Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

Xem các cuộc thảo luận, số liệu thống kê và hồ sơ tác giả cho ấn phẩm này tại:https://www.researchgate.net/publication/339827079

Lập công thức và mô tả đặc tính trong ống nghiệm của các hạt nano Chitosan được
nạp bằng Sắt chelator Deferoxamine Mesylate (DFO)

Bài báoTRONGDược phẩm · Tháng 3 2020

DOI: 10.3390/dược phẩm12030238

TRÍCH DẪN ĐỌC

65 431

8 tác giả, bao gồm:

Maria Lazaridou Evi Christodoulou

Đại học Aristotle Thessaloniki Đại học Aristotle Thessaloniki
17ẤN PHẨM342TRÍCH DẪN 40ẤN PHẨM721TRÍCH DẪN

XEM HỒ SƠ XEM HỒ SƠ

Maria Nerantzaki Margaritis Kostoglou

Viện Khoa học và Kỹ thuật Siêu phân tử (ISIS - Institut de Science et d'I… Đại học Aristotle Thessaloniki
30ẤN PHẨM844TRÍCH DẪN 344ẤN PHẨM7,173TRÍCH DẪN

XEM HỒ SƠ XEM HỒ SƠ

Một số tác giả của ấn phẩm này cũng đang thực hiện các dự án liên quan sau:

BIODERMAXem Kế hoạch

Ảnh hưởng của hiện tượng thấm ướt đến sự hình thành và tái tạo màng sinh họcXem Kế hoạch

Tất cả nội dung sau trang này đã được tải lên bởiMaria Lazaridouvào ngày 10 tháng 3 năm 2020.

Người dùng đã yêu cầu cải tiến tệp đã tải xuống.

Bài báo

Lập công thức và mô tả đặc tính trong ống

nghiệm của các hạt nano Chitosan được nạp bằng
Sắt chelator Deferoxamine Mesylate (DFO)
Maria Lazaridou1, Evi Christodoulou1, Maria Nerantzaki1, Margaritis Kostoglou2,
Dimitra A. Lambropoulou3, Angeliki Katsarou4, Kostas Pantopoulos4,* và Dimitrios N.
Bikiaris1,*
1 Phòng thí nghiệm Hóa học và Công nghệ Polyme, Khoa Hóa học, Đại học Aristotle Thessaloniki,
54124 Thessaloniki, Hy Lạp; marlazach@chem.auth.gr (ML); evicius@gmail.com (EC);
marinera002@msn.com (MN)
2 Phòng thí nghiệm Công nghệ Hóa học Đại cương và Vô cơ, Khoa Hóa học, Đại học Aristotle Thessaloniki,

GR-541 24 Thessaloniki, Hy Lạp; kostoglu@chem.auth.gr

3 Phòng thí nghiệm kiểm soát ô nhiễm môi trường, Khoa Hóa học, Đại học Aristotle Thessaloniki,

GR-541 24 Thessaloniki, Hy Lạp; dlambro@chem.auth.gr

4 Viện Nghiên cứu Y học Lady Davis và Khoa Y, Đại học McGill, Montreal, QC H3T 1E2,

Canada; ageliki.katsarou@mail.mcgill.ca
* Thư từ: kostas.pantopoulos@mcgill.ca (KP); dbic@chem.auth.gr (DNB)

Nhận: ngày 17 tháng 1 năm 2020; Chấp nhận: ngày 5 tháng 3 năm 2020; Xuất bản: ngày 7 tháng 3 năm 2020

Trừu tượng:Mục tiêu của nghiên cứu này là phát triển các hạt nano (NP) chitosan (CS) được nạp deferoxamine mesylate (DFO) để giải phóng chậm thuốc thải sắt này.

Quá trình tạo bao nano thuốc được thực hiện thông qua quá trình tạo gel ion của chitosan sử dụng natri tripolyphotphat (TPP) làm chất liên kết ngang. Các hạt nano có

kích thước nằm trong khoảng từ 150 đến 400 nm đã được chuẩn bị cho CS/TPP gọn gàng với tỷ lệ mol 2/1 trong khi năng suất của chúng phụ thuộc trực tiếp vào tốc độ

khuấy được áp dụng trong quá trình chuẩn bị. DFO ở các hàm lượng khác nhau (20, 45 và 75% trọng lượng) được gói gọn trong các hạt nano này. Chúng tôi thấy rằng

việc nạp thuốc tương quan với việc tăng hàm lượng DFO trong khi hiệu quả bẫy có hành vi ngược lại do độ hòa tan cao của DFO. Liên kết hydro giữa các nhóm amino và

hydroxyl của DFO với các nhóm CS phản ứng đã được phát hiện bằng phương pháp quang phổ FT-IR trong khi nhiễu xạ tia X cho thấy DFO được giữ ở dạng vô định hình

trong các hạt nano CS. Sự giải phóng DFO phụ thuộc trực tiếp vào hàm lượng thuốc được nạp, trong khi phân tích mô hình cho thấy cơ chế giải phóng DFO đối với các hạt

nano CS/TPP là do khuếch tán. Xử lý đại thực bào RAW 264,7 ở chuột bằng DFO được bao bọc nano đã thúc đẩy sự biểu hiện gia tăng của thụ thể transferrin 1 (TfR1)

mRNA, một phản ứng cân bằng nội môi điển hình đối với tình trạng thiếu sắt. Những dữ liệu này cung cấp bằng chứng sơ bộ cho việc giải phóng DFO có hoạt tính dược lý

từ các hạt nano chitosan. Sự giải phóng DFO phụ thuộc trực tiếp vào hàm lượng thuốc được nạp, trong khi phân tích mô hình cho thấy cơ chế giải phóng DFO đối với các

hạt nano CS/TPP là do khuếch tán. Xử lý đại thực bào RAW 264,7 ở chuột bằng DFO được bao bọc nano đã thúc đẩy sự biểu hiện gia tăng của thụ thể transferrin 1 (TfR1)

mRNA, một phản ứng cân bằng nội môi điển hình đối với tình trạng thiếu sắt. Những dữ liệu này cung cấp bằng chứng sơ bộ cho việc giải phóng DFO có hoạt tính dược lý

từ các hạt nano chitosan. Sự giải phóng DFO phụ thuộc trực tiếp vào hàm lượng thuốc được nạp, trong khi phân tích mô hình cho thấy cơ chế giải phóng DFO đối với các

hạt nano CS/TPP là do khuếch tán. Xử lý đại thực bào RAW 264,7 ở chuột bằng DFO được bao bọc nano đã thúc đẩy sự biểu hiện gia tăng của thụ thể transferrin 1 (TfR1)

mRNA, một phản ứng cân bằng nội môi điển hình đối với tình trạng thiếu sắt. Những dữ liệu này cung cấp bằng chứng sơ bộ cho việc giải phóng DFO có hoạt tính dược lý

từ các hạt nano chitosan.

từ khóa:chitosan; hạt nano; gel hóa ion; tripolyphotphat; deferoxamine mesylat; thải sắt; bao bọc
nano; giải phóng thuốc

1. Giới thiệu

Do kinh nghiệm lâm sàng hơn 40 năm và chi phí thấp, thuốc thải sắt deferoxamine (DFO) vẫn
là lựa chọn điều trị đầu tay để giảm gánh nặng sắt ở bệnh nhân thalassemia phụ thuộc vào truyền
máu [1]. Thách thức quan trọng nhất mà DFO phải đối mặt là không có khả năng được phân phối
hiệu quả, vì nó được hấp thu kém trong đường tiêu hóa và có thời gian bán hủy trong huyết tương
ngắn khoảng 20 phút. Để đạt được nồng độ dược lý hiệu quả, thuốc được dùng ngoài đường tiêu
hóa với sự hỗ trợ của bơm truyền di động ít nhất 4-5 ngày mỗi tuần và

dược phẩm2020,12, 238; doi:10.3390/dược phẩm12030238 www.mdpi.com/journal/pharmaceutics

dược phẩm2020,12, 238 2 trên 17

trong 8–10 h mỗi lần. Thủ tục khá vất vả này làm giảm sự tuân thủ và ảnh hưởng đến chất lượng
cuộc sống.
Các chất mang nano, chẳng hạn như các polyme tương thích sinh học, mang đến những khả năng độc
đáo để vượt qua các rào cản của tế bào và cải thiện việc vận chuyển thuốc [2]. Kích thước nhỏ của chúng cho
phép khả năng khuếch tán cao qua màng giúp cải thiện tính thấm của thuốc. Các hạt nano (NP) có đường kính
dưới 200nm và điều này có thể tạo điều kiện thuận lợi cho sự hấp thu tế bào của chúng thông qua quá trình
nhập bào qua trung gian thụ thể, quá trình nhập bào ở pha lỏng hoặc thậm chí là khuếch tán thụ động; hơn
nữa, kích thước nhỏ làm giảm khả năng thanh thải của chúng bởi hệ thống thực bào đơn nhân, do đó làm tăng
thời gian lưu thông của chúng trong máu [3–6]. Do đó, việc đóng gói DFO trong các hạt nano tương thích sinh
học nhằm giải phóng thuốc trong máu chậm hơn và có kiểm soát hơn có thể cung cấp một phương tiện thay
thế cho việc quản lý thuốc, bỏ qua vấn đề tuân thủ và cải thiện chất lượng cuộc sống.

Chitosan (CS) NP đã thu hút rất nhiều sự chú ý với vai trò là phương tiện vận chuyển thuốc do khả
năng bảo vệ thuốc khỏi sự phân hủy, để đạt được lượng thuốc cao hơn và giải phóng thuốc một cách
chậm và bền vững [7–10]. Hơn nữa, do tính chất ưa nước của chitosan, các NP CS là chất mang thích hợp
cho các loại thuốc ưa nước, như DFO. Gần đây, các NP CS đã cho thấy kết quả đầy hứa hẹn trong việc
cung cấp thuốc điều trị bệnh tiểu đường và ung thư [11]. Trong một trường hợp khác, CS NP được cấy
vào bề mặt mắt thỏ và có thể tương tác và duy trì liên kết với niêm mạc mắt trong thời gian dài mà
không gây viêm [12]. Một thách thức lớn vẫn là tổng hợp được kiểm soát kích thước của các NP CS [13].

Các NP CS-tripolyphosphate (TPP) được dùng để quản lý in vivo vì hồ sơ an toàn sinh học tuyệt
vời của chúng. Phương pháp tạo gel ion được sử dụng để điều chế chúng không yêu cầu bổ sung
bất kỳ dung môi hữu cơ nào, thực tế là tránh được vấn đề loại bỏ cặn trước khi đưa vào cơ thể sống
[14]. Tuy nhiên, thời gian phản ứng, tốc độ khuấy và lượng tripolyphosphate được thêm vào trong
dung dịch chitosan là những yếu tố cần được tối ưu hóa [15–19].
Mục đích của công việc hiện tại là chuẩn bị các hạt nano CS được nạp chất thải sắt DFO. Chúng tôi
lập luận rằng vì DFO thể hiện khả năng hòa tan trong nước cao và chia sẻ các nhóm amino và hydroxyl
với CS, nên nó có thể được gói gọn với số lượng lớn trong các hạt nano. Sau khi tối ưu hóa khuấy cơ học
trên kích thước hạt trong quá trình tạo gel ion, chúng tôi đã chuẩn bị các NP CS và mô tả chúng là chất
mang thuốc DFO thích hợp bằng một số kỹ thuật như kính hiển vi điện tử quét (SEM), quang phổ hồng
ngoại chuyển từ Fourier (FT-IR) và X- nhiễu xạ tia (XRD). Chúng tôi cung cấp bằng chứng sơ bộ rằng DFO
được đóng gói có thể được giải phóng khỏi các NP CS/TPP và tạo ra một kiểu hình thiếu sắt trong các tế
bào nuôi cấy.

2. Thực nghiệm

2.1. Nguyên vật liệu

Chitosan có trọng lượng phân tử cao (MW: 350.000 g/mol, độ deacetyl hóa >75% và độ nhớt 800–
2000 cps), natri tripolyphotphat (TPP) và sắt amoni citrate đều được mua bởi Sigma-Aldrich Co (St. Louis,
MO, HOA KỲ). Deferoxamine mesylate được cung cấp từ Mayne Pharma Inc. (Montreal Canada; Đề án 1).
Tất cả các vật liệu và dung môi khác được sử dụng trong nghiên cứu này đều thuộc loại phân tích.
dược phẩm2020,12, 238 3 trên 17

Đề án 1.Chitosan, tripolyphosphate (TPP) và desferoxamine mesylate được sử dụng cho quá trình
tạo bao nano.

2.2. Chuẩn bị hạt nano CS

Các hạt nano CS được điều chế theo phương pháp tạo gel ionotropic [20].Các hạt nano trắng
thu được khi bổ sung dung dịch nước TPP làm chất liên kết ngang ion (nồng độ cuối cùng tương
ứng là 1 mg/mL) vào dung dịch axit axetic CS. Tỷ lệ CS/TPP là 2/1 w/w và các tốc độ khuấy khác
nhau (400, 800 và 1200 vòng/phút) được áp dụng. Để điều chế các hạt nano chứa thuốc, dung dịch
nước deferoxamine mesylate (DFO) với CS đã được chuẩn bị và TPP được thêm từng giọt để chuẩn
bị các hạt nano. Mỗi mẫu được chuẩn bị ba lần và kết quả đại diện cho giá trị trung bình. Thuốc
không bị vướng và CS hòa tan được loại bỏ bằng siêu ly tâm ở tốc độ 13.000 vòng / phút trong 20
phút và được hoàn nguyên từ kết tủa trong nước ngọt (hai lần). Huyền phù thu được được đông
lạnh và đông khô bằng hệ thống đông khô (Scanvac, Coolsafe 110- 4 Pro,

2.3. Đặc tính của hạt nano CS

2.3.1. Đặc tính hình thái của hạt nano

Hình thái của các hạt nano đã chuẩn bị được nghiên cứu bằng kính hiển vi điện tử quét (thiết
bị SEM; JEOL JMS-840). Các mẫu được phủ một lớp phủ carbon để cung cấp độ dẫn điện tốt cho
chùm tia điện tử. Điều kiện hoạt động là: điện áp tăng tốc 20 kV, dòng điện thăm dò 45 nA và thời
gian đếm 60 giây.

2.3.2. Đo kích thước của hạt nano

Sự phân bố kích thước hạt trung bình cường độ của các hạt nano CS/thuốc được xác định bằng tán xạ ánh
sáng động (DLS) bằng cách sử dụng Dụng cụ Nano Zetasizer (Dụng cụ Malvern, NanoZS, ZEN3600, Vương quốc
Anh) hoạt động với tia laser 532nm. Một lượng hạt nano thích hợp được phân tán trong nước cất tạo ra tổng
nồng độ 1% và được giữ ở 37°C trong điều kiện khuấy trộn ở 100 vòng/phút.

2.3.3. Phép đo nhiễu xạ tia X góc rộng (WAXD)

dược phẩm2020,12, 238 4 trên 17

Nghiên cứu nhiễu xạ tia X góc rộng (WAXD) về các hạt nano gọn gàng và được bao bọc bởi thuốc đã
được thực hiện trong phạm vi 2θ từ 5 đến 50°, ở các bước 0,05° và thời gian đếm là 5 giây, sử dụng hệ
thống XRD MiniFlex II của Rigaku Co .với bức xạ Cu Ka (λ = 0,154 nm).

2.3.4. Quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FT-IR)

Phổ FT-IR thu được bằng cách sử dụng máy quang phổ FTIR của PerkinElmer, kiểu Spectrum
1000. Để thu thập quang phổ, một lượng nhỏ hạt nano đông khô được trộn với KBr (hạt nano 1%
trọng lượng) và được nén để tạo thành viên nén. Phổ IR của các viên này, ở chế độ hấp thụ, thu
được trong vùng phổ 450–4000 cm−1sử dụng độ phân giải 4 cm-1và 64 lần quét đồng bổ sung.

2.3.5. Nhiệt lượng kế quét vi sai (DSC)

Một nghiên cứu về nhiệt lượng kế quét vi sai (DSC) đã được thực hiện bằng cách sử dụng Perkin–Elmer,
Pyris Diamond DSC, được hiệu chuẩn bằng các tiêu chuẩn indi và kẽm. Các mẫu 10,0 ± 0,1 mg được niêm
phong trong chảo nhôm được gia nhiệt từ nhiệt độ phòng cho đến 200°C với tốc độ gia nhiệt 20°C/phút trong
môi trường khí nitơ và giữ ở nhiệt độ đó trong 5 phút. Sau đó, các mẫu được làm lạnh siêu tốc đến 30°C với tốc
độ làm mát 200°C/phút, giữ ở nhiệt độ này trong 5 phút và sau đó được gia nhiệt lại với 20°C/phút cho đến
200°C.

2.3.6. Đánh giá tỷ lệ đóng gói và giải phóng thuốc

Hàm lượng thuốc của các hạt nano được xác định bằng quy trình trực tiếp. Các mẫu hạt nano
đông khô (1 mg) được hòa tan trong hỗn hợp dung dịch nước axit axetic (1% v/v)/ferric clorua (20
mg/mL) 50%/50% thể tích/thể tích và các dung dịch này được phân tích hàm lượng thuốc sử dụng
hệ thống HPLC Shimadzu với cột CNW Technologies Athena C18 (đường kính trong 250 mm × 4,6
mm và 5 µm) ở 40 °C. Trạm sắc ký CSW được sử dụng để phân tích hồi quy và thu thập dữ liệu.
Nồng độ được xác định bằng cách sử dụng thiết bị HPLC-UV ở bước sóng 430nm như được mô tả
trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi [21]. Tóm lại, hệ thống HPLC được vận hành độc quyền,
tốc độ dòng chảy được đặt ở mức 1,2 mL/phút và thể tích tiêm là 20 µL. Pha động bao gồm 27 mM
KH2PO4/tetrahydrofuran/trietylamin (93:7:0,05 v/v/v). Mỗi mẫu được đo ba lần để thu được các pic
khá sắc nét ở thời gian lưu 6,6 phút và dữ liệu sắc ký được xử lý theo nồng độ. Năng suất hạt nano,
tải thuốc và hiệu quả bẫy thuốc được tính toán từ các phương trình (1), (2) và (3), tương ứng:

( ) (1)
Năng suất hạt nano (%) = ×100
( )

)
Tải lượng thuốc (%) =( ×100 (2)
( )

)
Hiệu quả bẫy (%) =( ×100 (3)
( )

Tốc độ giải phóng DFO từ các hạt nano đã chuẩn bị cũng được xác định bằng cách sử dụng thiết bị UV HPLC ở bước
sóng 430nm, như được mô tả trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi [21].

2.3.7. Nuôi cấy tế bào

Các đại thực bào RAW 264,7 ở chuột được nuôi cấy trong môi trường Eagle đã được sửa đổi (DMEM) của
Dulbecco có chứa 10% huyết thanh bào thai bò, penicillin 100 U/mL và streptomycin 100 mg/mL (Wisent Inc.,
St-Bruno, QC).

2.3.8. PCR định lượng thời gian thực (qPCR)

Tại các điểm cuối, các tế bào được cạo, thu hoạch và rửa trong dung dịch muối đệm phốt phát lạnh (PBS).
Các viên tế bào sau đó được ly giải trong Bộ đệm RLT. Tổng RNA được phân lập từ dung dịch tế bào
dược phẩm2020,12, 238 5 trên 17

sử dụng bộ RNeasy Mini (Qiagen). Độ tinh khiết được đánh giá bằng tỷ lệ hấp thụ 260/280nm. qPCR được
thực hiện bằng cách sử dụng đoạn mồi dành riêng cho gen (Bảng 1), như đã mô tả trước đây [22] với
protein ribosome S18 (rS18) làm gen giữ nhà để chuẩn hóa. Kết quả qPCR được biểu thị dưới dạng thay
đổi lần so với đại thực bào RAW 264,7 được xử lý bằng PBS.

Bảng 1.Danh sách các đoạn mồi dành riêng cho gen được sử dụng cho qPCR.

Ngân hàng gen

gen Chuyển tiếp trình tự mồi Đảo ngược trình tự sơn lót
gia nhập
TfR1 NM_011638.4 AGCCAGATCAGCATTCTCTAACT GCCTTCATGTTATTGTCGGCAT
Rpl19 NM_009078.2 AGGCATATGGGCATAGGGAAGAG TTGACCTTCAGGTACAAGGCTGTG

2.3.9. Phân tích thống kê

Dữ liệu định lượng được biểu thị bằng giá trị trung bình ± sai số chuẩn của giá trị trung bình (SEM). So
sánh được thực hiện bằng cách sử dụng Học sinh chưa ghép đôitBài kiểm tra. Giá trị xác suấtP<0,05 được coi là
có ý nghĩa thống kê.

3. Kết quả và thảo luận

3.1. Kích thước và hình thái của hạt nano CS/TPP

Kích thước hạt và sự phân bố kích thước của các hạt nano chitosan là các thông số quan trọng để phát
triển các chất mang nano ổn định về mặt vật lý và hóa học, vì các tính chất này ảnh hưởng đáng kể đến hiệu
suất sinh học và hồ sơ giải phóng thuốc của chúng [22,23]. Ảnh hưởng của tỷ lệ CS/TPP đối với kích thước của
hạt nano đã được nghiên cứu trong nghiên cứu trước đây của chúng tôi, nơi chúng tôi thu được kích thước hạt
nano thấp nhất ở tỷ lệ CS/TPP w/w gần 2/1–4/1 [24,25]. Việc bổ sung hàm lượng TPP cao hơn gây ra sự kết tập
hạt nano nhanh chóng dẫn đến kích thước cao hơn [26].
Tuy nhiên, cùng với tỷ lệ giữa CS và TPP, các điều kiện khuấy cũng có thể rất quan trọng trong
việc xác định loại hình dạng hạt và độ phân tán kích thước thu được do tốc độ tăng trưởng khác
nhau. Năng lượng cơ học liên quan đến tốc độ khuấy phản ứng có thể vượt quá năng lượng lực đẩy
tĩnh điện giữa các điện tích bề mặt dương của hạt nano, do đó cuối cùng gây ra hiện tượng kết tụ
[27,28]. Do đó, ở công trình hiện tại, vai trò quan trọng của tốc độ khuấy cũng được đánh giá, là
một trong những yếu tố liên quan trực tiếp đến quá trình kết tụ. Tỷ lệ CS/TPP 2/1 w/w đã được chọn
và áp dụng các tốc độ khuấy khác nhau như 400, 800 và 1200 vòng/phút. Bảng 2 cho thấy sản
lượng hạt nano ở các tốc độ khuấy khác nhau cũng như các kích cỡ đã chuẩn bị.

Ban 2.Năng suất hạt nano (%), kích thước hạt và thế zeta của CS/TPP 2/1 ở các tốc độ khuấy khác nhau.

Năng suất hạt nano

MộtVật mẫu Kích thước hạt nano (nm) Pdi Tiềm năng Zeta (mV)
(%)
CS/TPP 2/1 400 vòng/phút 77,50 ± 1,84 243 ± 15 0,62 38,45
CS/TPP 2/1 800 vòng/phút 85,75 ± 1,12 287 ± 17 0,78 37,59
CS/TPP 2/1 1200 vòng/phút 82,51 ± 0,93 269 ± 21 0,54 40.11
Một Ba phép đo cho mỗi điều kiện đã thu được. Độ lệch chuẩn (σ) đã được tính theo công thức sau:
= [∑( − )̂ 2/

Đồng ý với các nghiên cứu trước đây [13], phần trăm hạt nano cao nhất thu được ở tốc độ khuấy
800 vòng/phút (85,75%), mặc dù sự khác biệt với các tốc độ khác không quá cao. Ở tốc độ khuấy thấp
hơn và cao hơn (400 và 1200 vòng / phút), năng suất hạt nano thấp hơn một chút được tạo ra trong khi
kích thước hạt không bị ảnh hưởng đáng kể (Bảng 2). Độ phân tán và phân bố hạt của các hạt nano được
đo bằng DLS (Hình 1) cũng tương tự ở tất cả các tốc độ khuấy với sự khác biệt rất nhỏ và dường như
không có ý nghĩa thống kê. Những phát hiện này cho thấy rằng tốc độ khuấy trong quá trình tạo gel ion
ảnh hưởng đến hiệu suất phản ứng, và do đó, bằng cách điều khiển tham số này, có thể thu được tỷ lệ
hạt nano lớn hơn trong một phạm vi kích thước nhất định.
dược phẩm2020,12, 238 6 trên 17

14

12

CS/TPP 2/1 400 vòng/phút

10
CS/TPP 2/1 800 vòng/phút
CS/TPP 2/1 1200 vòng/phút

số 8
Cường độ (%)

100 1000

Phân bố kích thước hạt (nm)

Hình 1.Đường cong tán xạ ánh sáng động (DLS) của hạt nano CS/TPP 2/1 được điều chế ở các tốc độ khuấy
khác nhau.

Hình thái học của các hạt nano cũng không bị ảnh hưởng bởi sự thay đổi của tốc độ khuấy. Do đó, hình
dạng hạt nano về cơ bản là giống hệt nhau trong mọi điều kiện (Hình 2) và có thể nhìn thấy ở độ phóng đại cao
hơn (Hình 3), trong hầu hết các trường hợp là hình cầu. Điện thế zeta do các nhóm amino của CS có trong tất cả
các hạt nano dương tính và dao động trong khoảng 37,6–40,1 mV. Vì vậy, đối với đóng gói DFO, tỷ lệ CS/TPP 2/1
w/w đã được chọn và tốc độ khuấy dung dịch được duy trì ở mức 800 vòng/phút.

(Một) (b)

(c)
Hình 2.Ảnh vi mô SEM của hạt nano CS/TPP 2/1 Hạt nano CS/TPP 2/1 được điều chế ở các tốc độ khuấy khác nhau:
(a) 400 vòng/phút, (b) 800 vòng/phút và (c) 1200 vòng/phút.
dược phẩm2020,12, 238 7 trên 17

Hình 3.Ảnh siêu nhỏ SEM của hạt nano CS/TPP 2/1 được điều chế ở các tốc độ khuấy khác nhau và ở độ phóng đại
cao hơn (0,2 µm): (Một) 400 vòng/phút và (b) 800 vòng/phút.

3.2. Các hạt nano CS/TPP được nạp bằng DFO

DFO rất dễ hòa tan và do đó việc nạp nó vào các hạt nano CS/TPP có thể là một thách thức. Để đánh giá điều này, chúng tôi đã tạo và

nghiên cứu các đặc tính của hạt nano CS với hàm lượng DFO thay đổi là 20, 45 và 75% trọng lượng. Như có thể thấy từ Bảng 3, kích thước hạt

tăng nhẹ khi tăng nồng độ DFO. Các phép đo được thực hiện với DLS ở 25 ° C và dữ liệu cho thấy mối tương quan trực tiếp giữa hàm lượng thuốc

và đường kính NP. Điều này là do DFO có thể tương tác thông qua - OH và chủ yếu thông qua các nhóm carbonyl với các nhóm CS amino tạo

thành liên kết hydro amit. Những tương tác này, so với lượng CS giảm, có thể làm giảm khả năng sẵn có của CS đối với các tương tác ion với TPP.

Do đó, tăng nồng độ DFO dẫn đến giảm tương tác ion TPP và do đó kích thước NP lớn hơn. Cái này, so với việc nạp thuốc có thể ảnh hưởng đến

việc giải phóng DFO. Hàm lượng DFO cũng ảnh hưởng đến các đặc tính khác của hạt nano CS; do đó, năng suất của hạt nano giảm dần khi tăng

lượng DFO. Điều này có thể là do hiệu suất bẫy thấp của DFO trong các hạt nano, hiệu quả này cũng giảm đi khi tăng hàm lượng DFO. Như có thể

thấy trong tất cả các trường hợp, chỉ một tỷ lệ nhỏ DFO được nạp vào các hạt nano (khoảng 50% trọng lượng trong mọi điều kiện), điều đó có

nghĩa là một lượng lớn DFO đã ở trong dung dịch. Điều này là do khả năng hòa tan trong nước cao của DFO. mà cũng được giảm bằng cách tăng

hàm lượng DFO. Như có thể thấy trong tất cả các trường hợp, chỉ một tỷ lệ nhỏ DFO được nạp vào các hạt nano (khoảng 50% trọng lượng trong

mọi điều kiện), điều đó có nghĩa là một lượng lớn DFO đã ở trong dung dịch. Điều này là do khả năng hòa tan trong nước cao của DFO. mà cũng

được giảm bằng cách tăng hàm lượng DFO. Như có thể thấy trong tất cả các trường hợp, chỉ một tỷ lệ nhỏ DFO được nạp vào các hạt nano

(khoảng 50% trọng lượng trong mọi điều kiện), điều đó có nghĩa là một lượng lớn DFO đã ở trong dung dịch. Điều này là do khả năng hòa tan

trong nước cao của DFO.

Bàn số 3.Kích thước hạt nano, năng suất (%), tải lượng thuốc (%) và hiệu quả bẫy (%) của CS/TPP/DFO ở các
nồng độ DFO khác nhau.

hạt nano Năng suất hạt nano nạp thuốc Cái bẫy
MộtVật mẫu
Đường kính (nm) (%) (%) Hiệu quả (%)
CS/TPP_blank 287 ± 17 85,75 ± 1,12 - -
CS/TPP_20%DFO 304 ± 25 76,88 ± 1,12 11,55 ± 1,47 44,45 ± 1,39
CS/TPP_45%DFO 448 ± 31 61,46 ± 0,87 17,02 ± 2,12 26,15 ± 1,05
CS/TPP_75%DFO 528 ± 35 35,47 ± 1,34 40,09 ± 4,22 18,96 ± 0,89
MộtBa phép đo cho mỗi điều kiện đã thu được. Độ lệch chuẩn (σ) đã được tính theo công thức sau:
= [∑( − )̂ 2/

Được biết, sự giải phóng thuốc phần lớn phụ thuộc vào trạng thái vật lý của hợp chất được bao
bọc hoặc phân tán trong ma trận polyme. Nó cũng dựa trên mức độ tương tác với ma trận polyme
và đặc biệt là khả năng hình thành liên kết hydro. DFO chứa các nhóm hydroxyl, carbonyl và amin
thứ cấp, có thể tương tác với các nhóm amin chính của CS. Để khám phá những phản ứng có thể
xảy ra này, phổ FTIR của tất cả các mẫu đã được ghi lại và được thể hiện trong Hình 4.
dược phẩm2020,12, 238 8 trên 17

1.0 CS
DFO
CS/TPP
CS/TPP-20% DFO
0,8
CS/TPP-45% DFO
CS/TPP-75% DFO

0,6
hấp thụ

0,4

0,2

0,0

4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Số bước sóng (cm-1)

Hinh 4.Phổ FTIR của CS, DFO, CS/TPP và các hạt nano chứa lượng DFO khác nhau của chúng.

Đỉnh rộng khoảng 3600–3000 cm−1trong CS gọn gàng nên được gán cho dao động kéo dài của
–OH, dao động kéo dài của >NH và liên kết hydro liên phân tử của polysacarit. Thật vậy, CS có độ
hấp thụ mạnh ở 3428 cm−1do các nhóm –OH của nó trong khi các amin bậc một có hai pic ở vùng
này (3280 và 3098 cm−1) do NH2nhóm và một số đỉnh cường độ thấp hơn (trong khoảng 2921–2879
cm−1), được cho là do dao động kéo dài của các nhóm methylene trong chuỗi polyme. Có các cực đại
hấp thụ yếu ở 1639 và 1545 cm−1
tương ứng với amide I và amide II, chứng tỏ chitosan có độ deacetyl hóa cao, độ hấp thụ ở 1075 cm
−1là do ứng suất không đối xứng của liên kết C–O–C.Độ hấp thụ ở 1150 cm−1là đặc trưng của dao

động không đối xứng của liên kết glycosid b-(1-4) [29,30]. DFO cho thấy một đỉnh nhỏ ở 2310 cm−1
(nhóm –OH tự do), dải sắc nét ở 3423 cm−1
do dao động kéo dài –OH và đỉnh rộng (vai) ở 3233 cm−1được gán cho các dao động kéo dài N–H.

Phổ so sánh, trong trường hợp các hạt nano CS, được trình bày trong Hình 5a, b trong các vùng hấp
thụ của các nhóm hydroxyl và carbonyl, tương ứng, trong đó có thể thấy rõ một số dịch chuyển của các
đỉnh đặc trưng. Dải nhóm hydroxyl trong mẫu CS/TPP được ghi nhận ở 3410 cm−1và amino kéo dài ở
3262 và 3092 cm−1. Những thay đổi này rõ ràng là do tương tác ion diễn ra giữa CS và TPP để hình thành
các hạt nano. Tuy nhiên, khi DFO được kết hợp, dải –OH bị dịch chuyển ở 3321 cm−1, tại CS/TPP với 20%
trọng lượng DFO mà không bị tách khỏi các nhóm amin, trong khi một đỉnh nhỏ được ghi nhận ở 3083,
do sự dịch chuyển của –NH2nhóm từ 3092 cm−1. Cũng có thể thấy rằng ở các hạt nano chứa 45 và 75%
khối lượng DFO, đỉnh –OH được ghi lại ở các bước sóng thậm chí còn thấp hơn (3263 cm−1). Sự dịch
chuyển này quá cao và rõ ràng là do sự hình thành liên kết hydro giữa các nhóm OH hoặc amino của
chitosan và DFO, vì DFO nguyên chất có cực đại ở 3466 cm−1.
dược phẩm2020,12, 238 9 trên 17

Một
CS 3428 3410
1.0 DFO 3280
CS/TPP 3262
CS/TPP-20% DFO
3423
CS/TPP-45% DFO
0,8 CS/TPP-75% DFO
3321

3098 3092
3233 3083
0,6 3263
hấp thụ

0,4 3610

0,2

0,0

4000 3500 3000

Số bước sóng (cm-1)

1668 CS
1.0
b DFO
CS/TPP
CS/TPP-20% DFO
0,8 CS/TPP-45% DFO
CS/TPP-75% DFO
1660
1638 1550
0,6
1594
1560 1541
hấp thụ

1645

0,4 1713

1722

0,2

0,0

1800 1750 1700 1650 1600 1550 1500 1450 1400

Số bước sóng (cm-1)

Hình 5.Phổ FTIR của CS, DFO, CS/TPP và các hạt nano của chúng chứa lượng DFO khác nhau trong
các khu vực của (Một) của sự hấp thụ nhóm hydroxyl và (b) hấp thụ nhóm carbonyl.

Hình 5b cho thấy CS gọn gàng có độ hấp thụ dải rộng ở 1660 cm−1và một amide carbonyl ở 1545 cm
−1[31]. Cả hai đã được chuyển sang số sóng thấp hơn, 1638 và 1541 cm−1, tương ứng, khi CS tương tác với
TPP. DFO gọn gàng cũng có một số cực đại ở những khu vực này như năm 1713, 1668 và hai cường độ
nhỏ hơn ở các số sóng thấp hơn. Đặc điểm là trong tất cả các hạt nano CS/TPP/DFO, các đỉnh này không
được ghi lại và dường như là đỉnh cường độ cao ở 1668 cm−1đã được chuyển sang các số sóng thấp hơn
và được hợp nhất với sự hấp thụ carbonyl của CS/TPP tạo thành một đỉnh mới với độ hấp thụ ở 1645 cm−1
. Phát hiện này chỉ ra rằng các đỉnh carbonyl của DFO cũng tham gia vào các tương tác liên kết hydro với
CS.
Trạng thái vật lý của thuốc cũng rất quan trọng đối với hành vi giải phóng của nó và điều này đã
được XRD nghiên cứu. Như có thể thấy từ Hình 6, CS gọn gàng thể hiện các đỉnh nhiễu xạ yếu tập trung ở
góc nhiễu xạ 2θ = 11,9° và các đỉnh nhiễu xạ sắc nét ở 2θ = 20° cho thấy mức độ cao của
dược phẩm2020,12, 238 10 trên 17

hình thái tinh thể của chitosan [32]. Kết quả là việc bổ sung TPP đã tạo ra một vật liệu vô định hình
(các hạt nano) do một đỉnh rộng thần thánh đã được ghi lại. Vì vậy, rõ ràng là quá trình tạo gel ion
và các tương tác tiến hóa giữa CS/TPP đã làm giảm khả năng gấp nếp và kết tinh của chuỗi CS. Liên
quan đến các hạt nano CS/TPP với lượng DFO khác nhau, có thể thấy rằng tất cả chúng đều ở dạng
vô định hình, trong khi rõ ràng DFO là một hợp chất kết tinh với nhiều đỉnh đặc trưng ở 2θ = 19,32°,
21,03°, 22,56°, 23,98° và 28,46°. Trong tất cả các mẫu XRD của các NP CS/TPP/DFO, chỉ có một đỉnh
rộng ở 2θ = 22° được ghi lại. Các hạt nano được đặc trưng bởi sự vắng mặt của bất kỳ đỉnh kết tinh
nào, điều này cho thấy rằng DFO được bao bọc (bị bẫy) ở dạng vô định hình.

CS
DFO
CS/TPP
CS/TPP-20% DFO
CS/TPP-45% DFO
CS/TPP-75% DFO
Cường độ (số lượng)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

2θ (độ.)

Hình 6.Các mẫu XRD của CS, DFO, CS/TPP và các hạt nano chứa lượng DFO khác nhau của chúng.

Sự biến dạng thuốc cũng đã được xác minh bởi DSC. Như có thể thấy trong Hình 7a, có một
đỉnh rộng được ghi lại trong CS/TPP do các hạt nano bị mất nước. CS là một vật liệu rất ưa nước và
hấp thụ khoảng 12–20% trọng lượng nước ở nhiệt độ phòng. Nước này bị bay hơi trong quá trình
gia nhiệt CS/TPP tạo ra đỉnh thu nhiệt rộng với nhiệt độ tối đa khoảng 80 °C. Vì lý do này, không có
đỉnh nào được ghi lại trong lần quét thứ hai sau khi làm mát từ 200 °C (Hình 7b). Một hành vi tương
tự cũng được quan sát thấy đối với các hạt nano CS/TPP được bao bọc bằng DFO. Tất cả các mẫu
đều cho một đỉnh rộng trong lần gia nhiệt đầu tiên và một vạch trong lần gia nhiệt thứ hai. Nhiệt
độ khử nước dường như phụ thuộc vào DFO và như có thể thấy từ Hình 7a đã giảm nhẹ bằng cách
tăng lượng DFO cho đến 72 °C.
dược phẩm2020,12, 238 11 trên 17

72ÔC
2.0
72ÔC Một
76oC
1,5
80oC
1.0
Lưu lượng nhiệt (W/g)

0,5

0,0

- 0,5

- 1.0 CS/TPP
CS/TPP 20% DFO
- 1,5 CS/TPP 45% DFO
CS/TPP 75% DFO
- 2.0
40 60 80 100 120 140 160 180 200

Nhiệt độ (oC)

-5

CS/TPP
-6 CS/TPP 20% DFO
CS/TPP 45% DFO
CS/TPP 75% DFO
Lưu lượng nhiệt (W/g)

-7

- số 8

-9

- 10

b
- 11
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

Nhiệt độ (oC)
.

Hình 7.Biểu đồ nhiệt DSC của CS/TPP và các hạt nano chứa lượng DFO khác nhau của chúng. (Một) Gia
nhiệt đầu tiên và (b) gia nhiệt lần thứ hai.

3.3. Phát hành thuốc từ CS NP

Quá trình giải phóng DFO từ các NP CS được trình bày trong Hình 8. Rõ ràng là việc giải phóng DFO chủ yếu phụ
thuộc vào lượng DFO được thêm vào và ở mức độ thấp hơn về thời gian, điều này phù hợp với nghiên cứu trước đây
của chúng tôi khi sử dụng poly(ε-caprolactone) -block-poly(propylene adipate) copolyme làm chất nền thích hợp cho
quá trình bao bọc nano của DFO [34]. Một giai đoạn trễ đã được quan sát thấy trong quá trình giải phóng DFO từ các
NP CS với hàm lượng thuốc thấp hơn (20% và 45%) so với DFO tự do, có thể hòa tan tự do. Giai đoạn trễ không có
trong các NP CS với 75% DFO và hành vi phát hành gần giống với DFO gọn gàng. Điều này là do như được tìm thấy
trong Bảng 3, một tỷ lệ cao DFO đã được nạp vào các hạt nano (khoảng 40%). Những dữ liệu này cho thấy rằng việc
đóng gói DFO tăng lên đã cải thiện việc phát hành của nó
dược phẩm2020,12, 238 12 trên 17

hồ sơ từ các NP CS. Tuy nhiên, trong mọi trường hợp, việc phát hành đạt đỉnh điểm sau 1 ngày và sau đó đạt
đến mức ổn định. Ngoài ra, dường như trong mọi trường hợp và chủ yếu trong các hạt nano CS chứa 20 và
45% trọng lượng DFO, quá trình giải phóng không hoàn tất và một số lượng vẫn còn trong các hạt nano. Hành
vi này có thể là do các tương tác mạnh đang diễn ra giữa DFO và CS, điều này đã được chứng minh bằng FTIR,
làm giảm sự khuếch tán của DFO từ các hạt nano.

100

90

80

70
Thuốc giải phóng (%)

60

50

40

30
DFO
20 CS/TPP-20% DFO
CS/TPP-45% DFO
10 CS/TPP-75% DFO
0

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0

Thời gian (ngày)

Hình 8.Động học của quá trình giải phóng DFO từ các hạt nano CS (NP) với hàm lượng DFO thay đổi.

Tiếp theo, chúng tôi đã cố gắng lập mô hình/phân tích dữ liệu phát hành thử nghiệm và tương quan
chúng với thành phần hạt nano. Mặc dù thoạt nhìn, các đường cong giải phóng thuốc nguyên chất và các hạt
nano CS/TPP có vẻ khá giống nhau, nhưng đáng chú ý là chúng tương ứng với các cơ chế vật lý hoàn toàn khác
nhau. Trong tất cả các trường hợp giải phóng, có tính đến thời gian giải phóng đặc trưng là vài giờ và có sự
trộn lẫn mạnh mẽ, có thể giả định rằng việc truyền khối lượng lớn không ảnh hưởng đến quá trình giải phóng.

Cơ chế giải phóng thuốc tinh khiết là hòa tan dược chất. Quá trình này thường được mô tả bằng phương trình
Noyes–Whitney tổng quát có tính đến động học hòa tan tốc độ hữu hạn [35]. Nghiệm của phương trình này trong thí
nghiệm hiện tại là một đường cong hàm mũ. Việc khớp một đường cong như vậy với dữ liệu thực nghiệm tương ứng
là thành công trung bình. Một lý do có thể cho điều này là lý thuyết cho rằng nồng độ khối lượng cuối cùng là nồng độ
cân bằng (độ hòa tan của thuốc). Tuy nhiên, điều này không rõ ràng trong trường hợp hiện tại vì lượng phóng thích
cuối cùng gần như 100% ngụ ý rằng nồng độ khối lượng lớn cuối cùng của thuốc có thể không tương ứng với độ hòa
tan của nó. Trong trường hợp như vậy, sơ đồ của đường cong giải phóng bị ảnh hưởng mạnh bởi sự phân bố kích
thước của các hạt thuốc. Về nguyên tắc, phân phối này có thể được xây dựng lại bằng hình dạng của đường cong giải
phóng. Tuy nhiên, một nhiệm vụ như vậy nằm ngoài phạm vi của nghiên cứu hiện tại, nghiên cứu tập trung vào hành
vi giải phóng hạt nano.
Kiểm tra sự giải phóng từ các hạt nano, bước đầu tiên là tách biệt hành vi giới hạn khỏi hành vi
động. Tỷ lệ giải phóng tiệm cận đối với loại hạt nano 20, 45 và 75 DFO lần lượt là 76,3%, 89,3% và
94%. Rõ ràng là có một lượng thuốc bị ràng buộc vĩnh viễn vào ma trận CS/TPP. Lượng này giảm khi
hàm lượng thuốc tăng lên, dẫn đến tăng tỷ lệ giải phóng tiệm cận. Bước tiếp theo là xây dựng các
đường cong giải phóng chuẩn hóa. Nó có thể được thực hiện bằng cách chia dữ liệu đơn giản với
giá trị tiệm cận tương ứng. Các đường cong chuẩn hóa
dược phẩm2020,12, 238 13 trên 17

được thể hiện trong Hình 9 trong đó thấy rõ sự khác biệt về động lực giải phóng đối với ba hàm lượng thuốc.
Những đường cong chuẩn hóa này phải được mô tả bằng mô hình thích hợp.
Cơ chế giải phóng các hạt nano CS/TPP là cơ chế khuếch tán. Các phân tử DFO khuếch tán qua cấu
trúc CS/TPP cho đến khi chạm tới khối chất lỏng. Có một số mô hình đơn giản trong tài liệu giải phóng
thuốc để mô hình hóa quá trình khuếch tán này. Một phân loại cơ bản của các mô hình này là giữa kiểu
khuếch tán Fickian và phi Fickian [36]. Những mô hình đơn giản này thường đề cập đến các giai đoạn ban
đầu của quá trình phát hành. Dữ liệu hiện tại được mở rộng cho đến khi hoàn thành quá trình phát hành;
do đó, một mô hình khác là cần thiết. Trong trường hợp đó, quá trình được mô tả bằng nghiệm của
phương trình khuếch tán nhất thời trong hạt nano. Đây là một phương trình đạo hàm riêng và về nguyên
tắc nó phải được giải bằng số. Tuy nhiên, trong trường hợp đặc biệt của sự khuếch tán Fickian trong một
hạt hình cầu, một giải pháp phân tích ở dạng chuỗi vô hạn tồn tại [37]. Một cách tiếp cận khác là một giải
pháp gần đúng dựa trên biểu diễn đa thức được gọi là công thức động lực tuyến tính (LDF) [38]. Cách
tiếp cận này dẫn đến một dạng số mũ của dữ liệu phát hành được chuẩn hóa:

15Dt
Nr= 1− exp(− ) (4)
r2
nơi Nrlà phần thuốc được giải phóng chuẩn hóa, t là thời gian, R là bán kính hạt nano và D là hệ số
khuếch tán hiệu quả của DFO trong ma trận CS/TPP. Phương trình trên phù hợp với dữ liệu thực
nghiệm trong Hình 9. Giá trị của R cho mỗi loại hạt nano được tính toán từ các đường kính xuất
hiện trong Bảng 2. Sự phù hợp rất thành công khi nó xuất hiện trong Hình 10 trình bày so sánh
giữa thực nghiệm và mô hình kết quả. Công thức LDF đã bỏ qua cụm khuếch tán ban đầu, được
bao gồm trong giải pháp chuỗi vô hạn. Việc LDF đủ để mô tả dữ liệu hiện tại ngụ ý rằng thiếu thuốc
ở ngoại vi của các hạt. Điều này tương thích với độ trễ phát hành quan sát được đề cập ở trên.

1.0

0,8
Giải phóng thuốc bình thường hóa

0,6

0,4
CS/TPP-20% DFO
CS/TPP-45% DFO
0,2 CS/TPP-75% DFO

0,0
0,0 0,5 1.0 1,5 2.0 2,5 3.0
Thời gian (ngày)

Hình 9.Dữ liệu giải phóng thuốc được chuẩn hóa cho ba loại hạt nano.

Các hệ số khuếch tán được trích xuất từ quy trình lắp là D = 0,684 × 10−19tôi2/s, 1,43 × 10−19tôi2/
s và 3,65 × 10−19tôi2/s cho ba loại hạt nano (20, 45 và 75 DFO) tương ứng. Theo dự kiến, hệ số
khuếch tán tăng lên khi hàm lượng thuốc trong các hạt
dược phẩm2020,12, 238 14 trên 17

tăng. Sự gia tăng này dường như là phi tuyến tính trở nên dữ dội hơn đối với hàm lượng thuốc lớn hơn.
Dữ liệu về hệ số khuếch tán tương quan với hàm lượng phần trăm dược chất C trong hạt nano (xuất hiện
trong Bảng 2) thông qua phương trình phù hợp D = (0,0723C2− 0,706C + 2,39) × 10−19
tôi2/S.

1.0

0,8
Phát hành thuốc bình thường hóa

0,6

CS/TPP-20% DFO
0,4
CS/TPP-45% DFO
CS/TPP-75% DFO
0,2

0,0
0,0 0,5 1.0 1,5 2.0 2,5 3.0
Thời gian (ngày)

Hình 10.So sánh giữa kết quả giải phóng thuốc chuẩn hóa thử nghiệm (ký hiệu) và mô hình (dòng) cho
ba loại hạt nano.

3.4. Bằng chứng cho thấy DFO được phát hành từ các NP CS hoạt động như một chất thải sắt chức năng trong các tế bào nuôi cấy

Chuyển hóa sắt trong tế bào được điều hòa sau phiên mã bởi hệ thống IRE/IRP [39]. Trong các tế bào
thiếu sắt, “các protein điều hòa sắt” IRP1 và IRP2 liên kết với “các nguyên tố phản ứng với sắt” (IREs) trong các
vùng chưa được dịch mã của một số mRNA mã hóa protein của quá trình chuyển hóa sắt và kiểm soát biểu
hiện của chúng. Chương trình thích ứng cân bằng nội môi này thúc đẩy sự hấp thu sắt và ngăn chặn việc lưu
trữ hoặc xuất khẩu sắt. Sự hấp thu sắt được trung gian bởi thụ thể transferrin 1 (TfR1), được tạo ra trong các tế
bào thiếu sắt khi ổn định mRNA của nó bằng các tương tác IRE/IRP. Ngược lại, TfR1 bị triệt tiêu trong các tế bào
chứa sắt do IRP bị vô hiệu hóa, điều này cho phép phân hủy TfR1 mRNA. Do đó, biểu hiện của TfR1 mRNA là
một dấu hiệu phổ biến cho tình trạng sắt trong tế bào.
Chúng tôi đã sử dụng các đại thực bào RAW 264.7 ở chuột làm mô hình nuôi cấy tế bào để giải
quyết các đặc tính thải sắt của DFO được giải phóng từ các NP CS. Các tế bào không được xử lý hoặc
xử lý sơ bộ với 30 µg/mL sắt amoni citrate (FAC) trong 24 giờ. Sau đó, các tế bào được rửa sạch và
không được xử lý hoặc xử lý bằng 100 µM DFO tự do hoặc DFO được đóng gói NP CS trong 18 giờ.
Dữ liệu trong Hình 11 cho thấy rằng cả DFO tự do và DFO được bao bọc bởi CS NP đều tạo ra các
mức mRNA TfR1, đây là dấu hiệu của quá trình thải sắt hiệu quả. Trong các thí nghiệm sơ bộ, chúng
tôi thấy rằng các hạt nano rỗng không có tác dụng đối với biểu hiện TfR1 (không hiển thị). Có lẽ, và
dựa trên dữ liệu trong Hình 8, việc phát hành DFO từ các NP CS không đầy đủ. Tuy nhiên, giả sử
hiệu suất giải phóng là 70%, nồng độ hiệu quả của DFO tự do là trên 50 µM,
dược phẩm2020,12, 238 15 trên 17

Hình 11.CS/TPP DFO được đóng gói bằng NP thúc đẩy việc tạo ra TfR1 mRNA trong RAW 264.7
đại thực bào.

4.Kết luận

Kích thước thuận lợi của NP CS đã được chuẩn bị phù hợp cho các ứng dụng in vivo. Dữ liệu
của chúng tôi đề xuất một thử nghiệm tối ưu về tỷ lệ CS/TPP 2/1 w/w và tốc độ khuấy 800 vòng/
phút để thu được sản lượng hạt nano cao nhất. DFO, một loại thuốc được sử dụng rộng rãi để điều
trị bệnh betathalassemia phụ thuộc vào truyền máu, đã được bao bọc thành công trong các hạt
nano này với tải lượng thuốc cao từ 11% đến 40%, tùy thuộc vào lượng DFO. Quang phổ FT-IR đã
xác định được các tương tác mạnh giữa chất mang nano và thuốc. Những tương tác này có thể dẫn
đến sự biến dạng của DFO thành các sóng mang nano, như đã được phát hiện bởi các nghiên cứu
XRD. Các thí nghiệm của chúng tôi cho thấy rằng DFO đóng gói CS NP đã được giải phóng và vận
hành một cách thích hợp như một chất thải sắt trong mô hình nuôi cấy tế bào. Tuy nhiên,

Sự đóng góp của tác giả:Quản lý dữ liệu, MK và DAL; Phân tích chính thức, MK, DAL và AK; Mua tài trợ, KP; Tra,
ML, EC, MN, AK và ĐNB; Phương pháp, ML, EC, MN và AK; Quản trị dự án, KP; Viết—đánh giá và chỉnh sửa, KP
và DNB Tất cả các tác giả đã đọc và đồng ý với phiên bản đã xuất bản của bản thảo.

Kinh phí:Nghiên cứu này không nhận được tài trợ bên ngoài.

Sự nhìn nhận:Công việc này được hỗ trợ bởi một khoản trợ cấp từ Quỹ Thalassemia của Canada.

Xung đột lợi ích:Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.

Người giới thiệu

1. Hồi giáo, KM; Angastiniotis, M.; Eleftheriou, A.; Porter, JB Trao đổi chéo giữa các Hướng dẫn Hiện có để Quản
lý Bệnh nhân Beta-Thalassemia Thể nặng.Acta Hematol.2013,130, 64–73.
2. Trình, CJ; Tiết Kiệm, GT; Saucier-sawyer, JK; Đánh dấu, W.; trú ẩn, N.; Haven, N. Một cách tiếp cận toàn diện để nhắm
mục tiêu bệnh bằng các hạt nano polymer.Nat Rev Thuốc Discov.2015,14, 239–247.
dược phẩm2020,12, 238 16 trên 17

3. Fangueiro, JF; Andreani, T.; Egea, MA; Garcia, ML; Nam, SB; Silva, sáng; Souto, EB Thiết kế các hạt nano lipid
cation để đưa vào mắt: Phát triển, đặc tính hóa và gây độc tế bào.quốc tế J.Pharm.2014. 461, 64–73.

4. Mishra, V.; Jain, NK Acetazolamide bao bọc cấu trúc nano đuôi gai để kiểm soát bệnh tăng nhãn áp hiệu quả
ở thỏ',quốc tế J.Pharm.2014,461, 380–390.
5. Pahuja, P.; Arora, S.; Pawar, P.; Pahuja, P.; Arora, S.; Pawar, P. Hệ thống phân phối thuốc mắt: Tài liệu tham khảo về các
polyme tự nhiên.Ý kiến chuyên gia. Thuốc Deliv.2012,9, 837–861.
6. Üstündag-Okur, N.; Gökçe, EH; Bozdiyik, DI; Egrilmez, S.; Özer, Ö.; Ertan, G. Chuẩn bị và đánh giá in vitroin vivo các
chất mang lipid có cấu trúc nano dùng trong nhãn khoa được nạp ofloxacin được biến đổi bằng chitosan
oligosacarit lactate để điều trị viêm giác mạc do vi khuẩn.Ơ. J.Pharm. Khoa học.2014,63, 204–215.
7. Hiệp sĩ, MT; Gonzalez, J.; Alvarez, V. Các vi hạt polyme phân hủy sinh học làm thiết bị phân phối thuốc. Nếumbe
Proc.2015,49, 187–190.
8. Patel, JK; Jivani, Hạt nano dựa trên NP Chitosan trong phân phối thuốc.quốc tế J.Pharm. Khoa học. công nghệ nano.2009, 2,
517–522.
9. Keawchaoon, L.; Yoksan, R. Nghiên cứu điều chế, mô tả đặc tính và phóng thích in vitro các hạt nano chitosan
nạp carvacrol.Lướt keo. Giao diện sinh học B2011,84, 163–171.
10. Frank, LA; Ôn Tử, GR; Morawski, AS; Pohlmann, AR; Guterres, SS; Contri, RV Chitosan làm vật liệu phủ cho
các hạt nano dành cho các ứng dụng y sinh.Phản ứng. chức năng. polyme.2020,147, 104459.
11. Arulmozhi, V.; Pandian, K.; Miranalini, S. Các hạt nano chitosan bao bọc axit Ellagic cho hệ thống phân phối thuốc
trong dòng tế bào ung thư miệng ở người (KB).Lướt keo. Giao diện sinh học B2013,110, 313–320.
12. de Campos, AM; Chết tiệt, Y.; Carvalho, ELS; Sánchez, A.; Alonso, Hạt nano MJ Chitosan là Hệ thống phân phối thuốc mới ở
mắt: Độ ổn định trong ống nghiệm, Số phận trong Vivo và Độc tính tế bào.dược phẩm. độ phân giải2004,21, 803–810.

13. Fabregas, A.; Miñarro, M;, García-Montoya, E.; Pérez-Lozano, P.; Carrillo, C.; Sarrate, R.; Sánchez, N.; Ticó,
JR,; Suñé-Negre, JM Tác động của các tham số vật lý lên kích thước hạt và hiệu suất phản ứng khi sử dụng
phương pháp tạo gel ion để thu được các hạt nano chitosan–tripolyphosphate polyme cation.quốc tế J.Pharm.
2013, 446, 199–204.
14. Dấu gạch ngang, M.; Chiellini, F.; Ottenbrite, RM; Chiellini, E. Chitosan—Một polyme bán tổng hợp linh hoạt trong các ứng
dụng y sinh.Ăn xin. polyme. Khoa học.2011,36, 981–1014.
15. Bulmer, C.; Margaritis, A.; Xenocostas, A. Sản xuất và mô tả đặc tính của các hạt nano chitosan mới để giải phóng
rHu-Erythropoietin có kiểm soát.hóa sinh. Tiếng Anh J.2012,68, 61–69.
16. Quạt, W.; Yên, W.; Từ, Z.; Ni, H. Cơ chế hình thành các hạt nano chitosan đơn phân tán, trọng lượng phân tử
thấp bằng kỹ thuật gel hóa ion.Lướt keo. Giao diện sinh học B2012,90, 21–27.
17. Gaspar, VM; Sousa, F.; Queiroz, JA; Correia, IJ Xây dựng các viên nang nano chitosan–TPP–pDNA cho liệu
pháp gen.2011,22, 015101.
18. Tế, sáng; Su, D.; Che, O.; Lý, WS.; CN, L.; Trương, ZY; Dương, B.; Xu, F. Làm im lặng gen chức năng qua trung gian
chitosan / siRNA nanocomplexes.công nghệ nano2009,20,405103.
19. Tsai, M.; Chen, R.; Bái, S.; Chen, W. Độ ổn định lưu trữ của hạt nano chitosan / tripolyphosphate trong đệm
phốt phát.Cacbohydrat polyme.2011,84, 756–761.
20. Calvo, P.; Vila-Jato, JL; Alonso, MJ Đánh giá các viên nang nano phủ polyme cation làm chất mang thuốc nhỏ mắt.
quốc tế J.Pharm.1997,153, 41–50.
21. Namaki, SG; Kanaze, FI; Bikiaris, DN Phát triển một phương pháp HPLC đẳng quyền đơn giản đã được kiểm chứng để thử nghiệm
desferrioxamine trong các hạt nano dựa trên các chất đồng trùng hợp poly(ε-caprolactone)-block-poly(propylene adipate).quả địa
cầu. J. Hậu môn. hóa học.2011, 2, .
22. Maffettone, C.; Trần, G.; Drozdov, tôi.; Ouzounis, C.; Pantopoulos, K. Các đặc tính sinh khối u của Protein
điều hòa sắt 2 (IRP2) được trung gian bởi 73-axit amin cụ thể của nó.Plos One2010,5, e10163.
23. Chảo, Y.; Trịnh, J.; Triệu, H.; Lý, Y.; Xu, H.; Wei, G. Mối quan hệ giữa tác dụng của thuốc và kích thước hạt của các vi
cầu kết dính sinh học được nạp insulin.Dược phẩm Acta. Tội.2002,23, 1051–1056.
24. Papadimitriou, S.; Bikiaris, D.; Các hạt nano Avgoustakis, K. Chitosan được nạp dorzolamide và pramipexole.
Cacbohydrat polyme.2008,73, 44–54.
25. Siafaka, PI; Titopoulou, A.; Koukaras, EN; Kostoglou, M.; Koutris, E.; Karavas, E.; Bikiaris, các dẫn xuất DN Chitosan như
những chất mang nano hiệu quả để giải phóng thuốc timolol ở mắt.quốc tế J.Pharm.2015,495, 249–264.
26. Singh, KH; Shinde, UA Các hạt nano Chitosan để vận chuyển brimonidine tartrate có kiểm soát đến màng mắt.
Dược phẩm chết. -Int. J.Pharm. Khoa học.2011,66, 594–599.
 dược phẩm2020,12, 238 17 trên 17

27. Bozdag, S.; Dillen, K.; Vandervoort, J.; Ludwig, A. Ảnh hưởng của quá trình đông khô với các chất bảo vệ lạnh khác
nhau và khử trùng bằng bức xạ gamma đối với các đặc tính của hạt nano poly (D, L -lactideglycolide) được nạp
ciprofloxacin HCl. J.Pharm. dược phẩm.2005,57, 699–707.
28. Abdelwahed, W.; Degobert, G.; Stainmesse, S.; Fessi, H. Làm đông khô các hạt nano: Cân nhắc về công thức, quy
trình và bảo quản.quảng cáo Thuốc Deliv. Mục sư2006,58, 1688–1713.
29. Koutroumanis, KP; Avgoustakis, K.; Bikiaris, D. Tổng hợp chất đa điện phân nhạy cảm với pH N-(2-carboxybenzyl) chitosan
liên kết chéo và việc sử dụng nó để phân phối thuốc có kiểm soát.Cacbohydrat polyme.2010,82, 181–188.
30. Kyzas, GZ; Bikiaris, DN; Lazaridis, NK Dẫn xuất Chitosan có độ trương nở thấp làm chất hấp thụ sinh học cho thuốc nhuộm cơ bản.
Langmuir2008,24, 4791–4799.
31. Dubey, A.; Prabhu, P. Xây dựng và đánh giá hydrogel nhạy cảm với kích thích của timolol maleate và
brimonidine tartrate.quốc tế J.Pharm. điều tra.2014,4, 122.
32. Abdeen, Z.; Mohammad, SG Nghiên cứu về hiệu quả hấp phụ của Polyme cacbohydrat thân thiện với môi trường
đối với dung dịch nước bị ô nhiễm bởi thuốc trừ sâu Organophospho.Mở J. Tổ chức. polyme. mẹ.2014,4, 16–28.

33. Karavas, E.; Georgerakis, M.; Docoslis, A.; Bikiaris, D. Kết hợp các kỹ thuật SEM, TEM và micro-Raman để
phân biệt giữa sự phân tán cấp độ phân tử vô định hình và sự phân tán nano của một loại thuốc kém tan
trong nước trong ma trận polymer. Tạp chí quốc tế về dược phẩm2007,340, 76–83.
34. Nanaki, SG; Pantopoulos, K.; Bikiaris, DN Tổng hợp các chất đồng trùng hợp poly (e-caprolactone)
-blockpoly (propylene adipate) tương thích sinh học thích hợp cho quá trình bao bọc nano thuốc ở dạng
hạt nano vỏ lõi.quốc tế J. Nanomed.2011,6, 2981–2995.
35. Hattori, Y.; Haruna, Y.; Otsuka, M. Phân tích quá trình hòa tan bằng cách sử dụng phương trình tích phân Noyes–Whitney không có
mô hình.Lướt keo. Giao diện sinh học B2013,102, 227–231.
36. Korsmeyer, RW; Gurny, R.; Doelker, E.; Buri, P.; Peppas, NA Cơ chế giải phóng chất tan từ polyme ưa nước
xốpquốc tế J.Pharm.1983,15, 25–35.
37. Tay quay, J.Toán học về sự khuếch tán. Nhà xuất bản Đại học Oxford: Oxford, Vương quốc Anh, 1975.
38. Tiến, C.Tính toán và mô hình hấp phụ. Butterworth-Heinemann: Boston, MA, Hoa Kỳ, 1994.
39. Wang, J.; Pantopoulos, K. Quy định chuyển hóa sắt của tế bào.hóa sinh. J.2011,434, 365–381.
40. Pantopoulos, K.; Gray, NK Quy định khác biệt của hai protein liên kết RNA có liên quan, protein điều hòa sắt
(IRP) và IRPB.ARN1995,1, 155–163.

© 2020 của các tác giả. Người được cấp phép MDPI, Basel, Thụy Sĩ. Bài viết này là một bài báo truy
cập mở được phân phối theo các điều khoản và điều kiện của giấy phép Creative Commons
Attribution (CC BY) (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

Xem số liệu thống kê xuất bản