МЕТОДИКА ЗА АНАЛИЗ НА ОРГАНИЧНИ КИСЕЛИНИ С ГАЗ-МАС ХРОМАТОГРАФ

1. Описание на апарата

Анализите се извършват с помощта на газов хроматограф Focus GC (Thermo Electron

SA, Мадрид, Испания) с мас спектрометър DSQ II контролиран от компютър, работещ със
софтуер XCalibur. Извършват се сепарации с капиляри от 30 мм HP-INNOWax колона от
0.25 mmI.D., напълнена с неподвижен полиетилен гликол (0.25 μm дебелина на филма) от
J & W (Folson, СА, САЩ). Като носещ газ се използва хелий (чистота 6.0) при скорост на
потока от 1.5mLmin-1. Температурата на колоната се задава първоначално на 60 ° С за 4
минути и след това се повишава с 10 ° C min-1 до 200 ° С. Така се задържа за 1min и се
повишава до 250 ◦ С с 8◦C/ min-1 (задържа се за 5 минути). Температурата на
инжекционния порт и трасферната линия се поддържат на 250 ° С. Йонизацията се
извършва на температура 200 ◦C при режим 70 eV. Мас спектрометърът е в режим
„selected ion monitoring“ (SIM), избирайки две m/z стойности за всяка органична киселина.
Мас спектрометърът е настроен в режим „full scan“ (40–300 amu) . Пробите се инжектират
чрез AI/AS 3000 autosampler (Thermo Electron SA) в „split“ режим(1:20). Времето за
задържане на разтвора е 4 мин. SPE системата се състои от Gilson Minipuls-3
перисталтична помпа (Villiers-le-Bel, France), два Rheodyne (Cotati, CA, USA) 5041
инжекционни вентили и PTFE лабораторно изготвена сорбционна колона съдържаща
80mg от сместа сорбенти LiChrolut EN/Supelclean ENVI-18 (1:1). Колоната е заредена
първо с 1 mL от ацетонитрил-метанол (1: 1) и по-късно с 1 mL пречистена вода. При тези
условия колоната остава подлежаща на работа най-малко 2 месеца без промяна в
свойствата си.

2. Подготовка на пробите
В лабораторията, пробите се държат студени (4 °С), съхранявани на тъмно в плътно
опаковани съдове до провеждане на анализа. Филтруват се през 0.45 мембранни филтри
(смесени целулозни естери), Millipore Ibrika. рН се коригира на 1.3 с подходящ обем
разредена НС1.

3. Изпълнение на процедурата
Обем 1mL от пробата или стандартен разтвор с

pH1.3 (корегиран с 0.1mL на 0.5M HCl) съдържащ 0.5 – 1000 μg.kg−1 от всяка амино
киселина се асперира през сорбиращата колона (локализирана IV1 на схемата) с дебит
4 mL.min−1. Всички органични киселини се абсорбират и пробата се отстранява;
междувременно вторият поток IV2 се запълва чрез спринцовка с разтворител- елуент
(метанол, съдържащ 2mg.L−1 от 2-tert-buty-4-methylphenol като стандартен разтвор) .
Всяка останала следа от вода в колоната се отмива чрез въздушна струя за 1min.

След това, IV2 съдържанието на елуента (200 μL) преминава в обратна посока пробата,
през колоната, за да разтвори органичните киселини. Екстрактът се събира в конична
стъклена кювета (0.3mL ) в 2 mL тъмно стъкло за газ-хроматографски проби и плътно
се опакова. Аликвотни количества от 1 μL се инжектират в апарата за анализ.