24.

Генетични методи за постнатална диагноза на

хромозомни методи.

Цитогенетични методи – това са методи,чрез които се изучават

клетъчните структури, носители на клетъчната информация
(хромозомите). Те стоят в основата на отделна дисциплина наречена
Цитогенетика, изучаваща броя ,структурата и отклоненията от нормата
на човешките хромозоми.
Видове цитогенетични методи
- преки ЦГМ – при тях не е необходимо да се извършва
предварително култивиране на взетия за изследване клетъчен материал
с цел да се получи достатъчно голям брой клетки във фаза метафаза на
клетъчния цикъл, където всички хромозоми са максимално
спирализирани и при подходящо оцветяване могат да се наблюдават
със светлинен микроскоп.
- непреки ЦГМ – при тях взетият материал се подлага на
предварително култивиране в специална хранителна среда.
За цитогенетична диагностика се използват делящи се клетки в стадии
метафаза и прометафаза. Най – често използваният материал са
лимфоцитите от периферна кръв, взета в епруветка за анализ на
кариотипа. При онкохемолитичните заболявания се взима костен
мозък, при съмнение за хромозомен мозаицизъм се взимат
фибробласти.
Краткосрочно култивиране на лимфоцити от периферна венозна
кръв.
- 1 етап- вземане на материал за цитогенетично изследване; работи се
стерилно; с предварително хиперизирана 5 кубикова спринцофка се
взима 2мл периферна венозна кръв.
- 2 етап – извършване на посявка – в 20 кубика стерилен флакон
поставяме хр.среда (7мл хр.среда, 3мл фетален телешки серум, 0,2мл
фитохемаглутинин - стимулира разтежа на лимфоцитите, 0,5мл разтвор
на антибиотици, 0.5мл кръв от пациента).Посявката се извършва във
стерилен бокс със стерилен шкаф.
- 3 етап – култивиране за 72 часа при 37 С в термостат.
- 4 етап – на 70 час от култивирането във всеки флакон се поставя
колхицин (има свойството да къса нишките на делителното вретено и
да стопира хромозомите в стадии метафаза.)
 - 5 етап – извършване на хипотонична обработка – към всеки флакон
се прибавя 10мл 0,075 М разтвор на КСL (за да набъбне ядрото на
лимфоцита)
- 6 етап – накапване на културелната смес на леденостудени предметни
стъкла
- 7 етап – изсушаване на предметните стъкла и боядисване на 4% р-р с
бои на Гимза за 10мин.
Възможностите за диагноза са ограничении,определяя се само броя за
хромозомите.
Диференциални методи за оцветяване на хромозомите – При тях
след предварителна обработка на предметните стъкла с разтвори на
ензими или флоуросцентни багрила,всяка една хромозома получава
строго определен брой ленти.
Кариотипиране – под импресионен микроскоп се наблюдават
метафазни пластинки с хромозоми с добра морфология. Анализират се
броя, формата и лентовата струтура на хромозомата. Хромозомите се
подреждат в групи.
Съществуват още молекулно кариотипиране и молекулщрно
цитогенетични методи.