Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan 2022, 8(2); 11-15

p-ISSN: 2442-9791, e-ISSN: 2715-4181

Penetapan Kadar Andrografolid dalam Sambiloto (Andrographis paniculata

(Burm. f.) Ness) secara KLT-Densitometri

Quantification of Andrografolid from Sambiloto (Andrographis paniculata

(Burm. f.) Ness) using TLC-Densitometry

Etty Sulistyowati*, Rika Sebtiana

STIFAR Yayasan Pharmasi Semarang, Jl. Letjend Sarwo Edie Wibowo KM 1, Plamongan Sari, Semarang
50192

Email: etty0103 @gmail.com

Abstract
Article Info: In recent years, one of the most widely consumed natural ingredients during the Covid
Received: 5 Jan 2023
19 pandemic is Sambiloto, because of its benefits in increasing body immunity.
Accepted: 31 Jan 2023
http://dx.doi.org/10.33772/p Sambiloto can be used as an immunostimulator which increases the immune response
harmauho.v8i2.25 when the body's immunity decreases. The main ingredient that has this activity is
andrographolide, which is the active ingredient of the bitter plant (Andrographis
paniculata (Burm. f.) Ness). Andrographolide was obtained from extracting bitter leaf
(Andrographis paniculata (Burm.f.) Ness by maceration method using 70% ethanol until the extract was obtained. The
aim of this study was to determine the andrographolide content in the extract obtained from Sambiloto (Andrographis
paniculata (Burm.f.) Ness) using the TLC-Densitometry method. The Sambiloto extract was separated GF 254 TLC plates
with hexane: ethyl acetate (2:8) as a mobile phase system and the TLC plate was scanned at 230 nm wavelengths.
Standard andrographolide was used as a reference standard, meanwhile, the results of the sambiloto extract showed the
average andrographolide content was 7.43%.

Keywords: Andrographolide, TLC, densitometry, sambiloto, extract.

Abstrak
Beberapa tahun terakhir ini salah satu bahan alam yang paling banyak dikonsumsi oleh masyarakat disaat pandemic
Covid 19 adalah sambiloto, dikarenakan manfaatnya dapat meningkatkan imunitas tubuh. Sambiloto dapat digunakan
sebagai immunostimulator yang meningkatkan respon imun saat kekebalan tubuh menurun. Kandungan utama yang
mempunyai aktifitas tersebut adalah andrografolid, merupakan kandungan aktif dari tanaman sambiloto
(Andrographis paniculata (Burm. f.) Ness). Andrografolid diperoleh dari menyari daun sambiloto (Andrographis
paniculata (Burm.f.) Ness dengan metode maserasi menggunakan etanol 70% sampai diperoleh ekstraknya.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar andrografolid pada ekstrak yang diperoleh dari sambiloto
(Andrographis paniculata (Burm.f.) Ness menggunakan metode KLT-Densitometri. Ekstrak sambiloto Ness
dipisahkan pada plat KLT Silika Gel GF254 kemudian dieluasikan dalam chamber yang berisi eluen campuran n-heksana
: etil asetat (2:8) sebagai fase gerak dan menggunakan panjang gelombang deteksi 230 nm. Pada penetapan kadar
sampel digunakan baku pembanding andrografolid dan diperoleh hasil persamaan y = 3,619 x 10-3 x + 3,078 x10-3
untuk digunakan perhitungan kadar ekstrak andrografolid. Hasil ekstrak sambiloto menunjukkan bahwa kadar
andrografolid rata-rata adalah 7,43%.

Kata kunci: Andrographolide, KLT, densitometri, sambiloto, ekstrak

1. Pendahuluan
Tanaman sambiloto (Andrographis paniculata andrografolid dan turunannya merupakan kandungan
Nees.) banyak dimanfaatkan untuk obat tradisional aktif dari tanaman sambiloto (Andrographis paniculata
diberbagai negara, berdasarkan penelitian bahwa (Burm. f.) Ness) yang mempunyai aktivitas antitumor

11
Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan 2022, 8(2); 11-15
Supplemen SINaFa 2022
dalam beberapa tahun terakhir ini [1]. Penelitian
menunjukkan bahwa andrografolid dan beberapa
turunannya terbukti memiliki efek antitumor yang
menonjol dengan kemampuan menghambat
pertumbuhan, proliferasi, dan migrasi berbagai sel tumor
[2]. Andrografolid yang diisolasi dari sambiloto
memiliki aktivitas anti-dengue terhadap virus dengue-2
seperti terungkap dari metode in vitro dan in silico [3].
Dimasa pandemi Covid 19 ini sambiloto banyak
dimanfaatkan masyarakat untuk meningkatkan daya
imun tubuh sehingga berfungsi sebagai
immunomodulatory [4, 5]. Dalam studi terhadap virus
SARS-CoV mengungkapkan bahwa andrografolid dan
turunannya menghambat aktivitas protease utama dan
dengan demikian cenderung merusak replikasi SARS-
CoV dan 2019-nCoV [6]. Penelitian sambiloto juga
menyoroti peran antivirus, berdasarkan penelitian
ternyata andrografolid dapat memberikan kontribusi
signifikan terhadap peningkatan kesehatan manusia dan
aplikasi terapeutik andrografolid untuk memerangi
berbagai penyakit virus pada manusia [7].
Tanaman sambiloto mengandung andrografolid
terbesar ada pada bagian daun dan terendah pada bagian
biji. Kandungan utama daun sambiloto adalah
andrografolid, merupakan diterpenoid lakton, berupa
kristal tak berwarna dan mempunyai rasa yang sangat
pahit [1]. Senyawa ini bersifat mudah larut dalam
methanol, ethanol, pyridine, aseton, asam asetat namun
sedikit larut dalam air dan ether. Andrografolid
mempunyai titik leleh 228-2300 C dan spektrum
ultraviolet dalam ethanol λ 223 nm [8]. Penelitian ilmiah
telah banyak dilakukan, dan hasilnya menunjukkan
bahwa sambiloto mempunyai potensi untuk
dikembangkan sebagai produk fitofarmaka dengan
menggunakan pendekatan multikomponen. Tujuan
penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi dan
mengkuantifikasi senyawa andrografolid pada sampel
ekstrak etanol dari sambiloto (Andrographis paniculata
Nees.). Hasil penelitian ini akan digunakan sebagai
bahan baku salah satu sediaan farmasi. Identifikasi dan
penjaminan mutu yang memadai merupakan persyaratan
yang sangat penting dalam menjamin kualitas obat
fitofarmaka yang reprodusibel dan mendukung
keamanan serta efikasi penggunaannya.
Gambar 1. Struktur Kimia Andrografolid [11]
12
Sulistyowati dan Sebtiana
KLT adalah metode pilihan untuk analisis herbal,
mempunyai keuntungan dapat melakukan analisis
banyak sampel serta menguji banyak analit secara
simultan dalam waktu yang relatif singkat, sederhana,
reproduksibel serta relatif lebih murah. Fase diam dan
fase gerak yang lebih efisien menjadi pilihan untuk
pengujian bahan alam dibandingkan menggunakan
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) begitupun
metode KLT-Densitometriuntuk penentuan memberikan
hasil yang akurat jika dibandingkan dengan metode
KCKT [9]. Pengujian sampel bahan alam yang
mengandung banyak analit akan menyulitkan fase diam
(kolom) KCKT dan akan mengakibatkan banyak
masalah dalam pemisahan-pemisahan yang berdampak
pada penyumbatan kolom dan penurunan efisiensi
kolom [10].Berdasarkan hal tersebut, maka metode
densitometri akan digunakan dalam penentuan kadar
senyawa andrografolidekstrak sambiloto.
2. Metode
2.1 Pembuatan Larutan Baku
Larutan baku andrographolid dibuat dengan cara
menimbang 10 mg baku dilarutkan dalam 10 mL etanol
96% sehingga didapat konsentrasi 1000 ppm. Larutan
andrographolid tersebut selanjutnya dilakukan
pembuatan deret konsentrasi 1, 2, 3, 4, dan 5 ppm. Baku
andrografolid berbagai konsentrasi selanjutnya masing-
masing ditotolkan sebanyak 2 μL pada plat silika gel
GF254 20 x 20 cm (Merck). Baku yang sudah ditotolkan
dielusi menggunakan fase gerak n-heksana : etil asetat
(2:8) jenuh. Plat KLT akan dilakukan elusi sampai batas
yang telah ditentukan. Selanjutnya setelah proses elusi
selesai, plat silika gel segera diangkat dan dikeringkan
untuk dideteksi hasilnya. Plat KLT kemudian
dimasukkan ke alat Densitometer (TLC Scanner)
(Camag®) untuk dilakukan scanning menggunakan
lampu deuterium. Pembacaan plat KLT dengan
densitometer dilakukan dengan scanning panjang
gelombang maksimal dan pembacaan luas puncak
dibawah kurva atau area under curve (AUC).
2.2 Penyiapan Sampel
Ekstrak sambiloto ditimbang 100 mg, dilarutkan
dengan metanol dan diencerkan sampai 10 mL pada labu
takar. Pengujian dilakukan sebanyak enam kali replikasi
sampel. Sampel dan baku andrografolid masing-masing
ditotolkan sebanyak 2 μL pada plat silika gel GF254
(Merck) 20x20 cm dengan urutan penotolan baris
pertama untuk baku andrografolid, diikuti enam baris
berikutnya untuk sampel. Sampel dan baku yang sudah
ditotolkan dielusi menggunakan fase gerak n-heksana :
etil asetat (2 : 8) yang sebelumnya telah dijenuhkan.
Setelah proses elusi selesai, plat silika gel GF254
diangkat dan dikeringkan. Selanjutnya dilakukan
pengamatan dengan mendeteksi dengan alat
Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan 2022, 8(2); 11-15 Sulistyowati dan Sebtiana
Supplemen SINaFa 2022

Densitometer (TLC Scanner) menggunakan lampu

deuterium. Pembacaan plat KLT dengan Densitometer
dilakukan dengan scanning panjang gelombang
maksimal dan pembacaan luas puncak dibawah kurva
atau area under curve (AUC). AUC andrografolid
diukur dengan KLT-Densitometer pada panjang
gelombang maksimumnya. Kadar andrografolid dalam
ekstrak dapat dihitung dengan persamaan regresi linier
dari larutan baku pembanding andrografolid.

2.2 Analisis Data

Analisis data dilakukan pada tahap cara kerja yang

meliputi: kondisi KLT-Densitometri, eluen yang
digunakan dan hasil kromatogram Densitometer. Data
yang digunakan dengan melihat parameter seperti
Retention/retardation factor(Rf) yaitu sebuah nilai atau
ukuran yang mana didapat berdasarkan posisi noda
setiap zat terlarut pada plat kromatografi lapis tipis. SD,
RSD (%). Data seri konsentrasi baku dan AUC
dilakukan dengan metode regresi. Kadar andrografolid
dihitung dengan regresi linier antara kadar kurva baku
andrografolid dengan AUC dinyatakan dalam satuan
persen
Gambar 2. Panjang gelombang maksimal andrografolid
Plat silika dimasukkan ke alat Densitometer (TLC
Scanner) untuk dilakukan scanning menggunakan lampu
deuterium. Pembacaan plat KLT dengan densitometer
dilakukan dengan scanning panjang gelombang
maksimal dan pembacaan luas puncak dibawah kurva
atau Area Under Curve (AUC). Setelah diperoleh nilai
AUC sebagai y dan massa andrografolid sebagai x maka
akan diperoleh perhitungan sebagai kurva kalibrasi
yang tampak pada gambar berikut ini:

3. Hasil dan Pembahasan

Identifikasi andrografolid secara KLT-
Densitometri dilakukan pada panjang gelombang
maksimumnya. Dilakukan juga pemayaran pada panjang
gelombang 200 – 400 nm untuk mendapatkan spektrum
tiap sampel dan baku pembanding andrografolid. Hasil
dalam penelitian ini diperoleh panjang gelombang
maksimal pada 230 nm, panjang gelombang ini sesuai
dengan literature Farmakope Herbal Indonesia [11].
Setelah dilakukan penelusuran bercak noda KLT maka
akan mendapatkan hasil yang baik apabila dilakukan
pada panjang gelombang maksimum, karena apabila ada
perubahan konsentrasi pada bercak sedikit saja maka
analit akan terdeteksi. Pengukuran analit dilakukan
dengan bercak noda yang akan ditetapkan kadarnya pada
kisaran pada panjang gelombang senyawa tersebut.
Begitu juga pengujian dengan KLT-Densitometri, maka
keberhasilan analisis akan dipengaruhi diantaranya
adalah ketelitian volume sampel maupun baku. Pada
penelitian ini diperoleh volume penotolan 2 µL untuk
diperoleh hasil pengujian, begitupun volume ini
digunakan untuk menotolkan sampel maupun baku
pembanding.
Pada pengamatan di bawah UV254 disajikan pada
gambar 2 menunjukkan panjang gelombang serapan
maksimal 230 nm, diperoleh hasil yang sama dengan Gambar 3. Rf maksimal andrografolid
panjang gelombang serapan maksimal andrografolid
pada Farmakope Herbal Indonesia yaitu 230 nm [11]. Metode KLT-Densitometri untuk penentuan
Spot hasil elusi pada plat KLT dilakukan deteksi pada memberikan hasil yang akurat jika dibandingkan dengan
panjang gelombang maksimumnya yaitu 230 nm untuk metode KCKT [9]. Eluen yang digunakan campuran
memperoleh nilai AUC dari setiap baku pembanding dan kloroform: metanol (8:2) digunakan sebagai fase gerak
sampel. diperoleh pada Rf 0:55 dan 0,43 [9], sedangkan pada

13
Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan 2022, 8(2); 11-15 Sulistyowati dan Sebtiana
Supplemen SINaFa 2022

Tabel 1. Hasil pengamatan sampel

Replikasi Penimbangan Luas Massa Sampel Analit Kadar

mg µg µg/mL 20µL(µg) (%)
1 100.8 0.00816 1404 1.008 20.16 6.96
2 100.5 0.00834 1454 1.005 20.10 7.23
3 100.6 0.00855 1512 1.006 20.12 7.51
4 100.6 0.00774 1529 1.006 20.12 7.60
5 100.7 0.00773 1526 1.007 20.14 7.58
6 100.8 0.00783 1554 1.008 20.16 7.71
Rata-rata 100.6666667 0.008058 1496.5 1.006667 20.13333 7.431667
SD 0.121106014 0.000314 51.37363 0.001106 0.022111 0.257256
RSD 0.120303988 4.272491 3.760574 0.120304 0.120304 3.792011

penelitian ini campuran n-heksana : etil asetat (8:2) yang terdiri dari luas puncak dan kadar yang diperoleh dari
digunakan sebagai fase gerak memberikan resolusi perhitungan. RSD yang rendah diartikan bahwa
penanda yang baik untuk analit bersama dengan puncak semakin kecil nilai simpangan relatif (RSD) yang
simetris dan dapat direproduksi masing-masing pada Rf dihasilkan suatu metode, maka ketelitian metode
0,280. Semua sampel telah menunjukkan Rf) bervariasi tersebut makin tinggi [12].
pada Rf 0,280 dan 0,278.
4. Kesimpulan

Penelitian ekstrak sambiloto (Andrographis

paniculata Nees.) menggunakan metode KLT-
Densitometri diperoleh kandungan andrografolid rata-
rata sebesar 7,43%.

Ucapan Terima Kasih

Ucapan terima kasih kepada Sekolah Tinggi Ilmu

Farmasi Yayasan Pharmasi Semarang atas dukungan
dan fasilatasnya dalam pelaksanaan penelitian ini.

Gambar 4. Kurva kalibrasi andrografolid
Tabel 1 menunjukkan jumlah penanda pada ekstrak
sambiloto yang dinyatakan dalam mg/g berat kering.
Sampel yang diuji menunjukkan bahwa berdasarkan
waktu tambat analit sama dengan waktu tambat baku
pembanding. Pada pengujian sampel terhadap zat aktif
dilakukan keberulangan sampel dengan enam replikasi
untuk melihat keberulangan data yang baik itu dapat
diketahui dari hasil persentase standar deviasi relatif
yang cukup rendah. Hasil yang diperoleh menunjukkan
hasil menggunakan teknik KLT dan spektrum UV-Vis
pada metode pengukuran dengan KLT-Densitometri
menunjukkan jumlah andrografolid dalam ekstrak
metanol ditemukan bervariasi dari 1,404 hingga 1,554
µg/mL.
Data hasil pengujian menunjukkan bahwa dengan
data enam replikasi diperoleh hasil RSD rendah dari cara
kerja yang meliputi penimbangan, hasil kerja yang
Daftar Pustaka
1. Kandanur, Kandanur, N Tamang, NR Golakoti, 2019.
“Andrographolide: A Natural Product Template for the
Generation of Structurally and Biologically Diverse
Diterpenes”. European Journal of Medicinal Chemistry, 176
:513-533.
2. Yuwen, D., S. Mi, Y. Ma, W. Guo, Q. Xu,Y. Shen, 2017.
“Andrographolide Enhances Cisplatin-Mediated Anticancer
Effects in Lung Cancer Cells through Blockade of
Autophagy”. Journals.Lww.Com 289:967–76.
3. Kaushik, S., L. Dar, S. Kaushik, JP Yadav, 2021.
“Identification and Characterization of New Potent
Inhibitors of Dengue Virus NS5 Proteinase from
Andrographis Paniculata Supercritical Extracts on in Animal
Cell Culture”. Journal of Ethnopharmacology, 267.
4. Rajanna, M., B. Bharathi, BR Shivakumar, 2021.
“Immunomodulatory Effects of Andrographis Paniculata
Extract in Healthy Adults–An Open-Label Study”. Journal
of Ayurveda, 12(3): 529-534.
5. Rahayu, M. P. 2015. “Aktivitas Imunomodulator Fraksi N-
Heksan Dari Herba Sambiloto (Andrographis
Paniculata,(Burm. F) Nees) Terhadap Mencit Yang

14
Pharmauho: Jurnal Farmasi, Sains, dan Kesehatan 2022, 8(2); 11-15
Supplemen SINaFa 2022
Diinduksi Vaksin Hepatitis B”. Ppjp.Ulm.Ac.Id 2(1):35–43.
6. Shi, TH, YL Huang, CC Chen, WC Pi,YL Hsu, 2020.
“Andrografolid and Its Fluorescent Derivative Inhibit the
Main Proteases of 2019-NCoV and SARS-CoV through
Covalent Linkage”. Biochemical. Communications 533(3):
467-473.
7. Latif, Reshi, and Chi Yong Wang. 2020. “Andrographolide
as a Potent and Promising Antiviral Agent”. Chinese Journal
of Natural Medicines 18(10):760–69. doi: 10.1016/S1875-
5364(20)60016-4.
8. Aromdee, C., P. Wichitchote, N. Jantakun-Songklanakarin,
2005. “Spectrophotometric Determination of Total Lactones
in Andrographis Paniculata Nees”. Journal of Science
Teknology 27(6):1227–31.
9. Akowuah, GA, I. Zhari, I. Norhayati, A. Mariam, 2006.
“HPLC and HPTLC Densitometric Determination of
© 2023 by the authors; This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the
Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).
15
Sulistyowati dan Sebtiana
Andrografolids and Antioxidant Potential of Andrographis
Paniculata”. Journal of Food Composition, 19(2–3):118-
126.
10. Sulistyowati, Etty, Sudibyo Martono, Sugeng Riyanto, and
Endang Lukitaningsih, 2019. “Development and Validation
for Free Aglycones Daidzein and Genistein in Soybeans
(Glycine Max (L.) Merr.) Using RP HPLC Method”.
International Journal of Applied Pharmaceutics, 11(2): 138-
142 .
11. Depkes. 2017. Farmakope Herbal Indonesia. II. Jakarta:
Kementrian Kesehatan RI.
12. González, AG, MÁ Herrador, 2007. “A Practical Guide to
Analytical Method Validation, Including Measurement
Uncertainty and Accuracy Profiles”. TrAC Trends in
Analytical Chemistry, 26(3): 227-238