Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335 DOI 10.1002/eji.201041093 NỔI BẬT 3325

tiền tuyến
Sự suy giảm Treg hiệu quả gây ra sự xâm nhập của tế
bào T và loại bỏ các khối u lớn
Xingrui Li, Efterpi Kostareli, Janine Suffner, Natalio Garbiand
Günter J. Hämmerling-

Khoa Miễn dịch học Phân tử, Trung tâm Nghiên cứu Ung thư Đức (DKFZ), Heidelberg,
Đức

Có một số yếu tố cản trở liệu pháp miễn dịch điều trị ung thư. Ví dụ, các khối u biểu hiện một mạch
máu bất thường dường như tạo thành một rào cản chống lại sự xâm nhập của tế bào T. Một trở
ngại lớn khác được tạo ra bởi Treg. Cho đến nay, sự cạn kiệt thông thường của Treg bằng các kháng
thể chống CD25, chỉ loại bỏ được 70% Treg, đã thất bại trong việc làm giảm đáng kể sự phát triển
của các khối u đã hình thành. Sử dụng chuột Foxp3.LuciDTR-4, chúng tôi chỉ ra ở đây rằng sự suy
giảm 90–95% Treg dẫn đến hồi quy hoàn toàn các khối u lớn đã hình thành, trong khi sự suy giảm
70% là không hiệu quả. Sự suy giảm Treg rộng rãi đã gây ra một số quá trình quan trọng đối với
việc loại bỏ khối u, bao gồm cả việc kích hoạt CD8 đặc hiệu của khối u1tế bào T và tăng cường sự
xâm nhập của các tế bào này vào khối u. Cơ chế chính xác của quá trình thâm nhiễm tăng cường
vẫn chưa được biết, nhưng sự bình thường hóa hệ thống mạch máu của khối u được cho là sẽ hỗ
trợ quá trình thâm nhiễm. Thật vậy, chúng tôi đã quan sát thấy rằng sự suy giảm 90% Treg đã gây
ra sự bình thường hóa của mạch máu khối u được biểu thị bằng việc giảm rò rỉ và số lượng mạch
máu bị giãn. Những kết quả này cho thấy rằng đối với liệu pháp miễn dịch lâm sàng đối với bệnh
ung thư, mong muốn có thuốc thử cho phép làm cạn kiệt Treg ở mức độ cao, kết hợp với các
phương thức điều trị như tiêm phòng, có thể đồng thời làm tăng kích hoạt và xâm nhập tế bào T.

từ khóa:Liệu pháp miễn dịch . treg . miễn dịch khối u

Thông tin hỗ trợ có sẵn trực tuyến

Giới thiệu
Bằng chứng ngày càng tăng từ các thực thể ác tính khác nhau bao gồm
ung thư biểu mô tế bào hắc tố, đại trực tràng, buồng trứng, cổ tử cung,
tế bào gan, dạ dày và tiết niệu cho thấy số lượng tế bào lympho thâm
nhiễm khối u tăng lên có tương quan với quá trình bệnh thuận lợi và thời
gian sống lâu hơn [1-9]. Một trở ngại lớn cho sự xâm nhập dường như là
hàng rào nội mô khối u. Sự hình thành tân mạch của các mạch máu là
cần thiết cho sự sống sót của khối u, nhưng kết quả là
Thư tín:Giáo sư Günter J. Hämmerling e-mail:
hammerling@dkfz.de
mạch máu khối u thường hiển thị một cấu trúc bất thường được
đặc trưng bởi các mạch máu giãn ra và dễ vỡ dẫn đến rò rỉ, thiếu
oxy, nhiễm toan và áp lực kẽ cao [10, 11]. Thật thú vị, việc bình
thường hóa mạch máu khối u bằng thao tác thực nghiệm dẫn
đến tăng khả năng xâm nhập và phá hủy khối u [12]. Do đó,
bình thường hóa mạch máu khối u nổi lên như một phương
pháp mới và đầy hứa hẹn cho liệu pháp miễn dịch. Một trở ngại
lớn khác đối với liệu pháp miễn dịch là quần thể tế bào ức chế
như Treg và tế bào myeloid ức chế.
CD41CD251Treg được đặc trưng bởi biểu hiện của hộp đầu
dòng nhân tố phiên mã P3 (Foxp3) [13]. họ đang
- Những tác giả này đã đóng góp như nhau cho công việc này.

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

3326 Xingrui Li và cộng sự.
hiện diện tự nhiên trên khắp cơ thể và được biết là đóng vai trò quan
trọng trong việc duy trì khả năng tự chịu đựng và cân bằng nội môi
miễn dịch bằng cách hạn chế kích hoạt các tế bào T thông thường
[14, 15]. Treg đã được coi là một trong những cơ chế ức chế chính
của phản ứng miễn dịch chống khối u. Mức độ Treg tăng lên trong
các khối u thường liên quan đến kết quả lâm sàng kém và sự tiến
triển của khối u ở các thực thể khối u khác nhau [16–20]. Treg hiện
diện trong các khối u có khả năng bao gồm cả Treg tự nhiên và Treg
cảm ứng được gây ra bởi các yếu tố như TGF-b [21–23]. Nhìn chung,
mặc dù có rất nhiều nghiên cứu cho thấy vai trò quan trọng của Treg
trong việc cho phép các tế bào khối u trốn tránh phản ứng miễn dịch
của vật chủ, nhưng cơ chế chính xác mà Treg góp phần vào sự tiến
triển của khối u vẫn còn chưa rõ ràng.
Sự suy giảm Treg có thể cung cấp cái nhìn sâu sắc có giá trị
về vai trò của Treg trong khả năng miễn dịch chống khối u.
Trong những năm qua, các phương pháp khác nhau để làm cạn
kiệt Treg với các mức độ cạn kiệt/loại bỏ khác nhau đã được sử
dụng. Ngay cả trước khi xác định ngăn Treg, cyclophosphamide
(CY) đã được sử dụng để làm cạn kiệt quần thể của cái gọi là
L3T41tế bào T ức chế. Điều quan trọng là, việc loại bỏ các tế bào
như vậy cho phép hồi quy qua trung gian CY của khối u đã hình
thành ở chuột [24]. Sau đó, với việc xác định thụ thể IL-2 CD25
trên Treg, các kháng thể đặc hiệu chống lại CD25 đã được sử
dụng. Một phân tích so sánh trong các mô hình động vật [25]
cho thấy rằng mặc dù quản lý CY dẫn đến mức suy giảm Treg
cao nhất, nhưng việc giảm này cũng liên quan đến việc giảm
CD8 đồng thời1Tế bào T và giảm mồi kháng nguyên khối u.
Quản lý PC-61 kháng thể kháng CD25 dẫn đến giảm một phần
khoảng 65–70% Treg mà không ảnh hưởng đến tổng số CD81tế
bào T, nhưng hiệu quả điều trị của nó còn hạn chế [25].
Một số nghiên cứu đã cố gắng can thiệp vào sự phát triển của
khối u cấy ghép chuột bằng đơn trị liệu PC-61. Thông thường, ảnh
hưởng đến sự phát triển của khối u chỉ được quan sát thấy trong
môi trường dự phòng khi Treg bị cạn kiệt trước hoặc không muộn
hơn 2 ngày sau khi cấy vào khối u, trong khi sự suy giảm Treg qua
trung gian PC-61 ở động vật mang khối u đã hình thành thường
không có hoặc chỉ có ít ảnh hưởng đến khối u tăng trưởng [25–28].
Thành công điều trị đáng kể chỉ được quan sát thấy khi áp dụng các
phương pháp kết hợp phức hợp như chiếu xạ toàn bộ cơ thể kết hợp
với chuyển tế bào T và tiêm vắc xin [29], và điều trị bổ sung bằng
kháng thể kháng PDL1 [30], nhưng thông thường chuột được điều
trị khi khối u đã vẫn còn nhỏ (3–4 ngày sau khi tiêm khối u). Do đó,
liệu pháp miễn dịch của các khối u lớn đã hình thành vẫn là một
thách thức lớn.
Gần đây, chúng tôi đã thiết lập một số dòng chuột Foxp3.LuciDTR
biến đổi gen BAC [31] trong đó Treg biểu hiện luciferase cho hình
ảnh phát quang sinh học không xâm lấn (BLI) và thụ thể độc tố bạch
hầu ở người (DTR) để làm suy giảm Treg bởi độc tố bạch hầu (DT). Sự
sẵn có của các dòng chuột Foxp3.LuciDTR hiển thị các mức độ suy
giảm Treg khác nhau đã cung cấp cho chúng tôi một mô hình độc
đáo để nghiên cứu vai trò của Treg trong khả năng miễn dịch khối u
cũng như mức độ suy giảm cần thiết để điều trị thành công. Kết quả
của chúng tôi cho thấy rằng sự cạn kiệt 70% Treg đạt được ở chuột
Foxp3.LuciDTR-3 hoặc với kháng thể PC-61 là không hiệu quả đối với
sự phát triển của khối u. Ngược lại, Treg tăng
&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335
suy giảm khoảng 90% ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 mang khối u lớn
đã hình thành dẫn đến bình thường hóa mạch máu khối u kèm
theo thâm nhiễm tế bào T lớn và đào thải khối u. Những quan
sát này chỉ ra rằng về nguyên tắc, sự suy giảm Treg có thể gây
ra một số thay đổi trong môi trường vi mô khối u, điều này tạo
điều kiện thuận lợi cho việc loại bỏ khối u. Tuy nhiên, mức độ
suy giảm Treg rất quan trọng đối với hiệu quả điều trị.
Kết quả
Mô hình chuột cho sự suy giảm Treg vi sai ở chuột mang
khối u
Để giải quyết vai trò của sự suy giảm Treg khác biệt trong việc
kiểm soát các phản ứng chống ung thư, chúng tôi chủ yếu sử
dụng khối u ác tính MO4. Khối u này được đặc trưng bởi biểu
hiện MHC loại I thấp, khả năng sinh miễn dịch thấp và khả năng
sinh khối u cao, và những con chuột mang khối u đã hình thành
rất khó chữa khỏi. Sự suy giảm Treg bắt đầu vào ngày thứ 8 sau
khi cấy vào khối u (Hình 1A) và số Treg được xác định 3 ngày sau
đó ở lá lách, dẫn lưu các hạch bạch huyết và khối u (Hình 1 B và
C). Để làm cạn kiệt Treg, ba phương pháp đã được sử dụng: (i)
kháng thể chống CD25 PC-61, làm cạn kiệt khoảng 65–70% Treg,
vì không phải tất cả Foxp31Treg nhanh CD25; (ii) chuột
Foxp3.LuciDTR-3 trong đó, phù hợp với kết quả trước đây của
chúng tôi [31], sử dụng DT 2 hoặc 3 lần dẫn đến suy giảm
khoảng 65% ở lá lách và khoảng 75% suy giảm ở hạch bạch
huyết, do đó trung bình thu được khoảng 70%; và (iii) chuột
Foxp3.LuciDTR-4 trong đó điều trị bằng DT đã loại bỏ khoảng
90% Treg ở lá lách và 95% ở các hạch bạch huyết [31]. Ứng dụng
DT cho chuột B6 không ảnh hưởng đến Treg [31]. Hình 1B và C
cũng cho thấy Treg được làm giàu trong các khối u lên khoảng
20–30% CD4 trong khối u1Tế bào T, tùy thuộc vào mẫu khối u. Sự
cạn kiệt của Treg trong khối u ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 cũng đạt
90–95%, nhưng kém hiệu quả hơn nhiều với PC-61 hoặc ở chuột
Foxp3.LuciDTR-3 (khoảng 40–50% cạn kiệt). Ở chuột
Foxp3.LuciDTR-3 và –DTR-4, khoang Treg phục hồi hoàn toàn
sau khoảng 10–14 ngày (Hình 1D) nhờ sự mở rộng cân bằng nội
môi nhanh chóng của quần thể Treg không bị cạn kiệt còn sống
sót, như đã trình bày trong một nghiên cứu trước đây [ 31].
Những Treg được mở rộng cân bằng nội môi này vẫn thể hiện
khả năng triệt tiêu đầy đủ của chúng [31]. Quá trình phục hồi
sau khi cạn kiệt PC-61 chậm hơn nhiều, có thể là do thời gian
bán hủy dài của kháng thể được sử dụng. Do đó, đối với các
nghiên cứu về khối u sau đây, cần lưu ý rằng khoang Treg phục
hồi nhanh chóng và Treg giảm mạnh trong Foxp3.
Tăng trưởng khối u và suy giảm Treg
Sự cạn kiệt của Treg tại thời điểm tiêm khối u bằng kháng thể P-61
hoặc ở chuột Foxp3.LuciDTR đã ngăn chặn sự phát triển của khối u,
phù hợp với dữ liệu đã công bố về điều trị sớm bằng PC-61
www.eji-journal.eu
Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335 NỔI BẬT 3327

Hình 1.Sự suy giảm khác biệt của Treg trong các cơ quan bạch huyết và khối u bằng kháng thể chống CD25 hoặc điều trị DT. (A) Chuột C57/BL/6N (B6),
Foxp3.LuciDTR-3 (DTR-3) và Foxp3.LuciDTR-4 (DTR-4) được tiêm 4-105Các tế bào khối u MO4 được loại bỏ vào ngày 0. Treg đã cạn kiệt ở chuột B6 vào ngày thứ 8
bằng cách tiêm ip 500tôig kháng thể PC-61 và ở chuột Foxp3.LuciDTR vào các ngày 8, 9 và 10 bằng cách tiêm ip 15 ng/g DT trọng lượng cơ thể. Phân tích được thực
hiện vào ngày 11. (B) Phân tích tế bào học dòng đại diện của Foxp31CD41Treg trong lá lách (SPL), LN và khối u vào ngày thứ 11. Các con số biểu thị tần suất của
Foxp31Treg trong CD41tế bào T. (C) Tóm tắt dữ liệu được trình bày trong (B). Thanh chỉ ra ý nghĩa7SEM của ba con chuộtmỗinhóm. Kiểm soát việc tiêm DT vào
chuột B6 không dẫn đến sự suy giảm Treg [31]. (D) Phục hồi khoang Treg trong các hạch bạch huyết sau khi cạn kiệt ban đầu. Mũi tên chỉ ứng dụng của DT hoặc
PC-61. Các đồ thị cho thấy ý nghĩa7SEM của ba con chuộtmỗinhóm. Thí nghiệm được lặp lại với kết quả tương tự. --Po0,01, ---Po0,001 (ANOVA một chiều).

(dữ liệu không được hiển thị). Tiếp theo, chúng tôi đã xác định ảnh hưởng
của sự suy giảm Treg khác biệt đối với sự phát triển của các khối u MO4
đã được thiết lập, điều này phản ánh một tình huống phù hợp hơn về mặt
lâm sàng. Sự cạn kiệt Treg được thực hiện vào ngày 8–10 sau khi cấy vào
khối u, khi các khối u đạt đường kính khoảng 5–8 mm (thể tích khoảng
60–250 mm3). Hình 2A cho thấy một thử nghiệm đại diện ở từng con
chuột và Hình 2B là dữ liệu tóm tắt. Sự suy giảm 70% Treg với kháng thể
PC-61 hoặc với DT trong Foxp3. LuciDTR-3 chuột ít ảnh hưởng đến sự
phát triển của khối u MO4, ngay cả khi DT được áp dụng trong 6 ngày liên
tiếp (dữ liệu không được hiển thị). Ngược lại, ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 sau
khi cạn kiệt 90% Treg, các khối u tiếp tục phát triển trong khoảng 4 ngày
nhưng sau đó, ngay cả các khối u lớn cũng thoái triển hoàn toàn (Hình 2A
và B). Kết quả tương tự cũng thu được với một khối u khác, RMA.Tag. Một
lần nữa, quá trình cắt bỏ Treg ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 dẫn đến sự hồi
quy hoàn toàn của các khối u lớn đã hình thành (đường kính 10 mm,
khoảng 500 mm3khối lượng), trong khi sự cạn kiệt với PC-61 hoặc sau khi
điều trị DT ở chuột Foxp3. LuciDTR-3 không ảnh hưởng đến sự phát triển
của khối u (Hình 2C). Chuột hồi quy đã được tìm thấy là
miễn dịch chống lại thử thách thứ hai với cùng một khối u, cho thấy
sự kích hoạt cụ thể của hệ thống miễn dịch và sự hình thành trí nhớ
(Thông tin hỗ trợ Hình 1). BLI của chuột Foxp3.LuciDTR-4 mang
RMA.Tag đã chứng minh sự tích lũy Treg trong khối u (Hình 2D). Sau
khi điều trị bằng PC-61, người ta chỉ quan sát thấy sự suy giảm một
phần, trong khi điều trị DT cho chuột Foxp3.LuciDTR-4 dẫn đến việc
loại bỏ mạnh mẽ Treg trong khối u, phù hợp với sự đào thải khối u
được quan sát thấy ở những con chuột này vài ngày sau đó (Hình
2C). Các nghiên cứu BLI như vậy không thể được thực hiện với khối u
ác tính MO4 vì màu đen của khối u hấp thụ hầu hết các photon do
luciferase tạo ra. Những kết quả này cho thấy rằng việc loại bỏ 90%
Treg sẽ giải phóng phản ứng chống khối u mạnh mẽ, trong khi trong
trường hợp cạn kiệt 70%, 30% Treg còn lại dường như vẫn đủ để
kiểm soát các phản ứng chống ung thư. Cần nhấn mạnh rằng ở
chuột Foxp3.LuciDTR-4 suy giảm 90% không có dấu hiệu tự miễn
dịch nào được ghi nhận [31].
Để phân tích quần thể tế bào có thể chịu trách nhiệm cho sự đào
thải khối u quan sát được, CD41Tế bào T, CD81Tế bào T hoặc NK

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

3328 Xingrui Li và cộng sự. Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335

Hình 2.Hồi quy của các khối u MO4 và RMA.Tag đã được thiết lập lớn sau khi cạn kiệt Treg ở mức độ cao. (A và B) Treg đã cạn kiệt bắt đầu từ ngày thứ 8 sau khi cấy
tế bào khối u vào chuột B6, DTR-3 và DTR-4, thời điểm mà khối u MO4 đạt đường kính khoảng 4–6 mm. Mũi tên chỉ quản trị DT hoặc PC-61. Sáu con chuộtmỗinhóm
đã được sử dụng. Đường cong tăng trưởng khối u cho (A) từng con chuột và (B) dữ liệu tổng hợp (có nghĩa là7SEM). Thí nghiệm được lặp lại ba lần với kết quả
tương đương. (C) Đường cong tăng trưởng của khối u RMA.Tag. Các biểu đồ chỉ ra ý nghĩa7SEM của năm con chuộtmỗinhóm. Hiển thị là một trong hai thí nghiệm
có thể so sánh được. (D) Hình ảnh suy giảm Treg ở chuột DTR-4 mang khối u RMA.Tag. Hình ảnh chụp với khu vực khối u (mũi tên màu vàng) 12 ngày sau khi cấy
(bảng bên trái). Hình ảnh phát quang sinh học (ba ô bên phải) sau khi Treg cạn kiệt hoặc ở những con chuột không được điều trị.

các tế bào đã cạn kiệt ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 bằng cách tiêm kháng thể
đặc hiệu (Hình 3), sau đó là quá trình cắt bỏ Treg. Các kháng thể cạn kiệt
đã loại bỏ hiệu quả các quần thể tế bào miễn dịch tương ứng ở lá lách,
hạch bạch huyết (không hiển thị) và khối u (Hình 3). Suy giảm CD41Tế bào
T và tế bào NK không có tác dụng, trong khi CD81Sự suy giảm tế bào T đã
hủy bỏ tác dụng của quá trình cắt bỏ Treg đối với việc đào thải khối u
(Hình 3B). Những phát hiện này cho thấy vai trò trung tâm của CD81Các tế
bào T trong việc loại bỏ khối u khi không có Treg.
Sự suy giảm Treg ở mức độ cao giúp tăng cường sự xâm nhập của
tế bào T vào khối u và CD81kích hoạt tế bào T
Để xác định tình trạng của các tế bào miễn dịch trong khối u, huyền
phù tế bào đơn được chuẩn bị từ khối u vào ngày thứ 12, khi kích
thước của khối u từ chuột đối chứng và chuột thiếu Treg vẫn nằm
trong cùng một phạm vi (đường kính 8–9 mm, hoặc khoảng 250–360
mm3âm lượng). Chiến lược chọn đối với phân tích đo huỳnh quang
tế bào được mô tả trong Thông tin hỗ trợ Hình 2. Hình 4 cho thấy sự
xâm nhập của bạch cầu đã tăng lên ở chuột Foxp3.LuciDTR-4 sau khi
cạn kiệt Treg. Cụ thể, CD41Tế bào t
xâm nhập tăng khoảng bốn lần trong nhóm DTR-4, trong khi
CD81Các tế bào T xâm nhập mạnh hơn khoảng tám lần (Hình 4B
và C). Khoảng 60% CD8 trong khối u này1Các tế bào T đang sinh
sôi nảy nở theo biểu hiện của Ki67, trong khi đó ở các nhóm điều
trị khác có ít sự tăng sinh hơn và rất ít sự tăng sinh ở các hạch
bạch huyết dẫn lưu khối u (Hình 4D). Ngoài ra, khoảng 15% CD8
trong khối u1Các tế bào T tạo ra phân tử hiệu ứng IFN-gtrong
Treg cạn kiệt Foxp3.LuciDTR-4 chuột sautrong ống nghiệmkích
thích lại. Trong các cơ quan bạch huyết ngoại vi, IFN-gsản xuất
thấp (Hình 4E). Biểu đồ FACS đại diện được trình bày trong
Thông tin hỗ trợ Hình 3.
Chúng tôi đã chỉ ra trong Hình 3B rằng sự đào thải khối u được thực
hiện qua trung gian CD81Các tế bào T, có khả năng đặc hiệu cho kháng
nguyên khối u thay thế ovalbumin. Do đó, chúng tôi đã điều tra xem liệu
các tế bào T OVAspecific có hiện diện trong khối u xâm nhập hay không.
Hình 5A và B cho thấy sau khi suy giảm 90% Treg, khoảng 10% khối u
xâm nhập CD81Các tế bào T đặc hiệu cho khối u như được chứng minh
bằng cách nhuộm với các ngũ phân tử Kb/SIINFEKL cụ thể, trong khi ở các
nhóm PC-61 và DTR-3, chỉ một phần nhỏ của CD81Các tế bào T đặc hiệu
cho OVA. Thật thú vị, các cơ quan bạch huyết bao gồm các hạch bạch
huyết dẫn lưu khối u không chứa số lượng tế bào dương tính với
pentamer tăng lên. Do đó, các tế bào T đặc hiệu cho khối u

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335
Hình 3.CD81Các tế bào T chịu trách nhiệm hồi quy khối u sau khi cạn kiệt 90%
Treg. (A, B) 9 ngày sau khi cấy MO4, Treg đã cạn kiệt ở chuột Foxp3.LuciDTR-4
bằng ứng dụng DT. Đồng thời với việc tiêm DT, CD41Tế bào T, CD81Tế bào T
hoặc tế bào NK bị cạn kiệt khi tiêm ip kháng thể kháng CD4 1 mg GK1.5, 500tôi
g kháng thể kháng CD8 2,43 hoặc 1 mg kháng thể kháng NK1.1 PK163. Việc
tiêm kháng thể lặp lại được thực hiện vào các ngày 12, 15 và 18 theo chỉ định
của các mũi tên. Điều trị bằng kháng thể kiểm soát isotype 1 mg (Rat IgG) được
dùng làm đối chứng. (A) Suy giảm CD41Tế bào T, CD81Tế bào T và tế bào NK
trong khối u vào ngày thứ 12 được mô tả là tần số của bạch cầu thâm nhiễm
khối u (TILs). Dữ liệu có ý nghĩa7SEM của ba con chuộtmỗinhóm và là đại diện
của hai thí nghiệm độc lập. ( B ) Đường cong tăng trưởng của khối u MO4. Dữ
liệu có ý nghĩa7SEM của sáu con chuộtmỗinhóm và là đại diện của hai thí
nghiệm.
đã có mặt một cách chọn lọc trong các khối u sau khi cạn kiệt Treg ở mức
độ cao.
Bình thường hóa mạch máu khối u sau khi cạn kiệt Treg
mức độ cao
Các kết quả được trình bày cho đến nay chỉ ra rằng sự suy giảm 90% Treg, nhưng
không phải là sự suy giảm 70%, dẫn đến việc tạo ra CD8 đặc hiệu cho khối u1
Tế bào T và xâm nhập mạnh mẽ dẫn đến phá hủy các khối u lớn. Trong
các nghiên cứu trước đây, chúng tôi đã quan sát thấy rằng mạch máu
khối u bất thường cản trở sự xâm nhập của tế bào T, trong khi mạch máu
bình thường hóa cho phép tế bào T xâm nhập [12, 32, 33]. Do đó, chúng
tôi đã điều tra xem liệu những thay đổi gây ra trong môi trường vi mô
khối u do sự suy giảm Treg trên diện rộng có gây ra việc tu sửa mạch
máu khối u hay không. Đối với những nghiên cứu này, người ta đã cẩn
thận sử dụng các khối u ngày 12, có cùng kích thước ở chuột cạn kiệt Treg
và chuột không cạn kiệt để những thay đổi trong mạch máu không thể
quy cho kích thước khối u khác nhau. Các mạch máu khối u được hiển thị
bằng kính hiển vi huỳnh quang sử dụng FITC-liên hợp
&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
NỔI BẬT 3329
lectin cà chua. Hình 6A cho thấy mạch máu của các khối u MO4
không được điều trị hiển thị một kiểu hình bất thường với các mạch
máu lớn và giãn ra, thường được quan sát thấy ở các khối u của loài
gặm nhấm và người. Sự suy giảm 70% Treg bằng kháng thể PC-61
hoặc bằng DT trong Foxp3. Chuột LuciDTR không làm thay đổi cấu
trúc bình bất thường này. Ngược lại, sự suy giảm 90% Treg ở chuột
Foxp3.LuciDTR-4 dẫn đến bình thường hóa mạch máu khối u, được
biểu thị bằng việc giảm số lượng mạch giãn lớn và tăng số lượng
mạch có đường kính nhỏ (Hình 6B và C) . Các mạch máu khối u giãn
ra thường dễ vỡ, gây rò rỉ, thường được quan sát thấy là xuất huyết
trong khối u. Đây cũng là trường hợp của các khối u MO4 (Hình 6D).
Sau khi cạn kiệt 90% Treg, số vùng xuất huyết đã giảm đáng kể, phù
hợp với quan niệm rằng sự suy giảm Treg rộng rãi gây ra sự bình
thường hóa của mạch máu khối u. Cho đến nay, người ta vẫn chưa
hiểu đầy đủ làm thế nào quá trình bình thường hóa mạch máu khối
u tăng cường sự xâm nhập của tế bào T, nhưng người ta đã xác định
rõ rằng sự biểu hiện của các phân tử bám dính như VCAM-1 và
ICAM-1 trên các tế bào nội mô là một yếu tố quan trọng trong quá
trình di căn. quá trình [9]. Thật vậy, CD311
các tế bào nội mô thu được từ các khối u sau khi cạn kiệt 90%
Treg đã được tìm thấy để hiển thị mức VCAM-1 và ICAM-1 tăng
lên, trong khi không thấy sự gia tăng nào như vậy ở các nhóm
điều trị khác (Hình 6E).
Cuộc thảo luận
Trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đã điều tra xem liệu mức độ suy
giảm Treg có quan trọng đối với sự can thiệp vào sự phát triển của các
khối u đã hình thành hay không. Sự suy giảm khoảng 70% Treg ở chuột
Foxp3.LuciDTR-3 hoặc với kháng thể kháng CD25 PC-61 không thể làm
giảm sự phát triển của khối u. Ngạc nhiên thay, khi mức độ loại bỏ Treg
được nâng lên 90% bằng cách sử dụng dòng chuột Foxp3.LuciDTR-4,
người ta đã quan sát thấy sự hồi phục hoàn toàn ngay cả đối với các khối
u lớn. Hơn nữa, những con chuột thoái hóa có khả năng chống lại thử
thách thứ hai với cùng một khối u cho thấy hệ thống miễn dịch đã được
kích hoạt hiệu quả dẫn đến việc tạo ra bộ nhớ dành riêng cho kháng
nguyên. Các phát hiện cho thấy sự suy giảm Treg gây ra ít nhất hai quá
trình riêng biệt rất quan trọng đối với việc đào thải khối u, đó là kích hoạt
CD8 dành riêng cho khối u.1Tế bào T và tăng cường thâm nhiễm bạch cầu
vào khối u, đặc biệt là CD81tế bào T. Phần lớn CD8 trong khối u1
Các tế bào T sinh sôi nảy nở mạnh mẽ và một phần đáng kể (15%) đã
tạo ra phân tử hiệu ứng IFN-g.Hơn nữa, khoảng 10% CD8 trong khối
u1Các tế bào T đặc hiệu cho kháng nguyên khối u OVA. Rõ ràng, CD4
1Các tế bào T không cần thiết để loại bỏ khối u, vì chỉ có sự cạn kiệt
của CD81, chứ không phải CD41Tế bào T hủy bỏ tác dụng chống ung
thư. Thật thú vị, xâm nhập và CD81Các chức năng của tế bào T chỉ
được quan sát thấy sau khi cạn kiệt 90% Treg, trong khi sự suy giảm
70% Treg không thể tạo ra tác dụng chống khối u đáng kể, cho thấy
rằng 30% Treg còn lại là đủ để kiểm soát các phản ứng chống khối u.
Việc so sánh kháng thể chống CD25 PC-61 và chuột Foxp3.LuciDTR-3
cho thấy phản ứng chống khối u không hiệu quả thực sự là do mức
độ cạn kiệt thấp hơn chứ không phải do các tác động thứ cấp như sự
xâm nhập của kháng thể vào tế bào không hiệu quả. khối u. Cần lưu
ý rằng
www.eji-journal.eu
3330 Xingrui Li và cộng sự. Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335

Hinh 4.Tăng thâm nhiễm vào các khối u sau khi cạn kiệt 90% Treg. Tám ngày sau khi cấy MO4, Treg đã cạn kiệt do xử lý PC-61 hoặc DT. Sáu ngày sau khi cạn kiệt
Treg, các huyền phù đơn bào đã được chuẩn bị từ tổng số khối u và được phân tích bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Chiến lược chọn lọc được mô tả
trong Thông tin hỗ trợ Hình 1. Số lượng (A) tổng số bạch cầu CD45.2, (B) CD41Tế bào T và (C) CD81tế bào T. (D) Sự tăng sinh của CD81Các tế bào T rút cạn LN (dLN)
và khối u sau khi cạn kiệt Treg, được đo bằng biểu hiện của dấu hiệu tăng sinh Ki67. (E) Huyền phù đơn bào từ lá lách (SPL), không dẫn lưu (ndLN) và LN dẫn lưu
(dLN) và các khối u được kích thíchtrong ống nghiệmvới PMA/Ionomycin với sự hiện diện của monensin (GolgiStop) trong 4 giờ. Sau đó, tần số của IFNg-sản xuất
CD81Các tế bào T được xác định bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Dữ liệu có ý nghĩa7SEM của ba con chuộtmỗinhóm và đại diện của ba thí nghiệm.Po0,01
và ---Po0,001 (ANOVA một chiều).

Sự suy giảm 90% Treg gây ra hồi quy khối u mặc dù thực tế là khoang
Treg đã phục hồi hoàn toàn sau khoảng 10–14 ngày do sự mở rộng cân
bằng nội môi của Treg âm tính 10% DTR còn sót lại. Vì Treg mở rộng cân
bằng nội môi được biết là thể hiện hoạt động ức chế đầy đủ hoặc thậm
chí được tăng cường [31], nên có vẻ như khoang Treg được phục hồi
không thể kiểm soát phản ứng chống ung thư đang diễn ra. Lý do chính
xác vẫn chưa được biết, nhưng có thể sự cân bằng giữa số Treg và tế bào
hiệu ứng T là rất quan trọng. Ngoài ra, có thể hình dung rằng Treg mạnh
hơn trong việc kiểm soát kích hoạt các tế bào T ngây thơ hơn là trong việc
điều chỉnh các tế bào T effector.
Mặc dù CD8 đặc hiệu cho khối u1Các tế bào T chỉ được quan sát thấy trong khối u
chứ không phải trong hạch bạch huyết dẫn lưu khối u, vị trí chính xác kích hoạt tế bào
T không rõ ràng. Phù hợp với quan điểm được chấp nhận chung
rằng các cơ quan bạch huyết là vị trí quan trọng nhất để kích hoạt tế bào
T, một kịch bản có thể được hình dung trong đó kháng nguyên khối u dẫn
lưu đến hạch bạch huyết dẫn đến sự kích hoạt mạnh mẽ các tế bào T đặc
hiệu của khối u khi không có Treg. Các tế bào T được kích hoạt sau đó sẽ
di chuyển vào khối u, nơi mà số lượng của chúng sẽ tăng lên do sự tăng
sinh mạnh mẽ. Ngoài ra, hoặc ngoài ra, việc kích hoạt cũng có thể được
tạo ra trong chính khối u bằng các tế bào trình diện kháng nguyên trong
khối u, được hỗ trợ bởi môi trường vi mô gây viêm được tạo ra bởi sự suy
giảm Treg. Trong bối cảnh này, mồi tế bào T trong môi trường vi mô khối
u đã được đề xuất gần đây [34]. Do đó, tầm quan trọng tương đối của
Treg trong khối uđấu vớidẫn lưu hạch không rõ ràng.
Cơ chế tăng thâm nhiễm khối u sau khi suy giảm Treg vẫn chưa
được hiểu rõ, nhưng sự bình thường hóa quan sát được của mạch
máu dường như đóng một vai trò quan trọng. Trong một lần trước

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335 NỔI BẬT 3331

Hình 5.Tăng tần suất CD8 đặc hiệu cho khối u1Các tế bào T trong các khối u sau khi cạn kiệt 90% Treg. Tần suất của CD8 dành riêng cho OVA1Các tế bào T trong lá
lách, không dẫn lưu (ndLN) và LN dẫn lưu (dLN) và các khối u của chuột mang MO4 được xác định bằng phương pháp nhuộm tế bào học dòng chảy bằng cách sử
dụng các pentamer Kb/SIINFEKL 6 ngày sau khi cạn kiệt Treg (A) nhuộm tế bào học dòng đại diện của khối u -xâm nhập CD81Các tế bào T và (B) dữ liệu tổng hợp từ
các mô được chỉ định được hiển thị. Dữ liệu có ý nghĩa7SEM của bốn con chuộtmỗinhóm và là đại diện của ba thí nghiệm độc lập.
---
Po0,001 (ANOVA một chiều).

nghiên cứu sử dụng mô hình insulinoma Rip.Tag-5 tự phát, chuyển giao
tế bào T nuôi dưỡng được kết hợp với kích hoạt hàng rào nội mô khối u
bằng chiếu xạ. Phương pháp điều trị kết hợp này dẫn đến sự thâm nhiễm
tế bào T được tăng cường mạnh mẽ vào các khối u, điều này có liên quan
đến việc bình thường hóa hệ thống mạch máu của khối u [32] nhưng
không rõ liệu sự gia tăng thâm nhiễm tế bào T có liên quan nhân quả đến
quá trình bình thường hóa mạch máu hay không. Một liên kết như vậy đã
được cung cấp trong một nghiên cứu khác [12]. Loại bỏ gen điều hòa tín
hiệu protein G-5 (RGS-5), được phát hiện là biểu hiện quá mức bởi mạch
máu insulinoma, không chỉ dẫn đến bình thường hóa mà còn tăng cường
thâm nhiễm khối u bởi các tế bào T được chuyển giao sau đó. Do đó, quá
trình chuẩn hóa dường như cho phép tế bào T xâm nhập mạnh mẽ. Vì
thế, có thể quá trình chuẩn hóa được quan sát thấy sau khi cạn kiệt Treg
trên diện rộng cũng có thể tạo điều kiện cho sự xâm nhập. Sự biểu hiện
gia tăng của các phân tử bám dính VCAM-1 và ICAM-1 trên mạch máu
được chuẩn hóa được quan sát thấy trong nghiên cứu này phù hợp với
quan điểm này.
Có bằng chứng cho thấy việc bình thường hóa hệ thống mạch
máu của khối u và sự gia tăng đồng thời quá trình oxy hóa khối u
giúp tăng cường hiệu quả điều trị của xạ trị và hóa trị liệu khối u
[10]. Nghiên cứu hiện tại, cùng với các công trình đề cập ở trên của
Gansset al. [32] và Hamzah và cộng sự [12] sẽ thêm các tế bào T vào
danh sách các phương thức điều trị ung thư có lợi từ việc bình
thường hóa mạch máu khối u. Tuy nhiên, nó vẫn là một thách thức
lớn để làm sáng tỏ các quá trình tế bào và phân tử liên quan đến việc
tái lập mô hình mạch máu khối u và cơ chế thay đổi sự xâm nhập của
tế bào T điều chỉnh mạch máu.
Đối với sự suy giảm Treg ở người, một số thuốc thử được sử
dụng như CY [35], protein tổng hợp IL-2 DT Denileukin diftitox
hoặc ONTAK [36–39], nhưng mức độ suy giảm Treg vẫn còn hạn
chế (khoảng 50%). Cũng tồn tại các kháng thể trực tiếp chống lại
phân tử CD25 của con người,ví dụdaclizumab. Ban đầu, những
kháng thể này đã được phát triển để loại bỏ CD251Các tế bào T
effector và do đó được sử dụng lâm sàng để điều trị bệnh đa xơ
cứng và ngăn ngừa thải ghép [40–44]. Các nghiên cứu gần đây
với một số bệnh nhân ung thư hạn chế chỉ ra rằng daclizumab
có thể làm giảm tần suất Foxp31
Treg trong máu ngoại vi, nhưng hiệu quả điều trị bằng kháng thể
này vẫn chưa được xác định [36, 45]. Mặc dù có nhiều tiến bộ trong
việc phát triển thuốc thử để loại bỏ Treg ở người, nhưng kết quả
được trình bày trong nghiên cứu này cho thấy rằng đối với liệu pháp
miễn dịch lâm sàng cho các khối u, mức độ suy giảm Treg cao sẽ
được mong muốn để tăng cường mạnh mẽ các phản ứng chống ung
thư,ví dụ kết hợp với tiêm phòng.
Nguyên liệu và phương pháp
Chuột
Chuột C57BL/6N (B6) được mua từ Phòng thí nghiệm Charles
River (Wilmington, MA, USA). Chuột chuyển gen Foxp3.LuciDTR-3
và Foxp3.LuciDTR-4 BAC được tạo ra trong

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

3332 Xingrui Li và cộng sự. Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335

Hình 6.Chín mươi phần trăm sự suy giảm Treg gây ra sự bình thường hóa của mạch máu khối u. (A) Mạch máu của các khối u phù hợp với kích thước sau khi cạn
kiệt Treg đã được kiểm tra bằng kính hiển vi huỳnh quang đồng tiêu sau khi nhuộm bằng FITC-cà chua của bốn khối umỗinhóm. Hai phần khối u đại diện từ mỗi
nhóm điều trị được hiển thị (độ phóng đại 100; thanh tỷ lệ: 40tôim). ( B ) Đường kính tàu trung bình được theo dõi trong các khối u phù hợp với kích thước từ chuột
đối chứng và chuột cạn kiệt Treg. Tàu từ bốn lĩnh vựcmỗikhối u đã được đếm và nhóm thành ba loại đường kính (o10, 10–20 và420tôiđường kính m). Thanh hiển
thị tỷ lệ phần trăm của các mạch trong mỗi loại là trung bình của bốn khối umỗinhóm. (C) Mật độ tàu được xác định bằng cách đếm các tàu trong bốn lĩnh vựcmỗi
khối u. Thanh hiển thị số tàumỗi filĩnh vực như có nghĩa là7SEM của bốn khối u mỗinhóm. (D) Các phần khối u không nhuộm màu trước (trái) và sau (phải) Sự suy
giảm Treg (độ phóng đại 25; thanh tỷ lệ: 200tôim). Các tế bào khối u ác tính MO4 được đặc trưng bởi màu đen của chúng; vùng xuất huyết màu hồng. (E) Biểu hiện
của ICAM-1 và VCAM-1 trong các khối u sau khi cạn kiệt Treg: Huyền phù tế bào khối u được chuẩn bị 6 ngày sau khi cạn kiệt Treg và được phân tích bằng phương
pháp tế bào học dòng chảy cho các mức biểu hiện ICAM-1 và VCAM-1 trên CD45.2-CD311tế bào nội mô. Thanh biểu thị MFI là trung bình7SEM của sáu con chuột
mỗinhóm. -Po0,05, --Po0,01, ---Po0,001 (ANOVA một chiều (C), của Sinh viênt-kiểm tra (E)).

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335
phòng thí nghiệm. Foxp3.LuciDTR-3 và Foxp3.LuciDTR-4 thể hiện các
mức độ khác nhau của cấu trúc BAC và do đó hiển thị các mức độ
suy giảm Treg khác nhau sau khi xử lý DT (lần lượt là 70 và 90–95%)
[31]. Động vật được giữ trong điều kiện không có mầm bệnh cụ thể.
Tất cả các thí nghiệm được thực hiện theo các hướng dẫn và quy
định của chính phủ và thể chế (Regierungspräsidium Karlsruhe, giấy
phép số 35-9185.81/G-98/08).
Thách thức khối u và suy giảm tế bào ở chuột
Đối với các nghiên cứu về khối u, u hắc tố B16 biểu hiện albumin
hình bầu dục (MO4) và u tuyến ức RMA biểu hiện thẻ (RMA.Tag)
đã được sử dụng. Loại thứ hai được tạo ra bằng cách truyền
kháng nguyên SV40 largeT (Thẻ) vào các tế bào RMA. Tổng cộng,
4-105các tế bào khối u được cấy vào vùng bụng hoặc lưng dưới.
Kích thước khối u được đo bằng thước cặp cứ sau 3 ngày và thể
tích khối u được tính theo công thức: Thể tích50,5-LW2[46]. Đối
với sự cạn kiệt Treg, chuột B6 được xử lý ip với 500tôig chuột
PC-61 kháng thể kháng CD25 hoặc Foxp3.LuciDTR được tiêm ip
trong hai hoặc ba ngày liên tiếp với DT 15 ng/g trọng lượng cơ
thể (Sigma-Aldrich, Steinheim, Đức). Điều trị DT được bắt đầu 8–
9 ngày sau khi cấy ghép khối u khi các khối u có thể tích khoảng
60–250 mm3.
Đối với sự cạn kiệt của các tế bào NK, 1 mg kháng thể kháng
NK1.1 (PK163-3-6) đã được tiêm ip 3 ngày một lần. CD41Các tế bào T
đã cạn kiệt khi tiêm 1 mg kháng thể kháng CD4 (GK1.5) cứ sau 3
ngày và CD81Tế bào T cạn kiệt 500tôigMột-Kháng thể CD8 (2,43)
được tiêm ip cứ sau 4 ngày. Tất cả các kháng thể cạn kiệt đã được
mua từ BioXcell (Tây Lebanon, Hoa Kỳ).
BLI
Đối với BLI của Treg trong khối u, các tế bào RMA.Tag được cấy vào
vùng lưng dưới. Chuột mang khối u được cạo lông và chụp ảnh 5
phút sau khi tiêm ip 4,5 mgĐ.-luciferin (SynChem, Elk Grove Village,
IL, USA) sử dụng hệ thống hình ảnh IVIS 100 (Xenogen, Hopkinton,
MA, USA) như đã mô tả trước đây [31, 47]. Phân tích được thực hiện
với phần mềm LivingImage (v2.50, Xenogen). Sản lượng ánh sáng
được định lượng là đơn vị ánh sáng tương đối.
Dòng tế bào học, nhuộm pentamer và định lượng tế bào sản
xuất IFNg
Tổng cộng, 1–5-106các tế bào được nhuộm bằng các kháng thể
được đánh dấu biotin hoặc kết hợp với fluorochrom sau đây (BD
Bioscatics, Heidelberg, Đức hoặc eBioscience, Hatfield, UK hoặc
BioLegend, Uithoorn, Hà Lan): CD4 (RM4-5 hoặc GK1.5), CD8 (53
–6.7), Foxp3 (FJK-16s), CD25 (PC-61 hoặc 7D4), Ki67 (B56), CD45.2
(104), IFN-g(XMG1.2), VCAM-1 (429) và ICAM-1 (YN1/1.7.4).
Streptavidin có nhãn Fluorochrom được lấy từ BD Bioscatics. Sự
tăng sinh tế bào được định lượng bằng cách sử dụng kháng thể
kháng Ki67 theo hướng dẫn của nhà sản xuất.
&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
NỔI BẬT 3333
(Khoa học Sinh học BD). Nhuộm FoxP3 được thực hiện theo
hướng dẫn của nhà sản xuất (eBioscience). CD8 đặc hiệu cho
albumin1Các tế bào T được định lượng bằng cách sử dụng K có
nhãn phycoerythrinb/SIINFEKL pentamers theo hướng dẫn của
nhà sản xuất (ProImmune, Oxford, UK). Để xác định IFN-g sản
xuất bởi CD81Tế bào T, tế bào được nuôi cấy trong môi trường
hoàn chỉnh RPMI 1640 bổ sung 10% FBS, 2,0 mML- glutamine, 50
mM 2-mercaptoethanol, 100 U/mL penicillin và 100 mg/mL
streptomycin trong các đĩa 96 giếng nuôi cấy. Các tế bào được
kích thích bằng cách bổ sung PMA (50 ng/mL) và ionomycin (500
ng/mL) cùng với GolgiStop (Khoa học sinh học BD). Sau 4 giờ ở
371C, các tế bào được nhuộm cho CD8 bề mặt và sau đó cho
IFN- nội bàogsử dụng bộ BD Cytofix/Cytoperm (BD Bioscatics).
Trong mọi trường hợp, các mẫu được phân tích bằng phương pháp tế
bào học dòng chảy loại trừ các tế bào chết bằng cách sử dụng propidium
iodide (Sigma-Aldrich), ethidium monoazide (Invitrogen, Darmstadt, Đức)
hoặc Fixable Viability eFluor780 (eBioscience). Các mẫu được phân tích
trên máy đo dòng chảy BD FACSCanto II (BD Bioscatics) và được đánh giá
bằng phần mềm FlowJo Mac v8.8.6 (Tree Star, Ashland, OR, USA).
Mô học và kính hiển vi quét laser đồng tiêu
Chuột được tiêm vào tĩnh mạch 100tôig của nhãn FITC Lycopersicon
esculentumlectin (Phòng thí nghiệm Vector) trong PBS. Sau 3 phút
lưu thông, chuột được tưới máu tim với 4% paraformaldehyde trong
PBS. Các cơ quan được nhúng trong 36% albumin / 3% gelatine và
100-tôim cryosections đã được chuẩn bị. Máy chụp ảnh quang học
được chụp bằng kính hiển vi đồng tiêu Zeiss LSM 710 ConfoCor 3 với
phần mềm ZEN 2009 Image Browser. Kích thước tàu được định
lượng bằng phần mềm ImageJ (đường kính trung bình mỗitàu) và
được phân loại theo ba nhóm kích thước đường kính (nhỏ: o10tôim,
trung bình: 10–20tôim, lớn420tôim).
Phân tích thống kê
Kết quả được hiển thị dưới dạng trung bình7SEM. So sánh giữa hai
nhóm được thực hiện bởi Student'st-Bài kiểm tra. So sánh giữa ba
hoặc nhiều nhóm được thực hiện bằng ANOVA một chiều. Dữ liệu
được phân tích bằng cách sử dụng Prism 5 (GraphPad).Pcác giá trị
nhỏ hơn 0,05 được coi là có ý nghĩa thống kê.
Sự nhìn nhận:Các tác giả cảm ơn Christine Schmitt-Mbamunyo
và Martin Wühl vì sự trợ giúp kỹ thuật và Felix Bestvater từ Cơ sở
Kính hiển vi Ánh sáng DKFZ. Các tác giả cũng cảm ơn Birgit Vey
đã hỗ trợ chuẩn bị bản thảo. Công trình này được hỗ trợ bởi
CancerImmunoTherapy của EU (LSH-2004.2.2.0-5), Sander-
Stiftung Đức (cấp 2009.022.1) và Tumorzentrum Mannheim–
Heidelberg (D10027963). Eterpi
www.eji-journal.eu
3334 Xingrui Li và cộng sự. Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335

Kostareli là người nhận học bổng từ Quỹ phúc lợi công cộng 15Wan, S., Xia, C. và Morel, L.,IL-6 được sản xuất bởi các tế bào đuôi gai từ bệnh lupus-

Alexander S. Onassis, Hy Lạp (F-ZF 044/2009- 2010). chuột nằm sấp ức chế CD41CD251Chức năng điều hòa của tế bào T.J. miễn dịch.
2007.178:271–279.

16Woo, EY, Chu, CS, Goletz, TJ, Schlienger, K., Yeh, H., Coukos, G.,
Xung đột lợi ích:Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích Rubin, SCet al.,CD4 quy định(1)CD25(1)Tế bào T trong khối u của bệnh nhân ung

tài chính hoặc thương mại. thư phổi không phải tế bào nhỏ giai đoạn đầu và ung thư buồng trứng giai đoạn
cuối.Ung thư Res.2001.61:4766–4772.

17Liyanage, UK, Moore, TT, Joo, HG, Tanaka, Y., Herrmann, V., Doherty,
G., Drebin, JAet al.,Tỷ lệ tế bào T điều tiết tăng lên trong máu ngoại vi và môi
Người giới thiệu trường vi mô khối u của bệnh nhân ung thư biểu mô tuyến tụy hoặc vú.J. miễn
dịch.2002.169:2756–2761.
1Clemente, CG, Mihm, MC Jr., Bufalino, R., Zurrida, S., Collini, P. và
18Curiel, TJ, Coukos, G., Zou, L., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P.,
Cascinelli, N.,Giá trị tiên lượng của các tế bào lympho xâm nhập khối u trong giai đoạn
Evdemon-Hogan, M.et al.,Việc tuyển dụng cụ thể các tế bào T điều tiết trong ung thư biểu
tăng trưởng theo chiều dọc của khối u ác tính ở da nguyên phát.Bệnh ung thư1996.77:
mô buồng trứng thúc đẩy đặc quyền miễn dịch và dự đoán khả năng sống sót giảmtự
1303–1310.
nhiên y tế.2004.10:942–949.
2Taylor, RC, Patel, A., Panageas, KS, Busam, KJ và Brady, MS,
19Hiraoka, N., Onozato, K., Kosuge, T. và Hirohashi, S.,Tỷ lệ
Các tế bào lympho thâm nhiễm khối u dự đoán sự tích cực của hạch bạch huyết ở
FOXP31Các tế bào T điều hòa tăng lên trong quá trình tiến triển của ung thư biểu
những bệnh nhân bị u ác tính ở da.J. Lâm sàng. ung thư.2007.25:869–875.
mô tuyến tụy và các tổn thương tiền ác tính của nó.lâm sàng. Ung thư Res. 2006.
3Pages, F., Berger, A., Camus, M., Sanchez-Cabo, F., Costes, A., Molidor, R., 12:5423–5434.
Mlecnik, B.et al.,Các tế bào T bộ nhớ hiệu quả, di căn sớm và sống sót trong ung
20Zou, W.,Tế bào T điều hòa, miễn dịch khối u và liệu pháp miễn dịch.tự nhiên
thư đại trực tràng.N. Anh. J. Med.2005.353:2654–2666.
Mục sư Immunol.2006.6:295–307.
4Galon, J., Costes, A., Sanchez-Cabo, F., Kirilovsky, A., Mlecnik, B.,
21Valzasina, B., Piconese, S., Guiducci, C. và Colombo, MP,khối u-
Lagorce-Pages, C., Tosolini, M.et al.,Loại, mật độ và vị trí của các tế bào miễn dịch
gây ra sự mở rộng của các tế bào T điều hòa bằng cách chuyển đổi CD41Tế bào
trong khối u đại trực tràng ở người dự đoán kết quả lâm sàng. Khoa học2006.313:
lympho CD25- không phụ thuộc vào tuyến ức và sự tăng sinh.Ung thư Res.2006.
1960–1964.
66:4488–4495.
5Piersma, SJ, Jordanova, ES, van Poelgeest, MI, Kwappenberg, KM,
22Zhou, G. và Levitsky, HI,Các tế bào T điều hòa tự nhiên và de novo-
van der Hulst, JM, Drijfhout, JW, Melief, CJet al.,Số lượng cao của CD8 trong biểu
các tế bào T điều hòa gây ra đóng góp độc lập vào khả năng dung nạp đặc hiệu
mô1tế bào lympho thâm nhiễm khối u có liên quan đến việc không có di căn hạch
của khối u.J. miễn dịch.2007.178:2155–2162.
ở bệnh nhân ung thư cổ tử cung giai đoạn đầu lớn.Ung thư Res.2007.67:354–361.
23Liu, VC, Wong, LY, Jang, T., Shah, AH, Park, I., Yang, X., Zhang, Q.
et al.,Khối u trốn tránh hệ thống miễn dịch bằng cách chuyển đổi CD41Tế bào
6Gao, Q., Qiu, SJ, Fan, J., Zhou, J., Wang, XY, Xiao, YS, Xu, Y.et al.,
CD25- T thành CD41CD251Các tế bào điều hòa T: vai trò của TGFbeta có nguồn
Cân bằng nội mô của các tế bào T điều tiết và gây độc tế bào có liên quan đến tiên
gốc từ khối u.J. miễn dịch.2007.178:2883–2892.
lượng ung thư biểu mô tế bào gan sau khi cắt bỏJ. Lâm sàng. ung thư. 2007.25:
2586–2593. 24Bắc, RJ,Liệu pháp miễn dịch nuôi dưỡng có sự hỗ trợ của cyclophosphamide đối với
một khối u đã hình thành phụ thuộc vào việc loại bỏ các tế bào T ức chế do khối u
7Lee, HE, Chae, SW, Lee, YJ, Kim, MA, Lee, HS, Lee, BL và Kim,
gây ra.J. Exp. y tế.1982.155:1063–1074.
sao,Ý nghĩa tiên lượng của loại và mật độ tế bào lympho xâm nhập khối u trong
ung thư dạ dày.anh J. Ung thư.2008.99:1704–1711. 25Matsushita, N., Pilon-Thomas, SA, Martin, LM và Riker, AI,
Các phương pháp so sánh về sự suy giảm tế bào T điều tiết trong mô hình khối u
số 8Sharma, P., Shen, Y., Wen, S., Yamada, S., Jungbluth, AA, Gnjatic, S.,
ác tính ở chuột.J. miễn dịch. phương pháp2008.333:167–179.
Bajorin, DFet al.,Các tế bào lympho thâm nhiễm khối u CD8 được dự đoán là sống sót
trong ung thư biểu mô tiết niệu xâm lấn cơProc. tự nhiên. học viện. Khoa học. Hoa Kỳ 26Sutmuller, RP, van Duivenvoorde, LM, van Elsas, A., Schumacher,
2007.104:3967–3972. TN, Wildenberg, TÔI, Allison, JP, Ngón chân, REet al.,Sự phối hợp của phong tỏa
kháng nguyên 4 liên quan đến tế bào lympho T gây độc tế bào và làm cạn kiệt
9Buckanovich, RJ, Facciabene, A., Kim, S., Benencia, F., Sasaroli, D.,
CD25(1)Các tế bào T điều hòa trong liệu pháp chống ung thư cho thấy các con
Balint, K., Katsaros, D.et al.,Thụ thể endothelin B làm trung gian cho hàng rào nội
đường thay thế để ức chế các phản ứng tế bào lympho T gây độc tế bào tự động.J.
mô để tế bào T di chuyển đến các khối u và vô hiệu hóa liệu pháp miễn dịch.tự
Exp. y tế.2001.194:823–832.
nhiên y tế.2008.14:28–36.
27Tanaka, H., Tanaka, J., Kjaergaard, J. và Shu, S.,Suy giảm CD41
10Jain, RK,Bình thường hóa mạch máu khối u: một khái niệm mới nổi trong
CD251các tế bào điều hòa làm gia tăng việc tạo ra các tế bào T miễn dịch đặc hiệu
liệu pháp chống tạo mạch.Khoa học2005.307:58–62.
trong các hạch bạch huyết dẫn lưu khối u.J. Miễn dịch.2002.25:207–217.
11Manzur, M., Hamzah, J. và Ganss, R.,Điều chế ''khối u máu''
28Onizuka, S., Tawara, I., Shimizu, J., Sakaguchi, S., Fujita, T. và
rào cản cải thiện liệu pháp miễn dịch.Chu kỳ tế bào2008.7:2452–2455.
Nakayama, E.,đào thải khối u bằngtrong cơ thể sốngsử dụng kháng thể đơn dòng
12Hamzah, J., Jugold, M., Kiessling, F., Rigby, P., Manzur, M., Marti, HH, kháng CD25 (interleukin-2 receptor alpha).Ung thư Res.1999.59: 3128–3133.
dại, T.et al.,Bình thường hóa mạch máu trong các khối u thiếu Rss5 thúc đẩy sự
phá hủy miễn dịchThiên nhiên2008.453:410–414.
29Quezada, SA, Peggs, KS, Simpson, TR, Shen, Y., Littman, DR và
13Sakaguchi, S.,CD25 biểu hiện Foxp3 phát sinh tự nhiên1CD41quy định- Allison, JP,Sự xâm nhập khối u hạn chế bởi các tế bào T effector được kích hoạt sẽ
tế bào T tory trong khả năng miễn dịch đối với bản thân và không phải bản thân.tự nhiên miễn hạn chế hoạt động điều trị của sự suy giảm tế bào T điều tiết chống lại khối u ác
dịch. 2005.6:345–352. tính đã hình thành.J. Exp. y tế.2008.205:2125–2138.

14Kim, JY, Kim, HJ, Hurt, EM, Chen, X., Howard, OM và Farrar, WL, 30Pilon-Thomas, S., Mackay, A., Vohra, N. và Mule, JJ,phong tỏa
Các phân tích chức năng và bộ gen của các tế bào Jurkat-T được tải nạp FOXP3 dưới dạng các tế phối tử chết được lập trình 1 giúp tăng cường hiệu quả điều trị của liệu pháp miễn
bào giống T (Treg) điều hòa.hóa sinh. lý sinh học. độ phân giải cộng đồng.2007.362: 44–50. dịch kết hợp chống lại khối u ác tính.J. miễn dịch.2010.184: 3442–3449.

&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim www.eji-journal.eu

Ơ. J. miễn dịch. 2010.40:3325–3335
31Suffner, J., Hochweller, K., Kuhnle, MC, Li, X., Kroczek, RA, Garbi, N.
và Hammerling, GJ,Các tế bào đuôi gai hỗ trợ mở rộng cân bằng nội môi của
Foxp31các tế bào T điều tiết ở chuột Foxp3.LuciDTR.J. miễn dịch.2010.184: 1810–
1820.
32Ganss, R., Ryschich, E., Klar, E., Arnold, B. và Hammerling, GJ,
Sự kết hợp giữa liệu pháp tế bào T và kích hoạt phản ứng viêm tạo ra sự tái cấu
trúc mạch máu và loại bỏ khối u.Ung thư Res.2002. 62:1462–1470.
33Garbi, N., Arnold, B., Gordon, S., Hammerling, GJ và Ganss, R.,CPG
các mô típ như các yếu tố tiền viêm làm cho các khối u autochthonous cho phép
xâm nhập và phá hủy.J. miễn dịch.2004.172: 5861–5869.
34Thompson, ED, Enriquez, HL, Fu, YX và Engelhard, VH,khối u
khối lượng lớn hỗ trợ sự xâm nhập, kích hoạt và biệt hóa tế bào T ngây thơ thành
các tác nhân.J. Exp. y tế.2010.207:1791–1804.
35Cao, Y., Zhao, J., Yang, Z., Cai, Z., Zhang, B., Zhou, Y., Shen, GXet al.,
CD41FOXP31sự suy giảm tế bào T điều tiết bằng cyclophosphamide liều thấp
ngăn ngừa tái phát ở những bệnh nhân có acuminata condylomata lớn sau khi
điều trị bằng laser.lâm sàng. miễn dịch.2010.136:21–29.
36Powell, DJ, Jr., Attia, P., Ghetie, V., Schindler, J., Vitetta, ES và
Rosenberg, SA,Giảm một phần FOXP3 của con người1tế bào T CD4trong cơ thể
sống sau khi sử dụng độc tố miễn dịch tái tổ hợp theo hướng CD25.J. Miễn dịch.
2008.31:189–198.
37Morse, MA, Hobeika, AC, Osada, T., Serra, D., Niedzwiecki, D., Lyerly,
HK và Clay, TM,Sự cạn kiệt các tế bào T điều tiết của con người đặc biệt tăng
cường các phản ứng miễn dịch đặc hiệu với kháng nguyên đối với vắc-xin ung thư.
Máu 2008.112:610–618.
38Dannull, J., Su, Z., Rizzieri, D., Yang, BK, Coleman, D., Yancey, D.,
Trương, A.et al.,Tăng cường khả năng miễn dịch chống ung thư qua trung gian vắc-xin ở
bệnh nhân ung thư sau khi cạn kiệt các tế bào T điều hòa.J. Lâm sàng. Đầu tư.2005. 115:
3623–3633.
39Mahnke, K., Schonfeld, K., Fondel, S., Ring, S., Karakhanova, S.,
Wiedemeyer, K., Bedke, T.et al.,Suy giảm CD41CD251tế bào T điều hòa của con người
trong cơ thể sống:động học của sự suy giảm Treg và thay đổi chức năng miễn dịchtrong
cơ thể sốngVàtrong ống nghiệm. quốc tế J. Cự Giải2007.120:2723–2733.
40Bielekova, B., Howard, T., Packer, AN, Richert, N., Blevins, G., Ohayon, J.,
Waldmann, TAet al.,Tác dụng của daclizumab kháng thể kháng CD25 trong việc ức
chế viêm và ổn định tiến triển bệnh trong bệnh đa xơ cứng.Vòm. thần kinh.2009.
66:483–489.
41Rose, JW, Burns, JB, Bjorklund, J., Klein, J., Watt, HE và Carlson, N.
G.,Thử nghiệm Daclizumab giai đoạn II trong tái phát và thuyên giảm bệnh đa xơ cứng:
MRI và kết quả lâm sàng.khoa thần kinh2007.69:785–789.
&2010 WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim
NỔI BẬT 3335
42Waldmann, hỗ trợ kỹ thuật,Anti-Tac (daclizumab, Zenapax) trong điều trị
bệnh bạch cầu, các bệnh tự miễn dịch và trong việc ngăn ngừa thải ghép đồng loại: một
cuộc phiêu lưu cá nhân kéo dài 25 năm.J. Lâm sàng. miễn dịch.2007.27:1–18.
43Wiseman, LR và Faulds, D.,Daclizumab: đánh giá về việc sử dụng nó trong
phòng ngừa thải ghép cấp tính ở bệnh nhân ghép thận.Thuốc1999. 58:1029–1042.
44Gonzalez, E., Gutierrez, E., Hernandez, Y., Rosello, G., Gutierrez, MJ,
Martinez, VÍ DỤ, Manzanera, MJet al.,Liệu pháp cảm ứng ức chế miễn dịch tuần tự
kháng thể đơn dòng kháng CD25 trong ghép thận có nguy cơ chậm trễ chức năng
ghép cao.quy trình cấy ghép2005.37: 3736–3737.
45Rech, AJ và Vonderheide, RH,Sử dụng lâm sàng kháng thể chống CD25
daclizumab để tăng cường phản ứng miễn dịch đối với việc tiêm vắc-xin kháng nguyên khối u
bằng cách nhắm mục tiêu các tế bào T điều hòa.Ann. Học viện NY. Khoa học.2009.1174:99–106.
46Tomayko, MM và Reynolds, CP,Xác định dưới da
kích thước khối u ở chuột thể thao (khỏa thân).Hóa trị ung thư. dược phẩm.1989.24: 148–
154.
47Miloud, T., Henrich, C. và Hammerling, GJ,So sánh định lượng
bấm bọ cánh cứng và đom đóm luciferase chotrong cơ thể sốnghình ảnh phát quang sinh học.
J. Sinh học. Opt.2007.12:054018.
Các từ viết tắt:BLI:hình ảnh phát quang sinh học -C Y:xiclophosphamid
- ĐT:độc tố bạch hầu -DTR:thụ thể độc tố bạch hầu -Foxp3: hộp nhân tố phiên
mã P3
Thư từ đầy đủ:Giáo sư Günter J. Hämmerling, Khoa Miễn dịch học Phân tử
(D050), Trung tâm Nghiên cứu Ung thư Đức (DKFZ), Im Neuenheimer Feld 280,
69120 Heidelberg, Đức
Số fax:149-6221-401629
e-mail: hammerling@dkfz.de
Địa chỉ hiện tại:Xingrui Li, Khoa Phẫu thuật Tổng quát, Bệnh viện Tongji,
Trường Cao đẳng Y tế Tongji, Đại học Khoa học và Công nghệ Huazhong, Vũ
Hán, Trung Quốc
Nhận: 24/9/2010
Sửa đổi: 10/1/2010
Chấp nhận: 10/7/2010
Bài viết được chấp nhận trên mạng: 27/10/2010
www.eji-journal.eu