603124-Protein and Enzyme Technology-Chapter 5. Enzyme Kinetics

Machine Translated by Google
Chương 5. Động học enzym
5.1. Khái niệm cơ bản về enzym
5.2. Động học enzyme
5.3. Các Yếu Tố Ảnh Hưởng Đến Hoạt Động Của Enzyme
30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học enzym 1

Chương 5: Động học enzyme
5.1. Khái niệm cơ bản về enzyme
- Enzim được coi là chất xúc tác sinh học
- Chúng được gọi là chất xúc tác sinh học vì enzim là
phân tử protein được tạo ra bởi các sinh vật sống.
- Enzym xúc tác quá trình phân hủy cơ chất thành sản phẩm
- Enzyme có một số ưu điểm khác biệt so với thông thường
chất xúc tác hóa học
30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 2

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1. Giới thiệu về enzim

5.1.1. Thành phần của các phân tử enzyme

5.1.1. Thành phần của các phân tử enzyme
Đồng sáng lập có thể là:
Coenzym - một chất hữu cơ không phải protein, có
có thể thẩm tách, ổn định nhiệt và gắn lỏng lẻo vào phần protein.
Nhóm giả - một chất hữu cơ có thể thẩm tách và
chất bền nhiệt được gắn chắc chắn vào protein hoặc apoenzym
phần.
3. Chất kích hoạt ion kim loại - bao gồm K+, Fe++, Fe+++, Cu++
, Co++, Zn++, Mn++, Mg++, Ca++, và Mo+++.

5.1.2 Một số cofactor quan trọng
5.1.2.1. Coenzym là dẫn xuất của vitamin
1. Vitamin B1 - Thiamine pyrophotphat (TPP),
TPP là coenzym của decarboxylase (của alpha-ketoacid) và

transketolase


5.1.2.1. Coenzym là vitamin
2. Vitamin B2 - Các coenzym Flavin
Coenzym FMN
và FAD

2. Vitamin B2 - coenzym Flavin
30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme số 8

3.Vitamin B6-Pyridoxal photphat, Pyridoxamine photphat
PP là coenzym cho transaminase và decarboxylase (của axit amin)


4.Vitamin PP - Nicotinamid nucleotid (NAD, NADP)
Coenzym NAD và NADP

5. Vitamin B5 - Coenzym A (coA, CoASH)
Xúc tác phản ứng acetyl hóa


5. Vitamin B5 - Coenzym A (coA, CoASH)
30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học 12

của enzyme

6.Biotin (vitamin H):
Biotin là coenzym của carboxylase


5.1.2.2. Cofactor chứa ion kim loại
Cofactor chứa nhóm Hem (porfirin + Fe)
Hai loại: Fe2+: Ferohem,

Fe3+: Ferihem
Hem: Porfirin + Fe


5.1.2.2. Đồng yếu tố chứa ion kim loại
Polipeptit
CH-CH3 CH-CH3
Các protein không chứa sắt: mioglobin,
CH
hemoglobin
N N
Các protein enzym chứa sắt: CH Fe CH
peroxydase, catalase, cytochrom.

N N
peroxydaza xúc tác CH
AH2 peroxydaza 2 H2O H2O xúc tác

_H2O2
CH2 CH2
CH2 CH2
MỘT
H2O2 O2 Catalase-H2 H2O2
Peroxydase-H2
COOH COOH




Phần II:
ĐộngEnzyme
học Enzyme
và CN 5.1.
enzyme
Giới
Chương
thiệu 5:
về enzyme 5.1.3 Cấu trúc của
enzyme:
5.1.3.1 Trang web đang hoạt động
Trung tâm hoạt động là vùng enzim mà các phân tử cơ chất
liên kết và thực hiện phản ứng hóa học.
Vị trí hoạt động bao gồm các phần còn lại
hình thành liên kết tạm thời với chất nền
(vị trí liên kết) và các dư lượng xúc tác cho
phản ứng của cơ chất đó (vị trí xúc tác)



Vị trí hoạt động của enzym đơn giản: thường chứa -
SH của cystein,
- OH của serine,
- NH2 của lysin,
- COOH của glutamate, aspartate, -
imidazol của histidin, indol của tryptophan…

Ví dụ: Vị trí hoạt động của chymotrypsin
bao gồm: -OH của Ser 195, -
COOH của Asp 102, imidazol của
57 của anh ấy


Vị trí hoạt động của enzyme liên hợp: cofactor + axit amin
- apoenzyme quyết định tính đặc hiệu của enzyme và tăng
hoạt động của coenzym.
- cofactor tham gia trực tiếp vào phản ứng, xác định loại phản ứng
mà enzim xúc tác. Mặt khác, nó làm tăng
khả năng kháng lại chất ức chế của apoenzim.


5.1.3 Cấu trúc của enzym:
5.1.3.2 Vị trí dị lập thể: vị trí còn lại phù hợp với chất ức chế hoặc chất kích hoạt
Các loại điều chỉnh allosteric: tác nhân allosteric tích cực và tiêu cực
Các loại quy định allosteric: homotropic và heterotropic


5.1.3.3 Phức hợp đa enzym:
Phức hợp đa enzym là tổ hợp ổn định của nhiều hơn một enzym,
thường tham gia vào các chuyển đổi xúc tác tuần tự.




5.1.3.4 Tiền enzym (zymogen)
- Một số enzyme được tổng hợp ở dạng không hoạt động gọi là zymogen hoặc
tiền enzym như trypsinogen và pepsinogen.
- Zymogen không hoạt động vì các vị trí xúc tác của chúng bị che bởi một
chuỗi polipeptit.
- Hoạt hóa, phân cắt chuỗi polypeptide.



5.1.3.4 Proenzyme (zymogen)

Pepsinogen thành pepsin (dạ dày)
29
30/07/2020
603124 – Chương 5. Động học của enzyme

Trypsinogen thành trypsin
Trypsinogen: là zymogen của trypsin, do tuyến tụy sản xuất.
Trypsinogen bò bao gồm một chuỗi polypeptide duy nhất gồm 229
axit amin
Trypsin: là protease serine tuyến tụy, bao gồm một chuỗi duy nhất
polypeptide gồm 223 gốc axit amin, pHopt= 8
Chất kích hoạt: enteropeptidase, trypsin

5.1.3.4 Proenzym (zymogen)
Trypsinogen thành trypsin

Chymotrypsinogen thành chymotrypsin
Chymotrypsinogen được sản xuất bởi tuyến tụy.
Chymotrypsin là một protease serine, có ba chuỗi peptide
Một chuỗi: axit amin 1-13
Chuỗi B: axit amin 16-146
Chuỗi C: axit amin 149-245.


Chymotrypsinogen thành chymotrypsin
Cơ chế hóa học: nhờ trypsin

5.1.4 Tính đặc hiệu của enzyme
5.1.4.1 Tính đặc hiệu của phản ứng: Enzyme sẽ chỉ xúc tác cho một phản ứng cụ thể
sự phản ứng lại.
5.1.4.2 Tính đặc hiệu của cơ chất: tính chọn lọc của enzyme đối với cơ chất của chúng
Tính đặc hiệu tuyệt đối: Các enzym đặc hiệu tuyệt đối sẽ chỉ
xúc tác cho một phản ứng với cơ chất cụ thể của nó.
Ví dụ: glucose isomerase, urease

5.1.4.2 Tính đặc hiệu của cơ chất
Tính đặc hiệu tương đối: enzym sẽ tác dụng lên một loại
liên kết hóa học bất kể phần còn lại của cấu trúc phân tử.
Ví dụ: lipase, peptidase

Tính đặc hiệu nhóm: enzym chỉ tác động lên những phân tử
có các nhóm chức năng cụ thể

Enzim có tính đặc hiệu quang học: sẽ tác dụng lên một không gian hoặc một không gian cụ thể.
đồng phân quang học.
Ví dụ: enzyme malate dehydrogenase

5.1.5 Đặt tên và phân loại
-Tên thường gọi: papain, pepsin, chymotrypsin
- Cơ chất + ase: peptidase, amylase
-Subtrate + loại phản ứng + ase: pyruvate dehydrogenase


Số EC (Số Ủy ban Enzyme)
LỚP
(lớp)
PHỤ PHỤ
(lớp con)
NHÓM
(phần)





5.1.6 Cơ chế xúc tác của enzym 5.1.6.1.

Các loại liên kết trong phức hợp enzym - cơ chất
a) Liên kết ion
b) Tương tác kỵ nước
c) Liên kết hydro

5.1.6 Cơ chế xúc tác enzyme 5.1.6.1. Các

loại liên kết trong phức hợp enzyme - cơ chất
d) Tương tác Vandecvan
e) Liên kết cộng hóa trị: giữa nucleophile với electrophile
Các chất ái nhân: -OH, -SH, -S-, -NH2, =N-,
Điện di: H+ , >C=O, >C=NH, Fe2+ , Cu+


5.1.6 Cơ chế xúc tác enzyme 5.1.6.2.
Sự hình thành phức hợp ES


5.1.6 Cơ chế xúc tác enzyme 5.1.6.2.
Sự hình thành phức hợp ES

5.1.6 Cơ chế xúc tác enzyme 5.1.6.2. Sự hình
thành phức hợp ES
Giả thuyết ổ khóa và chìa khóa của Fischer
Đây là mô hình đơn giản nhất để biểu diễn cách thức hoạt động của một enzym. Các
chất nền chỉ cần phù hợp với vị trí hoạt động để tạo thành chất trung gian phản ứng.

5.1.6 Cơ chế xúc tác enzyme 5.1.6.2. Sự
hình thành phức hợp ES
Giả thuyết phù hợp cảm ứng của Daniel E.Koshland: phân tử enzyme
thay đổi hình dạng khi các phân tử chất nền đến gần. Sự thay đổi về hình dạng
được 'gây ra' bởi phân tử cơ chất tiếp cận. Cái này nữa
mô hình tinh vi dựa trên thực tế là các phân tử linh hoạt bởi vì
liên kết cộng hóa trị đơn xoay tự do.

Chương 5: Động học của Enzyme
5.2 Động học của Enzyme
V0 là vận tốc ban đầu của
Vmax là tốc độ tối đa của

[Chất nền] là nồng độ
của chất nền.
Km là Michaelis-Menten
không thay đổi

5.2 Động học của enzym
Km: Hằng số Michaelis-Menten,

thước đo mức độ phức tạp của cơ
chất với một enzym nhất định,

còn được gọi là ái lực liên
kết của nó.
-[S]>>Km : V=Vmax tốc độ phản ứng không phụ thuộc vào [S]
-[S] = Km : V=1/2 Vmax .
-[S] << Km : V phụ thuộc tuyến tính vào [S]

Lineaweaver và Burk Equation
1 = km 1 + 1
v Vmax [S] Vmax

Bài tập: Xác định Km và Vmax của invertase
[s] (g/ 0,5 1 1,5 2
l) t (phút) P (mgGlucose-Fructose)
0 0 0 0 0
5 1 2 2,8 4
10 1.3 2,5 3.2 4.4
15 1,5 2,8 3,4 4.6
20 1.6 3 3,5 4,8
30 1.7 3.2 3.6 4,9
PT tuyến tính = y0 + f'(x0 )(x-x0 )

5.3.1. Ảnh hưởng của nhiệt độ:
Nhiệt độ tối ưu: nhiệt

độ tại đó hoạt tính xúc
tác của enzim là lớn nhất
Nhiệt độ không hoạt động:

nhiệt độ tại đó enzim bị
biến tính và mất hoạt tính

5.3. Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt động của enzyme
5.3.2. Ảnh hưởng của pH:
Enzyme bị ảnh hưởng bởi những thay đổi trong
độ pH. Giá trị pH thuận lợi nhất -
điểm có nhiều enzyme nhất
hoạt động - được gọi là độ pH tối ưu
Giá trị pH cực cao hoặc thấp
thường dẫn đến mất hoàn toàn
hoạt động của hầu hết các enzym.

5.3.3. Tác dụng của chất ức chế:
Một số chất làm giảm hoặc thậm chí ngừng hoạt động xúc tác của
enzym trong các phản ứng sinh hóa. Họ chặn hoặc bóp méo trang web đang hoạt động.
Những hóa chất này được gọi là chất ức chế, vì chúng ức chế phản ứng.


Hạn chế cạnh tranh:
- Khi bị ức chế cạnh tranh , , một phân tử tương tự như chất nền nhưng
enzyme không thể tác động được nên sẽ cạnh tranh với cơ chất để giành vị trí
hoạt động.
- Có thể khắc phục được hiện tượng ức chế cạnh tranh bằng cách tăng nồng độ
cơ chất

5.3.3. Tác dụng của chất ức
chế: Ức chế không cạnh tranh:
- Trong ức chế không cạnh tranh, một phân tử liên kết với một enzym ở đâu đó không
phải là trung tâm hoạt động.
-Lưu ý rằng không thể khắc phục được sự ức chế không cạnh tranh bằng cách tăng
nồng độ cơ chất như cách có thể làm ức chế cạnh tranh.



Ức chế cơ chất
Ở nồng độ cao, hai phân tử cơ chất liên kết ở vị trí hoạt động
theo cách sau: một phân tử cơ chất liên kết bằng cách sử dụng "đầu" và
một phân tử khác sử dụng “đuôi”.
Liên kết này là không hiệu quả và cơ chất không thể được chuyển đổi thành
sản phẩm.
ES + S ESS

Ức chế phản hồi:

Chương 5: Động học enzyme 5.3.4.
Tác dụng của Trình kích hoạt:
Chất kích hoạt enzyme là các hợp chất hóa học làm tăng tốc độ phản ứng enzyme.
Trong số các chất kích hoạt, chúng ta có thể tìm thấy các ion, phân tử hữu cơ nhỏ,
cũng như peptide, protein và lipid.
-Kích hoạt trực tiếp: chất kích hoạt liên kết với enzyme.
Ví dụ: + Kích hoạt zymogen + Khôi
phục nhóm chức trong trung tâm hoạt động của enzyme (Papain, urease: cystein
có thể biến cầu SS thành nhóm –SH)
+ Liên kết ion kim loại với enzyme


5.3.4. Tác dụng của Trình kích hoạt:
- Hoạt hóa gián tiếp: hoạt hóa enzim là do loại bỏ
chất ức chế enzym.
Ví dụ: axit ethylenediaminetetraacetic (EDTA) được gọi là
các tác nhân chelate liên kết các cation ức chế này và bằng cách này có thể
loại bỏ tác dụng ức chế của chúng.


5.3.4. Tác dụng của Trình kích hoạt:

603124-Protein and Enzyme Technology-Chapter 5. Enzyme Kinetics

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

603124-Protein and Enzyme Technology-Chapter 5. Enzyme Kinetics

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Machine Translated by Google

Chương 5. Động học enzym

5.1. Khái niệm cơ bản về enzym

5.2. Động học enzyme

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học enzym 1

Chương 5: Động học enzyme

5.1. Khái niệm cơ bản về enzyme

- Enzim được coi là chất xúc tác sinh học

- Chúng được gọi là chất xúc tác sinh học vì enzim là

phân tử protein được tạo ra bởi các sinh vật sống.

- Enzyme có một số ưu điểm khác biệt so với thông thường

chất xúc tác hóa học

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 2

Chương 5: Động Học Enzyme

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học enzym 3

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1. Giới thiệu về enzim

5.1.1. Thành phần của các phân tử enzyme

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 4

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1. Giới thiệu về enzim

5.1.1. Thành phần của các phân tử enzyme

Đồng sáng lập có thể là:

Coenzym - một chất hữu cơ không phải protein, có

Nhóm giả - một chất hữu cơ có thể thẩm tách và

, Co++, Zn++, Mn++, Mg++, Ca++, và Mo+++.

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 5

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1.2 Một số cofactor quan trọng

5.1.2.1. Coenzym là dẫn xuất của vitamin

1. Vitamin B1 - Thiamine pyrophotphat (TPP),

TPP là coenzym của decarboxylase (của alpha-ketoacid) và

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 6

Chương 5: Động Học Enzyme

2. Vitamin B2 - Các coenzym Flavin

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 7

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1.2.1. Coenzym là vitamin

2. Vitamin B2 - coenzym Flavin

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme số 8

Chương 5: Động Học Enzyme

5.1.2.1. Coenzym là vitamin

3.Vitamin B6-Pyridoxal photphat, Pyridoxamine photphat

PP là coenzym cho transaminase và decarboxylase (của axit amin)

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 9

Chương 5: Động Học Enzyme

Coenzym NAD và NADP

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học enzym 10

Chương 5: Động học enzyme

5.1.2.1. Coenzym là vitamin

5. Vitamin B5 - Coenzym A (coA, CoASH)

Xúc tác phản ứng acetyl hóa

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học enzym 11

Chương 5: Động học enzyme

5. Vitamin B5 - Coenzym A (coA, CoASH)

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học 12

Chương 5: Động học enzyme

5.1.2.1. Coenzym là vitamin

Biotin là coenzym của carboxylase

30/07/2020 603124 – Chương 5. Động học của enzyme 13

Chương 5: Động học enzyme

Cofactor chứa nhóm Hem (porfirin + Fe)

Hai loại: Fe2+: Ferohem,