TP D’EMBRYOLOGIE

PARTIE I : LE MICROSCOPE : REGLAGE ET ENTRETIEN

Objectif : fournir les bases de la microscopie. En effet la connaissance des parties d’un microscope, de son
mode d’entretien ainsi que des fonctions de ces différentes parties est essentielle à sa bonne utilisation et à
une interprétation correcte des données obtenues avec cet instrument.
1- Les parties du microscope et leurs différentes fonctions
Les différentes parties du microscope peuvent être classées en 4 systèmes à savoir : le système de
support, le système de grossissement, le système d’éclairage et le système de réglage
C. Système d'éclairage

1. Source lumineuse
De préférence la lumière électrique qui permet un réglage plus facile. Elle est fournie par une lampe
incorporée à l'intérieur du microscope, au-dessous de la platine, ou par une lampe extérieure, placée
devant le microscope.
Sinon, la lumière du jour. Le microscope ne doit jamais être utilisé ni placé directement à la lumière du jour.
Il doit être bien éclairé mais employé sous une source de lumière tamisée. Si le soleil est vif, on peut le
placer derrière une bouteille, ou un ballon rempli d'eau qui atténuera l'éclairage.

5. Filtres
Certains microscopes comportent, au-dessous du condenseur, des filtres colorés (notamment des filtres
bleus) qui peuvent être laissés ou retirés selon le type de préparation examinée.
D. Système de réglage Il comprend:

Il. INSTALLATION D'UN MICROSCOPE

Quand le laboratoire reçoit un nouveau microscope, il importe de savoir l'installer.
1. Emplacement du microscope
Sur une table solide- plane (vérifier au niveau d'eau)- pas trop haute, suffisamment grande. Si l'éclairage est
électrique, placer le microscope à l'ombre, loin d'une fenêtre. Mettre dessous un carré de feutre, ou, à défaut,
un morceau de tissu épais.

Il. MISE AU POINT DES IMAGES

Objectif à faible grossissement (5 ou 10 x)
Abaisser le condenseur à fond.
Abaisser l'objectif juste au-dessus de la préparation.
Remonter l'objectif avec la vis rapide jusqu'à ce que l'on obtienne dans l'oculaire une image nette.
Quelquefois, bien que l'objectif ait été abaissé le plus bas possible, jusqu'à sa butée, on ne parvient pas à voir
une image nette. C'est que la vis micrométrique est à bout de course. Il suffit alors de la faire tourner jusqu'à
l'autre bout de course et de procéder à nouveau à la mise au point en remontant l'objectif.
Remonter un peu le condenseur si l'éclairage est insuffisant.
3. Objectif à immersion (110 x)
Utiliser des lames colorées parfaitement sèches. Placer une petite goutte d'huile à immersion sur la partie à
examiner (utiliser des huiles synthétiques quine sèchent pas, plutôt que de l'huile de cèdre qui sèche vite).

Regarder dans l'oculaire, faire varier, très lentement, la vis micrométrique jusqu'à voir l'image nette.
Si l'éclairage n'est pas suffisant, procéder comme indiqué pour l'objectif 40 x avec le côté concave du miroir.
Profondeur de champ
L'image est vue avec sa profondeur quand on utilise un objectif à faible grossissement. La profondeur du
champ vu avec netteté est moins grande lorsqu'on utilise des objectifs puissants (40 x, 100 x). Ce qui accroît
l'impression globale de relief, et il faut faire varier la vis micrométrique pour voir tous les détails dans la
troisième dimension (par exemple les différents noyaux à l'intérieur d'un kyste sphérique d'amibe).
IV. ENTRETIEN DU MICROSCOPE
Cet entretien doit être quotidien, car c'est de lui que dépend le maintien en bon état du microscope et donc la
qualité des examens de laboratoire. Dans les pays chauds et humides, il exige des soins particulièrement
assidus.
1. Matériel nécessaire
1. Des morceaux de tissu usagé et un mouchoir fin et doux, déjà lavé
2. Du papier spécial pour nettoyage des lentilles ou, à défaut, du papier absorbant blanc (papier hygiénique)
3. Une peau de chamois, si possible (sinon un chiffon non pelucheux)
4. Un petit flacon de xylène (ou de toluène)
5. Une housse en plastique
6. Une petite poire en caoutchouc et, si possible, un pinceau à poils fins (ou un pinceau spécial pour
nettoyage des lentilles)
7. Dans les régions chaudes et humides
Laboratoires équipés à l’électricité :
- une armoire chauffante avec 1 ou 2 ampoules de 40 watts
Laboratoires sans électricité :
si possible un dessiccateur de 15 à 20 cm de diamètre contenant au moins 250 g de gel de silice bleu (qui
indique l'humidité en virant au rose).
2. Nettoyage des objectifs
Objectifs à sec
Souffler sur la lentille et l'essuyer avec un linge doux, d'un mouvement transversal, et non circulaire.
Objectifs à immersion
Essuyer l'huile avec du papier à lentille (ou absorbant). S'il s'agit de traces anciennes d'huile synthétique ou
d'huile de cèdre, utiliser d'abord un papier très légèrement imbibé de xylène (ou de toluène), puis essuyer de
nouveau avec un papier sec.
Tous les soirs, avant de ranger le microscope, enlever la poussière des objectifs en insufflant un jet d'air
l’aide de la poire en caoutchouc et parfaire éventuellement le nettoyage à l'aide du pinceau fin.
3. Nettoyage des oculaires
Nettoyer la face supérieure de la lentille supérieure (où l'on place l'œil) au moyen d'un linge doux ou de
papier absorbant
Nettoyer au pinceau fin la face inférieure de la lentille inférieure, à l'intérieur du tube
S'il y a de la poussière à l'intérieur de l'oculaire, dévisser la lentille supérieure et nettoyer les lentilles
internes en utilisant uniquement un jet d'air de la poire et le pinceau fin.
4. Nettoyage du condenseur et du miroir
Le condenseur est nettoyé, comme les objectifs, avec un linge fin ou un mouchoir en papier imbibé de
xylène.
Le miroir est nettoyé avec un linge fin imbibé d'alcool.
5. Nettoyage du support et de la platine
Nettoyer à la peau de chamois ou, à défaut, avec un linge doux non pelucheux.
Ne jamais utiliser de xylène, qui peut attaquer le vernis du microscope.
La platine peut être nettoyée à fond avec un papier absorbant imprégné de vaseline.
ATTENTION
1. Ne jamais nettoyer à 1'alcool les lentilles des objectifs et oculaires.
2. Ne jamais faire tremper les objectifs dans le xylène ou l'alcool (les lentilles se décolleraient).
3. Ne jamais utiliser du papier ordinaire ou de l'ouate pour nettoyer les lentilles.
4. Ne jamais poser les doigts sur les objectifs.
5. Ne jamais nettoyer au xylène le support ou la platine.
6. Ne jamais nettoyer les lentilles intérieures de l'oculaire et des objectifs avec un chiffon ou un papier
7. Ne jamais laisser le microscope sans ses oculaires si leurs orifices ne sont pas bouchés.
8. Ne jamais ranger le microscope avec de l'huile à immersion sur l'objectif.
PARTIE II : OBSERVATIONS MICROSCOPIQUES DE QUELQUES ECHANTILLONS
I- COMMENT UTILISER LE MICROSCOPE PHOTONIQUE
A- CAS D’UNE OBSERVATION A L’ETAT FRAIS
1- Préparer le microscope
S'installer en face du microscope ; Le nettoyer selon la norme ; Vérifier que le plus petit objectif soit en place
et bien enclenché ; Abaisser la platine au maximum (vis macrométrique) ; Allumer l'éclairage.
2- Placer la préparation microscopique sur la platine. Positionner l'objet dans l'axe du faisceau lumineux sans
regarder dans le microscope.
3- Tourner la vis macrométrique pour faire une première mise au point en regardant à travers l'oculaire. Utiliser
ensuite la vis micrométrique pour affiner la mise au point.
4- Rechercher la zone de la préparation la plus favorable à l'observation demandée en la déplaçant sur la platine
(tout en continuant l'observation).
5- Régler l'intensité lumineuse à l'aide du bouton rhéostat afin d'avoir la meilleure luminosité pour observer
l'objet étudié (lumière parfaitement blanche)
6- Régler ensuite la qualité de la lumière à l'aide du diaphragme puis la quantité à l'aide du condensateur.
7- Pour affiner l'observation, placer la zone à grossir au centre du champ de vision de l'oculaire. Tourner avec
précaution le barillet et enclencher l'objectif supérieur. Reprendre les étapes 4 à 6.
ATTENTION : A L'OBJECTIF X40 UTILISER UNIQUEMENT LA VIS MICROMETRIQUE !

(L'objectif étant très proche de la lame l'utilisation de la vis macrométrique peut entraîner la casse de celle-ci)
8- Une fois l'observation terminée :
Réenclencher le plus petit objectif
Abaisser la platine au maximum
Retirer la lame
Eteindre le microscope

B- CAS D’UNE OBSERVATION A L’ETAT COLORE

Répéter la même procédure que précédemment mais avant de déposer la lame sur la platine, déposer une
goutte d’huile à immersion sur la meilleure partie choix de la lame et enclencher plutôt l’objectif 100X
(Plus grand objectif)
A la fin essuyer l’huile sur l’objectif et protégé celui-ci avec un papier absorbant et enlevant la platine au
maximum (vice macrométrique)