크로마토그래피

1. 기구 및 시약
(1) 기구
TLC 판, TLC 전개병, 모세관, 시험관, UV-lamp
(2) 시약
전개용매 [CH2Cl2:MeOH=5:1(v/v), Hx:EA=4:1(v/v)],
시료용액 (브로모 페놀블루, 페놀프탈레인, 브로모 크레졸퍼플, 페놀레드, 미
지시료, 살리실산, 아스피린),
발색제 (NH3)
(위의 용액들은 모두 조교가 미리 준비한다.)

2. 방법
(1) TLC 판을 2개씩 준비한다.
(2) 첫 번째 TLC판의 바닥에서 1.0~1.5cm 정도 떨어진 곳에 연필로 점을
5개 나란히 찍는다. (시료용액 찍을 위치를 연필로 미리 점을 찍은 후 그 점
위에 최소한의 시료를 찍을 것 임)
(3) TLC 판에 준비된 4가지 시료용액(브로모 페놀블루, 페놀프탈레인, 브로
모 크레졸퍼플, 페놀레드) 및 혼합 미지시료 각각을 모세관에 묻힌 후 TLC
판에 차례로 찍고 오븐에서 5분정도 두어 완전히 말린다.
(4) 방법 (3)의 TLC 판을 CH2Cl2: MeOH = 5:1 (v/v)의 전개용매로 전개
한다. 이 때 시료의 점들이 전개용매에 잠기지 않도록 TLC판을 TLC 전개
병에 세우고, 전개용매가 증발하지 않도록 전개병의 뚜껑을 닫는다. (TLC를
전개하는 동안 전개병을 이동하거나 움직이지 않는다)
(5) 전개액이 TLC 판의 위쪽 끝에서 1cm정도 떨어진 곳까지 도달하면
TLC 판을 꺼내어 연필로 용매라인을 즉시 표시한 다음 말린다. 후드에서
TLC 판을 암모니아 기체에 노출시켜 TLC 판의 색변화를 관찰 기록한다.
 (6) 위 실험 결과로 얻은 Rf (반점이 이동한 거리/전개액이 이동한 거리)
값을 측정하여, 각 지시약에 대한 값을 계산한다. 또 혼합시료에 들어있을
거라 추측되는 지시약을 기록한다.
(7) 지난 실험에서 합성한 재결정 전, 후의 아스피린 결정 및 살리실산을
각각 아주 소량 취하여 MeOH에 잘 녹여 시료로 준비한다. (시험관 또는 25
mL 삼각 플라스크에 준비)
(8) 두 번째 TLC 판에 살리실산, 아스피린 및 페놀프탈레인을 같은 방법
으로 점을 찍고 완전히 말린다.
(9) 이동상으로 전개용매 Hx:EA = 4:1(v/v)를 사용한다. 역시 밀폐된 상
태로 전개시켜야 한다.
(10) 전개된 TLC 판을 먼저 UV-램프(254 nm)를 쪼여 나타나는 현상을
연필로 그리고 관찰한 다음 후드에서 TLC 판을 암모니아 기체에 노출시켜
TLC 판의 변화를 관찰 기록한다. 위 실험 결과로 얻은 Rf 값을 측정한다.
(11) 아스피린 TLC 경우 합성한 아스피린과 출발물질인 살리실산의 Rf
값을 비교해서 반응하지 않은 출발물질이 남아 있는지 확인한다.
3. 주의 사항
(1) TLC판에 너무 많은 양의 시료가 spotting 되어 서로 점이 겹치지 않
도록 주의한다.
(2) 해당 전개용매를 전개병에 넣고 시료가 spotting된 TLC판을 넣고 전
개를 시킬 때, 전개병을 움직이지 말고 실험대에 놓고 안정된 상태에서 전개
시키면서 관찰한다.
(3) 시료를 전개 시킬 때 전개병의 뚜껑은 항상 닫은 상태로 전개한다.
(4) 발색제로 사용하는 암모니아 기체는 후드에서 사용한다.
(5) UV-램프를 이동시키거나 사람을 향하지 않도록 주의한다.

4. 결과
얇은 층 크로마토그래피 (Thin Layer Chromatography)
(1) 실험 결과로 얻은 TLC판 위의 시료가 이동한 위치를 표시한다.
(2) 각 시약이 이동한 거리를 측정하여, 각각의 Rf 값을 계산하여 기록한
다. Rf 값을 계산할 때는 점의 중앙지점을 취하여 계산한다.
(3) 혼합시료에 들어있을 것으로 추측되는 지시약을 기록한다.
(4) 살리실산과 아스피린의 Rf 를 비교한다. 합성한 아스피린에서 출발물
질인 살리실산의 Rf 에 해당하는 점이 있는지 확인하고, 만약 있다면 왜 그
런지 이유를 기록한다.