Western Blot Protocol

试剂配置：
（1）1.5 mol/L Tris-HCl （pH 8.8）
Tris（MW 121.14） 45.43 g
超纯水 200 mL
溶解后，用浓盐酸调 pH 至 8.8 后，用超纯水定容至 250 mL，高温灭菌后室
温保存。
（2）1 mol/L Tris-HCl （pH 6.8）
Tris（MW 121.14） 30.28 g
超纯水 200 mL
溶解后，用浓盐酸调 pH 至 6.8 后，用超纯水定容至 250 mL，高温灭菌后室
温保存。
（3）10%过硫酸铵（APs）
过硫酸铵 0.1 g
超纯水 1.0 mL
溶解后，4℃保存，保存时间为 1 周。
（4）10% SDS
SDS 10g
蒸馏水 至 100 mL
50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍
可使用。
（5）30% Acr/Bic（29%丙烯酰胺（w/v），1%双丙烯酰胺（w/v））
丙稀既胺 (Acr) 29 g
甲叉双丙稀胺(Bic) 1g
超纯水 至 100 mL
在通风橱操作，加蒸馏水到 100 mL，缓慢搅拌至丙烯酰胺粉末完全溶解，
4C 可保存数月。注意:未聚合的丙稀酷胺是一种皮肤刺激物和神经素，操作时
必须带手套。
（6）G250 考马斯亮蓝溶液（测蛋白含量用）
考马斯亮蓝 G250 100 mg
 95%乙醇 50 mL
磷酸 100 mL
蒸馏水 至 1000 mL
配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水，混匀后，用滤
纸过滤，4℃保存。

转移缓冲液（转膜液）
NaHCO3 0.84 g
Na2CO3 0.32 g
甲醇 200 mL
蒸馏水 至1L

TBS 缓冲溶液(20 mmol/L Tris-HCl pH 7.6, 150 mmol/L NaCl)

1 mol/L Tris-HCl (pH7.6) 20 mL
NaCl 8g
蒸馏水 至 1000 mL

TBST 缓冲液(含 0.1% Tween20 的 TBS 缓冲液)

Tween20 1.0 mL
TBS 1000 mL
混匀后即可使用，最好现用现配。
封闭液(含 5%脱脂奶粉的 TBST 缓冲液)
脱脂奶粉 5g
TBST 100 mL
溶解后 4℃保存；使用时，恢复室温，用量以盖过膜面即可，一次性使用。