Master en Oncología Molecular

EL PROCESO DE CARCINOGENESIS. CELULAS

NORMALES vs TUMORALES

Miguel Lafarga
Dpto. Anatomía y Biología Celular
Universidad de CantabriaDepto. Anatomía y Biología Celular

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 INDICE

CARACTERÍSTICAS DE LAS CELULAS TUMORALES

MALIGNAS

 DISFUNCIÓN DEL CICLO CELULAR: LA TRANSICIÓN G1-S

 ALTERACIONES DE LA DIFERENCIACIÓN CELULAR: REPROGRAMACIÓN
• Predominio de polirribosomas libres
• Desregulación del nucleolo: incremento de la biogénesis de ribosomas
• Cambios estructurales y epigenéticos de la cromatina
 ALTERACIONES DE LA POLARIDAD Y ADHESIÓN INTERCELULAR
• De las uniones adherentes
• De las uniones comunicantes (tipo “gap”)
 INESTABILIDAD CROMOSÓMICA
• Alteraciones de los telómeros
• Translocaciones entre cromosomas
• Aneuploidía

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 ALTERACIONES DEL CICLO CELULAR
 El cáncer es una enfermedad de los genes que altera la organización celular y tisular.
 La ganancia o pérdida de función en dos categorías de genes “driver”, oncogenes y supresores
de tumores, respectivamente, son factores esenciales en el mecanismo de carcinogénesis.
 Determinadas mutaciones y alteraciones epigenéticas en genes “driver” alteran el ciclo celular y
generan una ventaja selectiva para el crecimiento celular.
Centrosomes
Normal Fibroblasts

D
Centrosomes

A
Malignant-transformed fibroblasts
E

B
C
(A, B) Courtesy of Lan Bo Chen, Dana-Farber Cancer Institute, Boston; © Pollard & Earnshaw, Biology of the Cell, © Saunders, 2007;
(D, E) Lafarga M & Berciano MT, 2015 USO EXCLUSIVO MOM
ALGUNOS ONCOGENES Y GENES SUPRESORES DE TUMORES
REGULAN LA TRANSICION G1-S
LA VÍA DEL RETINOBLASTOMA (Rb)
 En G1 las células dependen de señales externas para continuar un nuevo ciclo
 La señalización de un mitógeno induce la expresión y activación de complejos ciclina/Cdk
que fosforilan e inactivan Rb
 La Rb inactivada libera la represión del factor de transcripción E2F lo que estimula la
progresión a la fase S
 Los genes que codifican Rb y p16 son supresores tumorales que se inactivan por
mutación. Los que codifican CDK4 y ciclina D1 son oncogenes

A
B

(B) Figure 20-38, Molecular Biology Cell, © Garland Science, 2008

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 EL ENSAYO DE REPLICACION “IN SITU” CON BrdU PERMITE
ANALIZAR LA OCELULAR EN PERIODOS
 La síntesis de DNA (replicación) se produce en el periodo “S”
 La proporción de células en periodo “S” es un índice de la tasa de proliferación.
 La replicación del DNA se inicia en la eucromatina y termina en la heterocromatina
 Cada cromosoma posee múltiples orígenes de replicación
Replication of a chromosome
Bromodeoxiuridine (BrdU) incorporation into DNA in the “S” phase PC12
PC12 cells BrdU 20 min

B
“Replication bubble” with
nucleosomes

A
(A) Lafarga M & Berciano M.T. 2012; (B) Fig. 14-17, Curtis & Barnes, Biology, © 1989 Worth Publishers Inc.; (C) Blumenthal et al., Cold Spring
Harb Symp Quant Biol 38,205-223, 1974 USO EXCLUSIVO MOM
LA COEXPRESION DE LAS PROTEINAS Cdt1 Y GEMININA PERMITE
ANALIZAR EL CICLO CELULAR EN CLULAS VIVAS
Cdt1 y Geminina están implicadas en el control de la replicación del DNA
Geminin & Cdt1

Geminina Cdt1

Análisis del ciclo celular en un tumor inducido en el ratón.

Observación con el microscopio SV100 (Olympus)

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Sakaue-Sawano et al., Cell 132:487, © 2008 Cell Press
LAS CELULAS TUMORALES EXPRESAN NIVELES ELEVADOS DE
COMPONENTES DEL COMPLEJO DE REPLICACION
 En los epitelios poliestratificados normales la proliferación se produce
en el estrato basal (troncales) y suprabasal (amplificación transitoria)
A
 Mcm5 es una DNA helicasa del complejo de replicación
Normal ectocervix H&E Ectocervix anti-Mcm5
Normal Low-grade lesion High-grade lesion

B
C
high-grade lesion anti-Mcm5

D
E
(A) Fig. 5-15 Molecular Biology Cell © Garland Science 2008; (B) H. Willacy © 2012, Patient. co. uk; (C) Pollard & Earnshaw, Cell Biology, ©
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Saunders 2002; (D, E) Williams GH, et al., PNAS 95:14932, ©1998 National Academy of Sciences USA
ALTERACIONES DE LA DIFERENCIACION: DESDIFERENCIACION
• Las células tumorales pierden el fenotipo diferenciado: “desdiferenciación” (reprogramación)
• En el estado desdiferenciado se produce reducción de las cisternas de REG y aumento de
polirribosomas libres
• El crecimiento y la proliferación de las células tumorales son muy dependientes de proteínas
producidas en polirribosomas libres
Plasma cell: predominance of REG Cancer cell: predominance of free polyribosomes

A Nucleus B Nucleus

(A) Fawcet D. W., The Cell, © Saunders, 1981; (B) Berciano MT & Lafarga M, 2014
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DESDIFERENCIACION: AUMENTO DEL NUMERO DE NUCLEOLOS
 Se altera el mecanismo de fusión nucleolar en G1 y se activa la nucleologénesis.
 Se activa la biogénesis de ribosomas, un proceso esencial para la proliferación y crecimiento de
la célula tumoral.
 Las proteínas Rb y p53, codificadas por genes supresores tumorales, son reguladores negativos
de la transcripción de la RNA pol I.
 La sobreexpresión de MYC (proto-oncogen) activa la síntesis de rRNAs y proteínas ribosomales.
Lamin B & PI Cervix cancer cell

A
Prostate cancer PC3 cells

B
PC3

C F
(A-C) Suarez, Berciano, Muñoz, Lafarga, 2003; (D) Ghadially F.N. , Ultrastructural Pathology of the Cell and Matrix, © 1988 Butterworths;
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(E) Ruggero & Pandolfi, Nat Rev Cancer, 3:179,2003; (F) Riggelen et al. Nature Rev Cancer, 10:301, © 2010 Macmillan Publishers Limited
 DESDIFERENCIACIÓN: ALTERACIONES DE LA CROMATINA
• La “reprogramación” epigenética de las células tumorales frecuentemente conduce a un
incremento de los dominios de eucromatina (“open chromatin”)
• Los genes que codifican “modificadores de la cromatina” (metiltransferasas, demetilasas,
HATs, complejo SWI/SNF) están frecuentemente desregulados en el cáncer
• El factor MYC, codificado por el proto-oncogen c-myc, promueve el reclutamiento de histona
acetiltransferasas (HATs) y la transición heterocromatina-eucromatina
Pancreatic acinar cell Pancreatic acinar cell carcinoma

Differentiation

D
A B

(A) Roberts, Kessel, Tung, Freeze Fracture Images of Cells and Tissues, © Oxford University Press 1991(B) Ghadially F.N.
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Ultrastructural Pathology of the Cell and Matrix, © Butterworths, 1988; (C, D) Berciano M.T. & Lafarga M, 2013;
 POLARIDAD Y ADHESION DE LAS CELULAS EPITELIALES
 La polaridad celular determina la formación de diferentes dominios de membrana con
distintas propiedades estructurales y funcionales (apical vs baso-lateral)
 Los dispositivos de adhesión intercelular son esenciales para establecer la polaridad en los
epitelios
 La disfunción en la expresión de determinados genes “driver” en el cáncer altera la polaridad
y la adhesión celular
Colon globet cells

zonula occludens
or tight junction

(A) Berciano MT & Lafarga M, 2015 USO EXCLUSIVO MOM

 ALTERACIONES DE LAS UNIONES ADHERENTES
 Hay tres tipos de uniones intercelulares: ocluyentes (zonula occludens), adherentes (zonula
adherens y desmosomas) y comunicantes (uniones tipo “gap”).
 En las z adherens la adhesión está mediada por puentes moleculares de cadherinas que
interaccionan con proteínas de anclaje, α- y β-catenina, que se unen a filamentos de actina
 La adhesión es dependiente de Ca++ y permite el acoplamiento mecánico entre células

A
Actin
Ca2+

E-Cadherin D

B zonula adherens

C
(B) Berciano M.T. & Lafarga M. 2012; (C) Roberts, Kessel, Tung, Freeze Fracture Images of Cells and Tissues, © 1991Oxford
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University Press Inc.(D) Hirakowa & Heuser, J Cell Biol 91:399, © 1981 Rockefeller University Press
 ALTERACIONES EN LA EXPRESION DE E-CADHERINA
 En los carcinomas frecuentemente se produce pérdida o disminución en la expresión de E-
cadherina, lo que favorece la invasividad de las células tumorales
 El déficit en la expresión de E-cadherina desensambla las uniones adherentes e induce la
localización nuclear de b-catenina
 La b-catenina nuclear activa la expresión de genes de proliferación celular
 El tratamiento con vitamina D induce la expresión de E-cadherina y la relocalización de b-
catenina en las uniones adherentes (“diferenciación epitelial”)
Colon cancer SW480 cells
b catenin & E-cadherin Vit D 24h b catenin & E-cadherin

A B

Vit. D
D

C Western blot
(A-C) Palmer et al., J Cell Biol 154:369, © 2001 Rockefeller University Press; (D) Dusek & Attardi, Nat. Rev. Cancer, 11, 317 © 2011
Macmillan Publishers Limited USO EXCLUSIVO MOM
 ALTERACIONES DE LAS UNIONES TIPO “GAP”
 Las uniones “gap” permiten el paso de segundos mensajeros y pequeñas moléculas
 La base estructural es “el conexón”: complejo de 6 conexinas (Cx) que delimitan un canal
central
 Las uniones “gap” permiten el acoplamiento metabólico y eléctrico entre células
 El déficit de conexinas impide el ensamblaje de uniones “gap” y comporta la pérdida de un
mecanismo de coordinación intercelular que puede favorecer la invasividad y metástasis
Myoepithelial cells

Luminal cells
Duct

B C
F
A Cx43 expression in breast cancer
Ca++

D
G
Atomic force microscopy of gap junctions
E
(C, D) Fawcett,The Cell © Saunders, 1981; (E) Müller et al., EMBO J 21,3598-3607, © 2002 European Molecular Biology Organization;
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(F) Naus & Laird, Nat. Rev. Cancer 10, 435, © 2010 Macmillan Publishers Limited
 INESTABILIDAD CROMOSOMICA: DISFUNCION TELOMERICA
• Los telómeros protegen los extremos de los cromosomas (DNA telomérico y shelterina)
• Las alteraciones de los telómeros pueden producir inestabilidad cromosómica
• La expresión de telomerasa se mantiene en la mayoría de los tumores
FISH of telomeric DNA in metaphase and interphase chromosomes Telomerase assembly in Cajal
Telomeric DNA Telomeric DNA & Coilin bodies (“S” Phase)

TERC Dyskerin

TCAB1

C
B

Telomerase

U TERC CA
C U
U U
TCCCAATCCCAATCCCA5’ A
AAAAUCCCAA
AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGG3’
G

A Telomerase

U TERC CA
Elongation C U
U U
TCCCAATCCCAATCCC A5’ A
AAAAUCCCAA
D AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG
3’

(A) © Hesed Padilla-Nash & Thomas Ried, Center for Cancer Research, NIH, Washington; (B, D) Berciano MT & Lafarga M.
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2012; (C) Modified from Venteicher et al. Science 323:644-648, 2009;
INESTABILIDAD CROMOSOMICA: DISFUNCION TELOMERICA
El acortamiento telomérico en células tumorales puede inducir procesos de fusión y
fragmentación de cromosomas
Prostate intraepithelial neoplasia (PIN)
Telomeric DNA

Normal gland

A
C

B
(A) Modificado de Alberts et al., Mol Biol Cell © Garland Science, 2002; (B) Fig. 10.13b,Weinberg , The Biology of Cancer, ©
USO EXCLUSIVO MOM
Garland Science 2007; (C, D) Meeker et al., Cancer Res 62,6405-6409, © 2002 American Association for Cancer Research
INESTABILIDAD CROMOSOMICA: DISFUNCION TELOMERICA
Fusión y fragmentación de cromosomas

A
Normal chromosomes Chromosomal fusion and breakage

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(A) Figs. 10.14b, c,Weinberg , The Biology of Cancer, © 2007 Garland Science
 INESTABILIDAD CROMOSOMICA: TRANSLOCACIONES
 Las translocaciones reciprocas son muy frecuentes en linfomas de células B y leucemias.
 Se producen preferentemente entre cromosomas adyacentes (arquitectura nuclear).
 En linfocitos B, la proximidad de los Ch 8 y 14 favorece su translocación en el linfoma de
Burkitt y la inserción del gen c-myc (Ch 8) en el locus IGH (Ch 14).
Translocation Ch 9
Ch 17 Ch17
Ch9
Ch14

Ch9
Ch8 Ch14
A
Ch8
Ch17
c-myc
B C D
IGH

E c-myc
Phases in the biogenesis of a translocation

F
H
F G
E
(A, E) Roukos & Misteli, Nature Cell Biol. 16,293-300, © 2014 Macmillan Publishers Limited; ; (B, C) Forster et al. Cancer Cell 3:449-458, ©
2003 Cell Press; (D) Berciano MT & Lafarga 2012; (E) Robbiani & Nussenzweig, Annu. Rev. Pathol Mech. Dis., 8,79-103, © 2013 Annual
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Reviews; (F) Roukos et al., Science, 341,660-664, © 2013 Science AAAS
INESTABILIDAD CROMOSOMICA: MECANISMOS DE ANEUPLOIDIA
 La aneuploidía es muy común en los tumores sólidos y se debe a errores de la mitosis
 Defectos en la formación del huso mitótico
 Disfunción del punto de control de la mitosis (mutaciones de genes implicados Mad2, Bub)
 Defectos en la disociación de las cohesinas
 Amplificación de centrosomas con formación de husos mitóticos multipolares
Mitotic errors
Metaphase mitosis bipolar Anaphase cinetocore

D
A D

Mataphase cinetocores C

E micronucleus
B

C
F F
B E
(A) Rieder et al. Trends Cell Biol 11:413, © 2001 Elsevier Science Ltd; (B) Walczak, Trends Cell Biol 16:65, © 2006 Elsevier Science Ltd.;
(D) Pickett-Heaps & Fowke, Aust J Biol Sci 23,71-92, © 1970 CSIRO; (C, E) Berciano M.T. & Lafarga M., 2015
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 MECANISMOS DE ANEUPLOIDIA: ALTERACIONES DEL CICLO
CENTRIOLAR
 La duplicación del DNA y del centrosoma están estrictamente coordinados
 Los errores en la duplicación del centrosoma pueden dar lugar a centriolos
supernumerarios y a la formación de mitosis multipolares

B
A
Normal cells Cancer cell with multiple centrioles
Fase G1 Fase S

C D E
(A) Bettencourt-Davis & Glover, Nature Rev Mol Cell Biol 8:451-463, © 2007 Nature Publishing Group; (B) Berciano MT & Lafarga M 2015; (D)
McGill et al. J. Ultrastruct Res 57:43-53, © 1976 Academic Press; (E) Ghadially F.N. Ultrastructural Pathology of the Cell and Matrix, ©
Butterworths, 1988 USO EXCLUSIVO MOM
 MECANISMOS DE ANEUPLOIDIA: MITOSIS MULTIPOLARES
Alteraciones en la expresión de Aurora y Polo-like quinasas producen disfunción
del ciclo centriolar y de la formación del huso mitótico
MCF7 Bipolar mitosis Multipolar mitosis Multinucleate cancer cell

B
A

E
Dysfunction of cytokineisis

C D
Multipolar mitosis Multipolar mitosis

F G
H
(A-E) Lafarga M & Berciano M.T., 2012;( F, G) Yang et al.
Nature Cell Bioll, 10:748-751, © 2008 Nature Publishing
Group; (H) Figure 12.38c The Biology of Cancer, © Garland
Science 2007 (from K.G. Murti, cover picture Biotechniques,
2007). USO EXCLUSIVO MOM
 V van Gogh, 1888
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