‫اﻟﻌﺎم اﻟﺟﺎﻣﻌﻲ ‪ 1439 – 1438‬ھـ‬

‫إﻋداد‪ :‬أﻣل اﻟﻐﺎﻣدي‬

‫‪1‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬
 ‫ﻓﻲ اﻟﻄﺒﯿﻌﮫ‬
‫• ﺗﻘوم اﻟﺧﻠﯾﺔ ﺑﻣﺿﺎﻋﻔﺔ ﻛﻣﯾﺔ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ﻋﻧد اﻧﻘﺳﺎم اﻟﺧﻠﯾﺔ‬
‫ﺑﺷﻛل ﺗﻠﻘﺎﺋﻲ و ﺑﺷﻛل ﺳرﯾﻊ ﻣﻊ وﺟود ﻧظﺎم ﺗﺻﺣﯾﺢ ﻟﻸﺧطﺎء‬
‫ﺧﻼل اﻟﻧﺳﺦ‪.‬‬
‫• ﺗﺑﻠﻎ ﺳرﻋﺔ اﻟﻧﺳﺦ واﻟﻣﺿﺎﻋﻔﺔ إﻟﻰ ‪ 1000‬ﻗﺎﻋدة ﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﺔ‬
‫ﺑﺎﻟﺛﺎﻧﯾﺔ ) داﺧل اﻟﻧظﺎم اﻟﺣﯾوي ( و ھﻲ ﻛﻣﺎ ذﻛرﻧﺎ ﺗﺣدث ﻓﻲ‬
‫اﻟﺧﻠﯾﺔ ﻓﻲ وﻗت اﻟﺗﻛﺎﺛر واﻻﻧﻘﺳﺎم ﻓﻘط‪.‬‬
‫• وﻣﻊ اﻟﺗطور ﻓﻲ ﻣﺟﺎل اﻟﺗﻛﻧوﻟوﺟﯾﺎ اﻟﺣﯾوﯾﺔ واﻟذي ﯾﻘوم ﻋﻠﻰ‬
‫اﻟﺗﻌﺎﻣل ﻣﻊ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬ﺑﺷﻛل أﺳﺎﺳﻲ ‪ ،‬اﺳﺗدﻋﻰ‬
‫ذﻟك اﻟﻌﻠﻣﺎء ﻋﻠﻰ أن ﯾﺑﺣﺛوا ﻋن طرﯾﻘﺔ أو ﺗﻘﻧﯾﺔ ﺗﻘوم ﻋﻠﻰ‬
‫ﻣﺿﺎﻋﻔﺔ ﻛﻣﯾﺔ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬ﺑﺷﻛل ﻛﺑﯾر‪ ،‬ﺧﺎرج‬
‫اﻟﻧظﺎم اﻟﺣﯾوي )اﻟﺧﻠﯾﺔ(‪.‬‬

‫‪2‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﻣﻜﺘﺸﻒ ﺗﻘﻨﯿﺔ اﻟـ ‪PCR‬‬

‫ﻛﺎﻧت ﻓﻛرة ﺑواﺳطﺔ ﻋﺎﻟم ﻛﯾﻣﯾﺎﺋﻲ‬

‫ﺗﺗﺿﻣن ﻓﺻل اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي‪DNA‬‬
‫وﺻﻧﻊ ﻧﺳﺦ ﻛﺛﯾره ﻣﻧﮫ ‪..‬‬
‫وﻓﻌﻼً ﺗﺣﻘﻘت ھذه اﻟﻔﻛرة اﻟﻣﺑدﻋﺔ ‪..‬‬
‫ﺑواﺳطﺔ د‪.‬ﻛﺎري ﻣوﻟس ‪Kary Mullis‬‬
‫ﺧطرت ﺑﺑﺎﻟﮫ ﻓﻛرة أن ﯾﻔﺻل اﻟﺣﻣض‬
‫اﻟﻧووي ‪DNA‬‬
‫وﯾﺻﻧﻊ ﻣﻧﮫ ﻧﺳﺦ ﻛﺛﯾرة ‪..‬‬
‫ﻟﯾﻘﻠد ﻓﻲ ﻋﺎم ‪ 1993‬م ﺟﺎﺋزة ﻧوﺑل ﻓﻲ‬
‫اﻟﻛﯾﻣﯾﺎء‪.‬‬
‫‪3‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬
 ‫ﻣﺎ ھﻮ ‪ PCR‬؟‬

‫ھوﺗﻘﻧﯾﺔ ﻣﺧﺑرﯾﮫ ﺗﻘوم ﻋﻠﻰ أﺳﺎس ﺗﺻﻧﯾﻊ ﻧﺳﺦ ﻋدﯾدة ﻣن ﻗطﻊ‬ ‫•‬
‫اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ‪ DNA‬ﻓﻲ اﻟﻣﺧﺗﺑر )‪.(in vitro‬‬
‫ﺑﺣﯾث ﯾﻘوم اﻟﺟﮭﺎز ﺑرﻓﻊ درﺟﺔ اﻟﺣرارة إﻟﻰ ‪ 95‬درﺟﺔ ﻣؤﯾﺔ‬ ‫•‬
‫ﻓﯾﻧﻔﺻل اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي إﻟﻰ ﺟزﺋﯾن ‪..‬‬
‫وﺑﺈﺿﺎﻓﺔ إﻧزﯾﻣﺎت ‪ -‬ﻟﻛل ﺟزء‪ -‬ﺗﺳﺎﻋد ﻋﻠﻰ إﻧﺗﺎج ﻣﺋﺎت اﻟﻧﺳﺦ ﻣن‬ ‫•‬
‫اﻟﻧﺳﺧﺔ اﻷﺻﻠﯾﺔ‪.‬‬
‫اﻟﮭدف ‪ :‬ﺗﺳﮭﯾل إﺟراء اﻻﺧﺗﺑﺎرات و اﻷﺑﺣﺎث وﻓﺣوﺻﺎت‬ ‫•‬
‫إﺿﺎﻓﯾﺔ‪.‬‬
‫وھذه ﺻور ﺗوﺿﺢ ﺧطوات ﻋﻣل اﻟﺟﮭﺎز ‪:‬‬ ‫•‬

‫‪4‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

5 Amal Alghamdi 2017
 PCR ‫ﻣﻠﺨﺺ ﻟﻤﺒﺪأ ﺗﻘﻨﯿﺔ‬

6 Amal Alghamdi 2017

 ‫ﻣﺒﺪأ ﻋﻤﻞ اﻟﺠﮭﺎز‬
‫• ﯾﻣﻛن اﻋﺗﺑﺎر ﺗﻘﻧﯾﺔ ‪ PCR‬ﻣﺣﺎﻛﺎة ﻣﺑﺳطﺔ ﻟﻌﻣﻠﯾﺔ اﻧﺗﺳﺎخ‬
‫اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ‪ DNA‬أﺛﻧﺎء اﻻﻧﻘﺳﺎم اﻟﺧﻠوي‬
‫• ﺗﮭدف ﺗﻘﻧﯾﺔ ‪ PCR‬إﻟﻰ ﺗﺿﺧﯾم ﺟزﯾﺋﺎت ﻗﻠﯾﻠﺔ ﻣن اﻟﺣﻣض‬
‫اﻟﻧووي‪ ، DNA‬ﺑﻌد اﺳﺗﺧﻼﺻﮫ ﻣن ﺧﻼﯾﺎ أو ﺳواﺋل اﻟﺟﺳم‬
‫وﺑﺎﻟﺗﺎﻟﻲ اﻟﺣﺻول ﻋﻠﻰ ﻛﻣﯾﺎت ﻛﺑﯾرة ﻣﻧﮫ ﯾﻣﻛن إﺟراء اﻟﺗﺣﻠﯾل‬
‫ﻋﻠﯾﮫ‪.‬‬
‫• ﻟﯾﺗم ھذا اﻻﻧﺗﺳﺎخ‪ ،‬ﻻ ﺑد ﻣن ﺗوﻓر ﻣواد ﻣﺣددة‪.‬‬

‫‪7‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬
‫• ‪ -1‬ﻋﯾﻧﺔ اﻟﺗﻔﺎﻋل او ﯾﺳﻣﻰ ﻗﺎﻟب اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي) ‪DNA‬‬
‫‪.(Sample‬‬

‫‪8‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬

‫‪ -2‬اﻟﺑﺎدﺋﺎت )‪-:(Primers‬‬ ‫•‬

‫ﻧوﻋﺎن ‪:‬‬ ‫•‬
‫أﻣﺎﻣﻲ )‪.(Forward‬‬ ‫•‬
‫ﻋﻛﺳﻲ ) ‪.(Reverse‬‬ ‫•‬

‫• وھﻲ ﺗﺳﻠﺳل ﻣن اﻟﻘواﻋد اﻟﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﮫ ﻓﻲ ﺷرﯾط واﺣد‬

‫ﻗﺻﯾر)‪ (20-25 bp‬ﻣﻛﻣل ﻟﺗﺗﺎﺑﻊ ﺑداﯾﺔ اﻟﺟزء اﻟﻣراد ﺗﺿﺧﯾﻣﮫ‬
‫ﻓﻲ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي )دﻟﯾل(‪.‬‬
‫‪9‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬
 ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬
‫• ‪-3‬اﻧزﯾم اﻟﺗﻔﺎﻋل ) ‪( Hot Star Taq polymerase‬‬
‫أو) ‪:(Taq polymerase‬‬
‫• ﻣﺳﺗﺧرج ﻣن ﺳﻼﻟﺔ ﺑﻛﺗﯾرﯾﮫ ﺗﺳﻣﻰ ‪ Thermus aquaticus‬اﻟﺗﻲ‬
‫ﺗﺗواﺟد طﺑﯾﻌﯾﺎ ً ﻓﻲ اﻟﯾﻧﺎﺑﯾﻊ ﺣﺎرة‪.‬‬

‫• ﻻﯾﺗﺄﺛر ﺑدرﺟﺎت اﻟﺣرارة اﻟﻣرﺗﻔﻌﮫ‪.‬‬

‫• درﺟﮫ اﻟﺣراة اﻟﻣﺛﻠﻰ ﻟﮫ ‪⁰ 72‬م‪.‬‬

‫‪10‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 PCR ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ‬
-:(Nitrogen Base dNTPs* ) ‫ اﻟﻘواﻋد اﻟﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﺔ‬-4 •
Adenine ‫أدﻧﯾن‬ 
Thymine ‫ﺛﺎﯾﻣﯾن‬ 
Guanine ‫ﺟواﻧﯾن‬ 
Cytosine ‫ﺳﺎﯾﺗوﺳﯾن‬ 

*dNTPs :Deoxynuleoside triphosphates

11 Amal Alghamdi 2017

 ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬
‫• ‪ -5‬ﻣﺣﻠول ﻣﻧظم ) ‪.(PCR Buffer10x‬‬
‫• ‪ -6‬أﯾوﻧﺎت ﻣﻧﺎﺳﺑﺔ‪ ،‬أھﻣﮭﺎ اﻟﻣﻐﻧﯾزﯾوم ‪ Mg+2‬اﻟﺗﻲ ﺗﻌﺗﺑر‬
‫ﻋﺎﻣل ﻣﺗﻣم ‪ Cofactor‬ﻷﻧظﯾم اﻟﺑﻠﻣرة‪.‬‬

‫• ‪ -6‬ﻣﺎء ﻣﻘطر )‪.(DDW‬‬

‫‪12‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬
 ‫ﻣﺘﻄﻠﺒﺎت ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬
‫• ‪-7‬ﺟﮭﺎز ﺗﻔﺎﻋل اﻟﺑﻠﻣرة اﻟﺗﺳﻠﺳﻠﻲ)‪-:(Thermocycler‬‬
‫ﯾﻘوم ھذا اﻟﺟﮭﺎز ﺑﺗﻐﯾر درﺟﺔ اﻟﺣرارة ﺑﺷﻛل ﺳرﯾﻊ و دﻗﯾﻖ و‬
‫ﻣﺗﻛرر ﺑﺎﻧﺗظﺎم ﻷن ﺗﻐﯾر درﺟﺔ اﻟﺣرارة ﻣﮭم ﻓﻲ ﻋﻣﻠﯾﮫ‬
‫اﻟﺗﺿﺎﻋف‪.‬‬

‫‪13‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﺧﻄﻮات ﺗﻘﻨﯿﺔ ‪PCR‬‬
‫ﺛﻼث ﻣﺮاﺣﻞ ﻓﻲ اﻟﺪورة اﻟﻮاﺣﺪة‬
‫‪ -1‬ﻣرﺣﻠﺔ اﻟﺗﻔﻛﯾك اﻟﺣراري ‪: Denaturation‬‬
‫ﯾﺗم رﻓﻊ درﺟﺔ اﻟﺣرارة إﻟﻰ ‪ْ 94‬م وذﻟك ﻟﻔك اﻟﺷﻛل اﻟﻣزدوج ﻟﻠﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪(DNA‬‬
‫اﻷﺻل ‪ .d.s. DNA‬اﻟﻰ ‪s.s.DNA‬‬

‫‪ -2‬ﻣرﺣﻠﺔ اﻟﺗﺻﺎق اﻟﺑﺎدﺋﺎت ‪:Primers annealing‬‬

‫ﺗﺧﻔض درﺟﺔ اﻟﺣرارة إﻟﻰ ﻣﺎ ﺑﯾن ‪ْ 60-55‬م ﻟﺗﻠﺻﻖ اﻟﺑﺎدﺋﺎت ﻓﯾزﯾﺎﺋﯾﺎ ً ﺑواﺳطﺔ اﻟرواﺑط‬
‫اﻟﮭﯾدروﺟﯾﻧﯾﺔ ﻣﻊ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬اﻷﺻل‪.‬‬

‫‪ -3‬ﻣرﺣﻠﺔ اﻻﻣﺗداد‪:Extension‬‬
‫ﺗرﻓﻊ درﺟﺔ اﻟﺣرارة إﻟﻰ ‪ْ 75 - 72‬م ﻟﯾﻘوم اﻧزﯾم اﻟﺑﻠﻣرة ﺑﻌﻣﻠﮫ ﻓﻲ ﺑﻧﺎء اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي‬
‫) ‪(DNA‬اﻟﺟدﯾد ﻓﻲ وﺟود اﻟﻘواﻋد اﻟﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﺔ ‪.dNTPs‬‬
‫ﺗﻣﺛل اﻟﻣراﺣل اﻟﺛﻼث دورة ﻛﺎﻣﻠﺔ وﻧﺗﯾﺟﺔ ﻟﮭﺎ ﯾﺗﺿﺎﻋف اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬اﻷﺻل‪،‬‬
‫وﺗﻌﺗﻣد ﻛﻣﯾﺔ ﻧﺎﺗﺞ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬ﻋﻠﻰ ﻋدد اﻟدورات ﺑﺷﻛل أﺳﻲ ‪.‬‬
‫‪14‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬
 PCR ‫ ﺗﻮﺿﺢ ﺧﻄﻮات ﺗﻘﻨﯿﺔ‬:(1) ‫ﺻﻮره‬
Figure 1: The different steps in PCR.

15 Amal Alghamdi 2017

 ‫ﻟﺤﺴﺎب ﻋﺪد اﻟﺪورات اﻟﻼزﻣﺔ ﻓﻲ ﺟﮭﺎز اﻟـ ‪PCR‬‬

‫• وﯾﻌطﻰ ﻋﺎﻣل اﻟﺗﺿﺧﯾم ﺑﺎﻟﻣﻌﺎدﻟﺔ اﻟﺗﺎﻟﯾﺔ‬

‫• ) ‪x = n ( 1+E‬‬
‫• ﺣﯾث = ‪n‬اﻟﻛﻣﯾﺔ اﻟﺑدﺋﯾﺔ ﻟﻠﺣﻣض اﻟﻧووي اﻟﮭدف‬
‫= ‪E‬ﻓﻌﺎﻟﯾﺔ اﻟﺗﺿﺧﯾم‪( (Efficiency‬‬
‫= ‪X‬ﻋدد دورات‪PCR‬‬

‫‪16‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫طﺮﯾﻘﺔ اﻟﻌﻤﻞ‬

17 Amal Alghamdi 2017

 ‫طﺮﯾﻘﺔ ﻋﻤﻞ ﺟﮭﺎز ‪PCR‬‬
‫• ﺑﺎﺳﺗﺧدام ﻟوﺣﺔ اﻟﻣﻔﺎﺗﯾﺢ وﺷﺎﺷﺔ ﻋرض اﻟﺟﮭﺎز ‪ ،‬ﯾﺗم ادﺧﺎل‬
‫اﻟدورة اﻟﻣﺣددة ﻷي ﻗطﻌﮫ ﻣن اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي اﻟﻣﻔﺻول‪.‬‬

‫‪18‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﻧﻈﺎم اﻟﺘﻔﺎﻋﻞ‬

19 Amal Alghamdi 2017

 ‫طﺮﯾﻘﺔ اﻟﻌﻤﻞ‬
‫‪ ‬ﻧﺿﯾف ‪ 23‬ﻣﺎﯾﻛروﻟﯾﺗر ﻣن اﻟﻣزﯾﺞ اﻟرﺋﯾﺳﻲ ﻟﻛل أﻧﺑوب ﻣن‬
‫أﻧﺎﺑﯾب ‪ PCR‬ﺛم ﻧﺿﯾف ‪ 2‬ﻣﺎﯾﻛروﻟﯾﺗر ﻣن ﻋﯾﻧﮫ اﻟﺣﻣض‬
‫اﻟﻧووي )‪ (DNA‬اﻟﻣراد ﻣﺿﺎﻋﻔﺗﮭﺎ‪.‬‬
‫‪‬ﻛﯾف ﯾﺗم ﺗﺟﮭﯾز اﻟﻣزﯾﺞ اﻟرﺋﯾﺳﻲ ‪ Master Mix‬؟‬

‫‪ ‬ﺗطرد ﺟﻣﯾﻊ اﻷﻧﺎﺑﯾب ﺑﺳرﻋﺔ ‪ 3000‬ﻟﻔﮫ‪/‬دﻗﯾﻘﺔ ﻟﻣدة دﻗﯾﻘﮫ‬

‫واﺣدة ﻟﺧﻠط ﺟﻣﯾﻊ اﻟﻌﯾﻧﺎت وإزاﻟﮫ ﺟﻣﯾﻊ اﻟﻔﻘﺎﻋﺎت‪.‬‬

‫‪20‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫طﺮﯾﻘﺔ اﻟﻌﻤﻞ‬

21 Amal Alghamdi 2017

 ‫أﻧﻮاع ﺗﻘﻨﯿﺔ اﻟـ ‪PCR‬‬
‫‪ PCR‬اﻟﻌﺎدي ‪ :‬وھو ﻣﺎ ﺗم ﺷرﺣﮫ واﻟﺗطرق اﻟﯾﮫ ﻓﻲ اﻟﺧطوات‬
‫اﻟﺳﺎﺑﻘﺔ‪.‬‬

‫‪ : Real-Time PCR‬وھذا اﻟﻧوع ﯾﻘوم ﻋﻠﻰ ﻧﻔس اﻟﻣﺑدأ وﻟﻛن‬

‫اﻟﺧﻼف اﻟوﺣﯾد ﺑﺎن اﻟﺟﮭﺎز ﯾرﺑط ﺑﺟﮭﺎز ﻛﻣﺑﯾوﺗر ﻟﺗﺣدﯾد اﻟوﻗت‬
‫اﻟﺣﻘﯾﻘﻲ ﻟﺑدأ اﻟﺗﻔﺎﻋل وﻣن ﺛم ﺣﺳﺎب اﻟﻛﻣﯾﺔ اﻟﺣﻘﯾﻘﯾﺔ ﻟﻌدد ﻧﺳﺦ‬
‫اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬وﯾﻌﺗﻣد ذﻟك ﻋﻠﻰ وﺟود ﻗواﻋد ﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﺔ‬
‫ﺣرة ﻣﺷﻌﺔ ﻟﺗﺣدﯾد ذﻟك ‪ .‬ﻣﻣﺎ ﯾﻘﻠل ﻣن وﻗت اﻟﺑﺎﺣﺛﯾن ﻟﺗﺣدﯾد وﺟود‬
‫اﻟﺟﯾن اﻟﻣطﻠوب أو ﻻ ‪ ،‬وﻛﻣﯾﺔ اﻟﺟﯾن ﻗﺑل اﻟوﺻول إﻟﻰ ﻧﮭﺎﯾﺔ‬
‫اﻟدورات اﻟﺣرارﯾﺔ اﻟﻣﺣددة ﻓﻲ اﻟﺟﮭﺎز!‬

‫‪22‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 Real-Time PCR (qPCR)

23 Amal Alghamdi 2017

 ‫أﻗﺴﺎم اﻟﻤﺨﺘﺒﺮ اﻟﺨﺎص ﺑﺘﻘﻨﯿﺔ اﻟـ ‪PCR‬‬
‫• ﯾﻣﻛن ﺗﺟﻧب اﻟﺗﻠوث ﺑﺎﻻﻋﺗﻣﺎد ﻋﻠﻰ ﺗﻘﺳﯾم ﻣﻛﺎن اﻟﻌﻣل إﻟﻰ‬
‫ﺛﻼﺛﺔ أﻗﺳﺎم ﻣﻧﻔﺻﻠﺔ ﻋن ﺑﻌﺿﮭﺎ ﺑﺷﻛل ﺗﺎم‪:‬‬
‫‪.1‬ﻗﺳم اﻻﺳﺗﺧﻼص ‪Extraction sector‬‬
‫‪.2‬ﻗﺳم ﺗﺣﺿﯾر اﻟﻛواﺷف‪Reagent preparation sector‬‬
‫وھذان اﻟﻘﺳﻣﺎن ﯾﻌرﻓﺎن ﺑــــ)‪(Pre – PCR sector‬‬
‫‪.3‬ﻗﺳم اﻟﺗﺿﺧﯾم واﻟﺗﺣﻘﻖ ‪Amplification + Detection‬‬
‫‪sector‬‬
‫وﯾﻌرف ھذا اﻟﻘﺳم ﺑــــ) ‪( Post- PCR Sector‬‬

‫‪24‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 DNA ‫ ﺗﻮﺿﺢ اﻟﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ وﺟﻮد اﻟﺤﻤﺾ اﻟﻨﻮوي‬:(2) ‫ﺻﻮرة‬
‫اﻟﻤﻨﺘﺞ ﺑﺎﻟﻔﺼﻞ اﻟﻜﮭﺮﺑﻲ‬
Figure2 : Verification of the PCR product on gel

25 Amal Alghamdi 2017

 ‫ﺗﻄﺒﯿﻘﺎت ﺗﻔﺎﻋﻞ اﻧﺰﯾﻢ اﻟﺒﻠﻤﺮة اﻟﺘﺴﻠﺴﻠﻲ‬
‫اﻟﻛﺷف ﻋن اﻟطﻔرات اﻟوراﺛﯾﺔ ‪ :‬وذﻟك ﻋن طرﯾﻖ وﺿﻊ ﺑرﯾﻣر ﺧﺎص ﻟﻠطﻔرة ﻟﺗﻛﺛﯾر‬ ‫‪‬‬
‫اﻟﺟﯾن اﻟﺧﺎص ﺑﮭﺎ ‪.‬‬
‫ﺗﻌﯾﯾن اﻟﺑﺻﻣﺔ اﻟوراﺛﯾﺔ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ﯾﺳﺎﻋد ﻓﻲ ﺗﺷﺧﯾص ﺑﻌض اﻷﻣراض واﻟﺗﻲ ﺗﺳﺑﺑﮭﺎ ﺑﻛﺗﯾرﯾﺎ أو ﻓﯾروﺳﺎت‪ .‬ﺗﻌد اﻟﺗﻘﻧﯾﺔ‬ ‫‪‬‬
‫اﻷدق ﻓﻲ ﺗﺣدﯾد ﻧوع وﺟﻧس اﻟﻔﯾروس وﻛﻣﯾﺗﮫ‬
‫ﯾﺳﺗﺧدم ﻓﻲ اﻹﺳﺗﻧﺳﺎخ وإﻧﺗﺎج ﺧﻼﯾﺎ أﻛﺛر‬ ‫‪‬‬
‫اﻟﻌﻧﺻر اﻷھم ﻓﻲ ﻋﻣﻠﯾﺔ اﻟﺗﺟﻣﯾﻊ اﻟﺟﯾﻧﻲ ) ‪ Recombinant (DNA‬ﺣﯾث ﻧﻘوم ﺑﺈﻧﺗﺎج‬ ‫‪‬‬
‫ﻧﺳﺦ ﻋدﯾدة ﻣن اﻟﺟﯾن اﻟﻣراد دﻣﺟﮫ ﺑﺎﻟﺑﻼزﻣﯾد أو اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ) ‪ (DNA‬اﻟﻣﺿﯾف‪.‬‬
‫اﺳﺗﺧداﻣﮫ ﻓﻲ ﺗﻐﯾﯾر ﻧﮭﺎﯾﺎت اﻟﺟﯾن ﻟﺗﺻﺑﺢ ﻣﺗواﻓﻘﺔ ﻣﻊ إﻧزﯾﻣﺎت اﻟﻘطﻊ ‪( Restriction‬‬ ‫‪‬‬
‫‪enzyme ) .‬‬
‫ﻋﻣﻠﯾﺔ أﺳﺎﺳﯾﺔ ﻟﺗﺣدﯾد ﺗﺗﺎﺑﻊ اﻟﻘواﻋد اﻟﻧﯾﺗروﺟﯾﻧﯾﺔ ﻓﻲ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ‪(DNA) DNA‬‬ ‫‪‬‬
‫‪.Sequencer‬‬

‫‪26‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬

 ‫ﺗﻄﺒﯿﻘﺎت ﺗﻔﺎﻋﻞ اﻧﺰﯾﻢ اﻟﺒﻠﻤﺮة اﻟﺘﺴﻠﺴﻠﻲ‬
‫ﻣﻌرﻓﺔ طول اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي) ‪. (DNA‬‬ ‫‪‬‬
‫ﺗﻘﻧﯾﺔ اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي اﻟﻣﻛﻣل ) ‪(cDNA‬‬ ‫‪‬‬
‫ﺗﺣدﯾد اﻟﺟﯾن اﻟﻣطﻠوب ﻣن ﺧﻠﯾط ﻣن اﻟﺟﯾﻧﺎت‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ﯾﺳﺗﺧدم ﻓﻲ ﻣﺷروع اﻟﺧﺎرطﺔ اﻟﺟﯾﻧﯾﺔ اﻟﺑﺷرﯾﺔ‪(human genome project ) .‬‬ ‫‪‬‬
‫اﻟﺳﺎوﺛرﯾن ﺑﻠوت‪(Southern plot ) .‬‬ ‫‪‬‬
‫ﺗﻘﻧﯾﺔ ارﺗﺑﺎط اﻟﺣﻣض اﻟﻧووي ﻣﻊ اﻟﺑروﺗﯾن ‪(DNA ) -Protein Interaction ) .‬‬ ‫‪‬‬
‫ﻓﻲ ﻣﺟﺎل اﻟطب اﻟﺷرﻋﻲ ) اﺧﺗﺑﺎر اﻷﻣوﻣﺔ ‪ ،‬ﺣﺎﻻت اﻻﻏﺗﺻﺎب ‪ ،‬ﺗﺣدﯾد اﻟﮭوﯾﺔ ‪...‬‬ ‫‪‬‬
‫اﻟﺦ(‪.‬‬
‫ﺗﺣدﯾد اﻷﻧﻣﺎط اﻟﺟﯾﻧﯾﺔ ‪ Genotyping‬ﻟﻠﻔﯾروس اﻟﻛﺑدي ج‬ ‫‪‬‬
‫ﺗﺷﺧﯾص اﻷﻣراض اﻟﺳرطﺎﻧﯾﺔ ﺑﺎﻟﻛﺷف اﻟﺟﯾﻧﻲ ‪Oncogenes‬‬ ‫‪‬‬
‫ﺗﻌﯾﯾن اﻷﻧﻣﺎط اﻟﻧﺳﯾﺟﯾﺔ ‪ HLA- tissuc typing‬ﻓﻲ ﻣﺟﺎل زراﻋﺔ اﻷﻋﺿﺎء‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫‪27‬‬ ‫‪Amal Alghamdi‬‬ ‫‪2017‬‬