生物医学工程学杂志

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实验性家兔骨折愈合过程中破骨细胞的形态学测量 !
吴佳奇 "# 武元英 $ 蒋宜伟 % 李红专 % 张晓刚 % 杨天府 "
"&四川大学 华西医院 骨科 ’成都 ("))*"+
$&泸州医学院 ’泸州 (*()))+
%&甘肃中医学院 附属医院 骨科 ’兰州 ,%))$)+

摘要 为 了 探 讨 中 成 药 生 骨 再 造 散 对 骨 折 愈 合 中 骨 吸 收 与 破 骨 细 胞 形 态 学 特 征 的 影 响 及 二 者 的 关 系 ’将 %)
只青紫蓝家兔建成双侧桡骨 %-- 骨缺损的骨折模型 ’随机分为生骨再造散组 &. 组 +/仙灵骨葆组 &0组 +及 对 照 组
&1组 +’每组各 ")只 ’于术后 "*2和 %"2每组各 处 死 动 物 3只 取 材 ’进 行 骨 吸 收 与 破 骨 细 胞 形 态 学 计 量 检 测 和 相
关性分析 4结果 5术后 . 组骨吸收较对照组强 ’破骨细胞形态学也发生了一定变化 ’差异有统计学意义 &67 )8)3+9
0组对破骨 细 胞 形 态 也 有 一 定 影 响 ’但 对 骨 吸 收 影 响 不 大 4 相 关 分 析 表 明 5骨 吸 收 主 要 与 破 骨 细 胞 数 目 相 关 ’其 次
还与破骨细胞形状因子 /面积 /光密度等相关 4 实验结果提示 ’生骨再造散在 术 后 "*2和 %"2均 可 促 进 骨 吸 收 ’可
能是通过早期提高破骨细胞数量 ’后期则增强其功能实现的 ’对骨折愈合有一定促进作用 4
关键词 生骨再造散 骨折愈合 破骨细胞 形态测量 相关性

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! 甘肃省中医管理局课题资助 &F8)%">
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万方数据
 Fh4 生 物 医 学 工 程 学 杂 志
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! 引 言
破 骨 细 胞 "#$
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起 着 重要作用 +既 往 许 多 作 者 描 述 了 在 骨 质 疏 松 性
骨折中的破骨细胞形态 +且多为定性描述 .然而在非
骨质疏松性骨折修复过程中 #,形态计量学特征与
骨 吸 收是如何变 化 的 /以 及 二 者 之 间 的 关 系 人 们 还
知之甚少 +查阅文献 +尚少见报道 0 我们采用形态计
量学的方法对在药物干预下的实验性骨折中二者的
变化及关系进行了定量研究 0
1 材料与方法
12! 实验动物及分组
成 年 健 康 青 紫 蓝 家 兔 34只 +年 龄 5个 月 +体 重
6247 6289:+雌 雄 各 半 +由 兰 州 生 物 制 品 研 究 所 提
供 0随机分为 3组 ;</=组为用药组 "< 组药物为生
骨 再造散 +由 淫 羊 藿 /血 竭 /三 七 和 骨 碎 补 等 十 二 味
药组成 +甘肃中医学院附属医院药剂科提供 .=组药
物为仙灵骨葆 +由淫羊藿 /补骨脂 /川续断等组成 +贵
阳市仙灵药厂生产 +批号 ;6444846-+,组为对照组 0
3组于术后 >?@各处死 8只取材 +于术后 3>@再各
处死 8只取材 0
121 建模方法
每 组 均 采 用 6A 硫 喷 妥 钠 按 ?4B:C9:腹 膜 腔
注射麻醉 0双前臂无菌条件下取正中切口 +分离至桡
骨骨膜下 +用电锯锯掉骨膜下骨组织 3BB 宽 +造成
骨 折模型 0术后不固定 +肌注青霉素 3@0术后第 6@
开始 给 药 +剂量 按 人 与 兔 体 表 面 积 折 算 成 等 效 剂 量
的 6倍 0< 组给生骨再造散 3D6:C9:E@+=组给仙
灵骨葆 4D6F:C9:E@+两 组均 将药物 制成 混 悬 液灌
胃 +,组以等量生理盐水灌胃 0
12G 骨标本制备
动 物 处 死 后 +截 取 桡 骨 骨 折 处 上 下 各 >28(
B+
置 H4A 酒精 ?I 冰箱中保存 0 对标本行浓度梯度脱
水 +二甲苯透明后用甲基丙烯酸甲酯 /邻苯二甲酸二
丁 酯按 3J >比例混 合 +加 入 适 量 催 化 剂 "过 氧 化 苯
甲酯 -进行负压包埋 0 用硬组织切片机 "KLM ,< NO
6844L+德国 -行不脱钙切片 +厚度为 8PB+采用甲苯
胺蓝染色作形态计量学研究 0
12Q 观察指标
骨切片用 RS 9’TNU’%图像采集系统采图 +定标
后 用 OS
*$V 6444图 像 处 理 系 统 "四 川 大 学 图 像 图
形研究所提供 -进行半自动测量 0测量骨折处内外骨
万方数据
痂 +每张切片随 机 取 ?7 F个 视 野 +以 每 个 视 野 为 参
第 6?卷
i
照单位 0用光笔对欲测组织进行勾画 +输入计算机测
量破骨细胞形态学和骨吸收两类参数 0
破 骨 细 胞 "#,-定 义 为 细 胞 体 积 较 大 形 态 不 规
则 +有 6个核仁 以 上 并 与 骨 小 梁 紧 贴 形 成 凹 凸 不 平
表面或吸收陷窝 0形状因子 "W’X
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6
大值为 >0
12^ 统计学方法
数据用 ‘
_ab表 示 +行 单 因 素 方 差 分 析 +组 间 比
较用 c检验 +de4D48为差异有统计学意义 0对破骨
细胞 形态学 特征 与 骨 吸 收 的 关 系 +采 用 简 单 相 关 的
分析方法和应用 N]NN>4D4统计学软件进行统计学
处理 0
G 结 果
G2! 组织学观察
普 通 光 镜 下 +在 甲 苯 胺 蓝 染 色 的 骨 痂 切 片 中 可
观 察到 ;成 骨 细 胞 为 深 蓝 色 +覆 盖 在 骨 小 梁 表 面 +呈
扁平 状 /立 方 状 或 柱 状 .类 骨 质 为 亮 蓝 色 +位 于 骨 小
梁表面 .矿 化 骨 痂 为 浅 蓝 色 .矿 化 前 沿 为 深 蓝 色 +位
于类骨质与矿化骨痂之间 .骨吸收表面凹凸不平 +较
深者则形成吸收陷窝 +无类骨质和成骨细胞覆盖 +有
或 无 破 骨 细 胞 覆 盖 .破 骨 细 胞 为 浅 蓝 略 显 紫 色 +多
核 +胞体较大形态不规则 +位于骨吸收表面或陷窝表
面 "见图 >-0
G21 破骨细胞与骨吸收形态计量学测量结果
G212! 破骨细胞 形态 计 量 学 参 数 f 同 一 时 间 点
组 间比 较 0 术 后 >?@+< 组 #,形 状 因 子 高 于 =/,
组 +周 长较 =组 小 +平 均 光 密 度 较 =/,组 小 +#,指
数较 =组高 +=组 等 效 直 径 较 ,组 大 .术 后 3>@+<
组 #, 面 积 较 , 组 大 +平 均 光 密 度 较 =组 高 /较 ,
组低 +=组平均光密度较 ,组低 +其差异均有统计学
意义 +其余参数差异无统计学意义 0g 不同时间点组
内比较 0 各组术后 3>@与术后 >?@相比 +< 组 #,
面 积 /等 效 直 径 /平 均 光 密 度 增 大 +#, 指 数 降 低 .=
组形状因子增大 +平均光密度降低 .,组平均光密度
增 大 +#, 指 数 降 低 +其 差 异 均 有 统 计 学 意 义 "d 值
e4D48-+其余差异无统计学意义 "见表 >-0
G2121 骨吸收形 态计 量 学 参 数 f 同 一 时 间 点 组
间比较 0术后 >?@+< 组吸收陷窝均深高于 =/,组 .
术后 3>@+< 组吸收陷窝均深较 =/,组高 0 上述差
异均有统计学意义 +其余参数差异无统计学意义 0g
不同时间点组内比较 +差异无统计学意义 "见表 6-0
第 ’期 吴佳奇等 z 实验性家兔骨折愈合过程中破骨细胞的形态学测量 nj&
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图 ! 不脱钙骨痂组织切片

$-组术后 &’()"($-组术后 +&("甲苯胺蓝 .’//$"各图中箭头所指分别表示 0#破骨细胞 )*吸收表

"#$% 组术后 &’()"*$% 组术后 +&()",
面或吸收陷窝 "1 值 2/3/4$),矿化骨痂 )(成骨细胞 )5类骨质 )6矿化前沿 $

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表 ! 破骨细胞形态计量学参数 "YZ[W]
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术后 &’( 术后 +&(
参数
%组 g组 -组 %组 g组 -组
形状因子 /hij^/h&&+k l /hi/^/h&/4m /h4n^/h&/j /ho+^/h&ip /ho&^/h/n /hi4^/h&p+

面积 "qUp$ +j’hp4^&+4h&’om ’4jh/p^&/nh4’i+o+hp’^&&phnp/ 4&nho/^pjjhno4k ’/ihjn^&’&h/ni+ophpn^ojhoj+

等效直径 "qU$ p&hoo^+hijom p+ho+^phn4nk p&h&i^+h/+n p’h’o^ohin+ pphp’^’h/i& p&h4o^ph&j’

周长 "qU$ nih44i^&jhj’ol &/&h+n^&nh’no jpho’^ppho4n j+hpp^++hon4 n’h&’^&ohjip n4h4’^&4hji+

平均光密度 &/nhnn^&/hj/nk l m &4ph/n^&/hio4m &’/hi&^&oh/’om &+ph+j^p/hppjk l &&nhjj^&’hp&/k &4&h4/^&/h/in

r-指数 "个 sUU$ &hij^&h+4jl m /hnj^&h/i+ &h+o^&h4/nm /ho/^/hn/o /hij^&h/&j /h4o^&h&oj

同一时间点组间比较 0k 与 -组比较 1 值 2/3/4)l % 组与 g组比较 1 值 2/h/4)不同时间点组内比较 0m 同一组内部术后 &’天与术后 +&

天比较 1 值 2/3/4

表 t 骨吸收形态计量学参数 "YZ[W]
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吸收表面 "u$ &+h’4^nh&’4 &/hpo^nh/4/ &/h&/^ih&’& &’h4&^’h+j4 &4hn’^&/hn+o &+h+&^nhjno
吸收陷窝均深 "qU$ &&h4j^’h&+j kl
nhij^+h’+p nh++^ph+&/ &+h4p^4hppi kl
jh//^phonp jh&i^’h+p4

同一时间点组间比较 0k 与 -组比较 1 值 2/h/4)l % 组与 g组比较 1 值 2/h/4

vhthv 破骨细胞形态学参数与骨吸收的相关分析 关 W相关系数分别为 /hojpx/hj’+)y 吸收陷窝深度

二 者 的 简 单 相 关 分 析 结 果 0w 各 组 吸 收 表 面 u 与 仅 g组与 r-数目有较好相关性 W术后 &’(与术后
r- 数 目 有 较 好 相 关 性 W术 后 &’(W%xgx- 组 的 +&(相关系数分别为 /3innx/3ioiW此外 Wg组术后
J5#G
OHM相关系数分别为 /hinpx/h444x/hni’)术 后 +&(还与 r-平均光密度相关 W相关系数为 /3o44z
组 的 相 关 系 数 分 别 为 /hip/x/hiinW此
+&(Wgx-万方数据 上 述 相 关 系 数 均 具 有 统 计 学 意 义 "12 /3/4$W其 余
外 Wg组术后 +&(还与 r-形状因子 x平均光密度相 无统计学意义 "见表 +$z
 GEB 生 物 医 学 工 程 学 杂 志 第 B4卷
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表 ! 破骨细胞形态学参数与骨吸收的简单相关系数

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2+.
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术后 345 术后 935
参数
6组 7组 8组 6组 7组 8组
吸收表面 :;<= 形状因子 >?449 >?99@ A
>?BCC A
>?9D@ >?DEBF >?43@
吸收表面 :;<= 面积 A
>?>@C >?4@> A
>?>DB >?3B@ A
>?>GE A
>?43G
吸收表面 :;<= 光密度 A
>?BB9 A
>?B>3 A
>?4>B A
>?9B@ >?E49F A
>?49G
吸收表面 :;<= 周长 A
>?B3@ >?999 >?>9> >?B@@ A
>?B@C A
>?4DB
吸收表面 :;<= 直径 A
>?>EE >?4B4 A
>?>D> >?3G@ A
>?>D4 A
>?443
吸收表面 :;<=H8数目 >?@GBF >?CCCF >?G@4F >?3BD >?@B>F >?@@GF
吸收陷窝均深 = 形状因子 >?3DD >?3>G >?@34 A
>?BED >?33C A
>?49E
吸收陷窝均深 = 面积 A
>?>@C >?@44 A
>?9D9 A
>?>CB >?C9@ >?>GG
吸收陷窝均深 = 光密度 >?>9G >?3DD >?949 A
>?9>E >?DCCF A
>?@>3
吸收陷窝均深 = 周长 A
>?34> >?CBE A
>?4DC >?>GC >?4@3 >?BDE
吸收陷窝均深 = 直径 A
>?>EG >?@@3 A
>?9D> A
>?>3D >?C@B >?>4G
吸收陷窝均深 =H8数目 >?3ED >?@GGF A
>?C>9 A
>?>@B >?@D@F A
>?9>G
F
IJ>?>C

态学特征的改变可能与骨吸收有一定关联 Q
K 讨 论
简 单 相 关 分 析 表 明 M各 组 骨 吸 收 主 要 与 H8 数
骨 折 愈 合 过 程 可 简 单 分 为 三 个 时 相 L3MBNO炎 症 目呈正相关 Q为排除各参数间的相互干扰 M采用多元
期 P修复期 P重建期 Q破骨细胞 :H8<对形成的编织骨 逐步回 归与 相关 的 分 析 方 法 M对 部 分 组 别 做 了 进 一
进行重吸收和改建 M对骨折愈合十分重要 Q本次实验 步研究 Q 结果 O术后 345M6 组吸收表面 ; 与 H8数
观 察 到 M骨 折 345H8数 目 较 骨 折 935多 M与 其 他 目 P形 状 因 子 均 相 关 M偏 相 关 系 数 分 别 为 >oDG9P
作 者 L9M4N观察到的 基本一致 Q 然 而 如 何 识 别 H8M尚 >o@GCM8 组 吸 收 表 面 ; 与 H8 数 目 相 关 M偏 相 关 系
有一定困难 QRS6T染色法可特异识别 H8的标志 数为 >?G@3n术后 935M7组吸收表面 ; 与 H8面积 P
性酶 M但对早期未成熟 H8则缺乏敏感性 M新近认识 光 密 度 相 关 M偏 相 关 系 数 分 别 为 = >?ED@P>?EEDM吸
到 来 源 于 其 他 组 织 的 异 构 酶 RS6TCU也 会 干 扰 其 收 陷 窝 均 深 与 H8 光 密 度 相 关 M偏 相 关 系 数 为 >?
特 异 性 LCNQ 7UV Y 等 认 为 采 用 ZW5[
5WX
L@N
\
[]5 ^W_ DCCQ 上述相关性经检验 M均具统计学意义 Q 其余时
‘WaaUa[V
^]b染 色 与 cd 复 染 结 合 形 态 学 辨 认 是 最 间点由于所测得的 H8数目偏少 M未做进一步研究 Q
好 的 方 法 M形态 学 上 强 调 只 要 细 胞 多 核 且 靠 近 骨 小 以 上 表 明 M与 骨 吸 收 相 关 性 较 好 的 主 要 是 H8
梁表面无类骨质覆盖 P不管是否形成陷窝 M均认为是 数 目 M其 次 是 H8形 状 因 子 P面 积 P光 密 度 等 形 态 学
H8Q 本实验除染色不同外 M形态学辨认依据则是一 特征 Q这提示我们 M要增强骨吸收 M可从两方面考虑 O
致的 M应该较接近 7UV Y提出的方法 Q
5WX 一 是 增 加 H8 数 目 M二 是 增 强 H8 功 能 M相 比 之 下 M
H8 吸 收 骨 的 大 体 过 程 是 OH8 与 骨 表 面 紧 H8数目在骨折早期可能更为重要 QH8来源于单核
LDN

贴 M在接触面形成两个特化区 e 清亮区和皱褶缘 M皱 巨噬系细胞 M其数量和功能变化受许多因素影响 Q新

褶缘含有丰富的囊泡 M通过跨膜运动在 c A 6RT酶
f
近研究表明 HTpqS6r‘lqS6r‘ 系统对调节 H8
作 用 下 Mc 释 放 形 成 酸 性 微 环 境 :gch 4?C<M首 先
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的 分 化 及 其 活 性 起 着 关 键 作 用 LGNO成 骨 细 胞 和 骨 髓
对无机质进行降解 M然后在组织蛋白酶 P金属蛋白酶 基 质细 胞表面 的细胞 核因 子 s 7受 体 活 化 因 子 配 基
作 用下对有机质 进 行 降 解 M形 成 骨 吸 收 表 面 或 陷 窝 :b
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我们的研究表明 M6 组的骨吸收活动无论在 345还 系 列 级 联 信 号 转 导 途 径 M促 进 H8 分 化 n骨 保 护 素
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时形状仍较圆 M但面积 P直径 P光密度已增大 M数目减
万方数据 剂 <大 多 作 用 于 HTpqS6r‘lqS6r‘ 系 统 M从 而
少 n7组 H8形态变化则基本与之相反 Q提示 H8形 直接或间接调节 H8数量与 活性 Q 此 外 MwA 8xu可
第 1期 吴佳奇等 $ 实验性家兔骨折愈合过程中破骨细胞的形态学测量 b/3
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提 高 单 核 干 细 胞 的 存 活 率 !也 是 促 进 "# 分 化 早 期 ;
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