Generalitat de Catalunya

Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

CFTS LABORATORI D’ANÀLISI I CONTROL

QUALITAT
MÒDUL3 : Anàlisis instrumental
Pràctica: Cromatografia HPLC. Determinació de la
concentració d’una mostra problema a partir d’una
recta de calibrat

Elaborat per: Marta Griera Rossend Llorach

Departament de química INS Terrassa

 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

Problema recta calibrat:

1.- Posar l’equip en marxa, purgar, etc. segons les instruccions corresponents. Executar el mètode amb
el què volem determinar la concentració del problema. (ex. en el nostre cas CAFEINA1.M)

2.- Anar a Run control  Sample info (és per introduïr les dades o identificació de la mostra problema):

Apareix la següent pantalla, on s’ha d’omplir els següents camps:

Signal 1. Per identificar la “punxada”. Per exemple Problema5

Subdirectory: Carpeta on guardarà el software la punxada. Per exemple RECTAGRUP5

Sample name: nom de la mostra. Exemple: Cafeïna5

Al final prémer RUN METHOD

2
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

3.- Apareix un missatge Run in Progress/Waiting for injection

3
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

4. A continuació injectar la mostra problema (veure document injecció HPLC). Apareix

4
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

5.- Un cop finalitzat el cromatograma, apareix automàticament un “report”:

Veiem com en el report, surt el nom que hem posat a la mostra, el nom de l’arxiu a on guarda el
software la punxada, el mètode. Al final apareix un botó de Print, per si es vol imprimir el “report”.

També apareix un missatge d’error, on informa que el programa no té la calibració del compost. Per
assignar l’àrea del pic, segons la recta de calibració, i així determinar la concentració de la mostra
problema punxada, anar al programa Offline (clickar icona escriptori):

6.-Apareix el següent missatge. Fer OK:

5
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

7.- Veure que en el mètode apareix el mètode amb el qual hem punxat, i que és el que conté la recta de
calibrat (exemple: CAFEINA1.M)

8.- Prémer Data Analysis:

6
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

8.- Comprovar que en Calibration , apareix la recta de

calibració

9.- Sel·leccionar l’arxiu on s’ha guardat la punxada de la mostra problema.DATA (Exemple:

RECTAGRUP5 Single Runs:

7
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

10.-Apareix

11.- En la graella superior, triar la punxada. (Exemple: en aquest cas apareixen 2 punxades, la d’interés
en aquest cas és la 1a). Seleccionar clickant a sobre de la filera:

12.- Apareix el cromatograma de la mostra problema:

8
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

13.- Comprovar que el temps de retenció del problema, cau dins del rang de temps retenció de la recta
de calibrat. Per fer-ho, fer doble click sota el 1r temps de retenció de la recta de calibrat) i observarem
que apareix una franja de color blau. En cas que el pic problema estigui fora del rang, no podrà integrar,
és a dir trobar la concentració. (NOTA PELS PROFESSORS: En cas de que el RT problema no s’escaigui
dins del rang, es pot manipular el RT de la recta de calibració, clickant a sobre del RT i posant el temps
adequat) (*).

9
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

Doble click

14.- Anar a Report Specify Report:

15.- Apareix:

10
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

16.- En Report style, escollir Extended performance:

17.- En destination, si només volem veure el report en pantalla i que el guardi en la carpeta
corresponent, triar Screen i File (per defecte, opcions seleccionades). Prémer a continuació OK

18.- Apareix la següent pantalla. Prémer View saved Report File(s):

19.- Apareix el report. Al final de tot del report tindrem la concentració del problema:

11
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

20.- El report es pot imprimir, guardar, etc.

(*) NOTA: En el cas que el TR no surti dins el rang de la recta de calibrat es pot arreglar modificant el TR
de la recta de calibrat:

1.- Seleccionem la punxada problema (ex. Probema7.D) i clickem Calibration. Apareix:

12
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

2.- Veiem que el TR de la recta és de 2.844 i el nostre problema al voltant del 3.600. Modifiquem el
temps de la recta de calibrat, posant-nos damunt el RT de la recta, i posant el RT del problema:

3.- Clickar Integration, apareix:

13
 Generalitat de Catalunya
Departament d’Ensenyament
Institut de Terrassa

4.- A partir d’aquí continuar a partir dels punts 14-20.

14