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微波消解 ICP MS测定动物血清和组织器官中的微量银
微波消解 ICP MS测定动物血清和组织器官中的微量银
微波消解 ICP MS测定动物血清和组织器官中的微量银
Vo pp2533-2537
2014 年 9 月 c
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lys
is Sep
tember,2014
微波消解-ICP-MS测定动物血清和组织器官中的微量银元素
1.上海市骨科内植物重点实验室,上海交通大学医学院附属第九人民医院骨科,上海 200011
2.上海贝奥路生物材料有限公司,上海 201114
3.普研(上海)标准技术服务有限公司,上海 201210
关键词 微波消解;ICP-MS;血清;组织;器官;银
中图分类号:O657.
3 文献标识码:A DOI:10.
3964/
j.i
s 1000-0593(
sn. 2014)
09-2533-05
谱法、电感耦合等离子体质谱 法 等 [4]。其 中 电 感 耦 合 等 离 子
引 言 体质谱(
ICP-MS)法具有灵敏度高、消耗样品量少、检测速度
快、检出限低、线 性 范 围 宽、能 同 时 测 定 多 种 元 素 的 优 点 ,
银被公认具有广谱抗菌活性,从古希 腊 人 用 银 来 处 理 溃 已越来越多地被应用于生物样品分析中 [5-7]。
疡促进伤口的愈合,到现代银在纺织、化妆品、水质消毒 剂、 ICP-MS 由离子源和质 谱 仪 两 个 主 要 部 分 构 成,样 品 经
伤口辅料 [
和医疗器械
1] [
2]
等方面应用获 得 极 大 地 推 广。由 于 消解成溶液后,样 品 溶 液 经 过 雾 化 器 由 载 气 送 入 ICP 炬 焰
目前公开发表的动物实验和人体接触银流行病学研究存在局 中,经过蒸发、解离、原子化、电离等过程,转化为带正电荷
限性,银对人体毒性反应没有 被 明 确,其 生 物 安 全 性 方 面 和 的离子,经离子采集系统进入 质 谱 仪,质 谱 仪 根 据 质 荷 比 进
人体吸收银离子的潜在组织器官危害 引 起 了 热 议 [3],明 确 银 行分离,对于一定质荷比,质谱 积 分 面 积 与 进 入 质 谱 仪 的 离
在机体内分布显得尤为重要。 子数成正比,即样品中元素浓 度 与 质 谱 的 积 分 成 正 比 ,并 与
微量元素检测常用 的 方 法 有 原 子 吸 收 分 光 光 度 法 (火 焰 标准系列比较定量 [8]。
与石墨炉)、原子荧光法、极谱法、电感耦合等离子体发射 光 目前,国内外对于 医 学 生 物 样 品 经 处 理 后 采 用 ICP-MS
收稿日期:2013-10-23,修订日期:2014-01-22
基金项目:国家自然科学基金项目( YG2011MS24),上海高 校 创 新 团 队 建 设 基 金 项 目 (二 期),
81071453),上海交通大学医工交叉基金项目(
08DZ2230330)和上海教委重点学科建设基金项目(
上海市骨科内植物重点实验室建设基金项目( J50206)资助
作者简介:袁君杰,1987 年生,上海交通大学医学院硕士研究生 e-ma
il:a
jyuan@126.
com
* 通讯联系人 e-ma
il:youzhuan.
xie@gma
il.
com
2534 光谱学与光谱分析 第 34 卷
1.
0 0 50 0
1 实验部分 0.
025 50 0.
5
0.
050 50 1.
0
0.
25 50 5.
0
1 仪器和试剂
1.
0.
50 50 10.
0
美国 Pe
rki r(
nElme PE)公司 Nex
IONR 300XICP-MS,配 1.
00 50 20.
0
有自动进样器;屹尧科技 WX8000 微波消解仪。
69% ,质 量 浓 度 ):电 子 级 超 纯 试 剂;过 氧 化 氢
硝酸( 4 ICP-MS仪器工作参数
1.
30% ,质量 浓 度 ):电 子 级 超 纯 试 剂;内 标 原 液 (Y):10
( 1.
4.1 质谱调谐优化
mg·L-1 ;银标准贮备液:美国 PE 公司 CL43-50AS,浓度为 使用 PE 公 司 提 供 的 含 1μg·L-1 Be,Mg,I
n,Ce,U
100mg·L-1 ;超 纯 水:电 阻 率 ≥18.
2 MΩ·cm,用 于 配 制 质谱调谐液优化仪 器 工 作 条 件,使 仪 器 灵 敏 度、氧 化 物、双
所有标准溶液和样品溶 液;高 纯 氦 气 (纯 度 ≥99.
999% );液 电荷、背景等各项指标符合测 定 要 求,仪 器 优 化 调 谐 参 数 见
氩(纯度 ≥99.
999% )。 表 3。
2 样品采集及处理
1.
构建新西兰大白兔股骨髁缺损模型,应 用 载 银 β-磷 酸 三 Tab
le3 Op
timi
zat
ionpa
rame
ter
s
钙修复骨缺损,术后 4 周、8 周 和 12 周 心 脏 穿 刺 收 集 血 液, No . 分析物 相对原子质量 目标值 实际值 对比
待 血液自然凝固,离心( n)后取上清。兔处死
pm,8mi
4200r 1 Be 9.
0 3000 16894 >
后采集心脏、肝 脏、脾 脏 和 肾 脏 器 官,以 及 内 植 物 周 围 骨、 2 Mg 24.
0 20000 77620 >
肌肉和骨髓组织,以 β-磷酸三钙 植 入 组 为 空 白 对 照。血 清 和 3 I
n 114.
9 45000 84210 >
组织器官标本分装后置于 -80 ℃ 冰箱冻存。 4 U 238.1 40000 82805 >
5 CeO/Ce 155.9/139.
9 0.
03 0.
022
φ)硝 酸 浸 泡 24h,然
所有器皿及消化罐均须先 以 20% (
6 Ce+ + 70.
0 0.
03 0.
016
后用水反复冲洗,最后用超纯水冲洗干净。
7 Bkgd 220.
0 1 0.
067
将样品从冰箱取 出,充 分 解 冻。根 据 样 品 性 状,血 清 样
0g(精 确 至 0.
品称取 1. 001g),动 物 组 织 及 器 官 样 品 称 取
1.
5.2 仪器参数和测定方法
0. 0g(精确至 0.
5~1. 001g)。将样品置于聚四氟乙烯消化罐
将不同浓度的标准曲线溶液分别进 行 测 定,以 内 标 溶 液
中,加入 5mL 纯硝酸浸泡 1h,再加入 2mL H2O2 ,盖上密
在线混合进样,记录标准溶液 与 内 标 溶 液 离 子 数 比 值 ,以 它
封盖,放入微波消解仪中,微波 消 解 仪 功 率 和 加 热 时 间 调 至
为 纵坐标Y ,标准溶液浓度为横坐标 X,绘制标准工作曲线,
最佳程序(见表 1),消 解 结 束 后,将 聚 四 氟 乙 烯 消 解 罐 置 于
将样 品 消 解 溶 液 注 入 电 感 耦 合 等 离 子 体 -质 谱 仪 中 ,得 到 相
赶酸仪上,调节赶 酸 温 度 至 140 ℃ ,将 酸 液 赶 至 0.
5 mL 时
停止赶酸,冷却至室 温,加 入 2 mL5% ( φ)硝 酸 润 洗 消 解 罐
Tab
le4 E
lemen
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ion me
thodpa
rame
ter
s
内壁后,将消解液转 移 至 10 或 25 mL 容 量 瓶 中,用 超 纯 水
相对原 扫描 扫描 扫描 分析 内标
冲洗消化罐内壁 3 次以上,合并至容量瓶中,用 2% (
φ)硝 酸 元素
子质量 方式 次数 时间 模式 元素
定容至刻度,混匀,待测。同时做试剂空白试验。
107
峰跳 50 KED
Ag 5 Y
模式 mi
ll
ise
cond Mode
Tab
le1 Mi
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消解 最大 利用率 升温时间 温度 保持时间 Tab
le5 Op
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fICP-MS
步骤 功率/W /% /mi
n /℃ /mi
n
当前值 说明
1 2000 100 3:
00 120 3:
00
03/(
1. n-1)
L·mi STD/KED 模式喷雾器气流速度
2 2000 100 3:
00 150 3:
00
20/(
1. n-1)
L·mi 辅助气流速度
3 2000 100 5:
00 190 10:
00
00/(
18. n-1)
L·mi 等离子气流速度
-12.
00Vo
lt 转板电压
3 标准曲线制备
1. 1600.
00 Wa
tts ICP 射频功率
首先制 备 银 标 准 中 间 液 (
1.0 mg·L-1 ),即 吸 取 银 标 准 -1637.
00Vo
lt 模拟阶段电压
贮备液 5.
00mL 于 500mL 容量瓶中,用 5% ( 峰跳阶段电压
φ)硝酸溶液定 850.
00Vo
lt
第9期 光谱学与光谱分析 2535
表 5。 仪器工作参数后,银 元 素 检 出 限 的 测 定 是 通 过 连 续 10 次 测
量空白溶液,然后以 3 倍空白溶液的标 准 偏 差 除 以 线 性 相 关
2 结果与讨论 系数(标准曲线的斜率)作为仪器的检 出 限。本 方 法 确 定 银 的
检出限为 0.
98μg·kg-1 ,标准曲线相关系数为 0.
9999。
1 微波消解处理样品
2. 2.
2.2 方法的准确度试验
在采样和制备过程中应注意不使样品 受 到 污 染。HNO3- 为了评价方法的准确度,血清和组织 器 官 样 品 需 做 加 标
H2O2 能 发 生 连 锁 反 应,增 强 硝 酸 的 消 解 能 力,能 更 彻 底 地 回收试验。具体过程 是 将 每 个 样 品 等 量 分 成 2 份,1 份 样 品
破坏有机物,消解效果 更 佳。5 mL HNO3 和 2 mL H2O2 消 的处理同前所述,另 1 份在此基础上加 入 含 有 被 测 银 元 素 的
解体系硝酸用量少,最终获得 的 样 品 消 解 溶 液 澄 清 透 明;消 标准样品,然后两份 样 品 在 相 同 条 件 下 处 理 并 测 定。由 表 6
解 程序采用 2000W 功率 3 步式温度梯度,样品消解完全,获 可以看出,银元素回收率为 98% ~107% ,说 明 此 方 法 对 于
得的数据重复性好,且耗费时 间 短,为 大 批 量 样 品 处 理 节 省 血清和组织器官中微量银元素的测定准确可靠。
了时间。 2.
2.3 方法的精密度试验
2 方法质量控制
2. 为了验证方法的精密度,将 同 一 样 品 平 均 分 为 6 份,进
2.
2.1 银元素相对原子质量数的选择及检出限 行重复实验,评估分析方 法 的 精 密 度。相 对 标 准 偏 差 (
RSD)
对于 ICP-MS 测定同位素相对 原 子 质 量 数 的 选 择,在 避 是 6 次测量结果的标准偏差与算术平均值的比 值,反 映 了 该
开同质异位素和氧化还原物等多原子离 子 干 扰 的 前 提 下 ,应 方法检测同一 样 品 的 重 现 性 [11]。本 方 法 检 测 银 元 素 的 RSD
尽 可能选择高丰度的同位素。目前研究发现,银共有 74 个同 介于 2. 3% 之间,方法精密度良好。
0%~4.
位素,已知的天然存在的稳定同位素只有两种,分 别 是107Ag
Tab
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被检 检出限 标准曲线 加标回收试验 精密度
元素 μg·kg )
/( -1 相关系数 加标前测定值/(
μg ·L )
-1 加标量/(
μg ·L )
-1
μg ·L ) 加标回收率/%
加标后测定值/( -1 试验/%
107
0.00 2.5 2.45 98 2.0
Ag 0.98 0.9999
1.31 10.0 11.97 107 4.3
2.
2.4 样品的稳定性试验 的质量浓度,μg·L-1 ;V :样品定容体积,mL;f:样品稀释
将 6 份经过测 定 之 后 的 样 品 消 解 溶 液 置 于 冰 箱 4 ℃ 保 倍数;m:样品取样量,g 。
存,分别在其后 1,4,7 天 采 用 相 同 方 法 进 行 检 测 并 对 结 果 通过 ICP-MS 测定各时间点样 品(n=5),发 现 植 入 β-磷
统计分析,考察样品溶液的稳定性 [12]。结果显示第 1,4 和 7 酸三钙的空白对照组体内均未检出银离 子,可 能 与 实 验 动 物
天的测定值与首次测定值相 一 致,差 异 无 统 计 学 意 义,表 明 日常饮食未摄入银或 者 体 内 银 含 量 太 低 达 不 到 检 出 限 有 关 。
银元素在一周内的稳定性良好。 植入载银 β-磷酸三钙的实验组在各个时期均能检测出银离子
3 样品测定结果
2. 含量,结果见表 7。检 测 结 果 表 明 配 制 标 准 曲 线 时 以 稀 硝 酸
根据标准曲线,获得如 下 公 式,根 据 仪 器 读 值 ρ 计 算 出 作为基体液,而非以空白对照 样 品 消 解 液 为 基 体 液,是 可 行
样品中银的含量 的,简便易行。检测结 果 显 示 银 在 体 内 分 布 以 肝 脏 最 多 ,其
×V ×f 次为脾脏,心脏内最少,本工作 结 果 可 为 今 后 研 究 银 系 抗 菌
Ag)= ρ
ω(
1000m 内植物方面提供重要参考,其组织器官产 生 毒 性 反 应 的 剂 量
式中:ω(
Ag):样品中银的含量,mg·kg-1 ;
ρ:测试溶液中银 将在另文讨论。
-1
Tab
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μg·kg )
时间/周 血清 心脏 肝脏 脾脏 肾脏 肌肉 骨髓 骨骼
4 3.09±0.04 1.65±0.02 2940.38±5.24 44.90±1.26 11.80±1.59 39.11±2.43 38.66±2.88 35.23±1.
78
8 4.06±0.05 1.83±0.01 2110.25±6.15 34.10±2.38 22.04±2.76 38.38±1.59 30.26±1.98 33.46±1.
23
12 2.99±0.03 1.21±0.01 2340.89±4.28 41.60±3.
42 16.85±2.44 37.09±2.34 37.51±2.42 33.85±2.09
解-ICP-MS 测定动物血清和组织器官中微量银元素的分析方
3 结 论 法,该 法 操 作 简 便 快 捷、结 果 准 确 可 靠、灵 敏 度 高、适 用 性
强,可满足不同类型医学生物 样 品 中 微 量 银 元 素 的 测 定 ,尤
在前 人 研 究 的 基 础 上 [
5,7]
建 立 了 HNO3 -H2O2 微 波 消 其适合大批量生物样本检测。机 体 摄 入 银 离 子 后,其 浓 度 在
2536 光谱学与光谱分析 第 34 卷
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第9期 光谱学与光谱分析 2537
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