FEBRI SEMBIRING, S.SI, M.SI, M.

SC
TABLE OF
CONTENTS
Definition

Types

Work Principle

Determining λ Max

Determining Standard Curve

Sample Analysis
LEARNING
OBJECTIVES

1. Students understand the basic principles of spectrophotometric analysis

2. Students understand how a spectrophotometer works

3. Students understand how to determine lamda maximum

Mana yang lebih pekat?? dan Berapa Konsentrasinya??
 SPEKTRO a quantitative measuring instrument based on the
measurement of the absorbance of electromagnetic
FOTOMETER wave radiation or the transmitted light

Spectrometer photometer

produce light to measure the

spectrum with a transmitted/
certain absorbed light
wavelength intensity
SPEKTROFOTOMETER

Bagaimana cara memegang kuvet?

Kenapa Cuvet harus clear dan hati2 dipegang?
SPEKTROFOTOMETER
Spectrofotometer UV

UV light = λ 190 -
380 nm
Using Deuterium
Lamp
UV light cannot be
seen by the eye
Sample or TYPES Spectrofotometer Visible
Compounds Visible light = λ 380
absorbing UV are a - 750 nm
colorless, clear, and Using Wolfram
transparent Lamp
compound Visible light can be
seen by the eye
A Colored Sample
DEUTERIUM LAMP

Attention
Due to the high intensity of UV radiation
emitted by the bulb, eye protection is
suggested when using a deuterium bulb.
WOLFRAM LAMP

1. Bola lampu
2. Gas bertekanan rendah (argon, neon, nitrogen)
3. Filamen wolfram
4. Kawat penghubung ke kaki tengah
5. Kawat penghubung ke ulir
6. Kawat penyangga
7. Kaca penyangga
8. Kontak listrik di ulir
9. Sekrup ulir
10. Isolator
11. Kontak listrik di kaki tengah
two light sources Advantages
λ 200 - 700 nm simple way
Sample used can COLLABORATED INTO analyze solutions
be color or colorless SPECTROPHOTOMETER with very small
UV-VIS
concentrations
Disadvantages
The light used
must be
monochromatic
Dispersi Cahaya
Prinsip Kerja
Warna
Panjang Warna warna yang komplementer
gelombang (nm) diserap (warna yang
terlihat)

400 – 435 Ungu Hijau kekuningan

435 – 480 Biru Kuning

480 – 490 Biru kehijauan Jingga

490 – 500 Hijau kebiruan Merah

500 – 560 Hijau Ungu kemerahan

560 – 580 Hijau kekuningan Ungu

580 – 595 Kuning Biru

595 – 610 Jingga Biru kehijauan

610 – 800 Merah Hijau kebiruan

HUKUM
LAMBERT-BEER

Hubungan Linier antara

absorbansi (variabel Y)
dengan konsentrasi larutan
(variabel X)

Kesimpulannya apa ya?

Mana yang lebih pekat?? dan Berapa Konsentrasinya??
 tahapan analisis
1. Pembuatan Larutan Stok
2. Penentuan panjang gelombang maksimum
3. Pembuatan Kurva Standart
4. Penentuan Konsentrasi Senyawa

https://www.youtube.com/watch?v=-w1j-4OcsQQ
 Menghitung Lamda Max (λ max)

Tau ngga persis nya dimana?

 Membuat Persamaan dari Kurva Standar
Konsentrasi Protein
Absorban (Y)
(X)

? ?

? ?

? ?

? ?

Berapa X dan Y pada titik 1 - 4?

10.1590/S1516-89132012000300012
Penentuan Konsentrasi Senyawa
Y=a.X+b

Y = Absorban
a = konstanta
b = konstanta
X = Konsentrasi

apa rumusnya kalo yang ditanya

konsentrasi?

10.1590/S1516-89132012000300012
 PROJECT
Absorbansi 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6

2 4 8 10
Konsentrasi 6 ppm
ppm ppm ppm ppm

Buat grafik X dan Y, dan

tentukan persamaannya??
KERJAKAN....
Mengukur konsentrasi protein dalam dalam minuman air kelapa?

Larutan stok dibuat dari Bovin Serum Albumin (BSA) dengan konsentrasi 10% sebanyak 6 ml.
Bagaimana cara membuat perhitungan BSA dengan konsentrasi 10%? Kurva standar dibuat
dalam interval konsentrasi BSA 0%, 1%, sampai 5%. Jika konsentrasi BSA 1%, 2%, 4%, 8%, 16%
maka absorban yang dihasilkan adalah 0,2 , 0,35, 0,5, 0,65, 0,8 maka tentukan konsentrasi
protein air kelapa, jika absorbansinya 0,7?
 PROJECT PER KELOMPOK PRAKTIKUM

https://media.neliti.com/media/publications/455332-none-bc102e70.pdf
http://dx.doi.org/10.47653/farm.v8i2.557
THANK
YOU
We look forward to working
with you