MASTER COURSE:

PHÂN TÍCH HIỆN ĐẠI TRONG

KỸ THUẬT MÔI TRƯỜNG
CHƯƠNG 4. PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÍ

Nguyen Tien Giang, Ph.D

BUI HUU TRUNG, Ph.D.
Email: ntgiang@hcmute.edu.vn
 References.

1. Chromatographic method. Braithwaite and F.J. Smith

2. Analytical Chemistry for Technicians . John Kenkel

Part 3.

Gas Chromatography
Gas Chromatography (GC, sắc kí khí)

Buồng điều nhiệt Nhìn sơ đồ cho thấy sự

khác biệt của GC va LC?
 Principle

Volatile liquid or gaseous sample is injected through a septum

(a rubber disk) into a heated port, in which it rapidly evaporates.
Vapor is swept through the column by He, N2, or H2 carrier gas,
and separated analytes flow through a detector, whose response
is displayed on a computer.
Principle
 Cổng bơm Buồng điều
mẫu nhiệt (Cột
tách)

200°C–250°C 80°C–150°C 200°C–250°C

(1) Liquid mixture components must be “flash vaporized” upon

injection so that the flowing helium can immediately carry them into the
column. Thus, the injection port must be heated

(2) Vapor pressures and solubilities can vary substantially with

temperature. Because of this, it is useful to be able to use an elevated
column temperature and also to be able to carefully control the
temperature of the column.

(3) Mixture components should not condense when they are inside
the detector. For this reason, the detector must also be heated.
 Mobile Phase- Carrier Gas

Carrier gas : non-solvate, high purity and chemically inertness

Common carrier gas: include He, Ar, H2, N2
 Mobile Phase- Carrier Gas
Carrier Gas or Mobile phase does not affect solute retention,
but does affect:
1) Desired efficiency for the GC System
- Low Mw gases (He, H2) → larger diffusion coefficients
- Low Mw gases → faster, more efficient separations

2) Stability of column and solutes

- H2 or O2 can react with functional groups on solutes and
stationary phase or with surfaces of the injector,
connections and detector

3) Response of the detector

- Thermal conductor requires H2 or He
- Other detectors require specific carrier gas
 Mobile Phase- Carrier Gas

FIGURE 23-11: van Deemter curves for gas chromatography of n-C17H36 at 175oC,
using N2, He, or H2 in a 0.25-mm-diameter x 25-m-long wall-coated column with OV-
101 stationary phase
 Mobile Phase- Carrier Gas

Optimum practical gas velocity

 Stationary phase
(column)
• Đảm bảo trao đổi chất tốt giữa pha động, pha tĩnh
(dựa trên tối ưu hóa pt Vandemter)
• Độ thấm cao tức là độ giảm áp suất nhỏ so với 1 tốc
độ khí mang nhất định
• Tải trọng cao, khả năng hòa tan cấu tử trong pha tĩnh
(hệ số phân bố trong pha tĩnh cao)
• Bền ở nhiệt độ cao
 Stationary phase

❑ SK KHÍ –RẮN (GSC): cột sắc ký là cột nhồi

❑ SK KHÍ-LỎNG (GLC):
• Cột nhồi, pha tĩnh là chất lỏng phủ lên trên
những hạt trơ sử dụng như chất mang
• Cột mao quản, pha tĩnh là chất lỏng hay chất rắn
tráng phủ lên bề mặt trong của thành ống
 Cột sắc ký khí-rắn
• Ít phổ biến hơn GLC
• Khuyết điểm: thời gian giữ dài, kéo đuôi,
không lặp lại
• Pha tĩnh: Al2O3, carbon
• Ứng dụng chính: phân tích khí
CỘT NHỒI VÀ CỘT MAO QUẢN
 GC columns

Packed column Capillary column

- 1-3 mm i.d. - 0.1-0.33 mm i.d.

- < 5m length - 12-150m length

- 0.1-0.4 mm dp - WCOT: Wall coated-open tubular

- PLOT: Porous layer open tubular

- SCOT: Support coated open tubular

So sánh chênh lệch áp suất đầu cột và cuối cột
của hai loại cột tách?
Cột nhồi- Packed column
 Cột nhồi- Packed column

Cột được nhồi bằng một loại chất mang có phủ

trên bề mặt một lớp mỏng pha lỏng- tương ứng
có khối lượng từ 0,1-25% khối lượng so với
chất mang
Đường kính trong: 3-6 mm
Chiều dài: 1-5 m
Hiệu quả cột tách: 500-1000 đĩa/m
Lượng mẫu: 10 ng-1 mg
Áp suất: Cao
Tốc độ phân tích: chậm
Cột nhồi- Packed column
Packed columns contain fine particles of solid
support coated with nonvolatile liquid stationary
phase, or the solid itself may be the stationary
phase
Open Tubular columns - Cột mao quản hở)
Open Tubular columns - Cột mao quản hở)
CỘT MAO QUẢN LỚP XỐP CỘT MAO QUẢN PHIM MỎNG
Column Diameter and Resolution
Column Length and Resolution
 Features of Common Stationary Phase
Configurations

• WCOT has best resolution but smallest sample capacity

(lượng mẫu đưa vào cột- chỉ khoảng 10-7 g)

• SCOT has higher sample capacity but poorer resolution

• PLOT is an alternative to packed columns for certain

types of analysis (e.g., atmospheric gasses)
Stationary phase - materials
High molecular weight hydrocarbons
• Squalane (C30H62) (shark liver oil)
• Apolane-87 (C87H176)
• Apiezon greases: lubricating oils

• Poly(siloxane)

Poly(siloxane) Poly(silarylene-siloxane) A Poly(carborane-siloxane)

polymer copolymer copolymer
Polarity

Nhiệt độ chặn dưới: điểm nóng chảy

Nhiệt độ chặn trên: dựa trên áp suất hơi, độ bền nhiệt
 Column Polarity and Retention Time

non-polar polar
How the relative retention times of polar and nonpolar solutes change as the
polarity of the stationary phase changes?
(b) The strongly polar stationary phase
retains the strongly polar solutes

(a) The principal determinant of

retention on this column is the
volatility of the solutes
Isothermal Programming
Temperature Programming
Các chất có áp suất hơi (Vapor pressure) và khả năng
hòa tan (solubility) khác nhau sẽ được rửa giải (tách) ra
khỏi cột theo thứ tự nào?
the mixture components separate due to their
varying vapor pressure and solubility (in
Stationary Phase)
Injection
Injection

Tiêm chia dòng (splitless injection):

Thường sử dụng cho phân tích
lượng vết, van chia dòng được đóng
lại và để khí mang đi qua liner thủy
tinh để vào cột. Điều này cho phép
gần như toàn bộ mẫu đi vào cột.
 Injection
Split Injection
Parameter Considerations
Volume Reproduce the sample volume precisely for all
injections
Solvent All sample should be dissolved in the same solvent
Syringe handling Rapid injection using the hot needle or solvent flush
method is preferred. Autosamplers capable of high
speed and reproducible injection times provide
improved performance
Release position Preproduce the needle penetration length precisely
Liner packing Precaution advised as the outcome is unpredictable
in many cases
Column temperature The initial column temperature should be fixed and
constant
standards Internal standards are recommended for
quantitative analysis
 Injection
Splitless Injection

• Solvent effect

• Accuracy of retention time

• Matrix-induced response enhancement

Injection
Injection- headspace
 Injection- headspace

Static headspace

• Standby: Sample vial is temperature equilibrated at ambient pressure.

• Pressurization: Sample vial is pressurized to a pressure higher than the GC
column head pressure and equilibrated.
• Sampling: Sample vial is opened to the transfer line and the GC inlet. The
sampling time, temp., and P. drop determine the amount of sample transferred
 Injection- headspace
Dynamic headspace

Purge and trap-dynamic headspace

1. Purge gas Trap: tenax, silicagel, charcoal, molecular sieve

2. Vent Trap is heated in desorption step
3. GC carrier gas
Detector
The choice of carrier gas depends on the detector and
the desired separation efficiency and speed
Nguyên tắc: đố cháy một hợp
chất hữu cơ trên ngọn lửa air/H2
sẽ tạo ra ngọn lửa chứa e- và các
cation CHO+. Áp một điện thế
khoảng 300V qua ngọn lữa sẽ tạo
ra một dòng nhỏ tầm 10-9 – 10-12
A. Dòng điện này được khuếch
đại và cho tín hiệu phân tích
Ưu điểm:
• Cho tín hiệu với hầu hết các hợp chất hữu cơ ngoại trừ carbon
trong nhóm carbonyl và carboxylic
• Hầu hết các hợp chất vô cơ và khí như H2O, CO2 không cho
tín hiệu → hữu hiệu phân tích các hợp chất hữu cơ trong các
mẫu môi trường nướ, khí
• Rất nhạy, LOD khoảng10-11g (50 ppb), khoảng tuyến tính rộng
Nguyên tắc: đo liên tục độ
dẫn nhiệt của khí mang
(tinh khiết và khi có chất
phân tích)
Ưu điểm:
• Bởi vì tất cả các chất phân tích đề ảnh hưởng đến độ dẫn nhiệt
của pha động nên TCD là đầu dò phổ quát
• Khoảng tuyến tính rộng
• Không phân hủy chất phân tích

Nhược điểm:
• Độ nhạy thấp với hầu hết chất phân tích
 Đầu dò ECD (bắt giữ điện tử

Nguyên tắc: Khi các chất phân tích có độ âm điện cao sẽ bắt giữ
các e và dòng sẽ giảm, cho tín hiệu
Ưu điểm:
• Chọn lọc chất phân tích có độ âm điện cao như (chứa halogen,
nhóm nitro, amine, alcohol
• LOD rất thấp

Nhược điểm:
• Khoảng tuyến tính hẹp
• Không nhạy với các hợp chất hữu cơ khác
 Đầu dò MS

Nguyên tắc: các phân tử khí bị ion hóa và phân mảnh thành các
ion nhỏ hơn.Dựa trên tỷ lệ khối lượng/điện tích khác nhau mà các ion
này được tách ra khỏi nhau bằng tác dụng của điện trườn hoặc từ
trường. Tín hiệu tương ứng của các ion sẽ được ghi nhận và cho tính
hiệu dạng peaks.

Ưu điểm:
• LOD rất thấp, 25 fg – 100 pg
• Khoảng tuyến tính rộng
• Có thể định danh và định tính chất phân tích
 Applications of Chromatography

• Qualitative Analysis: tR, I

• Quantitative Analysis
– Analyses Based on Peak Height
– Analyses Based on Peak Areas
– Calibration and Standards
– The Internal Standard Method
– The Area Normalization Method
the parameters that are most important for a qualitative
analysis using most GC detectors are the retention time,
tR, and the adjusted retention time, t’R, I

Under a given set of conditions (the nature of the

stationary phase, the column temperature, the carrier flow
rate, the column length and diameter, and the instrument
dead volume), the retention time is a particular value for
each component.
 PP QUI VỀ 100 %
Áp dụng khi sắc đồ phân giải hoàn toàn
Hệ số hiệu chỉnh f=1
PP qui về 100 %, áp dụng khi sắc đồ phân giải hoàn
toàn