‫‪000‬‬

‫عملي‬ ‫‪00‬‬
‫‪00‬‬

‫‪2‬‬

‫‪4‬‬
‫‪1‬‬
‫أحياء دقيقة ‪Microbiology 1 | 1‬‬

‫السلام عليكم *__*‬

‫أعزاءنا الطلبة‪‬‬
‫نقدم لكم محاضرتنا الرابعة في مادة األحياء الدقيقة القسم العملي‪.‬‬
‫مع العلم أن هذا العمل هو نتاج طالبي بحت ال عالقة لدكاترة المادة به‪.‬‬
‫آملين أن نحقق لكم الفائدة المرجوة من وراء هذا العمل المتواضع‪.‬‬
‫راجين من المولى عزّ وجل التوفيق لنا ولكم ^__^‬

‫المكورات سلبية الغرام‬

‫لدينا عينة حيوية تم تلوينها تلوين غرام فتبين أنها مكورات سلبية الغرام‪ ،‬قمنا بزرعها على‬
‫‪ Blood agar‬وماكونكي فمن المفترض أن تنمو بعد ‪ 42‬ساعة على الوسطين لكن تبين أنها‬
‫تنمو بصعوبة على الـ ‪ Blood agar‬ولا تنمو أبدا على ماكونكي لأنها متطلبة ‪ Fastidious‬أي‬
‫تحتاج شروط خاصة للنمو‪.‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫شروط النمو‪:‬‬
‫‪ .1‬عوامل النمو‪( 5 :‬هيماتين) ‪ (NAD ( 11 +‬وهما موجودان بالكرية الحمراء لذلك يجب أن تنحل‬
‫لنحصل عليهما ‪،‬فالوسط الملائم الذي فيه كريات دم منحلة هو ال ‪.choclate agar‬‬

‫مالحظة‪:‬‬

‫‪ ‬يمكن أن نزرع أيضاً على وسط تايرمارتن‪.‬‬

‫‪ ‬تايرمارتن‪ :‬هو وسط يكون فيه العاملين ‪ 5‬و‪ 11‬مصنعين تجارياً ومضافين إليه‪ ،‬وهذا‬
‫الوسط يحوي أيضاً صاد حيوي نوعي يقتل كل الجراثيم اال المكورات سلبية الغرام أي‬
‫يُعطي إنتقائية للجراثيم (وسط غني وانتقائي)‪.‬‬
‫‪ :Candle jar .2‬لانها جراثيم متحملة للهواء تتثبط بتركيز الاوكسجين بالهواء (‪ )%22‬وتحتاج‬
‫‪ CO2‬بنسبة من ‪( % 21-2‬لماذا؟) بما أنها جراثيم متحملة للهواء فهي تحتاج ‪ CO2‬ليس‬
‫لتستهلكه بل لتنقص نسبة الأوكسجين عن التركيز الموجود فيه (‪ )%22‬حيث تتثبط بهذه‬
‫النسبة من الأوكسجين‪.‬‬

‫ما هي الطريقة للحصول على ‪ CO2‬بنسبة ‪%21-2‬؟‬

‫نزرع العينة الحيوية على وسط ‪ choclate agar‬ونضع الوسط داخل حجرة محكمة الإغلاق (‪)jar‬‬
‫ثم نضع فوقه شمعة ونشعلها لثواني فقط ثم نغلق الحجرة‪ ،‬ستنطفئ الشمعة بعد ‪ 11‬ثواني‬
‫تقريبًا فيكون الاحتراق استهلك جزء من الأوكسجين ونتج ‪ CO2‬و‪ ...CO‬وهكذا نكون قد حصلنا‬
‫على جو من ‪ CO2‬من ‪%21-2‬‬
‫‪ ‬تدعى هذه العملية مكورات سلبية الغرام مزروعة على ‪.chocolate agar with candle jar‬‬

‫أسئلة؟‬

‫لماذا تحتاج المكورات سلبية الغرام للعاملين ‪ 5‬و‪11‬؟‬

‫لأنها جراثيم متطلبة‪.‬‬
‫كيف نحصل على العاملين ‪ 5‬و‪11‬؟‬
‫من وسط ‪ Chocolate agar‬وتايرمارتن‪.‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪2‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫المكورات سلبية الغرام هي‪:‬‬

‫‪ ‬نايسيريا‪:‬‬
‫يوجد منها ‪normal flora‬ويوجد أيضًا نوعين ممرضين للإنسان ومنها‪:‬‬
‫‪ .1‬سحائية‪ :‬تسبب التهاب السحايا عند حديثي الولادة (العينة هي سائل دماغي شوكي لطفل)‪.‬‬
‫‪ .4‬البنية‪ :‬تسبب السيلان البني (وهو التهاب في المجاري التناسلية يصيب الذكور والإناث‬
‫والعينة هي سائل منوي أو مسحة مهبلية)‪.‬‬
‫‪ ‬موركسيلا‪ :‬تسبب التهاب ملتحمة العين خاصة عند الأطفال أثناء الولادة (عندما تأتي عينة عينية‬
‫للمخبر نشك بأن الجرثومة موركسيلا)‪.‬‬

‫ما هو شرط زرع النيسيريا؟‬

‫نزرع على ‪ chocolate agar with candle jar‬بالإضافة إلى ‪ Blood agar‬وماكونكي‪.‬‬

‫العصيات سلبية الغرام‬

‫‪ ‬تنمو على كلا الوسطين ‪ Blood agar‬وماكونكي‪.‬‬
‫‪ ‬لا تعتمد اختبار واحد حيث عددها كبير لذلك نطبق مجموعة من الاختبارات الكيميائية الحيوية‬
‫التي تعتمد على صفة حيوية مثل (تخمر السكر _إطلاق غاز _‪ )........‬أو بكاشف كيميائي مثل‬
‫(مشعر كيميائي _ مشعر حيوي_ تفاعل كيميائي _‪.).......‬‬
‫‪ ‬يمكن أن نشاهد العصيات سلبية الغرام على وسط ماكونكي بشكل عصورات (عصيات‬
‫قصيرة)‪.‬‬
‫‪ ‬العصيات سلبية الغرام هي نوعين‪:‬‬
‫‪ .1‬أمعائيات (سلبية الأوكسيداز)‪.‬‬
‫‪ .4‬زوائف (إيجابية الأوكسيداز) منها عصيات القيح الأزرق تنمو على الوسطين غير مخمرة للاكتوز‬
‫لديها ‪ 14‬نوع الهجومية والخطيرة فيها هي الزائجة الزنجارية‪.‬‬

‫‪3‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫وسط ‪:Cetrimide Agar‬‬

‫‪ o‬وسط شفاف صلب انتقائي مضاف إليه ستراميد (ملح من أملاح‬

‫الأمونيوم الرباعية) لونه أصفر باهت يشبه وسط الآغار المغذي‬
‫(أصفر غامق)‪ ،‬هذا الوسط انتقائي فقط للجرثوم عصيات القيح‬
‫الأزرق أو الزوائف الزنجارية ‪.Pseudomonus aeruginosa‬‬
‫‪ o‬الستراميد هو مادة مطهرة مضادة للجراثيم بحيث يثبط هذا‬
‫الوسط نمو جميع الجراثيم المزروعة عليه عدا الزائفة الزنجارية‪.‬‬
‫‪ o‬نوع هذه العصيات (سلبية الغرام)‪ ،‬هوائية لاهوائية مخيرة‪ ،‬عصية القيح الأزرق خطيرة إذا‬
‫أصابت العيون لأنها عصية مقاومة جداً‪.‬‬
‫‪ o‬تتواجد بالمشافي وتدعى جرثومة المشافي وقد تعيش في عبوات المطهرات فهي مقاومة جدًا‬
‫وهي من أكثر الجراثيم مقاومة بشدة للصادات الحيوية‪ ،‬وهي متعددة المقاومة ‪multi‬‬
‫‪ resistance‬لها ‪ 5‬طرق لمقاومة الصادات الحيوية أحدها الطريقة الفعالة وهي الضخ العكسي‬
‫عن طريق قنوات موجودة في الغشاء الخلوي تنمو على المطهرات تستخدمها كمصدر للطاقة‪،‬‬
‫تحتاج إلى مشاركة نوعين من الصادات للقضاء عليها‪.‬‬
‫‪ o‬صفات مستعمراتها‪:‬‬
‫‪ ‬شكلها مغزلي‪ ،‬حوافها مشرشرة‪ ،‬لونها أزرق مخضر (زنجاري)‪.‬‬
‫‪ o‬تنتج أصبغة منحلة بالماء مثل‪ :‬البيوسيانين ‪ Pyocyanin‬ذو اللون الأزرق والبيو فيريدين‬
‫‪ Pyoverdin‬ذو اللون الأخضر‪ ،‬تنتج هذه الأصبغة معاً لون أخضر مزرق (زنجاري) رائحتها مميزة‬
‫تشبه رائحة زهر اللوز (زهرة الفواكه)‪.‬‬
‫‪ o‬الزوائف‪:‬‬
‫‪ .1‬غير مخمرة للاكتوز على وسط ماكونكي‪.‬‬
‫‪ .4‬إيجابية الأوكسيداز‪.‬‬
‫‪ .3‬الوسط النوعي لها هو ستراميد آغار‪.‬‬

‫إذا كان لدينا معلق يحوي جراثيم سلبية الغرام وقمنا بالزرع على وسط ‪Cetrimide‬‬
‫ولم يحدث نمو هذا يعني أنه ‪‬ال يوجد ‪.Pseudomonus‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪4‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫للتميز بين األمعائيات نقوم بالزرع على أوساط انتقائية‪:‬‬

‫‪ .A‬وسط ماكونكي ‪:Macconkey media‬‬

‫‪ ‬وهو وسط غني‪ ،‬ونصف انتقائي لسلبيات الغرام‪ ،‬وتفريقي يفرّق بين الجراثيم المخمرة لسكر‬
‫اللاكتوز من غير المخمرة‪ ،‬حيث المستعمرات المخمرة يصبح لونها زهري أما غير المخمرة تكون‬
‫صفراء أو عديمة اللون (نلاحظ أن لون المستعمرة الذي يتغيّر وليس الوسط)‪.‬‬

‫ماكونكي ليس وسط انتقائي‪ ،‬انتقائي أي أنه يُنمّي نوع‪/‬جنس واحد‪.‬‬

‫‪ ‬زمرة الأمعائيات‪ :‬سميت بهذا الاسم لأنها ‪ normal flora‬موجودة في الأمعاء تصيب الجهاز‬
‫الهضمي‪.‬‬
‫‪ ‬من الجراثيم الشائعة المخمرة للاكتوز‪ ،E-coli :‬كلبسيلا‪ ،Entero bacter ،‬باقي العصيات‬
‫السلبية غير مخمرّة للاكتوز‪.‬‬

‫كيف نفرق بين هذه الجراثيم؟‬

‫من صفات المستعمرة حيث‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫الكلبسيال‪ :‬مستعمراتها كبيرة قوامها مخاطي تشبه قطرة العسل لونها زهري‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫سبب المخاطية‪ :‬لها محفظة (هي عديد سكاريد) لذلك تعطي مستعمرات ملساء‬ ‫‪‬‬
‫المعة ومخاطية‪.‬‬
‫الـ‪ E-coli‬و‪ : Entero bacter‬مستعمراتها كريمية القوام‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫الـ‪ :E-coli‬هي الجرثومة األكثر شيوعاً تسبب إنتانات جرثومية عند اإلنسان وهي‬ ‫‪‬‬
‫المسبب الرئيسي اللتهاب المجاري البولية ‪.)urinary tract infection( Uti‬‬
‫‪ ‬يحتوي هذا الوسط على أملاح صفراوية لذلك جميع الجراثيم يتثبط نموها عدا زمرة الأمعائيات‬
‫تتحمل الأملاح الصفراوية وبالتالي هو نصف انتقائي لسلبيات‬
‫الغرام‪.‬‬
‫‪ ‬لون الوسط‪ :‬أحمر مائل للبني‪.‬‬
‫‪ ‬يحتوي أيضًا على سكر اللاكتوز للتفريق بين الأمعائيات المخمرة‬
‫للاكتوز‪ :‬مثل (‪ ،E-coli‬كلبسيلا) الأمعائيات غير المخمرة للاكتوز‬
‫(متقلبات‪ ، protus‬سالمونيلا‪ ،‬شيغيلا) والمشعر أحمر معتدل‪.‬‬

‫‪5‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫المستعمرات المخمرة للسكر يصبح لونها زهري مستعمرات الكلبسيال قوامها مخاطي‬
‫لونها زهري‪.‬‬
‫إذاً‪ :‬هو وسط انتقائي ألنه ينمي جراثيم سلبية الغرام فقط وذلك بسبب وجود‬
‫األمالح الصفراوية وتفريقي ألنه يفرق بين أنواع األمعائيات‪.‬‬

‫لماذا استخدمنا سكر اللاكتوز في وسط ماكونكي ولم نستخدم مثلًا غلوكوز؟‬

‫لأن الغلوكوز سكر أحادي و ‪99%‬من الجراثيم تخمره ونحن نريد التفاضل بين الجراثيم في هذه‬
‫الصفة للتفريق لذلك استخدمنا سكر اللاكتوز الثنائي‪.‬‬

‫‪ .B‬وسط ‪:(Eosin methylene blue agar) EMB‬‬

‫‪ ‬وسط فيه ملونين [أيوزين _ أزرق الميتلين(مشعر)] وأملاح الصفراء‪ ،‬وسكر اللاكتوز‪.‬‬
‫‪ ‬لون الوسط بنفسجي غامق‪.‬‬
‫‪ ‬وسط صلب نصف انتقائي وتفريقي‪ ،‬نصف انتقائي لسلبيات الغرام‪ ،‬وهو‬
‫أكثر انتقائية من ماكونكي‪.‬‬
‫‪ ‬يُعتبر هذا الوسط مميّز لجرثومة ‪ E-coli‬حيث إذا نمت عليه الجرثومة‬
‫يُعطي لمعة يودية خضراء (معدنية)‪.‬‬
‫أشكال المستعمرات‬

‫كلبسيلا‪:‬‬

‫‪ ‬مستعمرات مخاطية ذات لون زهر غامق مع مركز أسود مخمرة‬

‫لسكر اللاكتوز قوامها مخاطي‬
‫‪ ‬شكلها يسمى بقطرة العسل‪.‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪6‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪: E-coli‬‬

‫‪ ‬عصيات كولونية مستعمرات ذات لون زهر مخمرة لسكر‬

‫اللاكتوز تعطي لمعة اليود الخضراء قوامها خشن‪.‬‬
‫‪ ‬بينما السالمونيلا والشيغيلا والمتقلبات تبدو مستعمرتها‬
‫شفافة لأنها غير مخمرة للسكر‪.‬‬

‫يعتبر اللون من أهم صفات المستعمرات الجرثومية والذي ينتج عن أصبغة‬

‫‪.Pigments‬‬

‫مالحظة‪:‬‬
‫‪ ‬يمكن استخدامه ألتحرى عن وجود تلوث برازي في المياه‪ ،‬فعند الشك بوجود التلوث‬
‫البرازي نزرع العينة على وسط ‪.EMB‬‬
‫‪ ‬إذا كان يوجد ‪ E-coli‬حتماً يوجد تلوث برازي‪ E-coli ،‬تتواجد في المياه لمدة يوم أو‬
‫يومين ال أكثر أي أن تلوث المياه بالصرف الصحي قريب‪.‬‬
‫‪ ‬إذا كان يوجد كابسيال ليس شرط لوجود تلوث برازي‪.‬‬

‫‪ .C‬وسط ‪ SS‬سالمونيال شيغيال‪:‬‬

‫‪ ‬وسط يحوي أملاح صفراوية ولاكتوز ومشعر أحمر المعتدل وأمالح الحديدي‬
‫‪ ‬وسط انتقائي ينمي كل السلبيات وتفريقي‪ ،‬يدعم نمو السالمونيلا والشيغيلا بشكل رئيسي‪،‬‬
‫لكن من الممكن أن تنمو عليه أنواع الأمعائيات الآخرى‪.‬‬
‫‪ ‬المستعمرات التي تخمر اللاكتوز تظهر بلون أحمر (كلبسيلا‪.)E.coli-‬‬
‫‪ ‬بينما تظهر المستعمرات التي لا تخمر اللاكتوز عديمة اللون (السالمونيلا‪-‬شيغيلا‪-‬متقلبات)‪.‬‬
‫‪ ‬تتميز السالمونيلا عن الشيغيلا بأنها تظهر شفافة ذو مركز أسود بسبب إطلاقها لغاز ‪ H2S‬الذي‬
‫يتفاعل مع أملاح الحديدي الموجود في الوسط فينتج راسب هو كبريت الحديدي ذو اللون‬
‫الأسود بينما تظهر الشيغيلا شفافة فقط لأنها لا تطلق غاز ‪.H2S‬‬

‫السالمونيال والشيغيال يسببان التهاب أمعاء إذاً العينة ستكون براز‪ ،‬وثلث وزن البراز‬
‫جراثيم لذلك نحتاج إلى انتقائية شديدة تُنمّي هذه الجراثيم‪.‬‬

‫‪7‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫حدد نوع الجرثوم حسب المعطيات التالية‪:‬‬

‫‪ .1‬وسط ‪ EMB‬يحوي مستعمرات لونها زهري وتحوي مركز أسود ‪‬كلبسيلا‪.‬‬

‫‪ .4‬وسط شابمان يحوي مستعمرات غيرت لون الوسط للأصفر ‪‬عنقوديات ذهبية‪.‬‬
‫‪ .3‬وسط ماكونكي يحوي مستعمرات زهرية مخاطية ‪‬غالبًا كلبسيلا‪.‬‬

‫علل لا نستطيع الزرع على الأوساط الانتقائية مباشرة عند أخذ العينة (مسحة بلعومية مثلاً)؟‬

‫لأن الجراثيم لا تكون معزولة عن بعضها‪.‬‬

‫مثال‪ :‬جرثوم العنقوديات الذهبية ينمو على وسط شابمان وعند أخذ العينة من المريض والزرع‬
‫على هذا الوسط سوف ينمو الجرثوم لكن بقية الجراثيم المتواجدة بالعينة لن تموت إنما تتثبط‬
‫فقط وبالتالي تحدث تشوش وتداخل بعملية العزل لذلك لا بد من المرور بعدة خطوات مثل الزرع‬
‫على الأوساط اللانتقائية وهي الخطوات التي قمنا بها في جلسات سابقة (تلوين غرام ‪Gram‬‬
‫‪ ،staning‬استفراد‪ ،‬العزل ‪.)Pure culture streaking‬‬

‫مالحظات‪:‬‬
‫يجب االنتباه عند التعقيم باللهب ألنه إذا احترقت الجراثيم بسبب الحرارة العالية ينتج‬ ‫‪‬‬
‫لدينا أطباق ال تحوي مستعمرات‪.‬‬
‫عند أخذ مستعمرة جراثيم لزرعها على وسط انتقائي تؤخذ من خط الزرع (خط‬ ‫‪‬‬
‫الزيكزاك غالباً) ونختار مستعمرة وحيدة‪.‬‬
‫ال يمكن نهائياً أن نقول هذا الجرثوم ‪ Staphylo coccus areus‬باالعتماد على المجهر‬ ‫‪‬‬
‫وتلوين غرام‪.‬‬
‫األوساط الصلبة تحوي مادة اآلغار وهي التي تمنحها القوام‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫يعتبر اللون من أهم صفات المستعمرات الجرثومية والذي ينتج عن أصبغة ‪pigments‬‬ ‫‪‬‬
‫غير منحلة بالماء مثل معظم الجراثيم‪.‬‬
‫أو منحلة بالماء كما في اللون الذي تنتجه عصيات القيح األزرق (اللون أخضر مزرق)‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تصنع بعض األنواع الجرثومية (المكورات العقدية المقيحة) مواد تسبب انحالل الدم‬ ‫‪‬‬
‫في حال وجوده في األوساط الزرعية‪.‬‬
‫وهذا ما يسمى االنحالل الدموي ‪ Hemolysis‬وهو ثالثة أنواع (ألفا‪ ،‬بيتا‪ ،‬غاما)‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫تلوين غرام هو الخطوة األولى لمعرفة شكل الجرثوم‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪8‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫كيف يتم التمييز بين الجراثيم المنتجة للأصبغة المنحلة بالماء والجراثيم المنتجة للأصبغة غير‬
‫المنحلة بالماء مع مثال؟‬

‫الجراثيم المنتجة للأصبغة المنحلة بالماء تغير لون الوسط مثل عصيات القيح الأزرق حيث تعطي‬
‫لون أخضر بينما معظم الجراثيم الأخرى تنتج أصبغة غير منحلة بالماء‪ ،‬حيث يتغير لون المستعمرة‬
‫وليس الوسط بأكمله‪.‬‬

‫ما هي أهم المعايير المستخدمة في وصف المستعمرات الجرثومية؟‬

‫الشكل‪-‬الارتفاع‪-‬الحواف‪-‬الحجم‪-‬القوام‪-‬اللون‪-‬المظهر‪.‬‬

‫أعط مثالًا على كل من‪:‬‬

‫‪ ‬مستعمرات جرثومية زرقاء ‪‬زوائف زنجارية‪.‬‬

‫‪ ‬مستعمرات جرثومية مخاطية‪ ‬كلبسيلا‪.‬‬

‫مقارنة بين أنواع األوساط‬

‫وسط ‪EMB‬‬
‫وسط ماكونكي‬ ‫وسط شابمان‬
‫‪Eosin‬‬
‫وسط ‪Cetrimide‬‬ ‫‪Macconkey‬‬ ‫‪Manitol salt‬‬
‫‪methylene‬‬
‫‪media‬‬ ‫‪Agar MSA‬‬
‫‪blue‬‬
‫موف (بنفسجي‬
‫أصفر فاتح‬ ‫أحمر مائل للبني‬ ‫أحمر‬ ‫اللون‬
‫غامق)‬
‫جراثيم سلبية‬ ‫جراثيم سلبية‬
‫عصيات القيح‬ ‫نوع الجراثيم مكورات إيجابية‬
‫الغرام من زمرة‬ ‫الغرام من زمرة‬
‫األزرق‬ ‫الغرام عنقودية‬ ‫النامية‬
‫األمعائيات‬ ‫األمعائيات‬
‫ملح كلور‬
‫الصوديوم و‬
‫مركب السيتراميد‬ ‫المانيتول‬
‫سكر الالكتوز‬ ‫أمالح صفراوية‬
‫وهو من مركبات‬ ‫(كحول له‬ ‫التركيب‬
‫واأليوزين‬ ‫سكر الالكتوز‬
‫أمالح األمونيوم‬ ‫طعم حلو‬
‫نسميه محلي‬
‫صنعي)‬

‫‪9‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪-‬‬ ‫أزرق الميثيلين‬‫أحمر المعتدل‬ ‫أحمر الفينول‬ ‫المشعر‬

‫انتقائي لسلبيات‬ ‫يفرق بين‬
‫يفرق بين‬ ‫الغرام فقط ال‬ ‫المكورات‬
‫عصية القيح‬
‫يسمح للجراثيم كلبسيال و‪E-coli‬‬ ‫العنقودية‬
‫األزرق عصية‬
‫حيث كلبسيال‬ ‫إيجابية الغرام‬ ‫الذهبية الممرضة‬
‫سلبية الغرام‬ ‫والمكورات‬
‫مستعمراتها‬ ‫بالنمو (يثبطها)‬
‫هوائية ال هوائية‬ ‫العنقودية غير‬
‫مخاطية ذات‬ ‫يفقرق بين‬
‫مخيرة‬ ‫الممرضة‪.‬‬
‫لون زهر مع مركز‬ ‫األمعائيات‬
‫مستعمراتها‬ ‫الممرضة تخمر‬ ‫ميزات أخرى‬
‫أسود و‪E-coli‬‬ ‫المخمرة لالكتوز‬
‫مغزلية حوافها‬ ‫المانيتول ينقلب‬
‫مستعمرات ذات‬ ‫(‪E-coli‬‬ ‫لون الوسط‬
‫مشرشرة تنتج‬
‫لون زهر قطرها‬ ‫وكلبسيال)‬ ‫لألصفر غير‬
‫أصبغة منحلة‬
‫خشن تعطي‬ ‫واألمعائيات غير‬ ‫الممرضة ال تخمر‬
‫بالماء وتعطي‬
‫لمعة خضراء‬ ‫المخمرة لالكتوز‬ ‫المانيتول ويبقى‬
‫لون أخضر مزرق‬ ‫لون الوسط كما‬
‫يدوية‬ ‫مثل (سالمونيال‪،‬‬
‫هو‬
‫شيغيال‪ ،‬متقلبات)‬

‫مستعمرات جرثومية‬
‫الآن سنرى بعض المستعمرات من الجلسة السابقة‪:‬‬

‫وسط ‪ Cetrimide‬نالحظ‬ ‫وسط شابمان نالحظ المستعمرات الجرثومية‬

‫مستعمرات الزرائف بلون أخضر‬ ‫العنقوديات وانقالب لون الوسط لألصفر‬
‫مزرق‬ ‫عنقوديات ذهبية‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪10‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫وسط ماكونكي مستعمرات جراثيم‬ ‫وسط ‪ EMB‬نالحظ لمعة اليود لجرثوم‬

‫مخمرة لالكتوز وهي الكلبسيال‬ ‫اإليكوالي‬
‫عند الزرع على وسط انتقائي فإننا نزرع بشكل خط زيكزاك فقط‪.‬‬

‫اختبارات ‪IMVC‬‬
‫‪ ‬وهو مصطلح يشير إلى جملة من الاختبارات الأكثر شيوعًا وتجرى في المخابر‪.‬‬
‫‪ ‬هذه الاختبارات تفرق بين الكلبسيلا و‪( E.coli‬وكلاهما من زمرة الأمعائيات وسلبية الغرام)‪.‬‬
‫‪ ‬هذه الاختبارات تتم في الأوساط السائلة‪.‬‬
‫‪ ‬والآن ماذا يشير المصطلح ‪:IMVC‬‬
‫‪( Indol  I )1‬اندول)‪.‬‬
‫‪( Methyl Red  M )4‬أحمر المثيل)‪.‬‬
‫‪( Voges Proskaver  V )3‬فوكس بروكسفر)‪.‬‬
‫‪( Cittrate  C )2‬سيترات)‪.‬‬

‫‪ .A‬اختبار االندول‪:‬‬
‫‪ ‬يستخدم هذا الاختبار للكشف عن وجود أنزيم التربتوفيناز أي لكشف قدرة بعض الجراثيم على‬
‫استقلاب الحمض الأميني تربتوفان إلى الاندول (حلقة عطرية) وذلك بإضافة كاشف كوفاكس‬
‫(بارا دي ميتيل أمينو بنز ألدهيد ‪ +‬الغول الايزو أميني)‪.‬‬
‫‪ ‬ونستدل أن الجرثوم قادر على تفكيك الحمض الأميني التربتوفان من ظهور حلقة حمراء على‬
‫سطح الأنبوب‪.‬‬
‫‪ ‬النتيجة‪:‬الايكولاي إيجابي التفاعل أما الكلبسيلا سلبية التفاعل‪.‬‬

‫‪11‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪ .B‬اختبار أحمر الميتيل ‪:MR‬‬

‫‪ ‬يعتمد هذا الاختبار على نواتج الاستقلاب في حال وجود جراثيم ‪ E.coli‬فإنها تعطي نواتج‬
‫استقلاب حمضية (وسط أصفر اللون) وعند استخدام أحمر الميتيل ينقلب لون الوسط للأحمر‬
‫‪‬نتيجة إيجابية‪.‬‬
‫‪ ‬أما في حال وجود جراثيم الكلبسيلا فهو يعطي نواتج استقلاب معتدلة وبالتالي عند استخدام‬
‫أحمر الميتيل لا ينقلب اللون ‪‬نتيجة سلبية‪.‬‬
‫‪ ‬أي تغير لون الوسط إلى اللون الأحمر بدل على إيجابية الاختبار بينما بقاء لون الوسط أخضر‬
‫يدل على سلبية الاختبار‪.‬‬

‫‪ .C‬اختبار ‪:VP‬‬
‫‪ ‬يتم في هذا الاختبار استخدام كاشفين هما ألفا نفتول وهيدروكسيد البوتاسيوم‪.‬‬
‫‪ ‬إذا كان الجرثوم ‪ E.coli‬وبالتالي يبقى لون الوسط أصفر لا يتغير (سلبي)‪.‬‬
‫‪ ‬بينما إذا كان الجرثوم كلبسيلا يتشكل لون أحمر خلال ربع ساعة (إيجابي)‪.‬‬
‫‪ ‬أي تغير لون الوسط للون الأحمر يدل على إيجابية الاختبار وبقاؤه اصفر يدل على سلبية الاختبار‬
‫‪ ‬اختبار ‪ VP‬و‪ MR‬يكون عندها نفس المكونات (غلوكوز) لكن الفرق بالمشعر ويجريان هذان‬
‫الاختباران مع بعض‪.‬‬
‫‪ ‬فائدة اختبار ‪ VP‬و‪ :MR‬معرفة قدرة الجرثوم على تخمير الغلوكوز‪.‬‬
‫‪ ‬في اختبار أحمر الميتيل إذا كان الجرثوم إيجابي التفاعل يكون الناتج النهائي لتخمير الغلوكوز‬
‫حمض وإذا كان سلبي التفاعل فنحن امام خيارين إما الناتج النهائي لتخمير الغلوكوز أسيتون أو‬
‫أن الجرثوم لا يخمر الغلوكوز نهائيا لذلك نقوم باختبار فوكس بروكسبل ‪.VP‬‬

‫‪ .D‬اختبار السيترات‪:‬‬
‫‪ ‬يجرى هذا الاختبار بطريقتين‪.‬‬
‫‪ ‬يُجرى الاختبار بزرع الجرثوم في وسط سائل يحوي السترات كمصدر وحيد للكربون وأملاح‬
‫الأمونيوم كمصدر وحيد للنتروجين )‪.(Koser’s Medium‬‬
‫‪ ‬يدل وجود العكر في الوسط بعد الحضن على نمو الجرثوم بوجود السترات فقط أي إيجابية‬
‫الاختبار بينما يبقى الوسط رائقاً في حال عدم النمو الجرثومي أي أن الاختبار سلبي‪.‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪12‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪ ‬يمكن أن يُجرى الاختبار بطريق ثانية وذلك بزرع الجرثوم على السطح المائل لوسط سيمون‬
‫الصلب المائل )‪ (SLANT‬ثم الحضن بالدرجة والفقرة المناسبتين‪.‬‬
‫‪ ‬يعتبر الاختبار إيجابي في حال وجود النمو الجرثومي على الوسط وتغير لون المشعر في الوسط‬
‫من الأخضر إلى الأزرق‪.‬‬
‫‪ ‬يحتوي وسط سيمون على السترات كمصدر وحيد للكربون‪ ،‬مواد مغذية وأملاح الأمونيوم ومشعر‬
‫أزرق بروم التيمول الذي يعطي الوسط لون أخضر في ‪ PH<6.9‬في حال استقلاب السترات يتم‬
‫إنتاج مواد قلوية ترفع ‪ PH‬الوسط )‪ (>7.6‬مغيرة لون الوسط إلى الأزرق‪.‬‬
‫وسط كوسر (سائل) لونه أصفر رائق‬ ‫وسط سيمون (صلب) لونه أخضر‬
‫النمو الجرثومي هنا نستدل عليه بوجود العكر‬
‫النمو الجرثومي هنا يقلب لون الوسط‬
‫إذا أصبح الوسط عكر يوجد نمو جرثومي مثل‬
‫للون األزرق بسبب وجود مشعر أزرق‬
‫جرثوم الكلبسيال هنا ال يوجد مشعر ألن وسط‬
‫بروم التيمول مثل جرثوم الكلبسيال‬
‫سائل‬
‫‪ ‬إذًا النتيجة الإيجابية على وسط سيمون هي اللون الأزرق‪ ،‬على وسط كوسر هي العكر‪.‬‬
‫كلبسيال‬ ‫‪E.coli‬‬ ‫إيجابية التفاعل‬ ‫الكواشف‬ ‫االختبارات‬
‫ظهور حلقة‬
‫‪-‬‬ ‫‪+‬‬ ‫كوفاكس‬ ‫االندول‬
‫حمراء‬
‫تلون الوسط‬ ‫مشعر أحمر‬
‫‪-‬‬ ‫‪+‬‬ ‫أحمر المتيل‬
‫باألحمر‬ ‫الميتيل‬
‫بوتاس مائي ‪+‬‬
‫لون أحمر‬
‫‪+‬‬ ‫‪-‬‬ ‫ألفا نفتول‬ ‫‪Vp‬‬
‫ارجواني‬
‫كحولي‬
‫تحول وسط‬
‫سيمون من‬ ‫مشعر أزرق‬
‫‪+‬‬ ‫‪-‬‬ ‫السيترات‬
‫األخضر إلى‬ ‫بروم التيمول‬
‫األزرق‬

‫‪13‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫العمل المخبري‬
‫أوالً‬

‫اختبار السترات‪:‬‬

‫نالحظ اإليجابي يلون بلون أزرق (الكلبسيال) والسلبي بلون أخضر (ايكوالي)‬

‫اختبار ‪: vp‬‬

‫نالحظ اإليجابي يعطي لون أحمر قرنفلي مع جرثوم الكلبسيال والسلبي يبقى أصفر مع ‪E.Coli‬‬

‫نتائج الاختبارات الحيوية لجرثوم الكلبسيلا و ‪E.COLI‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪14‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫اختبار أحمر المثيل‪:‬‬

‫نالحظ لون الوسط االحمر لإليجابي وذلك لجرثوم االيكوالي بينما األصفر سلبي مع الكلبسيال‬

‫اختبار الاندول‪:‬‬

‫نالحظ اإليجابية وهي ظهور الحلقة الحمراء وذلك يكون عند جرثوم االيكوالي بينما تبقى الحلقة بلون‬
‫أصفر عند جرثوم الكلبسيال (نتيجة سلبية)‪.‬‬

‫ثانياً‬
‫‪ ‬الزرع على السطح بواسطة اللوب الذي يحوي عروة وفي العمق بواسطة اللوب الذي لا يملك‬
‫عروة (بالطعن) على وسط كليفلر‪.‬‬
‫‪ ‬حيث يكون الزرع على السطح بشكل زيكزاك باللوب الذي يحوي عروة بلاتين‪.‬‬
‫‪ ‬أما بالعمق بالطعن (الوخز) باللوب الذي تكون نهايته مستقيمة دون عروة‪.‬‬

‫ما هو سبب صب الأنبوب بشكل مائل؟‬

‫لزيادة مساحة السطح للنمو الجرثومي‪.‬‬

‫‪15‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫مراجعة ألهم األفكار‬

‫‪ ‬الخطوات الأساسية لمعرفة هوية الجرثوم‪ :‬تلوين غرام‪-‬استفراد‪-‬عزل‪-‬زرع على وسط انتقائي‪.‬‬
‫‪ ‬تختلف الجراثيم في شكل وصفات المستعمرات التي تشكلها‪.‬‬
‫‪ ‬الهدف من الزرع على الأوساط الانتقائية تحديد هوية الجرثوم ومعرفة جنسه ونوعه‪.‬‬
‫وسط ‪Cetrimide‬‬ ‫وسط ‪EMB‬‬ ‫وسط ماكونكي‬ ‫وسط شابمان‬
‫انتقائي للمكورات‬
‫انتقائي للزوائف‬ ‫انتقائي للجراثيم‬ ‫انتقائي للجراثيم‬
‫إيجابية الغرام‬
‫الزنجارية‬ ‫سلبية الغرام‬ ‫سلبية الغرام‬
‫العنقودية‬
‫عصية القيح األزرق‬ ‫يحوي أمالح‬ ‫يحوي ‪ 7.5%‬من‬
‫يحوي أيوزين‬
‫عصية سلبية الغرام‬ ‫صفراوية‬ ‫ملح كلور الصوديوم‬
‫يحوي سكر‬
‫لونه أصفر فاتح‬ ‫يحوي سكر الالكتوز يحوي سكر الالكتوز‬
‫المانيتول‬
‫المشعر زرقة‬ ‫المشعر أحمر‬ ‫يحوي مشعر أحمر‬
‫‪-‬‬
‫الميتيلين‬ ‫معتدل‬ ‫الفينول‬
‫‪ ‬المكورات العنقودية الذهبية الممرضة تقلب لون الوسط (شابمان) للأصفر ‪‬مخمرة‬
‫للمانيتول‪.‬‬
‫‪ ‬الأمعائيات المخمرة للاكتوز‪ ،E-coli :‬كلبسيلا‪.Entero bacter ،‬‬
‫‪ ‬الأمعائيات غير المخمرة للاكتوز‪ :‬سلمونيلا – شيغيلا ‪-‬متقلبات‪.‬‬
‫‪ ‬شكل المستعمرات على وسط ‪:EMB‬‬
‫‪ .1‬الكلبسيلا‪ :‬مخاطية ذات لون زهر غامق مع مركز أسود‪.‬‬
‫‪ :E-coli .4‬خشنة ذات لون زهر نعطي لمعة اليود الخضراء‪.‬‬
‫‪ ‬يعتبر اللون من أهم صفات المستعمرات الجرثومية والذي ينتج من أصبغة‪.‬‬
‫‪ ‬صفات مستعمرات الزوائف‪:‬‬
‫‪ .1‬شكلها مغزلي‪.‬‬
‫‪ .4‬حوافها مشرشرة‪.‬‬
‫‪ .3‬رائحتها تشبه رائحة العنب‪.‬‬
‫‪ .2‬تنتج أصبغة منحلة بالماء وتعطيها اللون الأخضر المزرق‪.‬‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪16‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪ ‬الاختبارات الكيميائية الحيوية تعتمد على مبدأ كشف صفة أو صفات يتمتع بها الجرثوم‪:‬‬
‫‪ .A‬كشف قدرة الجرثوم على تخمير السكر‪.‬‬
‫‪ .B‬كشف امتلاك الجرثوم لأنزيم معين‪.‬‬
‫‪ .C‬كشف قدرة الجرثوم على الاعتماد على مصدر السترات لاستخدام الكربون‪.‬‬
‫‪ .D‬معرفة حركة الجرثوم‪.‬‬
‫‪ ‬أنواع انحلال الدم‪ :‬ألفا‪-‬بيتا‪-‬غاما ويستخدم دراسة انحلال الدم للتميز بين أنواع العقديات‪.‬‬

‫كليغلر‬
‫مشعر أحمر الفينول وهو وسط‬
‫انتقائي تفريقي لألمعائيات‬

‫ماكونكي‬
‫مشعر أحمر المعتدل يفرّق بين‬
‫األمعائيات المخمّرة لالكتوز‬
‫سلبي‪ ،‬فإنّنا نتوجّه بالتحري‬
‫(كلبسيال‪ ،)E.Coli ،‬وغير‬
‫عن األمعائيات سلبية الغرام‬
‫المخمّرة لالكتوز (شيغيال‪،‬‬
‫أيضاً وذلك بعد االختبارات‬
‫سالمونيال‪ ،‬متقلبات)‬
‫والزرع على أوساط انتقائية‬
‫تفريقية منها‬
‫‪EMB‬‬
‫مشعر أزرق المتيلين‬
‫‪ -‬تظهر ‪ E.Coli‬مستعمرات لها‬ ‫نجري عليها بدايةً اختبار‬
‫لمعة اليود‪.‬‬ ‫األوكسيداز الذي‬
‫‪ -‬تظهر كلبسيال مستعمرات‬ ‫يكشف طبيعة‬
‫مخاطية بشكل قطرة العسل‪.‬‬ ‫أكسدتها‬

‫إيجابي (لون بنفسجي‬

‫للتأكد نقوم بزرعها على الوسط‬
‫غامق) أي أنّها جراثيم‬
‫االنتقائي لها ‪،Cetrimide Agar‬‬
‫هوائية‪ /‬ال هوائية مخيّرة‬
‫فيعطي نتيجة إيجابية بظهور‬
‫وهي جراثيم‬
‫مستعمرات محاطة بأصبغة‬
‫‪( Pseudomonas‬سلبية‬
‫منحلة ذات لون أزرق مخضر‬
‫الغرام)‬

‫‪17‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫إيجابية االختبار‬ ‫االستخدام‬ ‫اسم االختبار‬

‫لقياس درجة استقالب الغلوكوز وتحديد‬
‫اللون األحمر للوسط‬ ‫فيما إذا كانت نواتج االستقالب حمضية أو‬ ‫اختبار أحمر المتيل‬
‫حمضية معتدلة‬
‫لتحديد إذا كان استقالب الغلوكوز يحدث‬
‫باألكسدة (ضمن وسط هوائي يحوي ‪)O2‬‬ ‫اختبار األكسدة‬
‫‪---‬‬
‫أو بالتخمر وسط ال هوائي ومن خالل نعرف‬ ‫واالرجاع‬
‫طبيعة تنفس الجرثوم‬
‫هذا االختبار لتحديد هوية الجراثيم إيجابية‬
‫الغرام حيث يفرق بين المكورات العنقودية‬
‫حدوث الفوران‬ ‫اختبار الكاتاالز‬
‫التي تمتلك الكاتاالز والمكورات العقدية ال‬
‫تملكه‬
‫يفرق بين المكورات العنقودية الذهبية‬
‫تحوصب أو علقة‬ ‫اختبار المخثراز‬
‫الممرضة من غير الممرضة‬
‫ظهور اللون‬ ‫للتفريق بين الزوائف التي تمتلك أنزيم‬
‫اختبار األكسيداز‬
‫البنفسجي‬ ‫أوكسيداز واألمعائيات (ال تملكه)‬
‫لكشف قدرة بعض الجراثيم على ستقالب‬
‫حلقة بلون أحمر‬ ‫اختبار االندول‬
‫الحمض األميني التربتوفان إلى االندول‬
‫يتم الكشف بهذا االختبار عن وجود مادة‬
‫اللون األحمر للوسط‬ ‫أستيل متيل كاربينول النتاجة عن استقالب‬ ‫اختبار ‪VP‬‬
‫الغلوكوز‬
‫هذا االختبار لتحديد قدرة الجرثوم على‬
‫سيمون اللون األزرق‬
‫استخدام السيترات كمصدر وحيد الكربون‬ ‫اختبار السيترات‬
‫كوسر العكر‬
‫وأمالح األمونيوم كمصدر لآلزوت‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪18‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫إضافة الى المحاضرة السابقة‬

‫‪ ‬الميتيسلين‪ :‬صاد حيوي يقضي على العنقوديات الذهبية‪.‬‬
‫‪ ‬نعالج ‪ MRSA‬بالفانكوميسين‪.‬‬
‫‪ ‬الفانكوميسين‪ :‬صاد حيوي يُعطى تسريباً وريدياً بطيئاً‪ ،‬حصرًا تحت إشراف طبي لأنه يسبب‬
‫لاوذميات‪.‬‬
‫‪ ‬لماذا يعطى ببطئ؟ لأنه عند تسريبه بسرعة سيسبب متلازمة الرجل الأحمر‪.‬‬
‫‪ ‬لا يعطى بشكل حبوب أو شراب لأنه لا يمتص جهازياً‪.‬‬
‫‪ ‬يوجد الفانكوميسين بشكل حب أو شراب لكن يكون لعلاج حالات أخرى سنتكلم عنها لاحقاً‪.‬‬

‫تصويبات المحاضرة األولى‬

‫التصويب‬ ‫الخطأ‬ ‫السطر‬ ‫الصفحة‬ ‫المحاضرة‬
‫البول في الحالة الطبيعية‬
‫يحوي رسابة دائماً‪ ،‬نقوم‬
‫بفحص الراسب البولي الذي‬
‫يوجّهنا لوجود مرض فإذا كان‬
‫يحوي كريات بيضاء وجراثيم‬
‫دليل التهاب جرثومي‪،‬‬
‫في مثال‬
‫نقوم بالزرع والمعالجة‪ ،‬بينما‬ ‫‪5‬‬
‫ال‬
‫على ذلك أو ً‬
‫لو كان الراسب يحوي جراثيم‬
‫فقط فهذا ال يكفي لنقول‬
‫أنه يوجد مرض ولو كان‬ ‫األولى‬
‫يوجد كريات بيضاء فقط‬
‫ممكن أن يكون سببها شيء‬
‫آخر‪.‬‬
‫حذف (والنتائج‬
‫إضافة ثم نُعطي هذا الصاد‬ ‫رابعاً‬
‫عادة ‪ ...‬مؤثر‬ ‫‪6‬‬
‫كعالج للجرثوم‬
‫أكثر)‬
‫‪CFU‬‬ ‫‪CFV‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪8‬‬
‫الضغط الموافق ‪ 15/‬بساي‬ ‫ضغط ‪5‬‬ ‫فقرة الصاد‬
‫‪8‬‬
‫‪ 1.1 /‬ميلي باسكال ‪ 1/‬جو‬ ‫باسكال‬ ‫الموصد‬

‫‪19‬‬ ‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
 ‫االختبارات الحيوية لتحديد هوية الجرثوم ‪2‬‬

‫‪ )4‬المحبة للبرودة مثل‬

‫فقرة حسب‬
‫الليستيريا المستوحدة تحب‬ ‫‪11‬‬
‫حبها للحرارة‬
‫درجة الحرارة ‪ 2+‬وتنمو‪...‬‬
‫تحضّر بالماء الساخن حتى‬
‫تمام االنحالل ثم نُعقّم‬
‫بالصاد الموصد ثم تُصب‬ ‫‪6‬‬ ‫‪11‬‬
‫باطباق بتري أو انابيب عقيمة‬
‫أو يتم صّبها ثم تعقيمها‬
‫األوساط‬
‫دم خاروف‬ ‫دم أرانب‬ ‫الصلبة النقطة‬ ‫‪14‬‬
‫‪)4‬‬

‫إلى هنا نصل وإياكم إلى ختام المحاضرة الرابعة‬

‫ال تنسونا من صالح دعائكم‪..‬‬
‫تمنياتنا لكم بالتوفيق ^__^‬

‫‪/groups/RBCs.Pharmacy.2025‬‬
‫‪20‬‬