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J 06720211341
J 06720211341
1341
제67회 전국과학전람회
출품학생
지도교사
구분 학생부
출품부문 생물
목 차
Ⅰ. 연구 동기 ·
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Ⅱ. 연구 목적 ·
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Ⅲ. 연구 내용 ·
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1. 이론적 배경 ·
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·2
2. 선행연구 분석 ·
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Ⅳ. 연구 방법 및 결과 ·
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Ⅴ. 결론 및 전망 ·
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1. 결론 ·
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2. 전망 ·
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Ⅵ. 참고 문헌 ·
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그림 및 표 목차
[그림 목차]
2. 〈그림 3〉 비타민C 분자 구조 ·
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·2
3. 〈그림 4〉 비타민P 분자 구조 ·
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··3
6. 〈그림 7〉 항산화 효과 검출 원리 ·
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·3
7. 〈그림 8〉 HPLC 분석 원리 ·
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·4
비교 ·
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[표 목차]
1. 〈표 1〉 KIO (아이오딘산 칼륨) 용액의 적정에 따른 감귤류별 비타민C 함량·
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·7
Ⅱ. 연구 목적
연구를 통해 알아보고자 하는 것은 감귤류별 알베도층의 비타민C 보존효과와 이에 따른
실용적 활용 가능성이다. 이러한 연구 목적을 이루기 위해 구체적인 세부목적을 다음과 같
이 설정하였다.
- 1 -
2. 알베도층 추출 수용액 첨가에 따른 가열 전·후의 항산화능 감소정도 비교
(DPPH 전자 소거능법 활용)
각 감귤류의 과즙에 알베도층 추출 수용액을 첨가하지 않은 시료(대조군)와 첨가한 시료
(실험군)를 준비하고, 가열을 통해 인위적으로 비타민C를 파괴시켰을 때 각 시료에서 항산
화능의 감소 정도를 비교해본다. 이를 통해 알베도층 추출 수용액이 비타민C를 보존해주
는지를 확인해보고자 한다. 이는 비타민C가 감귤류의 항산화능에 가장 큰 영향을 갖고 있
으며, 가열 시 비타민C가 파괴되어 항산화능이 감소된다는 사실에 근거하였다. 항산화능
은 DPPH의 전자 소거능법을 활용하여 알아본다.
Ⅲ. 연구 내용
1. 이론적 배경
가. 알베도층의 정의 및 효능
감귤류 겉껍질 안쪽에 그물 모양으로 생긴 하얀 섬유질을 뜻하는 말이다. 알베도층의
효능은 모세혈관을 튼튼하게 하고 몸에 해로운 산화작용을 억제하는 데 도움을 준다.
또한, 감기를 예방하고, 한의학에서는 독소 배출과 소화 불량 해소 효과가 있다고 보아
약재로 쓰거나 차로 달여 마신다.
나. 알베도층의 성분
(1) 비타민C(vitamin C) : 비타민C는 L-아스코르
브산(L-ascorbic acid, Asc)이라고도 부르며 인
간은 비타민C 합성 효소를 가지고 있지 않기
때문에 음식으로 섭취해야 한다. 비타민C는
강력한 환원제로써 항산화 작용이 있고, 결핍
시 괴혈병을 일으킨다. 비타민C는 열에 약하
기 때문에 약 70도 이상의 열을 가하면 비타
민C의 5각형 구조가 파괴된다. 〈그림 3〉 비타민C 분자 구조
- 2 -
(2) 비타민P(vitamin P) : 비타민P는 체내에서 합
성되지 않아 반드시 식이로부터 공급되어야 하
고 감귤류의 알베도층에 비타민P가 포함되어
있으며 열에 약하고 쉽게 파괴되는 단점이 있
는 비타민C를 보존해 주는 작용이 있다. 비타민
P의 종류에는 헤스페리딘(Hesperidin), 쿼써틴
(Quercetin), 시트룰린(Citrulline) 등이 있다. 〈그림 4〉 비타민P 분자 구조
- 3 -
마. HPLC의 정의 및 특징
고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 이동상을 극성으로 고정상을 비극성으로 사용하여 시료 내의 극
성물질이 먼저 용출되는 역상 크로마토그래피로 용매에 용해 가능한 분자량 2000 이하의 비휘발성 시
료 분석 시 이용한다. 사용할 수 있는 이동상이 광범위하고, 많은 검출기를 사용할 수 있다. (UV-vis,
RI, 형광 검출기, 질량분석기 등)
〈그림 8〉 HPLC 분석 원리
바. 장용성 제제의 특성
경구 투여 시 위에서 용출되지 않고 장에서 용출되는 제제로 일반적으로 위의 산성 조
건에서 용출되지 않도록 특별한 제조 방법에 의해 일정 시간 동안 약물의 용출을 지연
시키도록 제조된 제형이다. 주로 Alginate를 활용하는데, Alginate는 알긴산과 칼슘이온
을 결합시킨 젤 상의 염으로 산성에서 그 구조가 견고해지고 염기성에서는 구조가 분해
되는 성질을 갖고 있다.
2. 선행연구 분석
가. 저장 조건에 따른 로메인 및 체리의 비타민C 함량 및 항산화능의 변화
박과 이(2016)에 따르면 체리를 이용해 저장 온도에 따른 항산화 활성의 변화를 연구할 때
비타민C 함량과 DPPH 활성이 모두 ± ℃ 에서 저장 시 유의적으로 높게 유지되었다.
이를 차용하여 실험 전 냉장실을 위 온도와 비슷하게 맞추어 과일을 보관하였다.
- 4 -
다. 소디움 알지네이트 농도에 따른 감 칼슘 알지네이트 비드의 물리적 및
관능적 특성
용과 송(2011)은 Alginate bead를 형성하는 염화칼슘과 반응하는 Sodium Alginate의 농
도와 반응시간에 따른 Alginate bead의 물리적 및 관능적 특성에 대해 연구하였다. 다
양한 Alginate 농도를 변인으로 설정하여 실험하였는데, 그 중 9:1, 7:3, 5:5의 농도를
적용하여 보존효과에 초점을 맞춰 Alginate bead의 적정 농도를 확인하고자 하였다.
- 5 -
Ⅳ. 연구 방법 및 결과
1. 알베도층 추출 수용액 첨가에 따른 가열 전·후의 비타민C 함량의 감소 정도 비교
(요오드 적정법 활용)
가. 각 감귤류의 과즙, 알베도층 추출 수용액 제조
1) 귤, 오렌지, 레몬, 자몽에서 과육과 알베도층을 분리하고 각각 믹서기에 돌려 분쇄한다.
2) 분쇄하여 생성된 감귤류별 과즙과 알베도층을 과즙은 250mL 비커에, 알베도층은
100mL 비커에 담아준다.
〈그림 9〉 레몬, 오렌지, 자몽, 귤의 과즙 〈그림 10〉 레몬, 오렌지, 자몽, 귤의 알베도층
4) 추출된 수용액 150mL 중 절반은 상온에 30분간 두고, 나머지 절반은 항온기에서 60 ℃ 로
30분간 가열하여 인위적으로 비타민C를 파괴한다.
5) 30분 후, 삼각플라스크를 꺼내어 거름종이에 걸러 불순물을 제거하여 추출 수용액을
준비한다.
나. 요오드적정을 통한 비타민C 함량 측정
1) 삼각플라스크에 KI(아이오딘화 칼륨) 10g, 녹말 용액 5g, 1.0M HCl(염화수소) 5mL를
추가로 넣는다.
2) 뷰렛에 0.05M KIO (아이오딘산 칼륨) 용액을 담고 1)의 삼각플라스크에 적정하여(청람색으로
변화하는 순간부터 종말점까지 KIO 용액의 방울 수를 측정) 비타민C 함량으로 환산한다.
적정에 따른 비타민C 환산 식은 다음과 같다.
종말점에서 적가된 요오드 용액의 부피로부터 sample 내 비타민C 함량(%(wt/vol))을 구한다.
① sample 용액 150mL 속에 들어 있는 sample의 양 = 5mL
② 5mL sample 속에 들어 있는 비타민C 몰수 = 적가된 I3 이온의 몰수
=M_I3 x V_I3 (=적가된 요오드 용액의 부피)
=0.05 x V_I3
③ 5mL sample 속에 들어 있는 비타민C 질량
= 5mL sample 속에 들어 있는 비타민C 몰수 x 비타민C 분자량
- 6 -
다. 1차 실험 결과 및 개선점
아이오딘화 칼륨(KI)과 아이오딘산 칼륨(KIO )이 반응해 아이오딘 분자(I )가 되는 반응의 촉매
역할을 하는 물질의 산성도가 커서 비타민C의 양과 관계없이 즉시 모든 용액이 붉게 변하는
현상이 있어 적정과정을 측정할 수 없었다.
라. 2차 실험 결과 및 개선점
pH가 상대적으로 높은 귤과 오렌지에서는 적정이 가능하였으나, pH가 낮은 레몬, 자몽
에서 1차 실험과 같은 현상이 일어났다.
마. 3차 실험 결과 및 개선점
다음 표의 값은 KIO (아이오딘산 칼륨) 용액의 적정 방울 수를 환산한 비타민C의 양이
다. pH가 낮은 레몬과 자몽은 2차 실험과 같은 현상이 일어나 측정이 불가하였다.
귤 오렌지 레몬 자몽
구분 과즙+ 과즙+ 과즙+ 과즙+
알베 알베 알베도 알베
과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도
도층 도층 층 도층
층 층 층 층
가열
0.528 0.616 0.968 0.616 0.616 1.056 0.572 0.616 - 0.528 0.528 -
전
가열
0.792 0.792 1.144 0.880 0.880 1.232 0.792 0.792 - 0.880 0.792 -
후
〈표 1〉 KIO (아이오딘산 칼륨) 용액의 적정에 따른 감귤류별 비타민C 함량 (단위: mg)
바. 4차 실험 결과
다음 표의 값은 KIO (아이오딘산 칼륨) 용액의 적정값을 환산한 비타민C의 양이다. 비
타민C의 양이 과즙보다 알베도층과 과즙+알베도층에서 감소비율이 작은 것을 통해 비
타민P가 비타민C를 보존해 주는 효과를 확인했다고 볼 수 있다. 하지만 pH가 낮은 레
몬과 자몽을 실험하지 못했기 때문에 비타민C를 다른 방법으로 측정해 보고자 항산화
효과 비교 실험을 진행하였다.
- 7 -
귤 오렌지
구분
과즙 알베도층 과즙+알베도층 과즙 알베도층 과즙+알베도층
- 8 -
4) 추출된 수용액 중 절반은 상온에 30분간 두고, 나머지 절반은 항온기에서 90 ℃ 로 30
분간 가열하여 인위적으로 비타민C를 파괴한다.
- 9 -
2) 가열 전·후 각각 1SET(12개)에 0.2mM DPPH 용액 100㎕, 나머지 1SET(12개)에 메탄올
100㎕를 마이크로 피펫을 이용해 담는다.
3) E-튜브를 상온에 20분간 두어 반응이 일어나도록 한다.
4) 섞은 후 마이크로 피펫을 이용하여 큐벳에 1000㎕를 넣고, 분광광도계를 이용해 OD
에서 흡광도값을 측정하고 항산화율을 계산한다. 3번 반복 실험하여 평균값을 공식에
적용한다.
5) 항산화율(저해율)을 구하는 공식은 다음과 같다.
▪공식에서 Abs(sample)을 구할 때
실험군(test)에서 실험군(color) 값을
빼는 이유는 시료가 가지고 있는
기본 색에 의한 오류를 없애기 위
해서다.
다. 1차 실험 결과 및 개선방안
DPPH 용액을 첨가한 시료의 색 변화가 거의 없어 항산화 효과를 측정하여 감소 정도
를 비교하는 것이 불가능하였다.
라. 2차 실험 결과 및 개선방안
각 과일마다 과즙, 알베도층, 과즙+알베도층의 항산화 효과 측정 3번 반복 실험 결과의 평
균값을 이용해 항산화율을 구하면 다음과 같다. 2차 실험에서의 양성대조군 값은 2.31이다.
양성
대조군 2.31
(abs)
과일 귤 오렌지 자몽 레몬
과즙+ 과즙+ 과즙+ 과즙+
알베도 알베도 알베도 알베도
용액 과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도
층 층 층 층
층 층 층 층
DPPH
2.310 1.670 2.130 2.070 1.540 1.700 2.150 1.550 2.210 2.220 0.800 1.100
(abs)
메탄올
0.248 0.201 0.474 0.493 0.048 0.436 0.650 0.086 0.385 0.181 0.165 0.143
(abs)
항산화
10.7 36.4 28.3 31.7 35.4 45.3 35.1 36.6 21.1 11.7 72.5 58.6
율(%)
〈표 3〉 2차 실험 가열 전 각 시료별 흡광도 값(OD ) 및 항산화율
- 10 -
양성
대조군 2.31
(abs)
과일 귤 오렌지 자몽 레몬
과즙+ 과즙+ 과즙+ 과즙+
알베도 알베도 알베도 알베도
용액 과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도 과즙 알베도
층 층 층 층
층 층 층 층
DPPH
1.710 1.140 0.884 2.040 0.562 0.766 1.430 0.405 0.946 1.500 0.526 0.517
(abs)
메탄올
1.150 1.010 0.575 1.610 0.270 0.428 0.596 0.119 0.305 0.787 0.145 0.450
(abs)
항산화
75.8 94.4 86.6 81.4 87.4 85.4 63.9 87.6 72.3 69.1 83.5 97.1
율(%)
〈표 4〉 2차 실험 가열 후 각 시료별 흡광도 값(OD ) 및 항산화율
마. 3차 실험 결과
3차 실험에서의 양성 대조군의 값은 1.90이다. 다음 표와 그래프를 보면 모든 과일의
과즙보다 알베도층과 과즙+알베도층의 항산화율이 훨씬 크게 나타났다. 이를 통해 비
타민P를 포함하고 있는 알베도층, 과즙+알베도층은 비타민P가 비타민C의 산화를 막아
항산화율이 많이 줄지 않았음을 알 수 있었다. 그리고 과즙과 과즙+알베도층의 가열
전, 후 항산화율 감소 차이를 비율로 환산하여 비교한 결과, 감귤류 별 알베도층의 비
타민C 보존 효과는 귤>레몬>오렌지>자몽 순으로 나타났다.
구분 가열 전 가열 후
과즙+ 과즙+
알베 알베
용액 과즙 알베도 과즙 알베도
도층 도층
층 층
DPPH
0.737 0.449 0.363 1.790 0.385 0.619
(abs)
메탄올
0.049 0.031 0.073 0.103 0.060 0.018
즙
(abs)
과
도
베
항산화율
알
알
+
(%)
<표 5, 그림 18> 귤의 가열 전·후의 OD 흡광도값 및 항산화율 비교
- 11 -
오렌지
구분 가열 전 가열 후
과즙+ 과즙+
알베 알베
용액 과즙 알베도 과즙 알베도
도층 도층
층 층
DPPH
0.152 0.372 0.472 0.747 0.362 0.492
(abs)
메탄올
0.066 0.040 0.078 0.156 0.094 0.088
(abs)
층
과
도
베
베
항산화율
+알
95.5 82.5 79.3 68.9 85.9 78.7
즙
과
(%)
<표 6, 그림 19> 오렌지의 가열 전·후의 OD 흡광도값 및 항산화율 비교
자몽
구분 가열 전 가열 후
과즙+ 과즙+
알베 알베
용액 과즙 알베도 과즙 알베도
도층 도층
층 층
DPPH
0.465 0.644 0.722 0.830 0.576 0.702
(abs)
메탄올
0.123 0.073 0.144 0.154 0.066 0.123
즙
층
(abs) 과
도
베
베
항산화율 알
알
+
82.0 69.9 69.6 64.4 73.2 69.5
즙
(%) 과
레몬
구분 가열 전 가열 후
과즙+ 과즙+
알베 알베
용액 과즙 알베도 과즙 알베도
도층 도층
층 층
DPPH
0.273 0.102 0.159 1.160 0.115 0.164
(abs)
메탄올
0.134 0.017 0.127 0.143 0.022 0.065
즙
(abs)
과
도
베
베
알
+알
항산화율
92.7 95.5 98.3 46.5 95.1 94.8
즙
과
(%)
<표 8, 그림 21> 레몬의 가열 전·후의 OD 흡광도값 및 항산화율 비교
- 12 -
4) 1시간 후, 삼각플라스크를 꺼내어 거름종이에 걸러 불순물을 제거하여 추출 수용액
을 준비한다.
5) 각각의 추출물을 0.2㎛ NYLON Syringe Filter를 이용하여 거르고 증류수와 함께 바이
알병에 담는다.
6) Standard 물질인 Hespridin은 6.0㎎에 메탄올 50mL을 용해하고 Quercetin은 3.6㎎에
메탄올 50mL를 용해하여 제조한다.
0 - 10 18 82
10 - 24 18 82
24 - 30 18 → 35 82 → 65
30 - 35 35 → 18 65 → 82
35 - 40 18 82
40 - 45 18 → 40 82 → 60
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다. 비타민P의 2가지 Standard 물질의 HPLC 분석 결과
분석하고자 하는 비타민P의 2가지 Standard 물질 중 Quercetin은 23분에 peak가 나타
나고, Hesperidin은 15분에 peak가 나타났다. 이를 통해 감귤류별 Quercetin, Hesperidin
유무와 함유 정도를 확인하기 위한 기준자료로 활용하였다.
Quercetin: 23min
Hespridin: 15min
오렌지
레몬
자몽
<그림 25> 감귤류별 Hesperidin의 HPLC 분석 결과 <그림 26> 감귤류별 Quercetin의 HPLC 분석 결과
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마. 감귤류별 알베도층에 포함된 Quercetin HPLC 분석 결과 (2차)
메탄올과 PTFE-D 필터를 사용하였음에도 불구하고 어느 과일에서도 Quercetin이 검출
되지 않았음을 알 수 있다. 이를 통해 Quercetin은 감귤류의 알베도층에 함유되어있지
않는 것으로 판단된다.
Quercetin STD
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˂그림 28˃ Alginate bead를 추출한 모습
가-2. 인공 위액 및 인공 장액 제조
1) NaCl 1g과 HCl 3.5mL을 넣고 증류수로 500mL까지 채워 인공 위액을 제조한다.
2) KH PO 13.85g과 NaOH 4g을 넣고 증류수로 500mL까지 채워 인공 장액을 제조한다.
가-3. 인공 약물 전달 환경 조성 및 항산화능 측정
1) 생성된 Alginate bead를 인공 위액에 각각 0시간, 1시간, 2시간, 3시간 넣어 놓는다.
2) 각 시간마다 넣어둔 Alginate bead를 인공 위액에서 꺼내고 증류수로 세척한 후 인공
장액에 30분간 넣어 놓는다.
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3) 각 용액을 원심분리기를 돌려 상층액을 채취한 뒤, 채취한 액체를 시료로 하여 분광
광도계를 이용해 OD 값을 측정하고 항산화율을 계산한다.
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2) 실험군으로 가. 과정에서 얻은 적정 Alginate 농도로 (0.001% 비타민C 용액+귤 알베
도층 혼합용액), (귤 과즙+귤 알베도층 혼합 추출용액)을 시료로 하여 Alginate bead
를 제조한다.
3) 2)에서 제조한 Alginate bead를 인공 약물전달 환경에 두고 각각 0시간, 1시간, 2시간, 3
시간 후 시간에 따른 항산화능을 측정(DPPH 전자소거능 활용)하고 대조군과 비교한다.
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대조군② 실험군②
구분
(과즙+알베도층) (과즙+알베도층)
시간(h) 0 1 2 3 0 1 2 3
DPPH
0.622 0.778 0.838 0.864 0.759 0.789 0.775 0.827
(abs)
메탄올
0.008 0.021 0.047 0.032 0.035 0.048 0.002 0.013
(abs)
항산화율(%) 36.83 22.12 18.62 14.40 25.51 23.77 20.47 16.26
〈표 11〉대조군과 실험군에서 시간에 따른 과즙+알베도층의 OD 흡광도 및 항산화율
Ⅴ. 결론 및 전망
1. 결론
가. 알베도층 추출 수용액 첨가에 따른 가열 전·후의 비타민C 함량의 감소 정도 비교
(요오드 적정법 활용)
요오드 적정실험은 산성을 띠는 물질에 적용하기 어려운 실험이라는 사실을 알 수 있
었다. 그리고 비타민C 정량 실험의 결과를 종합적으로 보았을 때, 가열 시 과즙의 비타
민C의 함량은 약 50% 감소하였지만, 비타민P가 포함된 알베도층과 과즙+알베도층에서
는 비타민C 함량이 약 15% 감소하였다. 이를 통해 알베도층과 과즙+알베도층에 포함된
비타민P가 비타민C를 보존해주었다고 볼 수 있다. 따라서, 알베도층의 비타민P가 비타
민C를 보존시켰다고 판단된다.
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이 결과를 통해 비타민P가 거의 없는 과즙에는 가열시킴에 따라 비타민C가 파괴되면
서 항산화 효과가 많이 줄었지만, 비타민P를 포함하고 있는 알베도층, 과즙+알베도층은
비타민P가 비타민C를 보존해 항산화 효과가 많이 줄지 않았음을 알 수 있었다. 따라
서, 비타민P의 비타민C를 보존해주는 효능이 있다고 판단된다.
2. 전망
가. 일상생활에서의 이용
일상생활에서 감귤류 과일을 먹을 때 가능하면 비타민C의 보존을 위해 알베도층을 분리
하지 않고 그대로 섭취하는 것이 좋다.
나. 의약 제품에서의 이용
비타민C 제품을 만들 때 버려지는 알베도층 추출물을 첨가하면 비타민C를 더 많이 보존
시킬 수 있다.
다. 제조업계에서의 이용
비타민C 제품을 만드는 회사에서 비타민C 제품을 만들 때 유통 과정에서 깨지거나 손상
되지 않도록 넣는 방부제를 비타민P와 방부제 역할을 하는 몸에 해롭지 않은 화학 물질
을 넣어 비타민C의 산화도 막고, 손상되는 것도 막아 비타민C 제품을 먹는 사람들에게
신뢰와 안전성을 보장받을 수 있다.
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Ⅵ. 참고 문헌
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화능의 변화. 한국영양학회
4. 임도연, 표병식, 김선민, 이경인. (2017). HPLC와 DPPH radical 소거능 측정 방법의 결합에
의한 약용 식물 추출물의 항산화 활성 비교. 한국생명과학회
5. 육순홍, 신병철, 조선행, 이해방. (1990) 알진과 PAA 혼합물을 이용한 생분해성이 있고 pH에
민감한 약물전달체계. 한국고분자학회
6. 김창민, 백완숙, 권용수, 고경수, 허인옥. (2018) 성분분류학적 방법에 의한 제주도산 감귤류
과피의 생약학적 연구. 생약학회
7. 이종욱, 최강원. (2016) 감귤껍질 첨가가 돈육 patty의 내장저장 중 이화학적 품질에 미치는
영향. 동아시아식생활학회
8. 현복진, 김욱학, 김옥녀. (1998) Acyclovir 정제의 용출실험 및 함량균일성 평가. 병원약사회지
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