc gồm các tế bào
liên kết chặt chẽ tạo thành trạng thái phát triển chủ yếu của vi
khuẩn trong môi trường tự nhiên và nhân tạo [88]. Màng sinh
học có thể được sử dụng để sản xuất vật liệu sống có chức
năng tự phục hồi, đây là điều mong muốn đối với nhiều sản
phẩm [89].B. subtiliscó thể hình thành các màng sinh học
phức tạp và mạnh mẽ và là chủng mẫu tốt để nghiên cứu sự
hình thành màng sinh học. Các nghiên cứu gần đây đã chỉ ra
rằng màng sinh học dựa trên cơ chế protein amyloid TasA
trongB. subtilisthể hiện tính chất đàn hồi nhớt của hydrogel.
Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng màng sinh học có thể được chế
tạo chính xác thành các cấu trúc vi mô ba chiều (3D) khác
nhau thông qua công nghệ in 3D và vi nang [90]. So với vật
liệu hóa học, vật liệu sống nhân tạo này có hoạt động trao đổi
chất, khả năng tự đổi mới và khả năng lập trình [89]. Ngoài
ra, khả năng củaB. subtilisđể hình thành màng sinh học thúc
đẩy quá trình tổng hợp pentapeptide cảm ứng tối đa và oxit
nitric (NO), có thể trì hoãn sự lão hóa của vật chủ [91]. Sự
hình thành màng sinh học cải thiện
khả năng của vi sinh vật chuyển hóa chất dinh dưỡng và sản
xuất hóa chất, đồng thời có thể được sử dụng để cải thiện
tính ổn định của quá trình lên men. Các nghiên cứu gần đây
cho thấy lò phản ứng màng sinh học có thể thúc đẩy sự bài
tiết ngoại bào của MK-7 [92].
Khi phải đối mặt với nạn đói,B. subtilistạo ra nội bào tử có
Page
thể tồn tại lâu dài ở trạng thái anabiosis. Và khi có chất dinh
dưỡng thì nó lại nảy mầm [93]. Đặc tính này có lợi cho sự
biểu hiện thành công của các kháng nguyên khác loại hoặc
làm tăng hoạt tính tương đối, khả năng chịu nhiệt, độ ổn
định pH và khả năng tái sử dụng của enzyme trên bề mặt
bào tử. Khả năng chống stress rất lớn của nội bào tử có thể
được kết hợp để cải thiện tính ổn định và thúc đẩy khả năng
tái sử dụng của enzyme trong môi trường phức tạp [94].
Ngoài ra, công nghệ hiển thị bề mặt bào tử gần đây đã được
áp dụng thành công trong sản xuất polyme protein, vắc xin
và enzyme công nghiệp [95]. Các enzyme như lipase và
chitinase đã được biểu hiện thành công trên bề mặt nội bào
tử [94].
Kết luận và triển vọng trong tương lai
Là loài mô hình chính của vi khuẩn gram dương,B.
subtiliscó một loạt các công cụ di truyền trưởng thành, chất
xúc tiến và hệ thống biểu hiện plasmid, có thể được sử dụng
trong kỹ thuật trao đổi chất, biểu hiện protein và sinh học
tổng hợp. Nó có thể sản xuất hóa chất, enzyme và các sản
phẩm sinh học công nghiệp khác, nhưng cũng được sử dụng
làm nền tảng để điều chế vắc xin hoặc phụ gia thức ăn chăn
nuôi trong nông nghiệp. Hơn nữa, nó còn là mô hình lý
tưởng để nghiên cứu sự hình thành màng sinh học và các
đặc điểm sinh lý khác của tế bào đính kèm. Bài viết này đã
xem xét những ưu điểm của
B. subtilisnhư một tế bào khung từ một số khía cạnh, bao
gồm thao tác di truyền và biểu hiện gen dị loại, cũng như
ứng dụng của nó trong công nghiệp, nông nghiệp và y học.
Tuy nhiên, mặc dùB. subtiliscó nhiều ứng dụng hấp dẫn
khác nhau nhưng nó vẫn ít được nghiên cứu hơn nhiều so
với gram âm,E coli. Điều này vẫn đúng ngay cả trong thời
đại hiện nay với phương pháp luận phong phú và sự phát
triển công cụ nhanh chóng. Một trở ngại lớn trong việc áp
dụng các phương pháp mới là hiệu quả xây dựng plasmid
trongB. subtilisso sánh vớiE coli. Để giải quyết vấn đề này,
các chủng vi khuẩn được thiết kế trong tương laiB. subtiliscó
thể được phát triển để cho phép tạo ra plasmid trực tiếp.
Ngược lại, tốc độ tái hợp cao củaB. subtiliscó một số lợi thế
cho việc phát triển các công cụ chỉnh sửa gen.
Mục tiêu của chúng tôi là cung cấp cho người đọc sự hiểu
biết chung về các đặc điểm củaB. subtilis, vì vậy người ta có
thể tận dụng các tính năng của nó cho các ứng dụng hoặc
mục đích nghiên cứu nhất định. Tất nhiên, khi ngày càng có
nhiều nhà khoa học và kỹ sư đóng góp các nghiên cứu vềB.
subtilis, nhiều công nghệ, công cụ và phương pháp sẽ được
áp dụng choB.
 Su et al. Microb (2020)
subtilistrong tương lai và tiềm năng ứng dụng khoa học và
công nghiệp của vi khuẩn này sẽ còn được nâng cao hơn
nữa.
Các từ viết tắt
RBS: Trang web liên kết Ribosome; GlcNAc: N-acetylglucosamine;
CSM: Điểm đánh dấu có thể lựa chọn theo bộ đếm; SSR: Hệ thống
tái hợp dành riêng cho địa điểm; CRISPR: Các lặp lại palindromic
ngắn xen kẽ thường xuyên được nhóm lại; CRISPRi: nhiễu
CRISPR; Sec: Con đường bài tiết; Tat: Con đường chuyển vị song
sinh-arginine;
ABC: băng liên kết ATP; SRP: Hạt nhận dạng tín hiệu; TMD: Miền
xuyên màng; NBD: Miền liên kết nucleotide; Nsp: Protein giống hạt
nhân; PhoA: Phosphatase kiềm; BgaB: β-Galactosidase; RDPE: d-
Psicose 3-epimerase; RF: Riboflavin; Con đường PP: Con đường
Pentose phosphate; MK-7: Menaquinone-7; RSM: Phương pháp bề
mặt đáp ứng; SI:lưỡi liềm-inositol; MI:myo-Inositol; HA: Axit
Hyaluronic; AlsS: Acetolactate tổng hợp; AlsD: Acetolactate
decarboxylase; MLG: β-glucan liên kết hỗn hợp; 3D: Ba chiều.
Sự nhìn nhận
Công trình này được hỗ trợ bởi Chương trình R&D trọng điểm quốc
gia của Trung Quốc (2018YFA0901600), Quỹ khoa học Thiên Tân
dành cho các học giả trẻ xuất sắc (17JCJQJC45300) và Sáng kiến
Mạng lưới dịch vụ khoa học và công nghệ (STS) của Viện Hàn lâm
Khoa học Trung Quốc (CAS) (KFJ -STS-ZDTP-065).
Tác giả đóng góp
Tất cả các tác giả đều đọc và phê duyệt bản thảo cuối cùng.
Kinh phí
Nghiên cứu này được tài trợ bởi Chương trình R&D trọng điểm quốc
gia của Trung Quốc (2018YFA0901600), Quỹ khoa học Thiên Tân
dành cho các học giả trẻ xuất sắc (17JCJQJC45300), Sáng kiến
Mạng lưới dịch vụ khoa học và công nghệ (STS) của Viện Hàn lâm
khoa học Trung Quốc (CAS) (KFJ-STS- ZDTP-065).
Sự sẵn có của dữ liệu và tài liệu hỗ trợ
Không áp dụng được.
Phê duyệt đạo đức và đồng ý tham gia
Không áp dụng được.
Đồng ý xuất bản
Không áp dụng được.
Lợi ích cạnh tranh
Nhiều tác giả tuyên bố rằng họ không có hứng thú với việc cạnh tranh.
Chi tiết tác giả
1 tổ hợp không có dấu chọn lọc. Vi sinh vật môi trường Appl.
Trường Cao đẳng Công nghệ sinh học, Đại học Khoa học và Công
nghệ Thiên Tân, Thiên Tân 300457, Trung Quốc. 2 Viện Công nghệ
sinh học công nghiệp Thiên Tân, Viện Hàn lâm Khoa học Trung
Quốc, Thiên Tân 300308, Trung Quốc.3 Phòng thí nghiệm trọng điểm
về Công nghệ sinh học vi sinh hệ thống, Viện Hàn lâm Khoa học
Trung Quốc, Thiên Tân 300308, Trung Quốc.4 Đại học Viện Khoa học
Trung Quốc, Bắc Kinh 100049, Trung Quốc.
Đã nhận: ngày 4 tháng 7 năm 2020 Được chấp nhận: ngày 27 tháng 8
năm 2020
Người giới thiệu
1. Earl AM, Losick R, Kolter R. Sinh thái và bộ gen củatrực
khuẩn subtilis. Xu hướng vi sinh. 2008;16:269–75.
2. Chen J, Zhu Y, Fu G, Song Y, Jin Z, Sun Y, Zhang D. Sản
xuất nội và ngoại bào ở mức độ caod-psicose 3-epimerase
thông qua hệ thống biểu hiện cảm ứng xyloza đã được sửa
đổi trongtrực khuẩn subtilis. Công nghệ sinh học J Ind
Microbiol. 2016;43:1577–91.
3. Aslankoohi E, Rezaei MN, Vervoort Y, Courtin CM, Verstrepen
KJ. Sản xuất glycerol bằng cách lên men tế bào nấm men là
điều cần thiết để lên men bột bánh mì tối ưu. XIN MỘT.
2015;10:e0119364.
Page
4. Tây L, Tây H, Quax WJ. Bacillus subtilis là nhà máy sản xuất
tế bào cho protein dược phẩm: một phương pháp công nghệ
sinh học để tối ưu hóa cơ thể vật chủ. Biochim Biophys Acta.
2004;1694:299–310.
5. Zweers JC, Barak I, Becher D, Driessen AJ, Hecker M,
Kontinen VP, Saller MJ, Vavrova L, van Dijl JM. Hướng tới phát
triển Bacillus subtilis như một nhà máy sản xuất tế bào cho
protein màng và phức hợp protein. Sự thật về tế bào vi mô.
2008;7:10.
6. Jeong DE, So Y, Park SY, Park SH, Choi SK. Hệ thống biểu
hiện kích thích ngẫu nhiên để sản xuất protein dị loại ở
Bacillus subtilis với năng suất cao. Công nghệ sinh học J.
2018;266:50–8.
7. Olmos J, Acosta M, Mendoza G, Pitones V. Bacillus subtilis,
một loại vi khuẩn sinh học lý tưởng cho nuôi tôm và cá giúp
tăng khả năng tiêu hóa thức ăn, ngăn ngừa bệnh do vi khuẩn
và tránh ô nhiễm nước. Arch vi sinh. 2020;202:427–35.
8. Gu Y, Xu X, Wu Y, Niu T, Liu Y, Li J, Du G, Liu L. Những tiến
bộ và triển vọng của nhà máy sản xuất tế bào Bacillus subtilis:
Từ thiết kế hợp lý đến ứng dụng công nghiệp. Metab Eng.
2018;50:109–21.
9. Gu Y, Lv X, Liu Y, Li J, Du G, Chen J, Rodrigo LA, Liu L.
Thiết kế lại tổng hợp quá trình chuyển hóa carbon và oxy
hóa khử trung tâm để sản xuất N-acetylglucosamine năng
suất cao trongtrực khuẩn subtilis. Metab Eng. 2019;51:59–
69.
10. Duẩn M, Zhang Y, Chu B, Qin Z, Wu J, Wang Q, Yin Y. Tác
dụng củatrực khuẩn subtilisvề thành phần cacbon và sự trao
đổi chất chức năng của vi sinh vật trong quá trình ủ phân bò.
Công nghệ tài nguyên sinh học- nol. 2020;303:122868.
11. Dong H, Zhang D. Sự phát triển hiện nay trong chiến lược
kỹ thuật di truyền của loài Bacillus. Sự thật về tế bào vi
mô. 2014;13:63.
12. Bai H, Đặng A, Liu S, Cui D, Qiu Q, Wang L, Yang Z, Wu J,
Shang X, Zhang Y, Wen T. Một công cụ mới để chỉnh sửa bộ
gen vi sinh vật bằng hệ thống sửa đổi hạn chế. ACS Synth
Biol. 2018;7:98–106.
13. Yan X, Yu HJ, Hong Q, Li SP. Hệ thống Cre/lox và kỹ
thuật gen dựa trên PCR trongtrực khuẩn subtilis. Vi sinh
vật môi trường Appl. 2008;74:5556–62.
14. Altenbuchner J. Biên tậptrực khuẩn subtilisbộ gen bằng hệ
thống CRISPR-Cas9. Vi sinh vật môi trường Appl.
2016;82:5421–7.
15. Jeong DE, Park SH, Pan JG, Kim EJ, Choi SK. Kỹ thuật
bộ gen sử dụng mạch gen tổng hợp trongtrực khuẩn
subtilis. Axit nucleic Res. 2015;43:e42.
16. Fabret C, Ehrlich SD, Noirot P. Một hệ thống phân phối
đột biến mới cho các phương pháp tiếp cận quy mô bộ
gen ởtrực khuẩn subtilis. Mol vi sinh vật. 2002;46:25–
36.
17. Brans A, Filee P, Chevigne A, Claessens A, Joris B. Phương
pháp tích hợp mới để tạo ratrực khuẩn subtiliscác chủng tái
2004;70:7241–50.
18. Chen PT, Shaw JF, Chao YP, David Hồ TH, Yu SM. Xây dựng
hệ thống biểu hiện T7 định vị nhiễm sắc thể để sản xuất các
protein được tiết ra khác loại ở Bacillus subtilis. J Agric Thực
phẩm Chem. 2010;58:5392–9.
19. Shevchuk NA, Bryksin AV, Nusinovich YA, Cabello FC,
Sutherland M, Ladisch S. Xây dựng các phân tử DNA dài
bằng cách sử dụng phản ứng tổng hợp nhiều đoạn dựa trên
PCR dài cùng một lúc. Axit nucleic Res. 2004;32:e19.
20. Schilling T, Dietrich S, Hoppert M, Hertel R. Bộ công cụ dựa
trên CRISPR-Cas9 để thực hiện kỹ thuật di truyền in vivo
nhanh chóng và chính xác của các phage Bacillus subtilis.
Virus. 2018;10:241.
21. Westbrook AW, Moo-Young M, Chou CP. Phát triển bộ công cụ
CRISPR-Cas9 cho kỹ thuật toàn diệntrực khuẩn subtilis. Vi sinh
vật môi trường Appl. 2016;82:4876.
22. Hong KQ, Liu DY, Chen T, Wang ZW. Những tiến bộ gần đây
trong chỉnh sửa bộ gen qua trung gian CRISPR/Cas9 trongtrực
khuẩn subtilis. Công nghệ sinh học World J Microbiol- nol.
2018;34:153.
23. van der Oost J, Westra ER, Jackson RN, Wiedenheft B. Làm
sáng tỏ cơ sở cấu trúc và cơ học của hệ thống CRISPR-Cas.
Nat Rev Micro-biol. 2014;12:479–92.
24. Dong X, Li N, Liu Z, Lv X, Shen Y, Li J, Du G, Wang M,
Liu L. CRISPRi- tinh chỉnh kênh trao đổi chất đa hướng
dẫn để nâng cao
Susản
et al. Microb (2020) Page
xuất lacto-N-neotetraose ởtrực khuẩn subtilis. J Agric Thực
phẩm Chem. 2020;68:2477–84.
Su et al. Microb (2020) Page

25. So Y, Park SY, Park EH, Park SH, Kim EJ, Pan JG, Choi SK. chất mang nano thuốc kháng sinh để thăm dò chất vận
Việc xóa bộ gen lớn qua trung gian CRISPR-Cas9 hiệu quả cao chuyển màng ABC đa thuốc củatrực khuẩn subtilis. ACS
trongtrực khuẩn subtilis. Vi sinh vật phía trước. 2017;8:1167. Omega. 2020;5:1625–33.
26. Wang C, Cao Y, Wang Y, Sun L, Song H. Tăng cường sản xuất 48. Acevedo-Rocha CG, Gronenberg LS, Mack M, Commichau
Surfactin bằng cách sử dụng phương pháp ức chế CRISPRi có FM, Genee HJ. Nhà máy tế bào vi khuẩn để sản xuất vitamin
hệ thống để sàng lọc các gen sinh tổng hợp axit amin ở Bacillus B bền vững. Công nghệ sinh học Curr Opin. 2019;56:18–29.
subtilis. Sự thật về tế bào vi mô. 2019;18:90. 49. Revuelta JL, Ledesma-Amaro R, Lozano-Martinez P, Diaz-
27. Wu Y, Liu Y, Lv X, Li J, Du G, Liu L. CAMERS-B: Hệ Fernandez D, Buey RM, Jimenez A. Sản xuất sinh học riboflavin:
thống điều chỉnh và chỉnh sửa nhiều gen được lịch sử màu vàng tươi. Công nghệ sinh học J Ind Microbiol.
CRISPR/Cpf1 hỗ trợ chotrực khuẩn subtilis. Công nghệ 2017;44:659–65.
sinh học Bioeng. 2020;117:1817–25.
50. Wang G, Shi T, Chen T, Wang X, Wang Y, Liu D, Guo J, Fu J,
28. Liu D, Huang C, Guo J, Zhang P, Chen T, Wang Z, Zhao X.
Feng L, Wang Z, Zhao X. Phân tích trình tự toàn bộ bộ gen và
Phát triển và mô tả đặc tính của hệ thống chỉnh sửa bộ gen
bản phiên mã tích hợp cho thấy các đặc điểm di truyền của
ghép kênh dựa trên CRISPR/Cas9n chotrực khuẩn subtilis.
tình trạng sản xuất quá mức riboflavin - ingtrực khuẩn subtilis.
Nhiên liệu sinh học công nghệ sinh học. 2019;12:197.
Metab Eng. 2018;48:138–49.
29. Zhu H, Liang C. CRISPR-DT: thiết kế gRNA cho hệ thống
51. Suwannasom N, Kao I, Pruss A, Georgieva R, Baumler H.
CRISPR-Cpf1 với tính đặc hiệu và hiệu quả mục tiêu được cải
Riboflavin: lợi ích sức khỏe của một loại vitamin tự nhiên bị
thiện. Tin sinh học. 2019;35:2783–9.
lãng quên. Int J Mol Khoa học. 2020;21:950.
30. Song Y, Nikoloff JM, Zhang D. Cải thiện việc sản xuất protein ở
52. Shi T, Wang Y, Wang Z, Wang G, Liu D, Fu J, Chen T, Zhao X.
mức độ điều chỉnh cả con đường biểu hiện và bài tiết trongtrực
Bãi bỏ quy định về con đường purine trongtrực khuẩn
khuẩn- lus subtilis. Công nghệ sinh học J Microbiol.
subtilisvà ứng dụng của nó trong quá trình sinh tổng hợp
2015;25:963–77.
riboflavin. Sự thật về tế bào vi khuẩn. 2014;13:101.
31. Cui W, Han L, Suo F, Liu Z, Chu L, Chu Z. Khai tháctrực khuẩn
53. Liu S, Hu W, Wang Z, Chen T. Sản xuất riboflavin và các đồng
subtilisnhư một công cụ mạnh mẽ để sản xuất các protein dị loại
yếu tố liên quan bằng quy trình công nghệ sinh học. Sự thật
và hơn thế nữa. Công nghệ sinh học vi sinh thế giới J.
về tế bào vi mô. 2020;19:31.
2018;34:145.
54. Shi S, Chen T, Zhang Z, Chen X, Zhao X. Kỹ thuật trao đổi
32. Blazeck J, Alper HS. Kỹ thuật Promoter: những tiến bộ gần
chất hướng dẫn phân tích phiên mã củatrực khuẩn subtilisđể
đây trong việc kiểm soát phiên mã ở cấp độ cơ bản nhất.
sản xuất riboflavin. Metab Eng. 2009;11:243–52.
Công nghệ sinh học J. 2013;8:46–58.
55. Wang J, Wang W, Wang H, Yuan F, Xu Z, Yang K, Li Z, Chen
33. Liu D, Mao Z, Guo J, Wei L, Ma H, Tang Y, Chen T, Wang Z,
Y, Fan K. Cải thiện khả năng chịu stress và sản xuất riboflavin
Zhao X. Xây dựng, phân tích dựa trên mô hình và mô tả đặc
củatrực khuẩn subtilisbằng cách đưa vào các protein sốc
tính của thư viện khởi động để tinh chỉnh biểu hiện gen
nhiệt từ các chủng trực khuẩn ưa nhiệt. Công nghệ sinh học
trongtrực khuẩn subtilis. ACS Synth Biol. 2018;7:1785–97.
Appl Microbiol. 2019;103:4455–65.
34. Jin LQ, Jin WR, Ma ZC, Shen Q, Cai X, Liu ZQ, Zheng YG.
56. Berenjian A, Mahanama R, Talbot A, Biffin R, Regtop H,
Các chiến lược kỹ thuật thúc đẩy để sản xuất quá mức các
Valtchev P, Kavanagh J, Dehghani F. Phương tiện hiệu quả
chất chuyển hóa có giá trị ở vi khuẩn. Công nghệ sinh học
để sản xuất menaquinone-7 cao: phương pháp tiếp cận
Appl Microbiol. 2019;103:8725–36.
phương pháp bề mặt đáp ứng. Công nghệ sinh học Nat.
35. Guiziou S, Sauveplane V, Chang HJ, Clerte C, Declerck N, Jules
2011;28:665–72.
M, Bonnet
57. Fang Z, Wang L, Zhao G, Liu H, Wei H, Wang H, Ni W, Zheng
J. Một hộp công cụ để điều chỉnh biểu hiện di truyền trongtrực
Z, Wang P. Một quy trình chuẩn bị đơn giản và hiệu quả cho
khuẩn subtilis. Axit nucleic Res. 2016;44:7495–508.
menaquinone-7 từ
36. Liu Y, Liu L, Li J, Du G, Chen J. Phát triển khung và hộp
trực khuẩn subtilis(natto) sử dụng chiết xuất hai giai đoạn, sau
công cụ sinh học tổng hợp trongtrực khuẩn subtilis. Xu
đó là nhựa vi xốp. Quá trình sinh hóa. 2019;83:183–8.
hướng công nghệ sinh học. 2019;37:548–62.
58. Wu WJ, Ahn BY. Tối ưu hóa thống kê các thành phần
37. Tian R, Liu Y, Chen J, Li J, Liu L, Du G, Chen J. Trình tự
môi trường bằng phương pháp bề mặt đáp ứng để tăng
mã hóa đầu cuối N tổng hợp để tinh chỉnh biểu hiện gen và
cường menaquinone-7
kỹ thuật trao đổi chất trongtrực khuẩn subtilis. Metab Eng.
(Vitamin K(2)) sản xuất bằngtrực khuẩn subtilis. Công nghệ
2019;55:131–41.
sinh học J Microbiol. 2018;28:902–8.
38. Naseri G, Koffas MAG. Ứng dụng các chiến lược tối ưu hóa tổ
59. Yang S, Cao Y, Sun L, Li C, Lin X, Cai Z, Zhang G, Song H.
hợp trong sinh học tổng hợp. Xã Nat. 2020;11:2446.
Kỹ thuật đường dẫn mô đun củatrực khuẩn subtilisđể thúc đẩy
39. Ling Lin F, Zi Rong X, Wei Fen L, Jiang Bing S, Ping L, Chun
quá trình sinh tổng hợp de novo của menaquinone-7. ACS
Xia H. Con đường bài tiết protein trongtrực khuẩn subtilis: hàm
Synth Biol. 2019;8:70–81.
ý tối ưu hóa việc tiết protein dị loại. Công nghệ sinh học Adv.
60. Cui S, Xia H, Chen T, Gu Y, Lv X, Liu Y, Li J, Du G, Liu L. Kỹ
2007;25:1–12.
thuật chuyển giao điện tử và màng tế bào để cải thiện quá
40. Zhang K, Su L, Wu J. Những tiến bộ gần đây trong sản xuất
trình tổng hợp menaqui-none-7 trongtrực khuẩn subtilis.
protein tái tổ hợp bằngtrực khuẩn subtilis. Annu Rev Food Sci
iScience. 2020;23:100918.
Technol. 2020;11:295–318.
61. Tanaka K, Tsume A, Ishikawa S, Takenaka S, Yoshida
41. Zhao L, Chen J, Sun J, Zhang D. Nhận biết và bài tiết
KI.trực khuẩn subtilisnhà máy sản xuất tế bào để nâng cao
Multimer bằng con đường bài tiết phi cổ điển trongtrực
hơn nữa quá trình sản xuất scyllo-inositol. Sự thật về tế bào
khuẩn subtilis. Dân biểu Khoa học 2017;7:44023.
vi mô. 2017;16:67.
42. Wang JP, Yeh CM, Tsai YC. Cải thiện sản xuất subtilisin YaB
62. Yoshida KI, Ishikawa S. Sản xuất scyllo-Inositol: chuyển đổi
trongtrực khuẩn subtilissử dụng trình tự điều khiển biểu thức
cám gạo thành một tác nhân điều trị bệnh Alzheimer đầy hứa
tổng hợp được thiết kế. J Agric Thực phẩm Chem.
hẹn. J Nutr Sci Vitaminol. 2019;65:139–42.
2006;54:9405–10.
63. Li Y, Li G, Zhao X, Shao Y, Wu M, Ma T. Quy định trọng
43. Chen J, Zhao L, Fu G, Chu W, Sun Y, Zheng P, Sun J, Zhang
lượng phân tử và hiệu giá của axit hyaluronic theo nhiệt
D. Một chiến lược mới để sản xuất protein bằng cách sử dụng
độ trong thiết kếtrực khuẩn subtilis. 3 Công nghệ sinh học.
con đường bài tiết phi cổ điển trongtrực khuẩn subtilis. Sự thật
2019;9:225.
về tế bào vi khuẩn. 2016;15:69.
64. Jin P, Kang Z, Yuan P, Du G, Chen J. Sản xuất hyaluronan
44. Schallmey M, Singh A, Phường OP. Sự phát triển trong việc
có trọng lượng phân tử cụ thể bằng hyaluronan được thiết
sử dụng các loài Bacillus cho sản xuất công nghiệp. Can J
kế về mặt trao đổi chấttrực khuẩn subtilis168. Metab Eng.
Microbiol. 2004;50:1–17.
2016;35:21–30.
45. Liu Y, Li J, Du G, Chen J, Liu L. Kỹ thuật trao đổi chất củatrực
65. Liu Y, Zhu Y, Li J, Shin HD, Chen RR, Du G, Liu L, Chen J.
khuẩn subtilisđược thúc đẩy bởi sinh học hệ thống: những tiến
Kỹ thuật đường dẫn mô đun củatrực khuẩn subtilisđể cải
bộ gần đây và hướng đi trong tương lai. Công nghệ sinh học
thiện việc sản xuất N-acetylglucosamine. Metab Eng.
Adv. 2017;35:20–30.
2014;23:42–52.
46. van Dijl J, Hecker M.trực khuẩn subtilis: từ vi khuẩn đất đến nhà
66. Ma W, Liu Y, Shin HD, Li J, Chen J, Du G, Liu L. Kỹ thuật trao
máy sản xuất tế bào siêu tiết. Sự thật về tế bào vi khuẩn.
đổi chất của quá trình chuyển hóa tràn carbon củatrực khuẩn
2013;12:3.
subtilisđể cải thiện việc sản xuất N-acetyl-glucosamine. Công
47. Cherukuri PK, Songkiatisak P, Ding F, Jault JM, Xu XN. Các
nghệ tài nguyên sinh học. 2018;250:642–9.
Su et al. Microb (2020) Page
67. Wu Y, Chen T, Liu Y, Tian R, Lv X, Li J, Du G, Chen J,
Ledesma-Amaro R, Liu L. Thiết kế mạch di truyền cảm biến
sinh học-CRISPRi có thể lập trình để kiểm soát kép năng
động và tự chủ của quá trình trao đổi chất dòng chảy vàotrực
khuẩn subtilis. Axit nucleic Res. 2020;48:996–1009.
68. Watzlawick H, Altenbuchner J. Sự tích hợp đa dạng của gen
ganA vàotrực khuẩn subtilisnhiễm sắc thể để tăng cường sản
xuất beta-galactosidase bằng hệ thống CRISPR/Cas9. AMB
Express. 2019;9:158.
69. Lan Thanh Biên T, Tsuji S, Tanaka K, Takenaka S, Yoshida
K. Sự tiết ra các cellulase bền nhiệt khác loại ở Bacillus
subtilis. J Gen Appl Microbiol. 2014;60:175–82.
70. Patel AR, Mokashe NU, Chaudhari DS, Jadhav AG, Patil
Vương quốc Anh. Tối ưu hóa sản xuất và xác định đặc tính
của protease ngoại bào được tiết ra bởi chủng Bacillus
subtilis AU-2 mới phân lập thu được từ ruột Tribolium
castaneum. Công nghệ sinh học nông nghiệp Biocatal.
2019;19:101122.
71. Yan S, Wu G. Tắc nghẽn trong việc tiết alpha-amylase
trongtrực khuẩn subtilis. Sự thật về tế bào vi khuẩn.
2017;16:124.
Su et al. Microb (2020)
72. Ma Y, Shen W, Chen X, Liu L, Chu Z, Xu F, Yang H. Tăng
cường đáng kể việc sản xuất amylase kiềm tái tổ hợp ởtrực
khuẩn subtilisbằng cách tích hợp chiến lược sàng lọc đột biến
mới với tối ưu hóa quá trình lên men ở cấp độ hệ thống. J Biol
Eng. 2016;10:13.
73. Yang H, Ma Y, Zhao Y, Shen W, Chen X. Kỹ thuật vận chuyển và
phiên mã có hệ thống để thúc đẩy sản xuất alpha-amylase kiềm
trongtrực khuẩn subtilis. Công nghệ sinh học Appl Microbiol.
2020;104:2973–85.
74. Quesada-Ganuza A, Antelo-Varela M, Mouritzen JC, Bartel
J, Becher D, Gjermansen M, Hallin PF, Appel KF, Kilstrup M,
Rasmussen MD,
Nielsen AK. Xác định và tối ưu hóa PrsA trongtrực khuẩn
subtilisđể cải thiện hiệu suất thu được amylase. Sự thật về tế
bào vi khuẩn. 2019;18:158.
75. Yao D, Su L, Li N, Wu J. Tăng cường biểu hiện ngoại bào của
Bacillus stearothermophilus α-amylase trongtrực khuẩn
subtilisthông qua tối ưu hóa peptide tín hiệu, biểu hiện quá mức
chaperone và lựa chọn đột biến α-amylase. Sự thật về tế bào vi
khuẩn. 2019;18:69.
76. Yardimci GO, Cekmecelioglu D. Đánh giá và tối ưu hóa quá trình
sản xuất xylanase bằng cách sử dụng đồng nuôi cấytrực khuẩn
subtilisVàKluyveromyces marxianus. 3 Công nghệ sinh học.
2018;8:290.
77. Alponti JS, Fonseca Maldonado R, Phường RJ. Ổn định nhiệt
của Bacillus subtilis GH11 xylanase bằng kỹ thuật tích điện bề
mặt. Int J Biol Macromol. 2016;87:522–8.
78. Wang J, Wang Y, Wang X, Zhang D, Wu S, Zhang G. Tăng
cường tính ổn định nhiệt của lichenase từtrực khuẩn subtilis168
bởi vòng quay tự phát qua trung gian SpyTag/SpyCatcher.
Nhiên liệu sinh học công nghệ sinh học. 2016;9:79.
79. Wang X, Ge H, Zhang D, Wu S, Zhang G. Quá trình oligome
hóa được kích hoạt bởi Foldon: một phương pháp đơn giản
để nâng cao hiệu quả xúc tác của lichenase và xylanase.
Công nghệ sinh học BMC. 2017;17:57.
80. Lee NK, Kim WS, Paik HD. Các chủng Bacillus làm chế phẩm
sinh học của con người: đặc tính, độ an toàn, hệ vi sinh vật và
chất mang vi khuẩn. Thực phẩm Khoa học công nghệ sinh học-
nol. 2019;28:1297–305.
81. Kim PI, Ryu J, Kim YH, Chi Y-T. Sản xuất chất hoạt động bề
mặt sinh học lipopeptide iturin A, fengycin và Surfactin A từtrực
khuẩn subtilisCMB32 để kiểm soát Colletotrichum
gloeosporioides. Công nghệ sinh học J Microbiol.
2010;20:138–45.
82. Afsharmanesh H, Perez-Garcia A, Zeriouh H, Ahmadzadeh M,
Romero D. Suy thoái Aflatoxin bởitrực khuẩn subtilisUTB1 dựa
trên việc sản xuất enzyme oxyoreductase liên quan đến sinh tổng
hợp bacilysin. Kiểm soát thực phẩm. 2018;94:48–55.
83. Corvey C, Stein T, Düsterhus S, Karas M, Entian K-D. Hoạt hóa
tiền chất subtilin bằngtrực khuẩn subtilisprotease serine ngoại
bào subtilisin (AprE), WprA và Vpr. Biochem Biophys Res Cộng
đồng. 2003;304:48–54.
84. Thuốc kháng sinh Stein T. Bacillus subtilis: cấu trúc, tổng hợp
và chức năng cụ thể. Mol vi sinh vật. 2005;56:845–57.
85. Sumi CD, Yang BW, Yeo IC, Hahm YT. Peptide kháng
khuẩn thuộc chi Bacillus: kỷ nguyên mới của kháng sinh.
Can J Microbiol. 2015;61:93–103.
86. Souza VL, Lopes NM, Zacaroni OF, Silveira VA, Pereira RAN,
Freitas JA, Almeida R, Salvati GGS, Pereira MN. Hiệu suất tiết
sữa và khả năng tiêu hóa khẩu phần của bò sữa đáp ứng với
việc bổ sungtrực khuẩn- lus subtilisbào tử. Khoa học chăn nuôi.
2017;200:35–9.
87. Abdelqader A, Irshaid R, Al-Fataftah AR. Ảnh hưởng của việc bổ
sung men vi sinh vào khẩu phần đến năng suất, chất lượng vỏ
trứng, thành phần hệ vi sinh vật trong manh tràng và đặc điểm
xương chày của gà đẻ ở giai đoạn cuối của quá trình sản xuất.
Sản phẩm sức khỏe Trop Anim. 2013;45:1017–24.
Page
88. Pisithkul T, Schroeder JW, Trujillo EA, Yeesin P, Stevenson
DM, Chaiamarit T, Coon JJ, Wang JD, Amador-Noguez D.
Tái cấu trúc trao đổi chất trong quá trình phát triển màng sinh
học củatrực khuẩn subtilis. Loài. 2019;10:e00623–19.
89. Huang J, Liu S, Zhang C, Wang X, Pu J, Ba F, Xue S, Ye H,
Zhao T, Li K, và những người khác. Có thể lập trình và in
đượctrực khuẩn subtilismàng sinh học làm vật liệu sống được
thiết kế. Nat Chem Biol. 2019;15:34–41.
90. Balasubramanian S, Aubin-Tam ME, Meyer AS. In 3D để
chế tạo vật liệu sống chức năng dựa trên màng sinh học.
ACS Synth Biol. 2019;8:1564–7.
91. Kovacs AT, Dragos A. Màng sinh học tiến hóa: đánh giá các
nghiên cứu tiến hóa thực nghiệm củatrực khuẩn subtilishạt.
J Mol Biol. 2019;431:4749–59.
92. Lò phản ứng Mahdinia E, Demirci A, Berenjian A. Biofilm
như một phương pháp đầy hứa hẹn để sản xuất vitamin K
(menaquinone-7). Công nghệ sinh học Appl Microbiol.
2019;103:5583–92.
93. Setlow P. Bào tử củatrực khuẩn subtilis: khả năng kháng
và bị tiêu diệt bởi bức xạ, nhiệt và hóa chất. J Appl
Microbiol. 2006;101:514–25.
94. Lin P, Yuan H, Du J, Liu K, Liu H, Wang T. Tiến trình nghiên
cứu và phát triển ứng dụng công nghệ hiển thị bề mặt sử
dụngtrực khuẩn subtilisbào tử. Công nghệ sinh học Appl
Microbiol. 2020;104:2319–31.
95. Chen H, Ullah J, Jia J. Tiến bộ trongtrực khuẩn
subtilisCông nghệ hiển thị bề mặt bào tử hướng tới môi
trường, phát triển vắc xin và xúc tác sinh học. Công nghệ
sinh học J Mol Microbiol. 2017;27:159–67.
96. Chu K, Zou R, Zhang C, Stephanopoulos G, Quá HP. Tối
ưu hóa quá trình tổng hợp vô định hình ở trực khuẩn
subtilis thông qua điều chế phiên mã, dịch mã và môi
trường. Công nghệ sinh học Bioeng. 2013;110:2556–61.
97. Huang J, Du Y, Xu G, Zhang H, Zhu F, Huang L, Xu Z. Sản
xuất poly(γ-glutamic acid) năng suất cao và tiết kiệm chi phí
bằngtrực khuẩn subtilis. Eng Life Sci. 2011;11:291–7.
98. Đại J, Vương Z, Tú ZL. Sản lượng cao chất acetoin tinh
khiết về mặt quang học (3R) nhờ một chủng vi khuẩn biển
mới được phân lậptrực khuẩn subtilisCGMCC 13141.
Bioprocess Biosyst Eng. 2019;42:475–83.
99. Licona-Cassani C, Lara AR, Cabrera-Valladares N,
Escalante A, Hernandez-Chavez G, Martinez A, Bolivar F,
Gosset G. Vô hiệu hóa pyruvate kinase hoặc
phosphoenolpyruvate: hệ thống phosphotransferase đường
làm tăng sản lượng axit shikimic và dehydroshikimic từ
glucose trongtrực khuẩn subtilis. Công nghệ sinh học J Mol
Microbiol. 2014;24:37–45.
100. Fu J, Huo G, Feng L, Mao Y, Wang Z, Ma H, Chen T,
Zhao X. Kỹ thuật trao đổi chất củatrực khuẩn subtilisđể
sản xuất meso-2,3-butanediol tinh khiết. Nhiên liệu sinh
học công nghệ sinh học. 2016;9:90.
101. Qi H, Li S, Zhao S, Huang D, Xia M, Wen J. Thao tác với
con đường oxy hóa khử theo mô hình để cải thiện việc sản
xuất isobutanol trongtrực khuẩn subtilisbổ sung bằng xác
nhận thử nghiệm và phân tích hồ sơ trao đổi chất. XIN VUI
LÒNG MỘT. 2014;9:e93815.
102. Jin P, Zhang L, Yuan P, Kang Z, Du G, Chen J. Sinh tổng
hợp hiệu quả polysaccharides chondroitin và heparosan
bằng kỹ thuật trao đổi chấttrực khuẩn subtilis. Polyme
cacbonat. 2016;140:424–32.
Ghi chú của nhà xuất bản
Springer Nature vẫn giữ thái độ trung lập đối với các yêu sách về
quyền tài phán trong các bản đồ đã xuất bản và các liên kết tổ
chức.
Su et al. Microb (2020) Page

Ready to submit your research ? Choose BMC and benefit from:

fast, convenient online submission

thorough peer review by experienced researchers in your field

rapid publication on acceptance

support for research data, including large and complex data types

gold Open Access which fosters wider collaboration and increased

citations

maximum visibility for your research: over 100M website views per