1. DẤU VÂN TAY DNA LÀ GÌ?

Tạo dấu vân tay DNA là một thử nghiệm hóa học để phân tích cấu trúc di truyền
của một người hoặc sinh vật và tạo ra một mẫu riêng của cá nhân đó. Nó được tạo
ra bởi Alec Jeffreys vào những năm 1980 khi ông còn học tại Đại học Leicester ở
Leicester, Vương quốc Anh. Ông đã khám phá ra kỹ thuật này sau khi nhận thấy
rằng một số trình tự DNA có tính biến đổi cao, không đóng góp vào các chức năng
di truyền, được lặp lại trong gen.
Khi xét nghiệm được thực hiện trên một loài như thực vật hoặc động vật, nó được
gọi là mã vạch DNA. Các mẫu dùng để xét nghiệm có thể là bất kỳ mô nào của cá
nhân, bao gồm nước bọt, mồ hôi, máu, nang lông, vảy da và và thậm chí cả quần
áo cá nhân.
Thử nghiệm này rất hữu ích trong việc hỗ trợ điều tra pháp y và xác định cha mẹ
và người thân. Nó cũng được sử dụng để tìm chữa các bệnh di truyền, thiết lập khả
năng hội đủ điều kiện nhập cư, hỗ trợ nghiên cứu y học và phả hệ.
Dấu vân tay DNA được sử dụng để thiết lập mối liên hệ giữa hai mẫu sinh học,
chẳng hạn như bằng chứng máu và nghi phạm phạm tội. Theo truyền thống, nó đã
được sử dụng để giải quyết các vụ án hình sự chết người những trường hợp không
thể giải quyết được
2. KHOA HỌC ĐẰNG SAU DẤU VÂN TAY DI TRUYỀN
Bản đồ di truyền của mỗi cá nhân cho thấy tất cả chúng ta đều có ADN độc đáo.
DNA tồn tại trong mọi tế bào của cơ thể con người và là một chuỗi các hợp chất
hóa học liên kết với nhau tạo ra những bản thiết kế vĩnh viễn không thể thay đổi
trong suốt cuộc đời. Các hợp chất tạo nên DNA gọi là bazơ và có 4 loại (A-G-T-
C). Chúng kết hợp với nhau để tạo thành các cặp cơ sở và mỗi người ước tính có
khoảng 3 tỷ cặp như vậy. Chúng nối lại với nhau cho các tế bào biết cách tạo ra các
bản sao của nhau. Tập hợp đầy đủ của hợp chất này được gọi là bộ gen.
Hơn 99,9% bộ gen của con người gần giống nhau. Tuy nhiên, nguyên nhân gây ra
sự khác biệt nhỏ trong bộ gen của hầu hết mọi người là vì sự độc đáo về thể chất
lẫn tinh thần của chúng ta. Chỉ có cặp song sinh giống hệt nhau thì DNA của họ
mới 100%.
Dấu vân tay DNA phân tích tính độc đáo của bộ gen mỗi người. Kết quả có thể
được sử dụng để so sánh các mẫu khác với xác nhận hoặc thiết lập một tình huống
cụ thể ( xác định mối quan hệ huyết thống, truy tìm thủ phạm, truy tìm tung tích
nạn nhân,…).
DNA có thể được chiết xuất từ hầu hết mọi bộ phận của cơ thể con người. Tuy
nhiên, một số mẫu phổ biến hơn do dễ dàng khai thác chúng. Các mẫu được lấy từ
các tế bào của cơ thể cá nhân cụ thể là: Nước bọt, sợi tóc, máu, bong da , móng tay,
nước tiểu,...
3. THỰC HIỆN DNA LẤY DẤU VÂN TAY
Việc lấy dấu vân tay DNA thường được thực hiện trong phòng thí nghiệm, nhưng
nó cũng có thể được thực hiện
được thực hiện tại nhà bằng cách đặt mua một bộ xét nghiệm từ cơ sở y tế đã được
phê duyệt và công ty xét nghiệm gen uy tín. Để thực hiện kiểm tra một ô mẫu được
cung cấp và đây có thể là bất kỳ chất chiết xuất nào đã đề cập ở trên. Hầu hết các
phòng thí nghiệm đều sử dụng máu làm dịch chiết thông thường.
Phân tích STR dựa trên RFLP cho dấu vân tay DNA
Đầu tiên, DNA của con người được chiết xuất từ mẫu sinh học. Kế tiếp, DNA
được cắt thành các đoạn nhỏ hơn bằng cách sử dụng enzyme giới hạn. Các mẫu dò
DNA được đánh dấu phóng xạ bổ sung cho các trình tự mục tiêu cụ thể được sử
dụng trong lai tạo mẫu dò. Các mẫu dò liên kết với các trình tự bổ sung của chúng
trong DNA biến tính trên giấy nitrocellulose. Bước này giúp phát hiện các dấu hiệu
di truyền hoặc trình tự quan tâm cụ thể. Các dải DNA khác nhau tương ứng với các
đoạn có đầu dò liên kết được quan sát thấy trên phim X-quang. Các dải này thể
hiện sự hiện diện của các dấu hiệu hoặc trình tự di truyền cụ thể, cung cấp một
mẫu hoặc “dấu vân tay” duy nhất cho mỗi cá nhân.
Mặc dù phân tích RFLP được sử dụng rộng rãi để lấy dấu vân tay DNA, nhưng nó
có một số hạn chế. Phương pháp này tốn thời gian, tẻ nhạt và tốn kém. Ngoài ra,
nó yêu cầu số lượng DNA lớn hơn, khiến nó không phù hợp với các mẫu pháp y,
thường có DNA hạn chế hoặc bị suy giảm. Những hạn chế này đã dẫn đến sự phát
triển và áp dụng các kỹ thuật nhạy cảm và hiệu quả hơn như phân tích STR dựa
trên PCR, phần lớn đã thay thế phân tích RFLP trong các ứng dụng lấy dấu vân tay
DNA.
PHẢN ỨNG CHUỖI POLYMERASE (PCR)
Phản ứng chuỗi polymerase, còn được gọi là PCR (Polymerase Chain Reaction), là
một phương pháp quan trọng trong di truyền phân tử và nghiên cứu gen. Phản ứng
này cho phép nhân bản một đoạn nhỏ của DNA hàng triệu lần chỉ trong vài giờ.
Phản ứng chuỗi polymerase sử dụng một enzyme gọi là enzyme polymerase
(thường là Taq polymerase) để sao chép và nhân bản một đoạn DNA cụ thể. Quá
trình PCR bao gồm ba giai đoạn chính: giai đoạn tan chảy (melting), giai đoạn
annealing và giai đoạn kéo dài (extension).

Trong giai đoạn tan chảy, nhiệt độ được nâng lên để phá vỡ liên kết hidro giữa
các mạch helix của DNA, làm cho hai mạch tách ra và trở thành hai mạch đơn. Sau
đó, nhiệt độ được giảm để cho phép các primer (một đoạn ngắn của DNA được sử
dụng để xác định vị trí cho việc nhân bản) gắn vào vùng mục tiêu trên mỗi mạch.

Giai đoạn annealing là giai đoạn khi nhiệt độ được hạ xuống để các primer có thể
ghép nối vào vùng mục tiêu của DNA. Primer được thiết kế sao cho nó khớp hoàn
hảo với vùng mục tiêu, đảm bảo rằng quá trình nhân bản chỉ xảy ra trên DNA mục
tiêu.

Giai đoạn kéo dài là giai đoạn mà enzyme polymerase được thêm vào để nhân bản
DNA. Enzyme này sẽ tạo ra một dãy DNA mới bằng cách hoạt động trên các mạch
đơn của DNA mục tiêu đã được tách ra. Quá trình này được lặp lại nhiều lần để tạo
ra hàng triệu bản sao của DNA mục tiêu.

PCR có rất nhiều ứng dụng trong lĩnh vực khoa học và y học. Nó có thể được sử
dụng để xác định sự hiện diện và số lượng của một DNA cụ thể trong mẫu, như
kiểm tra gen mang đột biến gây bệnh hoặc mục đích chuẩn đoán. Ngoài ra, PCR
còn được sử dụng để tạo ra định hình gen, nghiên cứu quan hệ tiêu hóa, và trong
việc xác định dòng dõi gen.

Vì tính đơn giản, độ chính xác và tính lặp lại cao, PCR đã trở thành một công cụ
quan trọng trong nghiên cứu di truyền phân tử và phân tích gene. Phản ứng chuỗi
polymerase đã đóng góp quan trọng vào việc hiểu rõ hơn về sự lây lan các bệnh di
truyền và cung cấp những thông tin quan trọng về gen và di truyền liệu pháp mới.

Với các ưu điểm của nó, PCR tiếp tục được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực
và ngày càng được phát triển để đáp ứng các nhu cầu nghiên cứu khác nhau.

QUY TRÌNH REAL TIME PCR

Tương tự như PCR, kỹ thuật real-time PCR cũng bao gồm các thành phần cơ bản
như dNTP, DNA Polymerase, DNA mạch khuôn, cặp mồi và dung dịch đệm. Điểm
khác biệt đó là real-time PCR sử dụng chất phát huỳnh quang để máy có thể phát
hiện và đo được cường độ tín hiệu từ chất này. Khi phản ứng nhân bản xảy ra tới
một chu kỳ nhất định, cường độ tín hiệu huỳnh quang sẽ bắt đầu có sự gia tăng rõ
rệt và tương quan với số lượng bản sao DNA được tạo ra.

Kết quả được thể hiện dưới dạng biểu đồ quan sát được qua mỗi chu kỳ, từ đó có
thể đưa ra đánh giá về hiệu quả khuếch đại DNA mục tiêu. Real-time PCR yêu cầu
có thiết bị đo cường độ phát huỳnh quang từ ống mẫu và cài chương trình phần
mềm cho phép xử lý kết quả về sự biến đổi cường độ huỳnh quang.

Chu trình nhiệt của real-time PCR cũng có 3 giai đoạn cơ bản tương tự như PCR
bao gồm:

Giai đoạn biến tính: Hỗn hợp phản ứng được gia nhiệt đến 94-950C, lúc này liên
kết hydro giữa các bazơ trong sợi DNA mạch đôi bị phá vỡ, dẫn đến tạo thành 2
sợi đơn DNA. Mỗi sợi đơn này trở thành khuôn để tổng hợp mạch mới. Thời gian
biến tính có thể tăng lên nếu thành phần khuôn có nhiều GC.

Giai đoạn bắt cặp: Nhiệt độ phản ứng giảm xuống còn 50-650C trong 20-40 giây
để probe và mồi gắn lần lượt vào sợi DNA khuôn và bắt đầu quá trình tổng hợp
mạch mới nhờ vào sự hoạt động của DNA polymerase.

Giai đoạn kéo dài: Nhiệt độ phản ứng tăng lên 720C, đây là nhiệt độ tối ưu cho
hoạt động tổng hợp mạch mới của DNA polymerase. Giai đoạn này không bắt
buộc ở một số chu trình qPCR, do kỹ thuật này thường dùng khuếch đại các đoạn
có trình tự ngắn hơn PCR, vào khoảng <200bp, do vậy chỉ cần hai bước biến tính
và bắt cặp là đủ để khuếch đại đoạn gen mục tiêu trong phản ứng qPCR. Chu trình
chỉ gồm 2 bước giúp tiết kiệm thời gian, nhanh chóng phát hiện và định lượng
được DNA.

Các giai đoạn này được thực hiện thông qua sự luân chuyển nhiệt độ giữa các chu
kỳ. Qua mỗi chu kỳ, tín hiệu huỳnh quang sẽ được ghi nhận có sự gia tăng tương
ứng với lượng bản sao DNA nhân lên theo cấp số lũy thừa.
MỤC ĐÍCH CỦA LẤY DẤU VÂN TAY
Tiết lộ danh tính của một người: Phân tích DNA cung cấp một phương pháp đáng
tin cậy để xác định danh tính sinh học của một người. Đó là một tùy chọn có độ
chính xác cao có sẵn để thiết lập danh tính cá nhân.
Xác định xác chết: Dấu vân tay DNA thậm chí có thể được sử dụng để xác định
các cá nhân đã chết trong trường hợp thảm họa hàng loạt. Nó giúp xác định các thi
thể bị hư hỏng nặng bằng cách so sánh dữ liệu có sẵn với hồ sơ DNA.
Xác định huyết thống: Dấu vân tay DNA hỗ trợ thiết lập mối quan hệ huyết thống
giữa các cá nhân không liên quan. Bằng cách so sánh các mẫu DNA từ những
người thân tiềm năng, kỹ thuật này sẽ xác định xem họ có chia sẻ mối liên hệ sinh
học hay không.

Khám nghiệm hiện trường vụ án và xác minh tội phạm: Dấu vân tay DNA đóng
một vai trò quan trọng trong điều tra pháp y và xác minh tội phạm. Các mẫu được
thu thập từ hiện trường vụ án, chẳng hạn như nước bọt, máu hoặc nang tóc, sẽ được
phân tích DNA để thiết lập mối liên hệ giữa nghi phạm và tội phạm.

Nghiên cứu ghép tạng: Hồ sơ DNA được sử dụng trong cấy ghép nội tạng để đánh
giá sự chấp nhận và từ chối mảnh ghép. Kỹ thuật đánh máy HLA được sử dụng để
khớp với các loại Kháng nguyên bạch cầu người (HLA) của người cho và người
nhận, đảm bảo khả năng tương thích để cấy ghép nội tạng thành công.
Phát hiện ô nhiễm tế bào mẹ: Dấu vân tay DNA được sử dụng để phát hiện ô nhiễm
tế bào mẹ (MCC) trong các nghiên cứu và chẩn đoán trước khi sinh. Các tế bào mẹ
có trong các mẫu lông nhung màng đệm hoặc nước ối có thể dẫn đến kết quả dương
tính giả. Hồ sơ DNA giúp xác định và phân biệt các tế bào của mẹ, đảm bảo xét
nghiệm di truyền chính xác trong thai kỳ.

Nghiên cứu bệnh di truyền: Dấu vân tay DNA tìm thấy các ứng dụng rộng rãi
trong khoa học y tế, đặc biệt là trong nghiên cứu các bệnh di truyền. Các nhà khoa
học sử dụng kỹ thuật PCR sửa đổi để phân tích các đột biến, biến thể alen và thiết
lập mối quan hệ phát sinh loài giữa các sinh vật khác nhau

Lưu trữ vô thời hạn Sau khi được thu thập, hồ sơ di truyền của một cá nhân được
tạo từ DNA hồ sơ có thể được lưu trữ trong cơ sở dữ liệu vô thời hạn. Hồ sơ này có
thể cũng có thể được chuyển đổi thành các điểm dữ liệu có thể được sử dụng cho
nghiên cứu