Professional Documents
Culture Documents
Cromatografia Iònica
Cromatografia Iònica
Cromatografia
iònica
s
Continguts
1. Fonaments .........................................................................................................................2
1.1. ..........................................................................................................2
1.2. Tipus de cromatografies iòniques. .............................................................................. 3
1.2.1. ............................................................................3
1.2.2. .............................................................................5
1.2.3. Cromatografia de parells iònics ..............................................................................6
1.2.4. Cromatografia amb supressió iònica ....................................................................... 6
1.3. .....................................................................................7
2. Instrumentació ..................................................................................................................9
3. Aplicacions ................................................................................................................... 122
4. Bibliografia. .................................................................................................................. 144
1
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
1. Fonaments
La cromatografia iònica es basa en l s segons la
estacionària (que en la
majoria de mètodes es tracta d una resina polimèrica, composta per una matriu rígida que conté
grups funcionals ionitzables o lligands). La fase mòbil, per la seva banda, es composa per una
dissolució aquosa tamponada que arrossega la mostra, mentre que
1.1.
Requereix un fluxe continu i constant de fase mòbil
que permeti la mescla i elució dels components de
mostra requerits, una columna que contengui una
fase estacionària afí a les espècies de la mostra i un
sistema de detecció sensible a aquestes. El procés
2
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
.
.
.
Cromatografia amb columna supressora.
Il·lustració 2: Imatge microscòpica de resina
1.2.1. vi iònic
1.2.1.1. Fase estacionària; r
En la cromatografia iònica, la fase estacionària és poroses de
plàstic de 0,6 mm de diàmetre 2O, compostes principalment per polímers com el
poliestirè, divinilbenzè o cel·lulosa; les esferes conserven la seva estructura gràcies a
enllaços covalents interns. de la resina es
distribueixen grups iònics immòbils (grups funcionals de la resina), que poden interaccionar
amb els contraions lliures i presents en fase mòbil (per exemple, Na +). A la seva vegada,
aquests contraions poden sofrir un intercanvi per altres espècies iòniques, més afins al grup de
càrrega fixa (respectant l exemple anteior, Ca2+)
es diferencien quatre tipus de resines;
-CH2N(CH3)3+,
Base forta Amina quaternària 0-14
-CH2CH2N(CH2CH3)3+
Aniònic
-NH3+,
Base feble Amina 5-9
-CH2CH2NH(CH2CH3)2+
analits, emprant-
3
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
És utilitzat en
separació de proteïnes per a solucions de fase mòbil el pH de les quals cau 0,5-1,5
unitats per sota del pI de la proteïna estudiada.
seva efectivitat pràcticament no varia amb el pH. En contrast, els intercanviadors iònics
febles funcionen millor a rangs de pH molt reduïts.
seva constant;
on A+ i B+ -
(fase estacionària).
La preparació dels intercanviadors iònics és un procés necessari per a la correcta separació
les següents etapes;
1. Expansió: Per a intercanviadors catiònics, suposa el tractament amb NaOH 0,5 N,
seguit amb HCl 0,5 N; el procés contrari es segueix per als intercanviadors
catiònics.
2. Eliminació de partícules fines: els intercanviadors són sotmesos a repetides
de regeneració; aquest
la resolució de
pics.
4
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
Així mateix, l
retenció en qualsevol separació per intercanvi iònic. Concretament, aquells amb major força
permeten eluir espècies adherides a la fase
de residència de cadascun dels analits que transporta. A més, el ritme de fluxe també influeix en
la resolució dels pics cromatogràfics per a cada analit (a major ritme, major serà la resolució).
Per altra banda, un increment en el ritme de fluxe suposa un augment en la pressió exercida
sobre les resines, el qual pot arribar a deteriorar-les irreversiblement en cas de ritmes massa
elevats.
1.2.2.
3COOH) i un àcid
fort (HCl), sotmesa a una elució amb H2
En medi
5
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
Els anions resultants de la dissociació completa de l àcid fort sofriran repulsions per part dels
grups aniònics forts de la superfície de la resina (forman-set una interacció superficial contínua i
repulsiva coneguda com a membrana de Donnan); els protons de dissociació completa passarien
a competir amb la resta de cations per l ocupació i intercanvi de posicions amb els lligands.
només parcialment dissociat, pel qual la forma neutra del darrer pot penetrar en la membrana de
Donnan i ser absorbit per la fase sòlida amb una efectivitat depenent de la seva mida.
CPI és augmentar la força de retenció de bases i cations, així com suprimir la formació
de coes en els pics cromatogràfics.
incorpora amb la fase mòbil un
contraió de
càrrega oposada a l neutra,
contraió representa el parell iòn
iònic amb la fase estacionària; per una banda, el parell iònic es reparteix per la fase estacionària
apolar
per a ambdues fases. Per altra banda, els contraions es retenen amb força al llarg de la fase
estacionària neutra i aporten càrrega a aquesta fase.
en medi polar (preferible
i perclorat sòdic (millor per a evitar la formació de coes en
el cromatograma).
6
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
Il·lustració 4: Repr
resina de supressió aniònica (intercanviadora de cations), que elimina la conductivitat de fons procedent del KOH i
interferent en el primer cromatograma (sense supressió). Com a resultat, en el cromatograma conductimètric
1.3. romatograma
El mètode més comú per a eluir els reactius a través de la columna cromatogràfica consisteix en
inserir la mostra en la columna en condicions de fase mòbil que permetin la seva retenció
gradient salí creixent, gràcies al qual els contraions competeixen més pels lligands de les
resines, substituint els ions analit, que passen a eluir més fàcilment; els ions amb major força
ent per passes, segons la
qual es deixen eluir els ions en etapes de concentració salina constant i cada cop major.
Un segon mètode, menys comú i ja comentat, consisteix en anar aplicant canvis de pH a la fase
mòbil
quan aquest assoleixi el
aniònics.
7
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
El cromatograma és representat en base a les mesures dutes a terme pel detector, enfront al
A continuació es mostren alguns exemples explicatius.
actulosa.
com a eluent.
Co per anàlisi
espectofotomètrica (UV-vis) es pot representar de formes diferents; les dues anteriors mesuren
bància enfront als altres paràmetres
segona només enfront al volum de fase mòbil eluït). Una altra possibilitat, consistitia en la
mesura conductimètrica dels ana
carregades en el si de la dissolució.
8
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
2. Instrumentació
Il·lustració 9: Representació del sistema de cromatografia iònica amb tots els seus elements.
rcanvi iònic pren com a base el sistema HPLC típic, pel que
respecta a elements de bombeig (a pressió regulable), separació (columnes amb una vida útil
i detecció
model HPLC es deu a que ambdós comparteixen una bona transferència màssica, volum mort
baix, i fases estacionària i mòbil adequades.
A continuació es comentarà cadascun dels components individualment:
1) Injector: Permet introduir la mostra a la columna a elevades pressions, formant una banda de
mostra el més petita possible (que ocupi, inicialment, el menor volum possible dins la
9
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
4) Bomba: e
no es produeixin
als teòrics i una pobre reproducibilitat del procés tant a nivell qualitatiu com quantitatiu. Les
bombes binàries fan possibles gradients ràpids i precisos, mentre que les quaternàries
permeten que els components de dues fases mòbils es mesclin de forma simultània.
de fons.
7) Columna de protecció:
partícules o impureses que puguin acabar accedint a la columna analítica. Es pot aconseguir
un protecció òptima situant en els extrems de la columna de protecció dues masses de gel de
Il·lustració 2
tenen les fases estacionària i mòbil amb caràcter iònic, mentre que la de parells iònics té la fase estacionària amb
càracter polar i la de fase mòbil amb càracter apolar.
10
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
Amperometria:
11
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
3. Aplicacions
Les aplicacions principals de la cromatografia iònica inclouen un rang molt ampli
la ciència, sobretot en el camp de Ciències de la S
i subseqüents exemples:
Tractamen :
o :
afinitat de les resines per a cations divalents permet que tengui lloc la reacció
o :
Es pren com a objectiu la substitució de tots cations metàl·lics i anions presents
per H+ i OH-, a fi de purificar-la el màxim possible
(eliminant impureses ionitzades)
catiònic i aniònic que contenguin ions H+ i OH-, respectivament, donant-se lloc
les reaccions següents;
La recombinació dels ions H+ i OH- resulta en molècules d H2O, i ara que els
ions contaminants han quedat enllaçats a les resines, es pot considerar que
l aigua es troba completament desmineralitzada, de salinitat quasi nul·la; els
ions que puguin haver-se alliberat de les resines constitueixen la fuga iònica.
Agroquímica:
o Determinacions de monoclorofenols i diclorofenols emprats com a agents
i sòl.
Biotecnologia:
o Purificació de pèptids naturals, recombinants, obtinguts per digestions
enzimàtiques o sintètics.
Industria del cement:
o Quantificació dels nivells de clorurs i sulfats presents en cement, els quals
poden marcar la qualitat del producte.
Química Clínica:
2+
o , Co2+, Mn2+...) en mostres de fluids
fisiològics.
Química Ambiental:
o
Anàlisis biològiques:
o Separació de mescles de proteïnes.
o Estudi composicional de mostres ds nucleics.
12
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
liments:
o Separació de molècules amb propietats diferents en quant a estabilitat, polaritat
i acidesa, poguent-se controlar el pH en fase mòbil.
o Separació de múltiples vitamines en una sola anàlisi, amb una millor separació
de mostres amb UV que per mesures fluoromètriques.
o Detecció de sulfits en mostres de carn, essent responsables de provocar
Producció de polímers
o
emprat en la producció de glicerina i polímers diversos.
13
Curs 2016-2017 BARCELÓ ADROVER, Joan
4. Bibliografia.
Bibliografia virtual:
http://www.chromacademy.com/lms/sco111/theory_of_hplc_ion-chromatography.pdf
http://chem.libretexts.org/Textbook_Maps/Analytical_Chemistry_Textbook_Maps/Map
%3A_Analytical_Chemistry_2.0_(Harvey)/12_Chromatographic_and_Electrophoretic_
Methods/12.6%3A_Other_Forms_of_Liquid_Chromatography
http://www.bio-rad.com/es-es/applications-technologies/liquid-chromatography-
principles/ion-exchange-chromatography
https://www.separations.us.tosohbioscience.com/service--support/technical-
support/resource-center/principles-of-chromagraphy/ion-exchange
http://dardel.info/IX/IX_Intro_ES.html
14