CHAP 2. CSH TẾ BÀO - 232 - dịch

Machine Translated by Google
KHÓA HỌC: CƠ CHẾ SINH HỌC
CHƯƠNG 2: Cơ chế sinh học tế bào
Giảng viên: NGUYỄN THÁI HIỀN

MỤC TIÊU CỦA CHƯƠNG 2
1. Mô tả cấu trúc, chức năng của tế bào nhân chuẩn
2. Xác định hệ năng lượng của tế bào
3. Liệt kê các phương pháp đo tính chất cơ học của tế bào và phân tử sinh học
4. Liệt kê các mô hình hoạt động cơ học của tế bào
5. Xác định những thành phần nào tế bào cần để đáp ứng với kích thích cơ học.
Nội dung
2.1. Giới thiệu về cấu trúc tế bào nhân chuẩn.
2.2. Hệ thống năng lượng của tế bào.
2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào.
2.4. Tương tác ma trận tế bào.
2.5. Phương pháp đo tính chất cơ học của tế bào và
phân tử sinh học.
2.6. Các mô hình hoạt động cơ sinh học của tế bào.
2.7. Mechanotrans - dẫn truyền: tế bào cảm nhận và phản ứng như thế nào với các sự
kiện cơ học?
2.8. Kỹ thuật kích thích cơ học của tế bào.

2.1. Giới thiệu. đến cấu trúc tế bào nhân chuẩn

Tế bào nhân chuẩn chứa một vài hệ thống con chuyên biệt hoặc các bào quan
hợp tác để cho phép tế bào hoạt động:
Tường (màng). Những rào cản này chủ yếu được tạo thành từ lipid trong
sắp xếp hai lớp, được tăng cường bởi các protein chuyên biệt.
Một bộ khung (bộ xương tế bào): Cơ quan này bao gồm các cơ quan hình que dài
các phân tử gắn kết với nhau và với các bào quan khác bằng cách kết nối
phân tử.
Động cơ (ty thể). Các bào quan này sản xuất hầu hết các chất thiết yếu
phân tử chứa năng lượng từ một số chất nền nhất định như glucose. Sau đó
những phân tử chứa năng lượng này được sử dụng bởi các hệ thống con khác trong tế bào.
Trung tâm chỉ huy (nhân): các phân tử được tế bào tổng hợp chủ yếu là
chứa trong nhân, mặc dù có một lượng nhỏ ty thể
ADN.
Các nhà máy (lưới nội chất). Các trung tâm sản xuất này tổng hợp
phân tử sinh học cần thiết cho tế bào. Chúng nhận “lệnh” từ hạt nhân dưới dạng
của mARN.
Nhà máy đóng gói (bộ máy Golgi). Protein được sản xuất bởi nội chất
mạng lưới chưa “sẵn sàng cho thời kỳ quan trọng”. Họ thường phải trải qua một loạt
các bước gấp và sửa đổi sau dịch mã trước khi chúng có hoạt động sinh học.
Một hệ thống xử lý (lysosome). Hệ thống túi này chứa enzym
(protein xúc tác) có tác dụng phá vỡ các sản phẩm phụ của quá trình trao đổi chất, bị gấp nếp sai
protein, chất ngoại bào ăn vào và các chất không mong muốn khác.
2.2. Hệ thống năng lượng của tế bào
Ở cấp độ tế bào, các nhiệm vụ tiêu tốn năng lượng bao gồm:
Chuyển động, bao gồm cả sự thay đổi hình dạng tế bào và sự vận động của tế bào trên
cơ chất
Tổng hợp các hợp chất
Vận chuyển các ion và các phân tử khác trong tế bào và giữa tế bào
và môi trường xung quanh nó.
Tế bào có những “nhà máy năng lượng” chuyên biệt có thể sử dụng các hợp chất như glucose
và axit béo để tạo ra một phân tử chứa năng lượng chung mà tất cả các tế bào
bào quan có thể sử dụng. Phân tử phổ biến này là adenosine triphosphate (ATP), được hình thành
từ adenosine diphosphate (ADP) và phosphate ( ) trong phản ứng sau:
ADP+PO +năng
2-
3
lượng+2H
+
ATP
Năng lượng được lưu trữ trong liên kết hóa học giữa ADP và
Một chất tương tự cơ học là một lò xo, bắt đầu ở trạng thái không nén (ADP)
sau đó được nén lại và giữ cố định bằng một chốt . Vì vậy, ATP là
đồng tiền năng lượng chung trong tế bào.

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào

Bộ khung tế bào là một mạng lưới phức tạp gồm các protein dạng sợi có thể sử dụng một
phạm vi cấu hình đáng chú ý.
Thiết lập và duy trì hình dạng của tế bào.
Cho phép tế bào di chuyển (quá trình vận động).
Cung cấp độ bền cơ học và tính toàn vẹn cho tế bào.
Là trung tâm vận chuyển nội bào của các bào quan, đặc biệt là trong các tế bào lớn như
sợi trục.
Cần thiết trong quá trình phân chia tế bào.

Bộ khung tế bào bao gồm ba loại sợi, mỗi loại có một loại protein chuyên biệt
thành phần:
Sợi Actin (đường kính 7–

9 nm).
Các sợi trung gian (đường kính 10 nm) và các vi ống (khoảng 24 nm)
theo đường kính).
Các vi sợi hoặc – trong tế bào cơ xương – các sợi mỏng.
Sự tương tác giữa cả ba loại sợi giúp xác định cấu trúc của tế bào
hành vi máy móc.



2.3.1. Sợi actin
Actin tồn tại trong tế bào ở hai dạng, dưới dạng protein hình cầu (G-actin) và dưới dạng
protein dạng sợi (F-actin).
G-actin có trọng lượng phân tử khoảng 43 kDa và bao gồm một đơn
chuỗi polypeptide. G-actin đơn phân liên kết một Ca2+ và một phân tử ATP.
F-actin được hình thành do sự trùng hợp của G-actin làm cho ATP liên kết được
thủy phân thành ADP và ion photphat. ADP vẫn liên kết với tiểu đơn vị Actin
trong chuỗi F-actin.
Chuỗi F-actin là những cấu trúc động, phát triển và phân hủy theo
vị trí trong tế bào và các hoạt động của tế bào tại bất kỳ thời điểm nào.
Sợi F-actin bị phân cực, có đầu cuối nơi ưu tiên các monome G-actin
được thêm vào và phần cuối ở đó dây tóc đang phát triển chậm hoặc bị tháo rời.
2.3.1. Sợi actin
Actin tồn tại trong tế bào ở hai dạng, dưới dạng protein hình cầu (G-actin) và dưới
dạng protein dạng sợi (F-actin).
Các monome Actin riêng lẻ di chuyển dọc theo sợi, có xu hướng được thêm vào ở đầu + và
di chuyển đến đầu –, trong một quá trình được gọi là
chạy trên băng. Quá trình trùng hợp và phân hủy F-actin được điều hòa bởi một số protein,
bao gồm yếu tố khử polyme Actin/cofilin, các thành viên của họ protein gelsolin/villin
và CapZ.
Tuổi thọ của sợi Actin, chiều dài của sợi, tỷ lệ phần trăm Actin ở dạng polyme và số
lượng đầu gai thay đổi theo chức năng hoạt động của tế bào.
Các tế bào hợp lưu có xu hướng tương đối yên tĩnh, chỉ biểu hiện một lượng di chuyển
tế bào khiêm tốn. Tuổi thọ trung bình của sợi chỉ khoảng 8 phút và chỉ có khoảng 40%
Actin của tế bào hiện diện ở dạng polyme hóa

2.3.1. Sợi actin
Actin tồn tại trong tế bào ở hai dạng, dưới dạng protein hình cầu (G-actin) và dưới
dạng protein dạng sợi (F-actin).
F-actin tồn tại trong tế bào dưới nhiều dạng khác nhau. Trong tất cả các tế bào, nó hiện
diện ở một lớp mỏng sát màng tế bào, được gọi là lớp Actin vỏ não. Lớp này giúp gắn kết
các protein xuyên màng với protein tế bào chất và thường cung cấp độ bền cơ học cho tế
bào.
Trong nhiều tế bào, Actin còn hiện diện ở dạng bó dài chạy ngang qua tế bào, được gọi là
sợi stress. Các sợi căng thẳng có lẽ củng cố lớp Actin của vỏ não và cũng rất quan trọng
đối với việc vận chuyển các bào quan và vận động tế bào.
Cuối cùng, trong tế bào cơ xương, Actin rất phong phú và tương tác với các sợi myosin
(sợi dày) để tạo ra phức hợp Actin-myosin, chịu trách nhiệm co cơ.
2.3.1. Sợi actin
Do tầm quan trọng về cơ sinh học của nó, một số tác giả đã thực nghiệm
ước tính mô đun sợi F-actin của Young.
Chuyển hướng. 1. Tóm tắt các giá trị mô đun Young cho F-actin được đo
tác giả Phương pháp Mô đun ước tính của

Young (N/m2 )
Kojima Kim siêu nhỏ/sợi đơn 1,8 x 10 9
Huxley Ếch/cơ nhiễu xạ tia X 2,5 x 10 9
Higuchi Nhiễu xạ quang học/sợi cơ xương thỏ ~ 2 x 10 9
Ếch/cơ nhiễu xạ tia X Wakabayashi ~ 2 x 10 9


2.3.2. Sợi trung gian
Hiện tại có sáu loại protein sợi trung gian được biết đến. Mỗi lớp chứa
nhiều thành viên, do đó các sợi trung gian cùng nhau tạo thành một nhóm rất đa dạng
của các phân tử có biểu hiện đặc trưng cho loại tế bào. Ví dụ, các keratin được thể hiện
trong các tế bào biểu mô, trong khi các tế bào thần kinh đệm biểu hiện protein axit fibrillary thần kinh đệm (GFAP), tế bào thần kinh biểu hiện
các sợi thần kinh khác nhau và các tế bào nội mô biểu hiện vimentin.
Sinh học và cơ chế sinh học của các sợi trung gian chưa được hiểu rõ bằng
của vi sợi và vi ống. Chúng ta biết rằng các sợi trung gian ổn định hơn
hơn các thành phần khác của khung tế bào, mặc dù chúng có thể và thực sự làm thay đổi cấu hình của chúng
trong những hoàn cảnh thích hợp.


2.3.2. Sợi trung gian
Vì tính ổn định này nên chúng cung cấp một mạng lưới hỗ trợ cho tế bào; Ví dụ,
nhân được ổn định bởi mạng lưới các sợi trung gian được tạo thành từ Lamin.

2.3.3. Vi ống
Các vi ống là những cấu trúc hình trụ rỗng được tập hợp từ các dime của protein α-
tubulin và β-tubulin. Chúng là những cấu trúc năng động, có khả năng phát triển hoặc thu hẹp
ở mỗi đầu bằng cách thêm/loại bỏ các bộ điều chỉnh độ sáng.
Giống như F-actin, vi ống có tính phân cực: đầu + luôn hoạt động mạnh hơn đầu
đầu kia. In vitro dưới điều kiện thích hợp, các monome tubulin tự phát
trùng hợp để tạo thành một mạng lưới các sợi. mạng milar có mặt trong các tế bào.
Các vi ống đóng vai trò quan trọng trong cấu trúc của lông mao và tiên mao, nơi chúng cung cấp
độ cứng của cấu trúc và hỗ trợ tạo ra chuyển động. Các vi ống thường được liên kết
với các động cơ phân tử, là các protein được thiết kế để di chuyển dọc theo vi ống,
thường là để giúp vận chuyển một cái gì đó


2.3.3. Vi ống
Những động cơ phân tử này bao gồm:
Kinesin di chuyển về phía đầu + của ống thận.
Các dynein di chuyển về phía đầu – của ống thận.
Động cơ phân tử có thể được sử dụng cho nhiều mục đích hơn là chỉ vận chuyển vật liệu dọc theo
vi ống.
Các vi ống cũng đóng vai trò quan trọng trong quá trình phân chia tế bào, nơi chúng tạo thành một khối giống như cái giỏ.
mạng lưới được gọi là bộ máy phân bào. Để hoàn thành nhiệm vụ này, các vi ống
tự tổ chức xung quanh một cặp bào quan gọi là trung thể. Mỗi
trung thể chứa hai tập hợp vi ống được định hướng vuông góc với một
khác, được gọi là ly tâm.

2.4. Tương tác ma trận tế bào
Để hoạt động bình thường, tế bào phải gắn liền với chất nền và với với tế bào lân cận
người hàng xóm. Điều này không đơn giản như nó có vẻ. Nghĩ về mạch máu
tế bào nội mô trong một động mạch lớn: nó sống trên một chất nền biến dạng liên tục mà
nó phải tuân thủ trong khi vẫn duy trì sự tiếp xúc chặt chẽ với các tế bào nội mô lân cận .
Sơ đồ mặt cắt
ngang của roi
Có hai loại sự gắn kết mà các tế bào tạo ra: với các tế bào lân cận và với các tế bào của chúng.
chất nền.
Đầu tiên chúng ta phải tìm hiểu một chút về các chất ngoại bào cấu tạo nên tế bào
cơ chất. Vật liệu ngoại bào này là một hỗn hợp phức tạp của các polyme sinh học
được gọi chung là ma trận ngoại bào (ECM). Ngay liền kề
một số tế bào (ví dụ, tế bào nội mô, tế bào biểu mô, tế bào cơ, tế bào mỡ, Schwann
tế bào của hệ thần kinh), có một lớp chuyên biệt được gọi là lớp nền,
hoặc màng đáy, là vùng chuyên biệt của ECM.

Có hai loại sự gắn kết mà các tế bào tạo ra: với các tế bào lân cận và với các tế bào của chúng.
chất nền.
Nhìn chung, ECM rất phức tạp và bao gồm nhiều bộ phận có tính chuyên môn cao
đại phân tử. Một số thành phần quan trọng là:
Collagen.
Elastin.
Proteoglycan.
Hyaluronan.
Protein bám dính.

Collagen: là một loại protein dạng sợi giúp tạo cấu trúc và độ cứng cho mô. Nó là nhất
lượng protein dồi dào ở động vật có xương sống bậc cao
• Collagen loại I: tạo thành các bó cấu trúc lớn có trong gân,
dây chằng và các mô khác chịu tải trọng cơ học đáng kể; có cao
độ bền kéo (mô đun tiếp tuyến Young 1 × 109 Pa)
• Collagen loại IV: tạo thành các phức hợp hình chữ X liên kết với nhau tạo thành
mạng lưới sợi có tính liên kết cao; có nhiều ở màng đáy
• Collagen type VI: phân bố rộng khắp ECM, loại collagen này
dường như đóng vai trò trung gian giữa các collagen kẽ (loại I–
III)
và tế bào, giúp tế bào hình thành các chất gắn kết với chất nền xung quanh.
Elastin: Protein đàn hồi dạng sợi này có tác dụng mang lại độ đàn hồi và khả năng phục hồi cho mô. Nó
tuân thủ tốt hơn nhiều so với collagen (mô đun Young 3 × 104 Pa) và hiện diện
với số lượng đáng kể trong thành động mạch lớn, phổi và da.
Proteoglycans: là thuật ngữ chung biểu thị một loại protein có một hoặc nhiều
phía glycosaminoglycan (GAG, hợp chất polysaccharide tích điện âm)
dây chuyền. Các tính chất hóa lý của proteoglycan phần lớn là
được xác định bởi GAG, bản thân chúng là các polyme sinh học lớn được tạo thành từ
đơn vị lặp lại carbohydrate tích điện âm
Hyaluronan: Hyaluronan (còn gọi là hyaluronate và axit hyaluronic) là một
GAG ngoại bào khác thường ở chỗ không liên kết cộng hóa trị với protein, mặc dù
nó liên kết không cộng hóa trị với protein trong ma trận ngoại bào.
Protein bám dính: Laminin và fibronectin
• Laminin là một loại protein hình chữ thập có nhiều ở các lá cơ bản và liên kết với nhau
collagen loại IV và các phân tử ma trận khác; chúng là thành phần chính của
màng nền.
• Fibronectin: loại protein lớn này có các miền liên kết với collagen, liên kết với bề mặt tế bào
phân tử và heparin sulfat; nó là “keo đa năng” của ECM.
Khi các thành phần này được kết hợp với nhau sẽ tạo ra một cấu trúc tổng hợp .
• Collagen và Elastin hoạt động cùng nhau để mang lại sự toàn vẹn cơ học và cấu trúc mô, đồng thời
để cung cấp “giàn giáo” cơ học cho các tế bào thường trú.
• Hyaluronan và proteoglycan lấp đầy các khoảng trống và giữ nước trong mô. Các
vai trò của nước liên kết trong mô là rất quan trọng, vì điều này tạo ra con đường nhờ đó
chất dinh dưỡng và các loài khác được vận chuyển đến và đi từ tế bào.
Các tế bào biểu hiện các protein xuyên màng gọi là integrins chịu trách nhiệm liên kết với
thành phần cụ thể trong ma trận và gắn tế bào vào chất nền của nó. Các integrin là
các dị vòng (được hình thành bởi hai tiểu đơn vị khác nhau, chuỗi α và chuỗi β) có
extracellular binding domain, a transmembrane
miền liên kết ngoại bào, miền xuyên màng và miền tế bào chất.domain, and a cytosolic domain
Có ít nhất 22 loại integrin khác nhau ở động vật có vú, mỗi loại có đặc điểm riêng
nhận biết các miền liên kết trên collagen, laminin, fibronectin và/hoặc chất nền khác
protein. Miền tế bào của integrin liên kết với một nhóm protein lớn
được gọi là phức hợp bám dính tiêu điểm, từ đó gắn vào các sợi F-actin.
Bằng cách này, các sợi Actin của khung tế bào cuối cùng được kết nối với
chất nền sợi bên ngoài tế bào.

2.5. Phương pháp đo tính chất cơ học của tế bào và phân tử

sinh học
Để giúp hiểu được cơ chế sinh học tế bào, chúng ta cần dữ liệu thực nghiệm về
tính chất cơ học của từng tế bào như mô đun Young, mô đun cắt…
Việc đo lường độ bền cơ học của từng vật liệu cũng rất hữu ích.
các phân tử (ví dụ, sợi Actin) và các liên kết giữa các phân tử.
Làm thế nào để đo mô đun Young của một tế bào hoặc một phân tử?

sinh học
2.5.1. Kính hiển vi lực nguyên tử
Kính hiển vi lực nguyên tử (AFM) là một công cụ mạnh mẽ để đo lực và
chuyển vị ở cả quy mô phân tử và tế bào.
Độ lệch này có thể được đo bằng cảm biến
vị trí của chùm tia laser phản xạ khỏi
cánh tay đúc hẫng.
Bằng cách đặt tia laser thích hợp và
máy dò để tận dụng lợi thế của “quang học
hiệu ứng cánh tay ngang, độ dịch chuyển nhỏ hơn 1
nm có thể đo được

sinh học
AFM thường được sử dụng cùng với kính hiển vi quang học có thể được sử dụng
ví dụ: để trực quan hóa thời gian thực, giúp bản địa hóa đầu dò AFM trên mục tiêu
tế bào.
Một trong những lợi thế lớn của AFM là
việc tạo ảnh có thể được thực hiện trên các tế bào sống hoặc
các phân tử nguyên vẹn trong môi trường nước.
Điều này trái ngược với kính hiển vi có độ phân giải cao khác
kỹ thuật (ví dụ, kính hiển vi điện tử quét)
yêu cầu các mẫu phải được cố định và chụp ảnh trong một
gần chân không.

2.5. Phương pháp đo tính chất cơ học của tế bào

và các phân tử sinh học
Nếu cánh tay chỉ bị lệch một chút theo phương thẳng đứng thì có thể
coi như một lò xo tuyến tính có độ cứng kc .
Lực F cần thiết để tạo ra độ lệch dọc z có thể được viết là
F kzk. ;
c c
0,02 5 /N·m (1)
Năng lượng trung bình của một phân tử ở nhiệt độ tuyệt đối T được tính bằng kB .T/2
Chúng ta biết rằng năng lượng tích trữ trong một lò xo có độ cứng kc khi nó bị lệch đi một khoảng
z là 0,5kc z2 kB T
z (2) F kk TB c (3)
kc

sinh học
Mặc dù AFM có thể được sử dụng để chụp ảnh nhiều loại mẫu vật, nhưng ở đây chúng ta sẽ tập trung vào
trên các phép đo được thực hiện trên các tế bào bám dính. Đầu tiên hãy xem xét vấn đề “đơn giản” của
lập bản đồ địa hình của tế bào.
Chế độ đơn giản nhất trong số này được gọi là chế độ tiếp xúc, trong đó đầu dò được
được quét trên bề mặt tế bào theo mô hình giống như raster.
Tại mỗi vị trí raster, độ lệch của cánh tay đòn được đo (dựa trên
vị trí của chùm tia laze phản xạ) và vị trí thẳng đứng của cánh tay được điều chỉnh bằng
phần tử áp điện trong vòng phản hồi sao cho cánh tay đòn chịu tác động
độ lệch không đổi


sinh học
2.5.1. Kính hiển vi lực nguyên
tử Vì đã biết vị trí thẳng đứng của phần tử áp điện nên điều này
tạo ra một “bản đồ” địa hình ô, hay cụ thể hơn là một tập hợp các giá trị độ cao tại
mà tế bào tác dụng một lực phản ứng không đổi lên đầu dò.
Phương pháp đo địa hình tế bào này có một nhược điểm đáng kể: đầu dò
đầu thường tác dụng lực ngang lớn lên tế bào. Các lực ngang này có thể làm biến dạng hoặc
thậm chí làm hỏng các tế bào không cố định hoặc các mẫu vật “mềm” khác. Điều này đã dẫn đến sự phát triển
các chế độ quét phức tạp hơn.
Tuy nhiên, khi đầu dò tiếp cận tế bào, nó bắt đầu tương tác với tế bào.
làm thay đổi độ lớn dao động của cánh tay. Vị trí nơi sự thay đổi này
cường độ xảy ra là thước đo địa hình của ô ở vị trí bên đó.


sinh học
2.5.1. Kính hiển vi lực nguyên
tử Các phép đo thú vị khác có thể được thực hiện bằng AFM trên tế bào. Ví dụ,
Đầu dò có thể di chuyển theo chiều dọc về phía mẫu trong khi cánh tay đúc hẫng
độ lệch được đo. Điều này được gọi là “chế độ ánh xạ lực” và tạo ra một đường cong
của lực tác dụng so với độ lệch bề mặt.
Đây là một bài toán cổ điển trong cơ học tiếp xúc, được Hertz giải quyết vào năm 1882.
Kết quả quan trọng là độ lệch của tế bào ở tâm đầu dò, δ, do
một lực tác dụng F là

2
F 1
2
(4)
E
2 tân
trong đó E và là mô đun và tỷ lệ Poisson của ô và α là nửa góc hình nón đã biết

sinh học
Tóm tắt về giải pháp này hữu ích cho mục đích của chúng tôi:
F 1 2
F (5)
zz 0 kc E 2 tân
Ở đây z0 là chiều cao đầu dò tại đó lực tác dụng trở thành khác 0 và giá trị đầu tiên
số hạng ở bên phải tính đến độ lệch của cánh tay đòn. Bằng cách giả định
một giá trị cho (thường là 0,5), dữ liệu chuyển vị-lực đo được có thể phù hợp bằng
Phương trình (5) để thu được z0 và E.


sinh học
Đường cong lực mẫu để đo độ cứng tế bào của tiểu cầu được kích hoạt ở
người bằng kính hiển vi lực nguyên tử

sinh học
Chúng ta có thể mong đợi loại độ phân giải không gian tối đa nào với AFM? Đầu dò điển hình
bán kính đầu nhọn là 10–

50 nm, nhưng tiếc là độ phân giải ngang này không thể đạt được khi
đo độ cứng của tế bào.
Đó là do đầu dò chìm vào tế bào tương đối mềm và do đó
đo trên một diện tích lớn hơn chỉ là phần đầu. Mức độ ảnh hưởng này phụ thuộc vào
lực tác dụng và độ cứng của tế bào; các giá trị điển hình cho độ phân giải ngang nằm trong
phạm vi từ hàng chục đến vài trăm nanomet.
Giá trị này đủ nhỏ để cung cấp độ phân giải hợp lý khi ánh xạ độ cứng trên một ô.

sinh học
2.5.2. Bẫy quang học
Photon mang động lượng; do đó, khi ánh sáng chiếu vào một bề mặt sẽ xuất hiện
lực tác dụng lên bề mặt đó. Thông thường, ảnh hưởng này rất nhỏ và có thể
bị bỏ quên.
Tuy nhiên, đối với ánh sáng mạnh chiếu vào một hạt nhỏ, lực trong khoảng từ 1 đến 200
pN có thể được tạo ra. Sự mở rộng của khái niệm này là tạo ra một cơ chế tập trung đặc biệt
chùm ánh sáng tạo ra một “giếng” tiềm năng bẫy một hạt hoặc hạt nhỏ, thường là
đường kính 1–2μm.
Nguyên tắc này có thể được sử dụng cho các phép đo sinh học bằng cách phủ hạt bằng
fibronectin (hoặc một số phân tử khác sẽ liên kết với các thụ thể trên bề mặt tế bào) vì vậy
rằng hạt bám vào một vị trí nhất định trên tế bào.

sinh học
2.5.2. Bẫy quang học
Sau đó, chùm tia được di chuyển theo phương ngang và người ta quan sát được chuyển động của hạ
kính hiển vi.
Từ kiến thức về đặc tính của bẫy ánh sáng, lực tác dụng lên
hạt bằng chùm ánh sáng chuyển động có thể được xác định từ vị trí hạt so với
tâm của bẫy quang.
Sơ đồ mô tả của “quang học
nhíp” thao tác một hạt
được gắn vào tế bào nuôi cấy.


sinh học
2.5.3. vi mô hạt từ tính
Trong kỹ thuật đo lưu biến vi hạt từ tính , một hạt thuận từ, thường là 4–5
đường kính μm, được phủ bằng fibronectin hoặc một số phân tử thích hợp khác.
Fibronectin liên kết với các integrins trên bề mặt tế bào, tạo ra một liên kết trực tiếp giữa
hạt và khung tế bào Actin của tế bào.
Hạt thuận từ sau đó chịu một từ trường làm xoắn nó hoặc
thay thế nó (Hình trong slide tiếp theo). Ở đây chúng ta sẽ tập trung vào hạt từ tính
phép đo vi mô, trong đó chuyển động cảm ứng từ của hạt được hình dung bằng
kính hiển vi ánh sáng.


sinh học

Sơ đồ mô tả thiết bị đo trung tâm của máy đo lưu biến vi mô hạt từ tính
trên một nam châm điện. Nam châm điện được gắn vào một bệ kính hiển vi và bao gồm một
cuộn dây (1200 vòng dây đồng 0,7mm) và lõi sắt mềm. Cốt lõi này vượt ra ngoài
cuộn dây, tạo thành một đoạn cực xuyên qua buồng mẫu. Đầu của mảnh cực
có thể được định vị ở khoảng cách (r) từ 10 đến 100 μm từ hạt từ tính gắn vào tế bào.
Điều này tạo ra lực tối đa 10 000 pN trên hạt thuận từ có đường kính 4,5 μm

sinh học
Một phần mở rộng của phương pháp này liên quan đến việc “gieo” lên bề mặt tế bào bằng mủ cao su.
vi cầu và quan sát sự dịch chuyển của chúng trong vùng lân cận của từ trường
hạt. Điều này cung cấp thông tin về thang độ dài mà các chuyển vị được thực hiện
kết hợp bên trong tế bào.
Một vấn đề quan trọng là hệ thống sẽ được hiệu chuẩn như thế nào. Điều này được thực hiện bởi
treo một hạt trong chất lỏng có độ nhớt đã biết và đặt một từ trường vào
hạt. Sự dịch chuyển kết quả của hạt có thể được theo dõi bằng phương pháp quang học như là một hàm của
thời gian, và khi đó định luật Stokes có thể được sử dụng để ước tính lực tác dụng lên hạt.

sinh học
Một ví dụ về dữ liệu hiệu chuẩn lực cho máy đo lưu biến vi mô


sinh học
Phản ứng rão điển hình và đường cong hồi phục được đo cho hạt có đường kính 4,5 μm
liên kết với màng của nguyên bào sợi 3T3. Hạt được phủ fibronectin
và do đó được cho là liên kết với thụ thể integrin.


sinh học
Khi một lực tác dụng lên hạt, sẽ có sự dịch chuyển gần như ngay lập tức của hạt.
hạt. tiếp theo là sự leo thang dần dần (giai đoạn II và III). Điều này phù hợp với
bộ xương tế bào và tế bào chất thể hiện hành vi đàn hồi nhớt.

sinh học
2.5.4. Hút micropipette
Phương pháp cuối cùng mà chúng tôi sẽ xem xét là hút micropipette. Đây là một trong
các kỹ thuật lâu đời nhất để đo cơ sinh học tế bào (và dưới tế bào)
tài sản, có niên đại từ giữa thế kỷ XX.
Có nhiều cách khác nhau để sử dụng hút micropipette, nhưng tất cả đều
Các phương pháp tiếp cận sử dụng một micropipette thủy tinh rất mịn, thường có đường kính trong khoảng
1–10 μm và có đầu có thể di chuyển bằng máy vi thao tác.
Một áp suất nhỏ đã biết có thể được tác dụng lên pipet thông qua một bình chứa chứa đầy chất lỏng
gắn vào pipet. Bằng cách kiểm soát chiều cao hồ chứa, áp suất này có thể được thay đổi
trong một thí nghiệm


sinh học

sinh học
Ở dạng hút micropipette đơn giản nhất, đầu pipet được tiếp xúc với một
tế bào và áp suất hút (hút) nhỏ được tạo ra bởi bể chứa. Trực tiếp
Quan sát bằng kính hiển vi cho thấy sự biến dạng và chuyển động của tế bào theo thời gian thực khi nó được tác động
bằng micropipette.
Từ kiến thức về chiều cao của bình chứa và diện tích mặt cắt ngang của đầu pipet, lực
áp dụng cho tế bào có thể được xác định. Thiết bị này có thể tạo ra lực từ 10
pN đến khoảng 104 nN, đủ để gây ra biến dạng tế bào đáng kể.

sinh học
Nghiên cứu hút micropipette tế bào lông ngoài của chuột lang. Tế bào lông ngoài
cư trú trong ốc tai và chịu trách nhiệm về một số chức năng cơ sinh học,
quan trọng nhất là việc khuếch đại âm thanh đến thông qua hoạt động tu sửa.

sinh học
2.5.4. Hút micropipette Lực có
thể phân giải nhỏ nhất trong kỹ thuật này phụ thuộc vào độ chính xác của nó.
hồ chứa có thể được định vị; độ chính xác định vị dọc điển hình là vài μm,
chuyển thành lực bậc 1–10 pN đối với pipet có đường kính 10 μm.
Các phép đo cơ sinh học sử dụng kỹ thuật này đã được thực hiện trên một số tế bào
loại, bao gồm bạch cầu trung tính, hồng cầu và tế bào lông ngoài. Hút micropipette là
đặc biệt thích hợp để đo các tính chất cơ học của động vật có vú
hồng cầu, vì hồng cầu là một trong những loại tế bào “đơn giản nhất” về mặt cơ học.
Chúng ta hãy xem xét cơ chế sinh học của tế bào hồng cầu một cách chi tiết hơn, đòi hỏi một đường vòng nhỏ để
mô tả cấu tạo của hồng cầu.


sinh học
2.5.4. Hút micropipette Sự
hình thành hồng cầu của con người bắt đầu khi tế bào gốc trong tủy xương
biệt hóa để tạo hồng cầu. Tế bào này tách nhân ra để tạo ra
hồng cầu lưới, sau đó đi vào tuần hoàn và mất đi các bào quan để trở thành
hồng cầu. Hồng cầu chỉ có khung tế bào gắn với màng (vỏ não),
không có mạng lưới tế bào kéo dài vào bên trong tế bào.
Thành phần chính của khung tế bào vỏ não này là một loại protein dạng sợi gọi là Spectrin,
tạo thành các tetramer sau đó liên kết chéo với các tetramer khác để tạo thành một “trung tâm và-
mạng nói”. Liên kết chéo được cung cấp bởi một phức hợp protein có chứa các đoạn ngắn
sợi Actin và nhiều loại protein khác.


sinh học
Toàn bộ mạng lưới được gắn vào các protein màng nguyên vẹn bởi một protein gọi là
ankyrin, để màng được củng cố và liên kết chặt chẽ với vỏ não
khung tế bào. Kiến trúc này có nghĩa là hồng cầu rất linh hoạt (và do đó có thể
để đi qua các mao mạch nhỏ trong toàn bộ hệ thống tuần hoàn).
Về mặt cơ sinh học, sự vắng mặt của bất kỳ cấu trúc bên trong quan trọng nào có nghĩa là tế bào
có thể được coi như một “túi huyết sắc tố” được gia cố.
Khi tế bào hồng cầu được hút bằng micropipette, một phần tế bào hồng cầu được hút vào bên trong
lumen của pipet và được kéo dài.


sinh học
Nếu áp suất hút đủ thấp để tránh vỡ hồng cầu, trạng thái cân bằng sẽ được thực hiện.
được thiết lập trong đó áp suất hút được áp dụng được cân bằng bởi ứng suất cơ học
trong khung tế bào vỏ của hồng cầu. Một thước đo tính chất đàn hồi của tế bào
là khoảng cách mà đoạn được hút này kéo dài vào pipet, L.
Một đặc tính hữu ích khác có thể đo được trong thí nghiệm hút là mật độ của
quang phổ như là một hàm của vị trí trên bề mặt tế bào.
Hồng cầu bị biến dạng có mật độ quang phổ không đồng đều do trường biến dạng trên
bề mặt tế bào hồng cầu không đồng nhất: ở một số khu vực mạng quang phổ được mở rộng rất nhiều,
trong khi ở những nơi khác, nó ít được mở rộng hơn hoặc thậm chí bị nén lại.

sinh học
Discher và các đồng nghiệp đã trình bày các phép đo như vậy bằng cách vẽ đồ thị khối lượng quang phổ trên mỗi
đơn vị diện tích của màng, được chuẩn hóa theo giá trị ở xa pipet, cho các loại hút khác nhau
độ dài đoạn.
Rõ ràng là cường độ biến dạng trong khung tế bào hồng cầu là rất lớn so với
với các ứng dụng kỹ thuật “truyền thống”.
Khá dễ dàng để chứng minh rằng ứng suất uốn đóng góp một lượng tương đối nhỏ vào
hành vi cơ học của tế bào, ít nhất là đối với đường kính pipet điển hình. Vì thế, nhất
các dạng biến dạng quan trọng của màng tế bào/bộ khung tế bào trong quá trình pipet
khát vọng là lực cắt trong mặt phẳng và sự giãn nở trong mặt phẳng (thay đổi diện tích).

sinh học
Bởi vì mọi thứ đều diễn ra trong mặt phẳng cục bộ của màng/bộ khung tế bào, nên nó
có ý nghĩa khi làm việc với các ứng suất được xác định là lực trên một đơn vị chiều dài, thay vì
lực quen thuộc hơn trên một đơn vị diện tích.
Trong phương pháp này, chúng tôi vẽ một đoạn đường nhỏ trên màng tế bào và thể hiện
ứng suất trong mặt phẳng là lực tác dụng lên đoạn đường đó chia cho chiều dài của
bộ phận. Điều này ngụ ý rằng mô đun đàn hồi cũng sẽ có đơn vị lực trên một đơn vị chiều dài,
thay vì lực quen thuộc hơn trên một đơn vị diện tích mà chúng ta sử dụng cho các vật liệu khối. Đối với một mặt phẳng
vật liệu đẳng hướng, có hai hằng số như vậy: mô đun biến dạng diện tích, KA , và
mô đun cắt, Ks
2.6. Mô hình hành vi cơ sinh học tế bào
Dữ liệu thực nghiệm rõ ràng là cần thiết để mô tả đặc tính cơ học của
tế bào. Tuy nhiên, người ta thường mong muốn phát triển các mô hình về hoạt động cơ học của tế bào.
Những mô hình cơ học như vậy giúp chúng ta hiểu và giải thích các quan sát thực nghiệm.
Chúng cũng hữu ích trong việc dự đoán phản ứng của tế bào với nhiều loại đầu vào khác nhau và để
so sánh phản ứng của các tế bào khác nhau.
• Mô hình đầu tiên coi tế bào như một vật thể nhớt đàn hồi về cơ bản được tạo thành từ chất nhớt
nguyên sinh chất được bao quanh bởi màng tế bào. Cách tiếp cận này xem xét cơ chế của
toàn bộ tế bào, mà không tính đến sự đóng góp của từng thành phần tế bào riêng lẻ,
chẳng hạn như bộ xương tế bào.
• Mô hình thứ hai và thứ ba tập trung vào các đặc tính cơ học của tế bào
được xác định bởi cấu trúc và thành phần của khung tế bào của nó
2.6.1. Mô hình đàn hồi tham số gộp của tế bào
Dữ liệu từ các thí nghiệm đo lưu biến hạt từ tính chỉ ra rằng tế bào
phản ứng với lực tác dụng từng bước là đàn hồi nhớt, có độ đàn hồi ngay lập tức
phản ứng theo sau là leo dần dần.
Tính chất đàn hồi nhớt của vật liệu (bao gồm tế bào và nhiều mô sinh học)
có thể được mô hình hóa bằng cách sử dụng các mô hình tham số gộp được xây dựng từ sự sắp xếp của
hai yếu tố đơn giản: lò xo tuyến tính và bảng điều khiển.
Điều quan trọng là phải hiểu rằng các yếu tố trong các mô hình này không thể
liên kết rõ ràng với các thành phần tế bào cụ thể; thay vào đó, chúng tôi đại diện
hoạt động của tất cả các thành phần đàn hồi của tế bào bằng một lò xo tuyến tính (hoặc các lò xo) và
hoạt động của tất cả các thành phần nhớt bằng một dashpot (hoặc dashpot).
Hai phần tử cơ bản được sử dụng trong các mô hình đàn hồi nhớt tham số gộp (còn được gọi là
mạch tương đương) là lò xo tuyến tính và bảng điều khiển.
Khi tác dụng một lực F(t) vào một lò xo tuyến tính, nó sẽ phản ứng tức thời với một
biến dạng, x, tỷ lệ thuận với tải trọng:
F tkx mùa xuân t (7)

mùa xuân 0
Người đọc được nhắc nhở rằng xspring là chiều dài lò xo, được đo từ điểm cân bằng (hoặc
nghỉ) chiều dài của lò xo, là chiều dài mà lò xo có được khi không có lực tác dụng
áp dụng cho nó. Bảng điều khiển là một bộ phận nhớt, tương tự như bộ giảm xóc. Khi có một lực
áp dụng cho một dashpot tốc độ biến dạng có liên quan tuyến tính với lực
Ft t
dashpot
x
0 bảng điều khiển (số 8)
Những phần tử này rõ ràng đã được lý tưởng hóa, nhưng đặc tính lực-chuyển vị của chúng
có thể mô tả các đặc điểm cơ bản của hành vi nhớt đàn hồi tuyến tính, đặc biệt khi
kết hợp theo những cách sắp xếp cụ thể.

Một cách sắp xếp phổ biến là sự kết hợp hàng loạt giữa lò xo và bảng điều khiển, được gọi là
thể Maxwell. Biến dạng toàn phần của vật Maxwell, x(t), là tổng của
biến dạng của lò xo và của bảng điều khiển:
mùa xuân tx t (9)

xtx bảng điều khiển
Vì các phần tử nối tiếp nhau nên lực của lò xo, F(t), được truyền tới tấm trượt:
F t F t F t bảng điều khiển

mùa xuân (10)
Bằng cách thay thế các mối quan hệ chuyển vị-lực từ phương trình (7) và (8) thành
đạo hàm theo thời gian của phương trình (9), chúng ta có thể có được mối quan hệ lực-chuyển vị cho
Cơ thể Maxwell: 1
1 xt Ft Ft (10)
0 k0
Điều này thể hiện một phương trình vi phân có thể giải được cho độ dịch chuyển, x(t), nếu
lịch sử lực, F(t), đã biết. Trước khi có thể tích phân phương trình này, chúng ta cần một giá trị ban đầu
điều kiện có được bằng cách suy nghĩ về cách vật thể Maxwell phản ứng với
lực tác dụng.

Một lịch sử lực lượng chung là áp đặt một bước thay đổi về lực lượng, ví dụ như sự gia tăng
lực từ 0 đến một giá trị không đổi F0 . Trong trường hợp này, kết quả phản hồi của
cơ thể nhớt đàn hồi được gọi là phản ứng leo của nó.
Khi tác dụng một lực theo cách này, phần tử lò xo sẽ biến dạng ngay lập tức.
Tuy nhiên, bảng điều khiển sẽ không biến dạng ngay lập tức; nó đạt được một vận tốc hữu hạn ngay lập tức,
nhưng độ dịch chuyển tại thời điểm t = 0 bằng 0 vì vận tốc hữu hạn tác dụng lên một
thời gian vô hạn không tạo ra sự dịch chuyển.
Điều kiện ban đầu cho phương trình (10) là x 0 F k0 F/ k0 0 / 0

Nếu chúng ta giới hạn sự chú ý vào thời gian t > 0 thì F(t) = F0 vàFtrong0 Công thức (10), sao cho
phương trình vi phân được giải một cách tầm thường để thu được độ dịch chuyển của vật thể Maxwell trên mỗi
đơn vị lực tác dụng là: xt 1

1 t (11)
F0 k 0 0
Sự đóng góp của lò xo và bảng điều khiển được thể hiện rõ ràng từ phản ứng này, với một
phản ứng đàn hồi ngay lập tức của lò xo, sau đó là sự biến dạng tuyến tính của bảng điều khiển
theo thời gian.
Thật không may, cơ thể Maxwell rõ ràng không thể hiện chính xác phản ứng của tế bào,
chỉ ra rằng mô hình đơn giản này là không đủ.
Một mô hình phức tạp hơn một chút là vật thể Kelvin, bao gồm vật thể Maxwell ở
song song với một lò xo. Trong trường hợp này, do các phần tử song song nên biến dạng
của toàn bộ vật Kelvin bằng độ biến dạng của mỗi đường trong hai đường song song.
Biến dạng của vật Kelvin tương đương với biến dạng của vật Maxwell và cũng
được đưa ra bởi Công thức (10), với sự hiểu biết rằng F(t) trong Công thức (10) bây giờ sẽ là
được hiểu không phải là tổng lực tác dụng mà chỉ là lực được hỗ trợ bởi mô hình Maxwell
cơ thể, FMaxwell (t). FMaxwell (t) có thể được tính từ:
F t F tMaxwell
F t mùa xuân (12)
trong đó F lò xo là lực tác dụng lên lò xo có độ cứng k1 và F(t) là lực tổng cộng
áp dụng cho vật Kelvin.

1 1
Từ phương trình (12), (10) và (7):
xt F tkxt
1
F tkxt 1 (13)
0
k 0
k
F t F tkxt
0
k
1
0
1
1
xt (14)
k k
0 1 0
Đối với vật thể Maxwell, chúng ta giải quyết phản ứng rão bằng cách áp đặt một lực bước và
xét thời điểm t > 0, trong trường hợp đó: F(t) = F0 và . Đối với F
trường 0
hợp này, phương trình (14)
đơn giản hóa thành:

F kxtxt
0 1 (15)
nơi chúng tôi đã xác định , thời gian thư giãn như:
kk
0 1
0 (16)
kk
0 1
Độ dịch chuyển của dashpot bằng 0 tại thời điểm t = 0+ , do đó lực phải được truyền bởi
chỉ có lò xo Fkx
0 0 kx 1
0
0
xt 1 k0 t/
1 e (17)
F0 k 1 0 kk 1
Cơ thể Kelvin thực hiện công việc thể hiện hành vi leo thang của tế bào tốt hơn nhiều
chịu lực kéo của hạt từ tính hơn vật thể Maxwell. Tuy nhiên, vẫn còn một
sự khác biệt giữa dự đoán mô hình và dữ liệu thử nghiệm cho mạng di động
biến dạng trong giai đoạn III
Các dự đoán của mô hình có thể được cải thiện hơn nữa bằng cách thêm một dấu gạch ngang nối tiếp với
Thân xe Kelvin có tổng cộng bốn bộ phận: hai bảng điều khiển và hai lò xo. Xem hình trong
slide tiếp theo.

Phản ứng leo cho mô hình này chỉ đơn giản là sự chồng chất của phản ứng Kelvin
phần thân và bảng điều khiển loạt, và do đó được cho bởi:
xt 1 k0 t/
t
e (18)
F0 k kk
1
1 0 1 1
Chất lượng của sự phù hợp cho thấy rằng phải có (ít nhất) hai thành phần của tế bào
chịu trách nhiệm tạo ra phản ứng nhớt và (ít nhất) hai thành phần
tạo ra phản ứng đàn hồi.

Từ sự phù hợp như vậy, các hằng số nhớt đàn hồi mô tả phản ứng từ biến của một ô có thể
được ước tính và sử dụng để so sánh phản ứng của ô này với ô khác hoặc để xác định phản ứng của
ô với nhiều loại đầu vào khác nhau.
Bausch đã thực hiện những so sánh này và phát hiện ra rằng trong khi các hằng số nhớt đàn
hồi được đo ở các vị trí khác nhau trên một tế bào nguyên bào sợi riêng lẻ là gần bằng nhau, các
hằng số có thể thay đổi theo một bậc độ lớn từ tế bào này sang tế bào khác.
Các hằng số nhớt đàn hồi được ước tính bằng mô hình tham số gộp biểu thị các đặc tính của
toàn bộ tế bào, nhưng những đặc tính đó được xác định một phần bởi các đặc tính của màng tế bào,
một phần bởi các đặc tính của tế bào chất của tế bào và một phần bởi cấu trúc của khung tế bào, là
một cấu trúc động liên tục thay đổi thành phần và tổ chức của nó, có nghĩa là cấu trúc khung tế
bào trong một tế bào có thể khác biệt đáng kể so với cấu trúc của tế bào khác.
Cho đến thời điểm này chúng ta chỉ xem xét việc tăng lực theo từng bước. Một cách thay thế
buộc các hạt từ tính gắn vào một tế bào là làm cho chúng chịu một lực dao động của
hình thức: F t F 1 0tội lỗi

t (19)
Đối với vật thể Kelvin, điều kiện ban đầu vẫn là x(0+ ) = F0 /(k0 + k1 ), nhưng đáp ứng của
hạt phức tạp hơn một chút. Có thể chứng minh rằng độ dịch chuyển có cả hàm mũ
và các thành phần hài, được cho bởi:
2
t/
0
e vì t
0
t
F0 k0 k0 k0
1 1 tội lỗi
xt e
t/
1 (20)
k1
kk
0 1 1
2
2.6.2. Mô hình độ căng của khung tế bào
Chúng tôi bắt đầu bằng cách định nghĩa thuật ngữ độ căng, là sự rút gọn của tính toàn vẹn về lực căng.
Đây là một kỹ thuật xây dựng trong đó duy trì tính toàn vẹn cơ học của cấu trúc
bởi các thành viên nội bộ, một số trong đó đang bị căng thẳng và một số khác đang bị
nén.
Chính thức hơn, “cấu trúc độ căng có thể được định nghĩa là sự tương tác của một tập hợp các
các phần tử nén riêng biệt với một tập hợp các phần tử chịu lực kéo liên tục nhằm mục đích
cung cấp một hình thức ổn định trong không gian” Ví dụ về cấu trúc độ căng bao gồm trắc địa
mái vòm và cơ thể chúng ta, nơi các cơ đóng vai trò là yếu tố căng thẳng và
xương đang bị nén.

Có một số bằng chứng thực nghiệm hỗ trợ ý tưởng chung này:
• vi sợi Actin có thể tạo ra sức căng
• có mối liên kết giữa các vi sợi Actin và vi ống
• các vi ống có thể bị nén
Một khó khăn trong việc đánh giá ý nghĩa của mô hình độ căng là
cấu trúc liên kết của các sợi liên kết với nhau trong tế bào rất phức tạp.
Tuy nhiên, có thể thu được cái nhìn sâu sắc về cơ chế độ căng nếu chúng ta xem xét một
mô hình rất đơn giản. Ô được giả định chỉ có sáu phần tử nén (thanh chống).
Sáu phần tử nén này được nối với nhau bằng 24 phần tử căng.
Nếu tế bào được đặt dưới sức căng thì nó có mô đun hiệu dụng là bao nhiêu? Chúng tôi áp dụng một
lực căng T/2 lên mỗi đầu của bộ phận chịu nén A–
A theo phương x. Chúng tôi sẽ
Giả sử các bộ phận nén hoàn toàn cứng chắc và có chiều dài L0 bằng nhau .
Hơn nữa, chúng ta sẽ giả sử rằng các phần tử căng tác dụng như những lò xo tuyến tính, sao cho
lực căng mà chúng tạo ra có thể được viết là
chết tiệt r (21)

Chúng ta sẽ giả sử rằng chiều dài của các phần tử chịu lực là l0 (đối với tất cả các phần tử) khi ô
đang ở trạng thái nghỉ ngơi. Lưu ý rằng ngay cả khi tế bào ở trạng thái nghỉ, các sợi Actin vẫn bị căng; cái đó
nghĩa là các phần tử căng không được thả lỏng khi tế bào đứng yên. Điều này ngụ ý rằng l0 > lr .
Nếu chúng ta xác định các trục tọa độ như minh họa thì mọi thứ đều đối xứng qua
nguồn gốc. Do đó, chúng ta có thể mô tả các vị trí thanh chống bằng sx (tổng khoảng cách giữa
hai thanh chống A–

A), sy (tổng khoảng cách giữa hai thanh chống B–
B) và sz (tổng khoảng cách
giữa hai thanh chống C–C). Từ hình học của bài toán, chúng ta có thể biểu diễn
chiều dài các phần tử chịu lực A-B như sau:
2 2 2
2
Ls
BB x
s
y
LAA
(22)
2 2 2
tôi
AB
2 2
x y

Nó theo sau đó
1 2 2
AB L BB
s x y s L AA
(23)
2
tôi
2
Các biểu thức tương tự có thể được viết cho chiều dài của các phần tử căng A–
C và BC:
1 2 2
AC LAAs z sx L CC
(24)
2
tôi
2
1 2 2
BC Ls
CC y
sz L BB
(25)
2
tôi
2
Bây giờ chúng ta xem xét cân bằng lực (ở trạng thái cân bằng) cho từng cấu trúc A–A, B–B và C–
C. Cân bằng lực theo phương x cho thanh chống A–

A ta viết:
(26)
Phương trình này có thể được đơn giản hóa và khi phương trình (21) được thay thế vào
dạng đơn giản ta thu được:

T r
tôi
r
tôi
1 L AB
s x 1 Sx 0 (27)
kl 2 AB AC
tôi
Các biểu thức tương tự có thể được viết theo hướng y và z cho thanh chống B–
B và C–
C,
tương ứng, thu được:
(28)
(29)
Các phương trình (23) đến (25) và (27) đến (29) biểu thị sáu phương trình cho bảy
ẩn số: lAC, lAB, lBC, sx , sy , sz và T. Nếu chúng ta chỉ định T, thì chúng ta có
thể giải hệ tìm chuyển vị và độ dài của các phần tử căng, mặc dù nó mang tính đại số
lộn xộn.
2.6.3. Mô hình hóa sợi Actin dưới dạng bọt
Mô hình độ căng mà chúng tôi đã trình bày ở trên đại diện cho một mô hình khả thi của
bộ khung tế bào hoạt động như thế nào, nhưng chắc chắn nó không phải là cái duy nhất.
Một cách tiếp cận khác để phân tích cơ chế sinh học của bộ xương tế bào, trong đó
Mạng lưới sợi Actin liên kết ngang được coi là một ma trận rắn ngẫu nhiên xốp với khả năng mở
lỗ chân lông (bọt có tế bào mở).
Bộ khung tế bào gồm nhiều sợi nối với nhau bằng
cấu trúc liên kết phức tạp.
Nhiều vật liệu tự nhiên và tổng hợp có dạng sợi liên kết ngang tương tự nhau.
cấu trúc vi mô, chẳng hạn như giấy, nỉ, bông gòn và xương trabecular. Cơ khí
hành vi của các vật liệu như vậy có thể được mô tả bằng một mô hình đơn giản hóa trong đó các kết nối
giữa các sợi.


Mô hình tế bào đơn vị của khung tế bào
Chúng tôi sẽ sử dụng mô hình này để ước tính mô đun và lực cắt hiệu quả của Young
mô đun của bộ khung tế bào dựa trên tính chất cơ học của từng sợi.
* * 2
E
C (30)
E
1
S S
ρs là mật độ của các sợi rắn và ρ là mật độ trung bình của toàn bộ mạng;
C1 là hằng số tỷ lệ; Es là mô đun Young đối với vật liệu sợi và E*

là mô đun Young cho toàn bộ mạng lưới tế bào.
Rõ ràng, có rất nhiều giả định được đưa ra khi suy ra phương trình này, đặc biệt là
về hình học của ô đơn vị.

May mắn thay, dữ liệu thực nghiệm được thu thập trên nhiều loại vật liệu xốp dạng sợi khác nhau.
chất rắn phù hợp với dữ liệu khá tốt nếu C1 = 1. Điều này mang lại cho chúng tôi sự tự tin khi sử dụng mô hình này
để nghiên cứu về bộ xương tế bào.
Sự phát triển tương tự có thể được sử dụng để thu được mô đun cắt của mạng. Nó là
giả định rằng ứng suất cắt được tác động từ bên ngoài vào mạng, gây ra hiện tượng toàn cầu
sức căng cắt . Một lần nữa, sẽ có một lực F được truyền bởi các sợi của
mạng, nhưng bây giờ nó sẽ hoạt động để cắt các sợi. 2

* *
G
Chúng tôi tính toán mô đun cắt mạng, G*, bằng: C2 (31)
E S S
trong đó C2 là một hằng số, về mặt thực nghiệm bằng 3/8.

Dự đoán mô đun mạng Actin
Các kết quả trên có thể được sử dụng để ước tính tính chất cơ học của mạng Actin
trong một tế bào. Mật độ của F-actin tinh khiết (ρs ) là 730–
850 mg/ml và mật độ của F-
Mạng lưới Actin trong tế bào nội mô được ước tính là ρ = 10–20 mg/ml
Do đó, mật độ Actin tương đối là khoảng 1%. Mô đun Young của Actin nguyên chất là
ước tính khoảng 2 Gpa => E* và G theo thứ tự 105 Pa mỗi cái. Những giá trị này là
lớn hơn đáng kể so với hầu hết các phép đo độ đàn hồi tế bào chất cho toàn bộ tế bào và
ngay cả khi giá trị nhỏ hơn của ρ được sử dụng, các giá trị mô đun thu được sẽ ở mức rất cao
cuối phạm vi đo.

Dự đoán mô đun mạng Actin
Điều hơi ngạc nhiên là mô hình bọt dường như dự đoán quá cao một cách rõ rệt
độ cứng, do kiến trúc siêu cấu trúc của mạng lưới Actin vô định hình bên trong
nhiều tế bào trông có vẻ rất thích hợp để được xử lý dưới dạng bọt.
Cộng thêm khó khăn này là thực tế là mô đun rút ra từ mô hình này phải
giới hạn dưới của mô đun Young đo được, vì mô hình bọt Actin không
bao gồm các thành phần khung tế bào khác có thể chịu áp lực, chẳng hạn như vi ống và
sợi căng thẳng Actin.

2.6.4. Mô hình tính toán của tế bào sụn trong ma trận của nó
Hầu hết các tế bào nằm trong ma trận ngoại bào (ECM), một hỗn hợp các polyme sinh học
quyết định phần lớn các tính chất cơ học của mô. Khi xác định làm thế nào một
tế bào phản ứng khi một lực được tác dụng lên toàn bộ mô, các đặc tính của ECM và
cách nó tương tác với tế bào là quan trọng. Điều này được thể hiện trong ví dụ sau
của tế bào sụn trong sụn khớp.
Chondrocytes là những tế bào chịu trách nhiệm tổng hợp và duy trì sụn. Họ
được nhúng trong một ECM mở rộng. Chondrocytes trải qua các chủng đáng kể
do tải trọng lớn tác dụng lên sụn khớp trong các hoạt động hàng ngày.
Ví dụ, sụn khớp ở hông chịu tải theo chu kỳ với áp suất đỉnh lên tới 20
MPa khi leo cầu thang.

Các tế bào sụn được bao quanh bởi một “vỏ” mô liên kết chuyên biệt;
cùng với nhau, tế bào và lớp vỏ này được gọi là chondron.
Thử nghiệm cơ học trực tiếp tế bào sụn bằng kỹ thuật micropipette cho thấy
tế bào sụn có đặc tính nhớt. Từ những phép đo này, có thể
ước tính mô đun Young ban đầu cho ô (E0 ), mô đun Young ở trạng thái ổn định cuối cùng
(E∞ ) và độ nhớt của tế bào (μ).
Nếu tiến hành phép thử tương tự với các hạt nhân bị cô lập thì người ta thấy rằng các hạt nhân đó cứng hơn nhiều
hơn toàn bộ tế bào. Điều này ngụ ý rằng tế bào sẽ biến dạng khác nhau để đáp ứng với một
tải áp đặt. Có lẽ, sự biến dạng khác biệt này được đảm nhận bởi khung tế bào.
Những dữ liệu này sau đó có thể được sử dụng làm đầu vào cho mô hình phần tử hữu hạn để dự đoán cách một ô
sẽ phản ứng khi toàn bộ mô trải qua một lực nén xác định.
Những dữ liệu này chứng minh rằng sự căng thẳng của tế bào sụn phụ thuộc rất nhiều
H
*
mạnh mẽ vào tỷ lệ mô đun tế bào với mô đun mô, MỘT
. Vấn đề là
hành vi cơ học của tế bào phải được xem xét trong bối cảnh xung quanh
chất ngoại bào.
Hầu hết các tế bào đều rất nhạy cảm với các lực cơ học và phản ứng theo nhiều cách khác nhau, thường là
đỉnh điểm là sự biến đổi chức năng của chúng và những thay đổi về thành phần, cấu trúc và
chức năng của các mô xung quanh.
Sự tương tác giữa các tế bào, ECM của chúng và các lực tác dụng lên chúng rất
phức tạp và khó nghiên cứu in vivo

2.7. Dẫn truyền cơ học: tế bào cảm nhận và phản ứng như thế nào với các
sự kiện cơ học?
Trong tế bào sống, việc áp dụng kích thích cơ học không chỉ gây ra hiện tượng cơ học
phản ứng mà còn là phản ứng sinh học. Sử dụng mạng lưới cảm biến, đầu dò phức tạp
và cơ chế kích hoạt, tế bào có thể đáp ứng và thích ứng với các cơ chế cơ học của chúng.
môi trường.
Cơ chế tiếp nhận. Đầu tiên, tế bào phải phát hiện kích thích và chuyển tiếp thông điệp từ
bên ngoài tế bào (nơi tác động kích thích) vào bên trong tế bào (nơi phản ứng sẽ
cuối cùng được tạo ra). Để làm như vậy, các tế bào sử dụng các cơ quan thụ cảm cơ học.
Truyền tín hiệu. Sau khi được cảm nhận, tín hiệu cơ học cần được chuyển tiếp trong vòng
tế bào tới các mục tiêu khác nhau khắp tế bào; tế bào dường như sử dụng cả sinh hóa
con đường và bộ xương tế bào để truyền tín hiệu này.
Kích hoạt mục tiêu. Khi tín hiệu đến được mục tiêu (thường là protein), mục tiêu sẽ
2.7.1. Cơ quan thụ cảm cơ học
Vì các cơ quan cảm thụ cơ học phải đáp ứng với các tín hiệu ngoại bào và chuyển tiếp các tín hiệu từ
bên ngoài tế bào vào bên trong tế bào, điều đó có nghĩa là các cơ quan thụ cảm cơ học có mặt về mặt vật lý
nằm trong màng sinh chất, ở điểm nối giữa không gian ngoại bào và nội bào.
Một số cơ quan thụ cảm cơ học đã được xác định ở vị trí này, bao gồm integrins,
các kênh ion được kích hoạt kéo dài và các protein thụ thể bề mặt tế bào khác.
Tích phân. Sự biến dạng của bộ khung tế bào có thể gây ra nhiều hậu quả:
• các tính chất vật lý của tế bào sẽ thay đổi theo dự đoán của các mô hình phân tích
• các thụ thể khác trong tế bào, bao gồm các kênh ion và các thụ thể khác trên bề mặt tế bào, có thể
được kích hoạt
• các sự kiện sinh hóa và phân tử trong tế bào có thể được điều chỉnh trực tiếp
Các kênh ion được kích hoạt kéo dài. Kênh ion là các protein trải dài trong huyết tương
màng, nối bào tương với bên ngoài tế bào. Không giống như các lỗ màng khác,
tương đối lớn và dễ dãi, các kênh ion có tính chọn lọc cao, cho phép
khuếch tán các ion vô cơ cụ thể qua lớp lipid kép.
Các ion này bao gồm Na+ ,K+ , Ca2+ và Cl , tham gia vào nhiều hoạt động di động
bao gồm truyền tín hiệu nội bào, biểu hiện gen, phiên mã, dịch mã và
Tổng hợp protein.
Các kênh ion được chuyên môn hóa hơn nữa ở chỗ chúng không phải lúc nào cũng mở - thay vào đó, chúng
bị chặn, nghĩa là một kích thích cụ thể có thể khiến chúng mở ra trong thời gian ngắn, do đó cho phép
dòng ion vào hoặc ra khỏi tế bào phụ thuộc vào gradient điện hóa.
Protein thụ thể bề mặt tế bào. Để đáp lại các tín hiệu từ môi trường, tế bào
dựa vào các thụ thể bề mặt tế bào liên kết các phân tử tín hiệu để bắt đầu quá trình nội bào
phản ứng. Các thụ thể trên bề mặt tế bào này được phân loại rộng rãi là thụ thể liên kết với protein G hoặc thụ thể
liên kết với enzyme.
Thông thường, các thụ thể phản ứng với các phân tử tín hiệu ngoại bào hòa tan, chẳng hạn như protein,
peptide nhỏ, steroid hoặc khí hòa tan.
Tuy nhiên, có bằng chứng cho thấy một số thụ thể trên bề mặt tế bào có khả năng đáp ứng hoặc ở mức
ít tham gia nhất vào việc cảm nhận các tín hiệu cơ học. Một lần nữa, các cơ chế không rõ ràng,
nhưng giống như các kênh ion được kích hoạt kéo dài, cấu trúc của các thụ thể trên bề mặt tế bào có thể
bị thay đổi do biến dạng màng, chuyển chúng từ trạng thái không hoạt động sang trạng thái hoạt động
2.7.2. Truyền tín hiệu nội bào
Khi một kích thích cơ học được cảm nhận và truyền từ bên ngoài tế bào, tín hiệu
cần được truyền đến các điểm khác trong tế bào nơi có thể có phản ứng phân tử
được tạo ra. Dường như các tế bào dựa vào cả cơ chế vật lý và sinh hóa để
truyền tín hiệu cơ học.
Sự truyền tín hiệu qua trung gian tế bào
Việc truyền tín hiệu cơ học thông qua integrins có thể dẫn đến biến dạng của
khung tế bào, do đó, có thể ảnh hưởng đến trạng thái sinh hóa của tế bào. Ví dụ,
bởi vì khung tế bào là một mạng lưới năng động, liên tục cung cấp cơ chế
sự kết nối giữa các cấu trúc nội bào, sự biến dạng của bộ khung tế bào tại một thời điểm
vị trí có thể dẫn đến biến dạng của các kết cấu được kết nối tại các vị trí ở xa
“Kết nối cứng” này trong tế bào có nghĩa là sự nhiễu loạn được áp dụng cục bộ vào integrin có thể
dẫn đến sự chuyển động của các bào quan và sự biến dạng của nhân, có thể ảnh hưởng đến gen
sự biểu lộ.
Biến dạng khung tế bào cũng có thể kích hoạt các thụ thể khác, chẳng hạn như kênh ion và G
thụ thể liên kết với protein. Cơ chế “phân cấp” này, theo đó một cơ chế được áp dụng tại địa phương
kết quả kích thích dẫn đến sự dẫn truyền cơ học ở nhiều vị trí được liên kết cơ học, cho phép
sự đa dạng hơn trong phản ứng của tế bào so với khả năng của một thụ thể tách rời,
vì các thụ thể khác nhau sẽ có độ nhạy và thời gian đáp ứng khác nhau và do đó sẽ
phản ứng với các tín hiệu môi trường địa phương khác nhau
Truyền tín hiệu qua trung gian sinh hóa
Nguyên tắc chung đằng sau việc truyền tín hiệu qua trung gian sinh hóa là sự kích hoạt
của một thụ thể bắt đầu một chuỗi các sự kiện được trung gian bởi một loạt các phân tử tín hiệu.
Những phân tử này tương tác với các protein mục tiêu, làm thay đổi các protein mục tiêu để chúng tạo ra
những thay đổi trong hoạt động của tế bào. g., yếu tố tăng trưởng), tiếp xúc tế bào-tế bào và cơ học
tín hiệu.
Điều thú vị là, ngoài vai trò truyền tải cơ học, integrins còn có thể
gây ra các phản ứng sinh hóa. Ví dụ: phân cụm các integrins tại các vị trí bám dính tiêu điểm
dẫn đến việc huy động và kích hoạt các phân tử tín hiệu (ví dụ, kinase bám dính khu trú hoặc
FAK), từ đó bắt đầu truyền tín hiệu sinh hóa.

2.7.3. Phản ứng của tế bào với các tín hiệu cơ học Các
tín hiệu cơ học, giống như các tín hiệu ngoại bào khác, có thể ảnh hưởng đến chức năng tế bào ở một mức độ nào đó.
nhiều cấp độ, tùy thuộc vào mục tiêu của đường truyền tín hiệu được khởi tạo bởi
kích thích.
Ví dụ, một đường truyền tín hiệu được kích hoạt bởi một kích thích cơ học có thể nhắm tới các protein
điều hòa sự biểu hiện gen và phiên mã mRNA từ DNA (ví dụ, phiên mã
các nhân tố).
Ngoài ra, mục tiêu truyền tín hiệu có thể là các phân tử tham gia vào quá trình sản xuất protein, do đó
sự thay đổi của các phân tử đó sẽ ảnh hưởng đến việc dịch mã mRNA thành protein hoặc
lắp ráp hoặc bài tiết protein sau phiên mã.
Bởi vì hình dạng và khả năng vận động của tế bào phụ thuộc vào khung tế bào nên sự biến dạng của nó do
kích thích cơ học có thể làm thay đổi các quá trình phụ thuộc vào tế bào này.
2.7.3. Phản ứng của tế bào với tín hiệu cơ học
Cuối cùng, việc sản xuất protein và sự bài tiết của chúng từ tế bào có thể ảnh hưởng đến chức năng của
các tế bào lân cận (hoặc thậm chí chính tế bào chế tiết), từ đó lan truyền tác dụng của
tín hiệu cơ học từ một ô đến nhiều ô.
Điều quan trọng là phải nhận ra rằng phản ứng của tế bào đối với một loại kích thích có thể khá khác nhau.
phức tạp, vì việc kích hoạt một loại thụ thể thường kích hoạt nhiều thụ thể song song
con đường truyền tín hiệu và do đó có thể ảnh hưởng đến nhiều khía cạnh của hành vi tế bào.
Hơn nữa, tại bất kỳ thời điểm nào, các tế bào cũng nhận được hàng trăm tín hiệu khác nhau từ
môi trường và phản ứng của họ được xác định bằng cách tích hợp tất cả thông tin họ
nhận được. Rõ ràng, điều này làm cho mọi việc trở nên phức tạp hơn, đặc biệt nếu người ta muốn
hiểu phản ứng của tế bào đối với một kích thích cơ học cụ thể.
2.8.Kỹ thuật kích thích cơ học tế bào
Giới hạn trên của dự đoán có thể được xác định bằng cách giả sử các sợi Actin
đang trên bờ vực tan vỡ trong tư thế nghỉ ngơi. Giả sử sợi Actin có
bán kính hiệu dụng là 2,8 nm, mô đun Young là 1,8 GPa và phá vỡ ở mức trung bình
lực khoảng 400 pN. Sử dụng các giá trị này để ước tính biến dạng tại đó một
sợi Actin sẽ đứt.

Câu hỏi?

CHAP 2. CSH TẾ BÀO - 232 - dịch

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

You might also like

CHAP 2. CSH TẾ BÀO - 232 - dịch

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

CHAP 2. CSH TẾ BÀO - 232 - dịch

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Machine Translated by Google

KHÓA HỌC: CƠ CHẾ SINH HỌC

CHƯƠNG 2: Cơ chế sinh học tế bào

Giảng viên: NGUYỄN THÁI HIỀN

MỤC TIÊU CỦA CHƯƠNG 2

1. Mô tả cấu trúc, chức năng của tế bào nhân chuẩn

2. Xác định hệ năng lượng của tế bào

4. Liệt kê các mô hình hoạt động cơ học của tế bào

2.1. Giới thiệu về cấu trúc tế bào nhân chuẩn.

2.2. Hệ thống năng lượng của tế bào.

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào.

2.4. Tương tác ma trận tế bào.

2.5. Phương pháp đo tính chất cơ học của tế bào và

phân tử sinh học.

2.6. Các mô hình hoạt động cơ sinh học của tế bào.

2.8. Kỹ thuật kích thích cơ học của tế bào.

2.1. Giới thiệu. đến cấu trúc tế bào nhân chuẩn

2.1. Giới thiệu. đến cấu trúc tế bào nhân chuẩn

hợp tác để cho phép tế bào hoạt động:

2.1. Giới thiệu. đến cấu trúc tế bào nhân chuẩn

hợp tác để cho phép tế bào hoạt động:

chứa trong nhân, mặc dù có một lượng nhỏ ty thể

2.1. Giới thiệu. đến cấu trúc tế bào nhân chuẩn

hợp tác để cho phép tế bào hoạt động:

Một hệ thống xử lý (lysosome). Hệ thống túi này chứa enzym

2.2. Hệ thống năng lượng của tế bào

Tổng hợp các hợp chất

và môi trường xung quanh nó.

từ adenosine diphosphate (ADP) và phosphate ( ) trong phản ứng sau:

2.2. Hệ thống năng lượng của tế bào

đồng tiền năng lượng chung trong tế bào.

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào

phạm vi cấu hình đáng chú ý.

Thiết lập và duy trì hình dạng của tế bào.

Cho phép tế bào di chuyển (quá trình vận động).

Cung cấp độ bền cơ học và tính toàn vẹn cho tế bào.

Cần thiết trong quá trình phân chia tế bào.

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào

Sợi Actin (đường kính 7–

theo đường kính).

Các vi sợi hoặc – trong tế bào cơ xương – các sợi mỏng.

hành vi máy móc.

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào

2.3. Tổng quan về bộ xương tế bào

2.3. Hệ thống năng lượng của tế bào

2.3.1. Sợi actin

protein dạng sợi (F-actin).

trong chuỗi F-actin.

2.3. Hệ thống năng lượng của tế bào

2.3.1. Sợi actin

dạng protein dạng sợi (F-actin).

di chuyển đến đầu –, trong một quá trình được gọi là

Actin của tế bào hiện diện ở dạng polyme hóa

2.3. Hệ thống năng lượng của tế bào

2.3.1. Sợi actin

dạng protein dạng sợi (F-actin).

2.3. Hệ thống năng lượng của tế bào

2.3.1. Sợi actin