Tel: 508-660-2221 ENG

Fax: 508-660-2224 Creatine Kinase-MB Reagent Set

Email: info@htmed.com
Web˖ http://htidiagnostics.com Catalog №
High Technology, Inc. HT-C124E-65 HT-C124E-340
HT-C124E-150 HT-C124E-540

INTENDED USE 1. Total CK Activity: Determine total CK Activity in serum according to the directions provided in the package
CK-MB is intended to measure the activity of isoenzyme CK-MB in insert for CK Reagent.
human serum.
2. CK-B Activity:
INTRODUCTION IU/L = ΔAbs./min. × TV × 1000 = Abs./min. × 1.050 × 1000
Creatine kinases are dimeric molecules composed of M and B subunits and exist as the isoen zymes MM, MB, d × ∈ × SV 1× 6.22 × 0.050
and BB. The subunits M and B are immunologically distinct; CK-MM and CK-MB are distributed primarily in the = ΔAbs./min. × 3376
skeletal muscle and heart muscle, respectively. While CK-BB is present mainly in the brain and in tissues
composed of smooth muscle. Following acute myocardial infarction, CK-MB activity increases significantly and Where:
this elevation is highly specific for the laboratory diagnosis of myocardial infarction. Although total CK activity ΔAbs./min. = Average absorbance change per minute
usually increases following myocardial infarction, in somepatients only the CK-MB activity increases, while the TV = Total reaction volume (1.050)
total CK remains in the normal range. 1000 = Conversion of IU/ml to IU/L
In conventional methods, CK isoenzymes are quantitated after first separating the three species by D = Light path in cm (1.0)
electrophoresis, column anion exchange, or batch anion exchange chromatography. However, these methods ∈ = Millimolar absorptivity of NADH (6.22)
are time consuming. In recent times, Wurzburg et al. has introduced an immunoinhibition method. This SV = Sample volume in ml (0.050)
methodology forms the basis of our CK-MB reagent. 3. CK-MB Activity:
CK-MB activity is calculated from CK-B activity as follows:
PRINCIPLE
The sample is incubated in the CK-MB reagent which includes the anti-CK-M antibody. The activity of the CK-MB Activity (U/L) = CK-B Activity U/L x 2*
noninhibited CK-B is thendetermined using the following series of reactions: *CK-MB molecule is a dimer consisting of a B subunit and an M subunit. Antibody complexing with the M subunit
CK results in loss of half the catalytic activity of the CK-MB molecule. Therefore, CK-MB activity in the sample is
ADP + Creatine Phosphate ------------ÆCreatine + ATP equal to twice the CK-B activity.
HK
ATP + Glucose--------------Æ ADP + Glucose-6-Phosphate Example:
G6PDH If your average absorbance change per minute is 0.020, then:
G-6-P + NAD+-----------Æ 6-Phosphogluconate + NADH + H+ 0.020 × 3376 = 67.5 IU/L (CK-B Activity)
CK-B catalyzes the reversible phosphorylation of ADP, in the presence of creatine phosphate, to form ATP and
creatine. The auxiliary enzyme hexokinase (HK) catalyzes the phosphorylation of glucose by the ATP format, to NOTE: CK-MB activity (IU/L) = CK-B activity (IU/L) × 2
produce ADP and glucose-6-phosphate (G-6-P) is oxidized to 6-phosphogluconate with the concomitant For example, if CK-B activity is 67.5 IU/L then
production of NADH. The rate of NADH formation, measured at 340 nm, is directly proportional to serum CK-B CK-MB = 67.5 × 2 = 135.0
activity. Percentage of CK-MB activity in sample is:

REAGENT COMPOSITION % CK-MB activity = CK-MB activity × 100

CK-MB Reagent: Total CK activity
Creatine Phosphate 30 mM; Adenosine-5'-Phosphate 2mM; Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NAD) 2mM; For example, if the total CK activity is 1007 IU/L, the CK- B
Hexokinase (Yeast) ≥ 3000 U/L; Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (Bacterial) ≥ 2000 U/L activity is 67.5 IU/L, and the CK-MB activity is 135 IU/L , then

WARNINGS AND PRECAUTIONS % CK-MB activity = 135 × 100% = 13.5%

1. For in vitro diagnostic use. 1007
2. Exercise the normal precautions required for the handling of all laboratory reagents. Pipetting by mouth is not CALIBRATION
recommended for any laboratory reagent. Calibration is not required. The CK activity in the sample is calculated based on t he millimolar absorptivity of
NAD. CK-MB reagent is suitable for CK isoenzyme assay when total CK activity in the sample does not exceed
REAGENT PREPARATION 1500 IU/L at
Reconstitute each vial of CK-MB reagent with the volume of DI water specified on the vial label. Swirl to 37°C.
dissolve.
QUALITY CONTROL
STORAGE AND STABILITY Use control sera with known normal and abnormal values to monitor the integrity of the reaction in each set of
The unreconstituted reagent and diluent should be stored at 2 - 8°C. They are stable until the expiration date. assay. Values should be acceptable for this method and temperature.
The reconstituted reagent is stable for 5 days in refrigerator (2 - 8°C).
TEMPERATURE CONVERSION FACTORS
SPECIMEN COLLECTION To convert CK-MB activity at 37°C to 30°C value, multiply the result by 0.60
Serum is the specimen of choice for this assay. Avoid exposure of samples to strong light. Store samples in
refrigerator (2-8°C), but no longer than one week. Freezing of samples (-20°C) results in minimal loss of activity. EXPECTED VALUES
0 - 24 IU/L (37°C)
INTERFERING SUBSTANCES 0 - 14 IU/L (30°C)
Extremely hemolyzed samples are not suitable for the test since they may contain high levels of adenylate % CK-MB < 5.5%
kinase, ATP, and glucose-6-phosphate, which interfere with the assay to yield false results. Drugs and other It is recommended that each laboratory establish its own range of expected values, since differences exist
substances, which may interfere with the determination of creatine kinase activity, have been listed by Young et between instruments, laboratories, and local populations.
al.10 The described procedure may overestimate CK-MB values if CK-BB activity in the serum is very high.
However, CK-BB activity is usually absent in sera from normal PERFORMANCE CHARACTERISTICS
individuals and patients with myocardial infarction. Some investigators have observed a macro form of BB 1. Linearity: 1500 IU/L
(immunoglobulin complexed), which may be measured as B in this assay. The presence of macro BB in the 2. Sensitivity: Based on an instrument resolution of A = 0.001, this procedure has a sensitivity of 4 IU/L.
specimen should be suspected if the CK-B activity measured by this procedure represents more than 20% of the 3. Comparison: Studies done between this procedure and Sigma procedure yield a correlation coefficient of 0.98
total CK activity. with a regression
equation of Y = 0.98X - 0.823 (N= 40).
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED 4. Precision:
Sample and reagent pipettes, test tubes or cuvettes, timer, thermoregulated flowcell, spectrophotometer, control Within Run
serum. Mean (IU/L) S.D. C.V. (%)
Normal 34 2.8 8.2
AUTOMATED PROCEDURE Abnormal 132 9.9 7.5
Consult our appropriate instrument application instructions.
NOTE: Certain instruments require different reconstitution volumes than those stated on the vial label. Re fer to Run to Run
appropriate application sheets. Mean (IU/L) S.D. C.V. (%)
Normal 32 3.1 9.8
MANUAL PROCEDURE Abnormal 122.8 9.2 7.4
1. Reconstitute CK-MB reagent according to instructions. Manufactured By
2. Pipette 1.0 ml of CK-MB reagent into the appropriate test tubes and pre-warm at 37°C for at least two (2) High Technology, Inc.
minutes. 20 Alice Agnew Dr. EMERGO EUROPE
3. Zero spectrophotometer with water at 340 nm. North Attleboro, MA 02763 USA Prinsessegracht 20
4. Add 0.050 ml (50μl) of sample to the reagent, mix, and incubate at 37°C for five (5) minutes. Tel: 1-508-660-2221 2514 AP The Hague
5. After five minutes, read and record the change in absorbance per minute for two (2) minutes E-mail: info@htmed.com The Netherlands
6. Calculate the average absorbance difference per minute (ΔAbs./min.). www.htmed.com, http://htidiagnostics.com +31 70 345 8570
7. The ΔAbs./min. multiplied by the factor 3376 (see Calculations) Manufactured by Manufactured by
will yield CK-B results in IU/L.
8. Samples with values above 1500 IU/L should be diluted 1:1 with
saline, re-assayed, and the results multiplied by two (2). Catalog number Catalog number

NOTE: If the spectrophotometer being used requires a final volume greater than 1.0 ml for accurate readings,
3.0 ml of reagent and 0.15 ml (150 μl) of sample can be used. If the spectrophotometer being used is equipped Temperature Temperature limitation
with a temperature-controlled cuvette, the reaction mixture may be left in the cuvette while readings are taken. limitation

LIMITATIONS Lot number Lot number

The procedure assumes that CK-BB activity in the sample is negligible. If a significant amount of CK-BB activity
is present, then the CK-MB activity will also be overestimated.
This product conforms to the directive 98/79/EC (IVD-directive)

CALCULATIONS

IS-ERUK-C124 Rev.1 2018-04-23 Page 1 of 4

 Tel: 508-660-2221 RUS
Fax: 508-660-2224 Креатинкиназа -МВ
Email: info@htmed.com
Web˖ http://htidiagnostics.com Каталожный №
HT-C124-65 HT-C124-340
High Technology, Inc. HT-C124-150 HT-C124-540

Назначение *Молекула КК-МВ – димер, состоящий из В и М субъединиц. Связывание антител с М субъединицей приводит к
Реагент предназначен для измерения активности изофермента КК-МВ в сыворотке человека. потере половины каталитической активности КК-МВ молекулы. Поэтому, КК-МВ активность в образце равна
Введение двойной активности КК-В.
Креатинкиназа – димерные молекулы, состоящие из М и В субъединиц и существующие в виде изоферментов:
ММ, МВ и ВВ. Субъединицы М и В различаются иммунологически; КК-ММ и КК-МВ в основном содержатся в Пример:
скелетной и сердечной мышечной ткани, КК-ВВ присутствует, главным образом, в головном мозге и в гладкой Если среднее поглощение в минуту составляет 0,020, то: 0,020 х 3376 = 67,5 Ед/л (КК-В активность)
мускулатуре. После острого инфаркта миокарда значительно увеличивается активность КК-МВ, и повышение
активности данного изофермента является очень специфичным признаком инфаркта миокарда. Хотя после ПРИМЕЧАНИЕ:
инфаркта миокарда увеличивается общая активность КК, у некоторых пациентов увеличивается активность только КК-МВ активность (Ед/л) = КК-В активность (Ед/л) х 2
КК-МВ, а общая активность КК остается в нормальном диапазоне значений. Например, если КК-В активность – 67,5 Ед/л, то КК-МВ = 67,5 х 2 = 135,0
В широко распространенных методах, изоферменты КК количественно определяются после первого разделения Процентная доля КК-МВ активности в образце:
одним из трех способов: электрофорез, колоночная анионообменная хроматография7 или порционная %КК-МВ активность = КК  МВактивнос ть u 100
анионообменная хроматография. Хотя проведение данных методов занимает много времени. Позднее Wurzburg и
соавт. предложили иммуноингибиторный метод. Данная методика является основой методикой определения ОбщаяККакт ивность
реагента (КК-МВ).
Принцип метода Например, если общая активность КК – 1007 Ед/л, активность КК-В – 67,5 Ед/л, активность КК-МВ – 135 Ед/л, то
Образец инкубируется в КК-МВ реагенте, содержащем антитела к КК-М. После чего определяется активность не
ингибированной КК-В с использованием следующей последовательности реакций: %КК-МВ активности = 135u 100% =13,5%
КК 1007
ADP + креатининфосфат --------→ креатинин + АТР Калибровка
ГК Активность КК в образце рассчитывается на основе миллимолярного поглощения NAD. КК-МВ реагент подходит
АТР + глюкоза --------------→ ADP + глюкозо-6-фосфат для измерения активности соответствующего изофермента КК, если общая активность КК в образце не более 1500
Г6ФДГ Ед/л при 37ºС.
Г-6-Ф + NAD+ ---------→ 6-фосфоглюконат + NADH + Н+
КК-В катализирует обратимое фосфорилирование ADP в присутствии креатинфосфата в АТР и креатин. Контроль качества
Вспомогательный фермент – гексокиназа (ГК) катализирует фосфорилирование глюкозы в присутствии АТР с В рутинной практике контроли на основе сыворотки с известными значениями для нормы и патологии должны
образованием ADP и глюкозо-6-фосфата (Г-6-Ф), который окисляется в 6-фосфоглюконат с образованием NADH. использоваться для контроля качества данного метода. В выбранных условиях измерения данным методом
Скорость образования NADH измеряется при 340 нм, она прямо пропорциональна активности КК-В в сыворотке. необходимо, чтобы полученные величины попадали в указанный для контрольных сывороток диапазон.
Состав реагентов
КК-МВ Реагент: Температурный коэффициент
Креатинфосфат 30 мМ, аденозин-5'-фосфат 2 мМ, никотинамидадениндинуклеотид (NAD) 2 мМ, гексокиназа Для перевода активности КК-МВ, измеренной при 37ºС, в активность КК-МВ при 30 ºС, необходимо величину
(дрожжи) ≥ 3000 Ед/л, глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа (бактериальная) ≥ 2000 Ед/л активности фермента при 37 ºС умножить на 0,60
Меры предосторожности
1.Реагенты только для «In vitro» диагностики. Ожидаемые значения
2.При работе со всеми лабораторными реагентами требуется соблюдение мер предосторожности. Не 0-24 Ед/л (37ºС)
рекомендуется пипетирование лабораторного реагента ртом. 0-14 Ед/л (30ºС)
Приготовление реагента %КК-МВ<5,5%
Растворить каждый флакон с КК-МВ реагентом таким объемом деионизованной воды, который указан на этикетке. Для каждой лаборатории настоятельно рекомендуется установление собственного диапазона ожидаемых
Перемешать для растворения. значений, т.к. существуют различия между приборами, лабораториями и местным населением.
Хранение реагента
Реагент в сухом виде и дилюент следует хранить при 2-8ºС. Они стабильны на протяжении всего срока годности. Характеристики теста
Растворенный реагент стабилен 5 дней в холодильнике (2-8 ºС). 1. Линейность: 1500 Ед/л
Сбор образцов 2. Чувствительность: Учитывая разрешающую способность оборудования А=0,001, чувствительность
В качестве образца необходимо использовать сыворотку. Избегать воздействия на сыворотку прямого солнечного описанного метода – 4 Ед/л.
света. Образцы следует хранить в холодильнике (2-8ºС), но не дольше одной недели. Замораживание образцов (- 3. Сравнение: В результате сравнительного исследования данного метода и метода Sigma был получен
20ºС) приводит к минимальной потере активности. коэффициент корреляции 0,98 с регрессионным уравнением у=0,98х-0,823 (N=40).
Влияние других соединений 4. Точность:
Выраженно гемолизированные образцы не подходят для тестирования, т.к. они могут содержать высокие Внутри серии
концентрации аденилаткиназы, АТР и глюкозо-6-фосфата, что приводит к ошибочным результатам данного Значение (Ед/л) S.D. C.V(%)
метода. Young и соавт. привели список лекарств и других веществ, которые могут влиять на определение Норма 34 2,8 8,2
активности креатинкиназы. Если активность КК-ВВ в сыворотке значительно повышена, то измеренная данным Патология 132 9,9 7,5
методом активность КК-МВ может быть завышена. Хотя, активность КК-ВВ обычно отсутствует в сыворотке От серии к серии
здорового человека и пациентов с инфарктом миокарда. Некоторые исследователи наблюдали образование Значение (Ед/л) S.D. C.V(%)
макроформы ВВ (иммуноглобулинового комплекса), который с использованием данного метода может Норма 32 3,1 9,8
определяться как В. Необходимо рассматривать возможность образования макро ВВ в образце, если измеряемая Патология 122.8 9,2 7,4
данным методом активность КК-В составляет более 20% от общей КК активности.
Необходимые, но не поставляемые материалы ИЗГТОВЛЕНО Уполномоченный представитель в РФ:
Пипетки для образца и реагента, пробирки или кюветы, таймер, термостатированная проточная ячейка, High Technology, Inc. ООО «Бизнес Технологии»
спектрофотометр, контрольная сыворотка. 20 Alice Agnew Dr. ул. Саморы Машела, 8/2, Москва 117198,
Автоматизированная процедура North Attleboro, MA 02763 USA Россия
Процедура проведения – см. инструкцию к анализатору. Tel: 1-508-660-2221 Тел: 8(495) 232-02-13
ПРИМЕЧАНИЕ: Некоторым приборам для проведения измерений требуются объемы растворенного реагента, E-mail: info@htmed.com Электронная почта: info@intermedica.ru
отличные от объемов, указанных на этикетках реагентов. См. соответствующие инструкции к приборам. www.htmed.com, http://htidiagnostics.com
Ручной метод определения Уполномоченный представитель в РК
1.Растворить КК-МВ реагент в соответствии с инструкциями. ТОО "Интермедика Алматы" 050059, г.
2.Внести 1,0 мл КК-МВ реагента в соответствующие пробирки, проинкубировать их при 37ºС как минимум 2 Алматы, ул. Ташкентская 348/4,оф.211
минуты. Тел: 8(727) 352-79-70,71
3.Настроить спектрофотометр на «0» по воде при 340 нм. Электронная почта: info@intermedica.kz
4.Внести 0,050 мл (50 мкл) образца к реагенту, перемешать и инкубировать пробирки при 37ºС в течение 5 минут. Производитель Использовать до
5.После 5 минут измерить и зафиксировать изменение поглощения в минуту в течение 2 минут.
6.Рассчитать среднюю разницу поглощения в минуту (∆Аbs/мин)
7.Величину ∆Аbs/мин необходимо умножить на коэффициент 3376 (см. Расчеты) для получения активности КК-В в
Ед/л Каталожный номер для диагностики In Vitro
8.Образцы с активностью более 1500 Ед/л должны быть разведены 1:1 физраствором, повторно измерены и
результат необходимо умножить на 2.
Допустимый Авторизированный
ПРИМЕЧАНИЕ: Если для точного измерения спектрофотометра требуется объем пробы более 1,0 мл, то диапазон представитель в Европейском
необходимо использовать 3,0 мл реагента и 0,15 мл (150 мкл) образца. Если спектрофотометр имеет температуры
термостатируемое кюветное отделение, то реакционную смесь можно оставлять в кювете при измерении. Сообществе
хранения
ОГРАНИЧЕНИЯ Номер лота Смотри инструкцию по
Метод подразумевает, что КК-ВВ активность в образце незначительна. Если в сыворотке присутствует применению
значительное количество КК-ВВ, то измеряемая активность КК-МВ будет завышена.
Результаты Данный продукт соответствуют директиве 98/79 / EC (IVD директиве)
Активность общей КК:
Определить общую активность КК в сыворотке в соответствии с инструкцией, вложенной в упаковку с КК
реагентом.
Рег. уд. № ФСЗ 2011/11303
КК-В активность:
Ед/л = =
'Abs / мин u TV u 1000
d u H u SV

'Abs / мин u 1.050 u 1000 =∆Abs/мин х 3376

1 u 6.22 u 0.050

Где:
∆Abs/мин = Среднее изменения поглощения в минуту
TV = Общий объем реакции (1,050)
1000 = Перевод Ед\мл в Ед/л
D = Длина оптического пути в см (1,0 см)
ε = миллимолярное поглощение NADH (6,22)
SV = Объем образца в мл (0,050)
КК-МВ активность:
КК-МВ активность рассчитывается с использованием КК-В активности в соответствии с формулой:
КК-МВ активность (Ед/л) = КК-В активность Ед/л х 2*

IS-ERUK-C124 Rev.1 2018-04-23 Page 2 of 4

 Tel: 508-660-2221 UKR
Fax: 508-660-2224 Креатинкіназа-МВ Набір реагентів
Email: info@htmed.com
Web˖ http://htidiagnostics.com Каталожный №
High Technology, Inc. HTI-C7562-60 HTI-C7562-340
HTI-C7562-150 HTI-C7562-540

Кат.номер Назва англійською мовою Назва українською мовою

Creatine Kinase-MB Reagent Set: Креатинкіназа-МВ Набір реагентів: КК-В активність:
HTI-C7562-150
R1, 10x15ml Реагент1, 10х15мл
Creatine Kinase-MB Reagent Set: Креатинкіназа-МВ Набір реагентів: Од/л = =
HTI-C7562-60
R1, 10x6.5ml Реагент1, 10х6.5мл
HTI-C7562-340
Creatine Kinase-MB Reagent Set: Креатинкіназа-МВ Набір реагентів: ෙ$EV͓͏͔͜
R1, 3x40ml Реагент1, 3х40мл Де:
Creatine Kinase-MB Reagent Set: Креатинкіназа-МВ Набір реагентів: ΔAbs / мин = Середнє зміни поглинання в хвилину
HTI-C7562-540
R1, 5x40ml Реагент1, 5х40мл TV = Загальний обсяг реакції (1,050)
Призначення 1000 = Переклад Од \ мл в Од / л
Реагент призначений для вимірювання активності ізоферменту КК-МВ в сироватці людини. D = Довжина оптичного шляху в см (1,0 см)
Введення Ε = міллімолярних поглинання NADH (6,22)
Креатинкіназа - димерні молекули, які складаються з М і В субодиниць та існують у вигляді SV = Обсяг зразка в мл (0,050)
ізоферментів: ММ, МВ і ВВ. Субодиниці М і В розрізняються імунологічно; КК-ММ і КК-МВ в КК-МВ активність:
основному містяться в скелетній та серцевій м'язовій тканині відповідно. КК-ВВ присутній, головним КК-МВ активність розраховується з використанням КК-В активності відповідно до формули:
чином, в головному мозку і в гладкій мускулатурі. Після гострого інфаркту міокарда значно КК-МВ активність (Од / л) = КК-В активність Од / л х 2 *
збільшується активність КК-МВ, і збільшення активності даного ізоферменту є дуже специфічною * Молекула КК-МВ - димер, що складається з В і М субодиниць. Зв'язування антитіл з М
ознакою інфаркту міокарда. Хоча після інфаркту міокарда збільшується загальна активність КК, у субодиницею призводить до втрати половини каталітичної активності
деяких пацієнтів збільшується активність тільки КК-МВ, а загальна активність КК залишається в КК-МВ молекули. Тому, КК-МВ активність у зразку дорівнює подвійній активності КК-В.
нормальному діапазоні значень. Приклад:
У широко поширених методах ізоферменти КК кількісно визначаються після першого поділу одним з Якщо середнє поглинання в хвилину становить 0,020, то: 0,020 х 3376 = 67,5 Од / л (КК-В активність)
трьох способів: електрофорез, колоночна аніонообмінна хроматографія або порційна аніонообмінна
хроматографія. Хоча, проведення даних методів займає багато часу. Пізніше Wurzburg і співавт.
запропонували іммуноінгібіторний метод. Дана методика є основою даного КК-МВ реагенту. ПРИМІТКА:
Принцип методу КК-МВ активність (Од / л) = КК-В активність (Од / л) х 2
Зразок інкубується в КК-МВ реагенті, що містить антитіла до КК-М. Після чого визначається Наприклад, якщо КК-В активність - 67,5 Од / л, то КК-МВ = 67,5 х 2 = 135,0
активність не інгібованої КК-В з використанням наступної послідовності реакцій: Відсоткова частка КК-МВ активності в зразку:
у
КК
$'3͇͙͑͗͌͏͔͔͕͇͙ͬ͛͛͘ൺ͇͙͑͗͌͏̷̧͔͔̹ͬ
ГК %КК-МВ активність =
̷̧̹͕͎͇͊͒ͥ͑ൺ$'3͕͎͕͕͇͙͊͒ͥ͑͛͛͘ Наприклад, якщо загальна активність КК – 1007 Од/л, активність КК-В – 67,5 Од/л, активність КК-МВ
Г6ФДГ
Г-6-Ф + NAD+ൺ͕͕͕͔͇͙͛͛͊͒ͥ͑͘1$'+̴+
– 135 Од/л, то %КК-МВ активності = =13,5%
КК-В каталізує оборотне фосфорилування ADP в присутності креатинфосфату в АТР і креатин.
Допоміжний фермент - гексокіназа (ГК) каталізує фосфорилювання глюкози в присутності АТР з Калібрування
утворенням ADP і глюкозо-6-фосфату (Г-6-Ф), який окислюється в 6-фосфоглюконат з утворенням Активність КК у зразку розраховується на основі міллімолярного поглинання NAD. КК-МВ реагент
NADH. Швидкість утворення NADH вимірюється при 340 нм, вона прямо пропорційна активності КК- підходить для вимірювання активності відповідного ізоферменту КФК, якщо загальна активність КК у
В в сироватці. зразку не більше 1500 Од / л при 37ºС.
Склад реагентів Контроль якості
КК-МВ Реагент: У рутинній практиці контролі на основі сироватки з відомими значеннями для норми і патології
Креатинфосфат 30 мМ, аденозин-5'-фосфат 2 мМ, нікотинамідаденіндинуклеотид (NAD) 2 мМ, повинні використовуватися для контролю якості даного методу. У вибраних умовах вимірювання
гексокіназа (дріжджі) ≥ 3000 Од / л, глюкоза-6-фосфат дегідрогеназа (бактеріальна) ≥ 2000 Од / л даним методом необхідно, щоб отримані величини потрапляли в зазначений для контрольних
Запобіжні заходи сироваток діапазон
1.Реагенти тільки для «In vitro» діагностики. Температурний коефіцієнт
2.При роботі з усіма лабораторними реагентами потрібне дотримання заходів обережності. Не Для перекладу активності КК-МВ, виміряної при 37ºС, в активність КК-МВ при 30 ºС, необхідно
рекомендується піпетування лабораторного реагенту ротом. величину активності ферменту при 37 ºС помножити на 0,60
Приготування реагенту Очікувані значення
Розчинити кожен флакон з КК-МВ реагентом таким обсягом деіонізованої води, який вказаний на 0-24 Од / л (37ºС)
етикетці. Перемішати для розчинення. 0-14 Од / л (30ºС)
Зберігання реагенту % КК-МВ <5,5%
Реагент в сухому вигляді і ділюєнт слід зберігати при 2-8ºС. Вони стабільні протягом усього терміну Для кожної лабораторії настійно рекомендується встановлення власного діапазону очікуваних
придатності. Розчинений реагент стабільний до 5 днів в холодильнику (2-8 ºС). значень, т.к. існують відмінності між приладами, лабораторіями та місцевим населенням.
Збір зразків Характеристики тесту
В якості зразка необхідно використовувати сироватку. Уникати впливу на сироватку прямого 1. Лінійність: 1500 Од / л
сонячного світла. Зразки слід зберігати в холодильнику (2-8ºС), але не довше одного тижня. 2. Чутливість: Враховуючи роздільну здатність обладнання А = 0,001, чутливість описаного методу -
Заморожування зразків (-20ºС) призводить до мінімальної втрати активності. 4 Од / л.
Вплив інших з'єднань 3. Порівняння: В результаті порівняльного дослідження даного методу і методу Sigma був
Виражено гемолізовані зразки не підходять для тестування, тому вони можуть містити високі отриманий коефіцієнт кореляції 0,98 з регресійним рівнянням у = 0,98х-0,823 (N = 40).
концентрації аденілаткінази, АТР і глюкозо-6-фосфату, що призводить до помилкових результатів 4. Точність:
даного методу. Young і соавт. привели список ліків та інших речовин, які можуть впливати на
визначення активності креатинкінази. Якщо активність КК-ВВ у сироватці значно підвищена, то Всередині серії Від серії до серії
виміряна даним методом активність КК-МВ може бути завищена. Хоча, активність КК-ВВ зазвичай Значення S.D. C.V(%) Значення S.D. C.V(%)
відсутня в сироватці здорової людини і пацієнтів з інфарктом міокарда. Деякі дослідники (Од/л) (Од/л)
спостерігали утворення макроформи ВВ (іммуноглобулінового комплексу), який з використанням Норма 34 2,8 8,2 Норма 32 3,1 9,8
даного методу може визначатися як В.12,13,14 Необхідно розглядати можливість утворення макро ВВ Патологія 132 9,9 7,5 Патологія 122,8 9,2 7,4
у зразку, якщо вимірювана даним методом активність КК-В становить більше 20% від загальної КК
активності.
Необхідні, але не надані матеріали ВИРОБНИК Уповноважений представник виробника в Україні:
Хай Технолоджі Інк. ТОВ «Інтермедика-Україна»,
Піпетки для зразка і реагенту, пробірки або кювети, таймер, термостатуюча проточна кювета, 20 Еліс Агнью Драйв, Північний Аттлборо, Юридична адреса: 03067 м.Київ, вул.Гарматна, 6,
спектрофотометр, контрольна сироватка. Массачусетс 02763, США ЄДРПОУ 38716182
Автоматизована процедура Тел: 1-508-660-2221
Процедура проведення - див. Інструкцію до аналізатора. E-mail: info@htmed.com
ПРИМІТКА: Деяким приладам для проведення вимірювань потрібні обсяги розчиненого реагенту, www.htmed.com, http://htidiagnostics.com
відмінні від обсягів, зазначених на етикетках реагентів. Див. Відповідні інструкції до приладів.
Ручний метод визначення
Виробник Термін придатності
1.Растворіть КК-МВ реагент відповідно до інструкцій.
2.Внесті 1,0 мл КК-МВ реагенту у відповідні пробірки, преінкубуйте їх при 37ºС як мінімум 2 хвилини.
3.Налаштуйте спектрофотометр на «0» по воді при 340 нм.
Каталожний номер In vitro діагностика
4.Внести 0,050 мл (50 мкл) зразка до реагенту, перемішати і інкубувати пробірки при 37ºС протягом
5 хвилин.
5.Після 5 хвилин виміряти і зафіксувати зміну поглинання в хвилину протягом 2 хвилин. Уповноважений представник в
6.Розрахуйте середню різницю поглинання в хвилину (ΔАbs / хв) Температура зберігання
Європейському співтоваристві
7.Величину ΔАbs / хв необхідно помножити на коефіцієнт 3376 (див. Розрахунки) для отримання
активності КК-В в Од / л
8.Зразки з активністю більше 1500 Од / л повинні бути розведені 1: 1 фізіологічним розчином, Номер лоту Зверніться до інструкції по
повторно виміряні і результат необхідно помножити на 2. застосуванню
Партія
ПРИМІТКА: Якщо для точного вимірювання спектрофотометра потрібен обсяг проби більше 1,0
мл, то необхідно використовувати 3,0 мл реагенту і 0,15 мл (150 мкл) зразка. Якщо Даний виріб відповідає
спектрофотометр має термостатуюче кюветне відділення, то реакційну суміш можна вимогам директиви 98/79 / EC Знак відповідності ТР
залишати в кюветі при вимірюванні. (IVD-директива)
Обмеження
Метод передбачає, що КК-ВВ активність у зразку незначна. Якщо в сироватці присутня значна
кількість КК-ВВ, то вимірювана активність КК-МВ буде завищена.
Результати
Активність загальної КК:
Визначити загальну активність КК у сироватці відповідно до інструкції, вкладеної в упаковку з КК
реагентом.

IS-ERUK-C124 Rev.1 2018-04-23 Page 3 of 4

 Tel: 508-660-2221 KAZ
Fax: 508-660-2224 Креатинкиназа -МВ
Email: info@htmed.com
Web˖ http://htidiagnostics.com Каталожный №
High Technology, Inc. HT-C124K-65-2
HT-C124K-150-2
Арналуы Мұндағы:
Реагент адамның сарысуындағы изоферменттің КК-МВ белсенділігін өлшеуге арналған. ∆Abs/мин = Минутына сіңірудің орташа өзгеруі
Кіріспе TV = Жалпы реакция көлемі (1,050)
Креатинкиназа – димерлі молекулалар, М жəне В субъбірліктерден жəне изоферменттер түрінде əрекет 1000 = Бірл\мл Бірл/л-ге ауыстыру
ететін: ММ, МВ жəне ВВ тұрады. М жəне В субъбірліктер иммунологиялық тұрғыдан ерекшеленеді; КК-ММ D = Оптикалық жолдың ұзындығы, см (1,0 см)
жəне КК-МВ негізінен скелетті жəне тіннің жүрек бұлшықетінде бар, КК-ВВ ең бастысы бас миында жəне ε = миллимолярлық сіңіру NADH (6,22)
жұмсақ бұлшықеттерде бар. Асқынған миокард инфарктінен кейін КК-МВ белсенділігі біршама артады SV = Үлгінің көлемі, мл (0,050)
жəне осы изоферменттің белсенділігінің артуы миокард инфарктінің өте ерекше белгісіболып табылады. КК-МВ белсенділік:
Дегенмен, миокард инфарктінен кейін КК жалпы белсенділігі артады, ал кейбір пациенттердің тек КК-МВ КК-МВ белсенділік формулаға сəйкес КК-В белсенділікті пайдалану арқылы есептеледі:
белсенділігі артады, ал КК жалпы белсенділігі мəндердің қалыпты диапазонында қалады . КК-МВ белсенділік (Бірл/л) = КК-В белсенділік Бірлд/л х 2*
Кең таралған əдістерде КК изоферменттер үш тəсілдің біреуін бірінші бөлгеннен кейін сандық *Молекула КК-МВ – димер, В жəне М субъбірліктерден тұрады. Антиденелерді М субъбірліктермен
анықталады: электрофорез, бағаналы анионды алмасатын хроматография7 немесе үлесті анионды байланыстыру КК-МВ молекуланың каталитикалық белсенділігінің жартысының жоғалуына алып келеді.
алмасатын хроматография. Алайда осы əдістерді жүргізу көп уақытты алады. Кейіндеп Wurzburg жəне Сондықтан, КК-МВ үлгідегі белсенділік КК-В қосарлы белсенділікке тең.
бірлескен автор иммуноингибиторлы əдісті ұсынды. Оы əдістеме реагентті (КК-МВ) анықтаудың негізгі
əдістемесі болып табылады. Мысал:
Əдістің қағидасы Егер минутына орташа сіңіру 0,020 құрайтын болса, онда: 0,020 х 3376 = 67,5 Бірл/л (КК-В белсенділік)
Үлгі КК-М антиденесі бар КК-МВ реагентте инкубацияланады. Содан кейін реакцияның келесі реттілігін
пайдалана отырып, баяулатылмаған КК-В белсенділігі анықталады: ЕСКЕРТПЕ:
КК КК-МВ белсенділік (Бірл/л) = КК-В белсенділік (Бірл/л) х 2
ADP + креатининфосфат --------→ креатинин + АТР Мысалы, егер КК-В белсенділік – 67,5 Бірл/л, онда КК-МВ = 67,5 х 2 = 135,0
ГК Үлгідегі КК-МВ белсенділіктің пайыздық үлесі:
АТР + глюкоза --------------→ ADP + глюкозо-6-фосфат %КК-МВ белсенділік = КК  МВактивнос
белсенділікть u 100
Г6ФДГ
Г-6-Ф + NAD+ ---------→ 6-фосфоглюконат + NADH + Н+ ОбщаяККакт
Жалпы ивность
КК белсенділік

КК-В АТР креатинфосфаттың жəне креатиннің болуымен қайтымды ADP фосфорлануды катализдейді.
Қосымша фермент – гексокиназа (ГК) ADP жəне глюкозо-6-фосфатты (Г-6-Ф) түзу арқылы АТР Мысалы, егер жалпы белсенділік КК – 1007 Бірл/л, белсенділік КК-В – 67,5 Бірл/л, белсенділік КК-МВ –
қатысуымен фосфорланған глюкозаны катализдейді, ол NADH түзу арқылы 6-фосфоглюконатта 135 Бірл/л, онда %КК-МВ белсенділік = 135u 100% =13,5%
қышқылданады. NADH түзу жылдамдығы 340 нм кезінде өлшенеді, ол сарысудағы КК-В белсенділігіне
тура пропорционалды. 1007
Реагенттер құрамы Калибрлеу
КК-МВ Реагент: Үлгідегі КК белсенділік NAD миллимолярлық сіңіру негізінде есептеледі. Егер үлгідегі КК жалпы
Креатинфосфат 30 мМ, аденозин-5'-фосфат 2 мМ, никотинамидадениндинуклеотид (NAD) 2 мМ, белсенділігі 37ºС температурада 1500 Бірл/л артық болмаса, КК-МВ реагент тиісті изоферменттің
гексокиназа (ашытқы) ≥ 3000 Ед/л, глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа (бактериалды) ≥ 2000 Ед/л белсенділігін өлшеуге жарамды болады.
Сақтық шаралары
1.Реагенттер тек «In vitro» диагностика үшін. Сапаны бақылау
2. Барлық зертханалық реагенттермен жұмысістеген кезде сақтық шараларын сақтау талап етіледі. Норма мен патология үшін белгілі мəндері бар сарысу негізінде күнделікті бақылау тəжірибесінде осы
Зертханалық реагентті ауызбен тамшылату ұсынылмайды. əдістің сапасын бақылау үшін қолданылуы тиіс. Таңдалған өлшеу жағдайларында осы əдіспен алынған
Реагентті дайындау шамалар бақылау сарысулары үшін аталған диапазонға түсуі.
Əрбір шыны сауытты заттаңбада көрсетілген ионсыздандырылған судың көлемімен КК-МВ реагентті бар
əрбір шыны сауытты ерітіңіз. Еріту үшін араластырыңыз. Температуралық коэффициент
Реагентті сақтау 37ºС температурада өлшенген КК-МВ белсенділігін 30ºС температурадағы КК-МВ белсенділігіне
Құрғақ күйіндегі реагентті жəне дилюентті 2-8ºС температурада сақтау керек. Олар барлық жарамдылық ауыстыру үшін 37 ºС температурадағы фермент белсенділігінің шамасын 0,60 көбейту керек.
мерзімі ішінде тұрақты. Сұйылтылған реагент ең кемінде (2-8 ºС) тоңазытқышта 1 күн жəне бөлме
температурасында (15-30 ºС) 12 сағат тұрақты. Күтілетін мəндер
Үлгілерді жинау 0-24 Бірл/л (37ºС)
Үлгі ретінде сарысуды пайдалану керек. Сарысуға тікелей күн сəулесінің əсерін болдырмаңыз. Үлгілерді 0-14 Бірл/л (30ºС)
тоңазытқышта (2-8ºС), бірақ бір аптадан артық сақтамау керек. Үлгілерді қатыру (-20ºС) ең төменгі %КК-МВ<5,5%
белсенділікке əкеледі. Əрбір зертхана үшін күтілетін мəндердің өз ауқымын белгілеу ұсынылады, себебі аспаптар, зертханалар
Басқа қосылыстардың əсері жəне жергілікті елдер арасында ерекшеліктер бар.
Айқын гемолизденген үлгілер тестілеу үшін жарамсыз, себебі олардың құрамында аденилаткиназаның,
АТР жəне глюкозо-6-фосфаттың жоғары концентрациялары болуы мүмкін, бұл осы əдістің қате Тест сипаттамалары
нəтижелеріне алып келуі мүмкін. Young жəне бірлескен авторлар дəрілердің жəне креатинкиназаның 1. Сызықтық: 1500 Бірл/л
белсенділігін анықтау үшін əсер етуі мүмкін басқа заттардың тізімін берді. Егер сарысудағы КК-ВВ 2. Сезімталдық: Жабдықтың рұқсат етілген қабілеттігін А=0,001 ескере отырып, сипатталған əдістің
белсенділік айтарлықтай жоғары болса, онда осы əдіспен өлшенген КК-МВ белсенділік жоғары болуы сезімталдығы – 4 Бірл/л.
мүмкін. Алайда, əдетте КК-ВВ белсенділік дені сау адамның жəне миокарда инфаркті бар пациенттердің 3. Салыстыру: Осы əдісті жəне Sigma əдісті салыстырып тексеру нəтижесінде регрессиялық теңдеуі
сарысуында болмайды. Кейбір зерттеушілер макроформаның ВВ (иммуноглобулин кешені) түзілуін бар у=0,98х-0,823 (N=40) корреляция коэффициенті 0,98 алынды.
бақылады, ол осы əдісті пайдалану арқылы В ретінде анықталуы мүмкін. Егер осы əдіспен өлшенетін КК- 4. Дəлдік:
В белсенділігі жалпы КК белсенділігінен 20% артық құррайтын болса, үлгідегі макро ВВ түзілу мүмкіндігін Серия ішінде
қарастыру керек. Мəні (Бірл/л) S.D. C.V(%)
Қажетті, бірақ жеткізілмейтін материалдар Норма 34 2,8 8,2
Үлгіге жəне реагентке арналған тамшуырлар, сынауықтар немесе кюветтер, таймер, термостатикалық Патология 132 9,9 7,5
бақыланатын ағысты ұяшық, спектрофотометр, бақылау сарысу. Сериядан серияға
Автоматтандырылған процедура Мəні (Бірл/л) S.D. C.V(%)
Жүргізу процедурасы – талдауыш нұсқаулығын қараңыз. Норма 32 3,1 9,8
ЕСКЕРТПЕ: Өлшеулерді жүргізу үшін кейбір аспаптарға реагенттердің заттаңбаларында көрсетілген Патология 122.8 9,2 7,4
көлемдерден ерекше сұйылтылған реагенттің көлемдері талап етіледі. Аспаптардың тиісті
нұсқаулықтарын қараңыз.
ДАЙЫНДАДЫ ҚР уəкілетті өкілі:
Қолмен анықтау əдісі
1. Нұсқаулықтарға сəйкес КК-МВ реагентті сұйылтыңыз. High Technology, Inc. «Интермедика Алматы»ЖШС
20 Alice Agnew Dr. Ташкентскийк., 348/4, Алматы 050059.
2. Тиісті сынауықтарға 1,0 мл КК-МВ реагентті салыңыз, оларды 37ºС температурада кемінде 2 минут North Attleboro, MA 02763 USA Тел: 8(727) 352-79-70,71
инкубациялаңыз. Tel: 1-508-660-2221 Электронды пошта: info@intermedica.kz
3. 340 нм кезінде су бойынша спектрофотометрді «0» теңшеңіз. E-mail: info@htmed.com
4.Реагентке 0,050 мл (50 мкл) үлгіні қосыңыз, араластырыңыз жəне сынауықты 5 минут бойы 37ºС www.htmed.com, http://htidiagnostics.com
температурада инкубациялаңыз.
5. 5 минуттан кейін өлшеңіз жəне 2 минут ішінде минутына сіңірудің өзгерісін белгілеңіз.
6. Минутына сіңірудің орташа айырмасын есептеңіз (∆Аbs/мин) Өндіруші Дейін пайдалану
7. ∆Аbs/мин шамасын КК-В Бірл/л белсенділігін алу үшін 3376 коэффициентке (Есептеулерді қараңыз)
көбейту керек.
8. 1500 Бірл/л астам бірлігі бар үлгілер 1:1 физерітіндімен сұйылтылуы тиіс, қайтадан өлшеп жəне Каталогтық In Vitro диагностика
нəтижені 2-ге көбейту керек. нөмірі үшін
ЕСКЕРТПЕ: Егер спектрофотометрді дəл өлшеу үшін 1,0 мл артық сынама көлемі талап етілсе, онда Рұқсат етілген Еуропалық
3,0 мл реагентті жəне 0,15 мл (150 мкл) үлгіні пайдалану керек. Егер спектрофотометрде сақтау қауымдастықтардағы
термостатикалық бақыланатын кювет бөлігі бар болса, онда реакциялық қоспаны өлшеу кезінде температурасын
кюветте қалдыруға болады. авторластырылған өкі
ШЕКТЕУЛЕР ың диапазоны
Бұл əдіс үлгідегі КK-BB белсенділігінің аздығын білдіреді. Егер сарысуда КК-ВВ елеулі мөлшері бар Лот нөмірі Қолдану жөніндегі
болса, онда өлшенетін КК-МВ белсенділік жоғары болады. нұсқаулықты қараңыз
Нəтижелер Осы өнім 98/79 / EC директиваға (IVD директива) сəйкес
Жалпы КК белсенділігі:
КК реагентпен бірге қаптамаға салынған нұсқаулыққа сəйкес сарысудағы КК жалпы белсенділігін анықтау. келеді

КК-В белсенділік:
Бірл/л = =
'Abs / мин u TV u 1000
d u H u SV

'Abs / мин u 1.050 u 1000 =∆Abs/мин х 3376

1 u 6.22 u 0.050

IS-ERUK-C124 Rev.1 2018-04-23 Page 4 of 4