ls UNIVER: USD OBSERVACION MICROSCOPICA DE CELULAS PROCARIOTAS ELABORADO POR: ANGIE ALZATE JULIANA BRUNO LUCIA MARTELO MARIA JOSE MOLINA NATALIA MESTRA DOCENTE: LUIS CARLOS RUIZ GARCES BIOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR LABORATORIO UNIVERSIDAD DEL SINU- ELIAS BECHARA ZAINUM FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ODONTOLOGIA - I SEMESTRE MONTERIA - CORDOBA. 2024INTRODUCCION En el fascinante campo de la biologia celular, las células procariotas representan una categoria esencial que ha capturado la atencién de cientificos e investigadores durante décadas. Estas células, que ineluyen bacterias y arqueas, coustituyen una forms de vida fundamental en nuestro planeta, habiendo colonizado pricticamente todos los ambientes imaginables, desde los mis extremos y hostiles hasta los més benignos y hospitalarios. A pesar de su aparente simplicidad en comparacién, con las células eucariotas, las células procariotas son increiblemente diversas en su morfologia, fisiologia y adaptaciones, lo que las convierte en sujetos de estudio inagotables y en protagonistas esenciales de numerosos procesos biolégicos. El estudio de las células procariotas ha sido impulsado y enriquecido por la observacién microscépica, una herramienta poderosa que nos permite adentramos en el mundo diminuto y complejo de estas cétulas. A través de la observaci6n microscépica, los cientificos han podido desvelar aspectos cruciales de la estructura, funcién y comportamiento de las eétulas procariotas, proporcionando asi una comprension més profiunda de su biologia y su papel en los ecosistemas naturales, En este informe, nos proponemos profimndizar en Ia importaneia de la observacién microseépica en el estudio de las células procariotas. Examinaremos detalladamente los diferentes tipos de microscopia utilizados para investigar estas céhulas, desde Ia microscopin éptica convencional hasta las técnicas més avanzadas como la microscopia electronica de transmisién y de barrido. Ademis, exploraremos las diversas técnicas de preparacién de muestras que son fimdamentales para obtener imagenes de alta calidad y reveladoras de las células procariotas en el microscopio, Alo largo de este informe, también presentaremos una variedad de ejemplos concretos de observacién microscépica de células procariotas, destacando las caracteristicas morfolégicas, estructurales y fincionales mis relevantes de diferentes especies bacterianas y arqueas. Al hacerlo, pretendemos ilustrar la diversidad y complejidad de las células procariotas, asi como su adaptabilidad asombrosa a una amplia gama de condiciones ambientales. En resumen, este informe tiene como objetivo proporcionar una vision detallada y completa de laimportancia de la observacién microscépica en el estudio de las células procariotas. Esperamos que este anilisis contribuya a enriquecer nuestra comprensién de la biologia celular procariota y su papel fiandamental en la dindmica de los ecosistemas terrestres y acuticos.OBSERVACION MICROSCOPICA DE CELULAS PROCARIOTAS INTRODUCCION Las células procariotas corresponden a un organismo unicelular sin nticleo Gefinido, es decir, sin membrana iiiiclear, por lo que el material genético se encuentra disperso en el citoplasma. ‘Ademds, el termino procariota hace referencia a los organismos pertenecientes al imperio Prokaryota, cuyo concepto seincide con el reino Monera de las clasificaciones de Herbert Copeland, por lo ‘que a este tipo de organizacién pertenecen las bacterias y las cianobacterias. Los Las células procariontes en su medio refringentes, ademés presentan una 0,2 ¥ 2,0 um de diémetro y presentan una de las tres esférica o de coco, la de bastoncillo y la espiral. habitual, se caracterizan por ser bastante morfologia y un tamafio muy variable entre morfologias siguientes: la as tinciones bacterianas facilitan notablemente el examen microscépico y Permiten, ademés, el reconocimiento de ciertas estructuras externas Estos Pueden ser coloraciones simples, las cuales emplean un solo colorante para Poner en evidencia la presencia de bacterias en una muestra y la forma que estas presentan. El colorante mayormente usado en este caso es el azul de metileno, Garacteristicas de la Gram negativa (-) La pared de la célula Gram-positiva es gruesa y consiste en varias capas interconectadas de peptidoglicano, asi como algo de Acido teicoico. Generalmente, 80% 90% de la pared de la célula Gram-positiva es Peptidoglicano. La pared de la célula Gram-negativa, Pared celular de las bacterias Gram positivas (+) y 1 y lipoproteinas. Sélo 10% ~ 20% de la pared de la célula Gram-negativa es peptidoglicano, La tincién de Gram se utiliza para diferenciar estructural (pared celular) y morfologicamente las bacterias. Las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas/ 2 tifien de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la ea de _ bacteriana sirve para sus paredes celulares. La pared de la célula a sirve per er tamaiio y forma al organismo, as{ como para prevenir la! material de la pared celular bacteriana que confiere rigidez es el peptidoglicano. Pared ceior Gram postiva Pared celular Gram negativa Tomado: Pearson Educacién. 2017 editorial Médica Panamericana S.A.CF. Método de tincidn simple: Se realiza con una solucién acuosa 0 alcohélica de un colorante basico, el objetivo principal de la tincién simple, es establecer la forma y las estructuras celulares basicas de una célula, Algunas de las tinciones simple utilizadas con frecuencia es azul de metileno, carbolfucsina, cristal violeta y la Safranina. Método de tincién de Gram: La tincién de Gram, es la técnica mas utilizada en microbiologia médica, esta tincién proporciona informacién valiosa para el tratamiento de ciertas enfermedades. La tincién de Gram tiene como objetivo diferenciar estructuralmente la pared celular de las bacterias, los reactivos utilizados en orden en esta metodologia son: cristal violeta, yodo (Lugol), alcohol -acetona y fucsina o safranina.FORMA DIBUJO TINCION | ENFERMEDAD coco DIPLOCOCO ESTREPTOCOCO, ESTABILOCOCO BACILOS COCOBACILOS ESPIRILOS ‘VIBRIOS MATERIALES Portacbjetos Q Cubreobjetos ™ Microscopic @ Papel de arroz Q Aceite de inmersién OQ Solucién salina Asabactericlégica Q Cultivo bacteriano ooog Gotero Agua destilada Azul de metileno Colorantes de Gram. PROCEDIMIENTO: Realizacién de frotis directo. 1, Desinfecte el area de trabajo. 2. Tome una gota de solucién salina y coléquela sobre la lamina portaobjetos. 3. Con el asa bacteriolégica y de manera estéril, tomo una muestra de la colonia bacteriana a estudiar. Mezcle y homogenice la muestra tomada con el asa con Ja solucién salina que se encuentra sobre la lamina cubreobjetos, 4, Permita que se seque completamente a temperatura ambiente. 8, Fije el extendido por calor o mediante el uso de metanol. Tincién Simple: AZUL DE METILENO 1, Luego de fijar la muestra, afiadir azul de metileno y esperar 2 minutos. 8 2, Lavar con agua 3. Secar. 4, Observar primero con el objetivo de 40x primero y luego se afiade aceite de inmersién y se observa con el objetivo de 100x, PUEDEN DARTE LA LAMINA. CON EL ACEITE DE INMERSION, PARA OBSERVAR DE UNA CON EL, OBJETIVO DE 100X.EJERCICIO 1. TINCION CON AZUL DE METILENO # 1 (Observada en el laboratorio) 1. Células procariotas. Dibuja lo observado en el laboratorio y responde las siguientes preguntas: LETS 41.1 objetivo: 100X PS [OC LUC I RS atsnenete, a ‘atamateprosimede$O0, A UGS AD LAGOS, ALONE, ‘1.44Qué forma bacteriana observas?_Pacilos. ol uslenlsimpornncia circa dl gtnere ebay Cel AQHTTE Boe ANTROSHEL Oe] TRAETO eet Bel n vas nissan ease ees Yabo €° epee ceome fe EJERCICIO 2. TINGION CON AZUL DE METILENO #2 (Tincién Observada spelVideo 2. Células procariotas. Coloca una foto de la tincién de azul de metileno ! del Video y responde las siguientes preguntas: ano rT 2-1 2Qué forma bacteriana observas? GOLD CLAY % 2.2 ui eet Aumont dot preparacién?: AOD X, bo " 2.3 Menciona dos ejemplos de cocos de importancia clinica o industrial 4. steePtococeas Pyocenes_ AMIGORLTIS 2. S[wcPl0coccus PRCUMONIAS — ReuMonie 3-MEISSeMn feMatiTO, — ewig A MESScRIA CrodoReoer = CLOMORRE a S . ST Repro: =, Tincién compuesta: COLORAGION DE GRAMS Lous MaTanS— Capres | 1. Coloque la lamina con la ‘muestra sobre un soporte de coloracién. 2. Cubra el extendido con cristal violeta y déjelo actuar por un minuto, 3, Lave con agua de chorro y escurra. 4. Agregue Lugol y déjelo actuar por un minuto. 8. Lave con agua de chorro y escurra. 6. Agregue alcohol etilico o alcohol acetona por un minuto o hasta que se decolore completamente la lamina. 7, Lave con agua de chorro y escurra.EJERCICIO 1. TINCION CON AZUL DE METILENO # 1 (Observada en el laboratorio) 1. Células procariotas. Dibuja lo observado en el laboratorio y responde Jas siguientes preguntas: ZIG E ODD aera Ce), YT vee econ: Vr tb KAN ” 1.2. Aumento:7000, WAN, toned . ny wf an \)) St =maio aproximade:500, & UrdS 400 baciles, APTON EAD ra SEM IL Ty ELAS sagt toma tactanactuarraet_DactOS. PALIN oy COM PTI Y & NAL 1.5 Cuél es la importancia clinica del género Mebsiella? Eé,e| AQGITE Sb ReeaTeS RACERES eer SSE emBa eens neigh oO! AMOR eintFeccuone't: EJERCICIO 2. TINGION CON AZUL DE METILENO #2 in Observada enel Video) 2, Células procariotas. Coloca una foto de la tincién de azul de metileno del Video y responde las siguientes preguntas: arid? F 2.1 :Qu6 forma bacteriana obeerras? GOGO CAP Anb 4 2.2 gCual es ol Aumento de la preparacién?: ADOO K 2.8 Menciona dos ejemplos de cocos de importancia clinica o industrial F/4- steseqococedsS Py oqen ese AMIGOAUTIS 2. SJRePIOCoccuS PRCUMONIAE - Neuman A B.mEiSetia MemACiTO — Meningitis TRENSSERIA CrodOREHOLA = CrontoRRen Ge - = ‘Tincién compuesta: meta TE Ms tet— Oped. 1. Coloque la lamina con la muestra sobre un soporte de coloracién. 2. Cubra el extendido con cristal violeta y déjelo actuar por un minuto. 3, Lave con agua de chorro y escurra. 4. Agregue Lugol y déjelo actuar por un minuto, 8. Lave con agua de chorro y escurra. 6. Agregue alcohol etilico o alcohol acetona por un minuto o hasta que se decolore completamente la lamina. 7. Lave con agua de chorro y escurra,8, Examine el frotis, si la muestra permanece coloreada use nuevamente el decolorante por 30 seg. 9. Lave con agua de chorro y escurra. 10. Cubra el extendido con fucsina o Safranina y déjelo actuar por un minuto. 11, Lave con agua de chorro y escurra. 12, Permita que se seque completamente a temperatura ambiente. 13. Observe al microscopio en 100X, no olvide usar aceite de inmersion. EJERCICIO 3. Tincién de GRAM#1 (Observada en el laboratorio) 3. Gélulas procariotas. Dibuja lo observado en el laboratorio y xesponde Jas siguientes preguntas: 3.1 Objetivo: AQO 3.2 Aumento: 1000 3.3 2Qué forma bacteriana observas?_Sxca S 3.4 ¢Se trata de una bacteria GRAM+ 6 GRAM ~? 3.6 zPor qué es importante diferenciar las bacterias en (GRAM# y GRAM? Yur A poescae 1p 9 EJERCICIO 4. TINCION DE GRAM #2 CELULA PROCARIOTA 4. Coloca una foto de lo segunda tincién de GRAM observada en el video y responde las preguntas. 4.1 ¢Que formas morfolégicas. bacterianas observes? FORMA ESEEQUCA 4.2 gE género Salmonella sp es GRAM + 6 GRAM ealnella eS vet Greil Bart — 43 gio lnsbactan por RAM GRAM? Ja cA S eRo De Gocren tne enct = 44 gCuéles son las principales caracteristicas de ‘Salmonella spe eno Forma esporas * Son anactosio o FaolrsTivoEJERCICIO 5. TINCION DE GRAM #3 CELULA PROCARIOTA 5. Coloca una foto de la tercera tincién de GRAM observada en el video y responde las preguntas. vie - 8.1 Que formas morfolégicas bacterianas observas? © pelo S 5.2 ¢Clasifica las bacterias observadas segin forma morfolégica y tincién de GRAM? |+ , Titeon oe akan 4 : he ig aInwo 4 Fyauon dt la moetta en. Un pOrtandy—Erd v Qobav La mvetta Con Carel Violela durante onor Sequeaiot v Layee CON aqua Par Bhinrnar A exteto de rial poteto. v Gobre ta touertsa Gon bogol (Yodo) Guradle ondy Seopaaos v Enyagar con aqua pda eemade el THE Ue oh Gide La mnvestio con ailghol etihoo Coransé unos Srqpocter v Emyuagex von abimenet Qobae la muestra Cor Jafronina dwrante — ynot Sequndoe v Enjoaqor OM FOX porg Yuninoe el eretco DE Salanna_ v Gsewar al micronont uv d Las Celular Se baeron de eaipura7? \ No (cron Negohuat ) Fanatar + no (Gam Pontwas] Finaly3or* Lara Gram fosthuar ; el coor frac! es Ricporo © Para Grom Negatwat , e color Final ef Posato 0 Goo @ En tas backenas Gras Pontivar, lo pore cekolar tila compoeria papal Mente por ona qwese Capa AE pePpoto Wwcand ; due retene el @toranre Aholeta cristal, fecto hace que "lay babar oram' Portas apareacan de oe Porpuro bay a mMicorcomd Aespoer de binadn Ae Gram, mventyar a im Neggtwar, la pared Celular @5 mar ‘Clelqada gor eee ft pes de “Spepitio lOcand mas oelqado y ond qnembrang exketna Compyerta Por lipolisdcancios. Estas membranor Externa Adva Como harrera que chieivlla ja retenuoh del Coloronie urole- ko Urithal. Por lo tanto, durante tl proceto ole hnuor de ram, lay boclenat Gram Neqahwar perder el Cowor Viol Cartal y fe finen con Bi Colorante Ge Cobra, como ta Gabraning palquictnold "on wor foFAdo 9 Toyo bajo. la tinocin gadto —alconel renstente &f on metoclo de Anam yfnaado Puoapalmente. pata Getenes bacienar que fene una pore Cetotar greta y Cera Gok let Confiere reiiskenod gq ola decormaca fon Goto yaks ayguete GE la fnuow Con un cowWsanie Primaro able metodd tp espeaaimenre Obl Para to detengor Ge Gacteriat del aerate My cobace: trum 2 lps Colprantey © Sustanaar Ubligadot tn ta frst -gado~ aleokol rericlenk! Son: -Glorante Pamano—> Je ohlwe la Pyrana Saileg Joe Ey UN Clorante roy, SE LbIa Para tem fat Cetolar Ge mone Infentd . — Aqente dramivcinte —> fe emplea ona Solon de aado aleohul para ehpkaar tl ooiorante de taf Celular que nD to refrenen . 1 aawb Alwond Rhetina ef Gorante dt tac Celular gok po tienen Ja pared Celvier weet Cerota Caradenrica Ge lar bawenar aude - atconol jeTibene | Colorantt oe contrartt —> Se Vlad Una mlocios ce arwl de mehilens parc Conharer tl CowWrante roy0 Ge Ia FLtana en Las Celular que no rehuuieon 4b Cotorant® Armano. Va ree. GE padenar Golo —alenhol resistenter Ae ImMportomad clinicg ee Pycobactenum tyberevlone , que Cour la Foberentons a eeJ] 7 Dibyyo {yemoto | Tinwo’ | Enfermedoo! [Loy ort gran 1 fon Teeeploecyl ae ero adr orenro Amado lune. Pyogenes motel \ Wl Aram ‘y : oor neqariwot fon w7de U }OCASOS — : E iptocaro q Oo Nevrrena | ve dp Sram eerommotae [= PO ELE AL eben 1 9° Ho ak Etatiar tet - Gonewed , tmood GO qrany \ec- be on cotor? ruraddy roy _— Dipiogxo . SS ee Estreptoweos | CI tiltepieuee’ | _Fanoghtar Pyogenet PAGER om pontiy 7 CicsMating eae no oe |= Amps qo ¥ Cocolnutor. ne | Sulmonetla Slapaytowees § rgicamrdic cc epee mics GHG ECleACua qian Spe pewwe J faoole de Reboee, Dauiy det | fon Contactor Un emoplilut aren — no ouilay Influemoe eanpela — Beaons licytor rebrE LEU IDEN CE - &pne — tngoca hy Odd MEDIO - Goontic = meawmgire ¥ ap Worry — Infecionet regal oneal Tafearoore otLOE spinor fon - HAG badena s tam — " ‘ Cqwpasat ie el Pole baclenas Plaqgeladar Oe Conc hebtordtal o eo EXP WON | TEs ona baclena | Vibrio Gra neyhve _Gieed Cholerae, Con Coma de | baTLON Worvo. Expuitos Treponema Palicom \ibnot ‘ |CONCLUSION Para concluir, 1a observacién microseépica de las célutas procariotas revela una estructura celular fundamentalmente diferente a la de las células eucariotas. Estas ctlulas carecen de nicleo definido y de orgnulos membranosos, presentando en cambio un nucleoide donde se encuentta el ADN, ribosomas dispersos en el citoplasma y una pared celular que proporciona rigidez y proteccién La simplicidad de su organizacidn supiere una adaptacion efidente a ambientes diversos y una capacidad para realizar una amplia gama de funciones vitales. con recursos limitados, Estas odservaciones destacan Ia Importancia de comprender Ia diversidad celular para avanzar en ‘Ruestro conocimiento de la biclogia y su aplicacién en diversas areas, desde la medicinaBIBLIOGRAFIA 1. Madigan, M. T., et al. Brock Biology of Microorganisms. Pearson, 2017. 2. Prescott, L. M., et al. Microbiology. McGraw-Hill Education, 2016. 3. Brown, T. A. Introduction to Genetics: A Molecular Approach. Garland Science, 2019.