I.

Mẫu thực hiện

Oral Leukoplakia (OLK): Đây là mẫu từ bệnh nhân có triệu chứng của bệnh
tiền ung thư miệng. Các mẫu này được thu thập từ người trưởng thành có khả
năng lâm sàng để tiến hành nghiên cứu.
Oral Squamous Cell Carcinoma (OSCC): Đây là mẫu từ bệnh nhân đã được
chẩn đoán với ung thư biểu mô biểu mô miệng và đã tiến hành phẫu thuật
loại bỏ ung thư. Mẫu này được sử dụng để so sánh với mẫu OLK và mô bình
thường.
Mô bình thường: Đây là mẫu từ bệnh nhân không có triệu chứng ung thư
miệng hoặc tiền ung thư miệng. Các mẫu này thường được thu thập từ bệnh
nhân có nhu cầu phẫu thuật như lấy răng hoặc có các bệnh lý không liên
quan đến biểu mô biểu mô.
II. Cách thực hiện

1. Lấy mẫu mô: Các mẫu mô đã được thu thập từ ba nhóm khác nhau, bao gồm
mô miệng bình thường, mô miệng bị biến đổi thành bệnh như bệnh đột biến
tuyến tiền ung thư miệng (OLK), và mẫu mô ung thư biểu đạt gen (OSCC).
2. Chuẩn bị mẫu: Các mẫu mô sau khi thu thập đã được đóng băng bằng nitơ
lỏng và lưu trữ ở nhiệt độ -80°C cho đến khi sử dụng sau này. Các mẫu bình
thường được lấy từ các bệnh nhân có trạng thái bình thường.
3. Xác định chất lượng mẫu: Mỗi mẫu mô đã được đánh giá tại mức tế bào và
dịch tễ học để đảm bảo tính chất lượng của chúng. Các mẫu không đáp ứng
các tiêu chuẩn này đã bị loại bỏ khỏi nghiên cứu.
4. Sử dụng genechip: Mẫu RNA đã được chuẩn bị từ các mẫu mô bằng cách sử
dụng Trizol và sau đó tinh chế để tạo ra RNA tốt chất lượng. Các gene được
nghiên cứu đã được phân tích bằng cách sử dụng Oligo GEArray Human
Cancer Microarray, chứa 440 hoặc 704 gen liên quan đến ung thư.
5. Chuẩn bị RNA và phân tích microarray: RNA từ mẫu mô đã được sử dụng để
tạo cRNA được gắn với Biotin-16-dUTP. Các gene đã được chuẩn bị này sau
đó được sử dụng để tiến hành phân tích microarray trên Oligo GEArray. Dữ
liệu từ microarray đã được xử lý và phân tích bằng cách sử dụng phần mềm
phân tích dữ liệu phù hợp.
6. Xác định gen thay đổi: Các gene được coi là thay đổi nếu chúng có giá trị P
<0,05 (sử dụng kiểm định Student t) và có tỷ lệ biểu đạt thay đổi ít nhất 2 lần
so với nhóm so sánh.
7. Xác nhận bằng RT-PCR: Một số gene đã được chọn để xác định thông qua
phân tích microarray đã được xác nhận bằng phản ứng PCR đảo ngược bán
lượng (RT-PCR).
 8. PCR thời gian thực (qPCR): Các biểu đạt gen đã được xác định thông qua
microarray và RT-PCR đã được xác minh và so sánh thông qua qPCR để đảm
bảo tính chính xác và đáng tin cậy.

III. Kết quả

Kết quả của việc thực hiện microarray và các phân tích liên quan như sau:

1. Microarray Gene Expression Profiling: Trong nghiên cứu này, đã sử dụng kỹ

thuật microarray (sử dụng Oligo GEArray OHS-802) để xác định biểu đồ biểu thức
của các gen trên ba loại mẫu mô miệng khác nhau, bao gồm ba mẫu mô miệng
bình thường, ba mẫu miệng có tình trạng viêm niêm mạc miệng (OLK), và ba
mẫu mô miệng có ung thư biểu mô biểu thức (OSCC).
2. So sánh Biểu đồ Biểu thức Gen: Sau khi tiêu chuẩn hóa kết quả ban đầu, đã tiến
hành so sánh biểu đồ biểu thức của các gen trên ba nhóm mẫu. Các gen được
xem xét là tích cực khi tỷ lệ mức xám (grayscale) giữa hai nhóm mẫu liên tiếp
tăng 2 lần hoặc hơn. Có 9 gen được xác định là gen chữ ký (signature genes) liên
quan đến quá trình biểu mô miệng biểu mô biểu thức (carcinogenesis).
3. Xác minh qua RT-PCR: Sau đó, đã sử dụng kỹ thuật RT-PCR (Reverse
Transcription Polymerase Chain Reaction) để xác minh các kết quả từ microarray.
Kết quả RT-PCR cho thấy mức độ biểu đồ biểu thức của các gen chữ ký và đã
được xác nhận bằng hệ thống phân tích ảnh Gel Kodak. So sánh giữa kết quả từ
microarray và RT-PCR cho thấy có sự tương thích.
4. Xác minh bổ sung bằng Real-time PCR: Cuối cùng, để đảm bảo tính chính xác
của các kết quả, đã sử dụng phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực (real-time
PCR) để xác minh các gen chữ ký chọn lọc. Kết quả real-time PCR cũng cho thấy
sự tương thích với kết quả từ microarray và RT-PCR.

Kết luận: Các kết quả từ microarray và các phân tích liên quan đã xác định được 9 gen
chữ ký liên quan đến quá trình biểu mô miệng biểu mô biểu thức (carcinogenesis). Các
phương pháp kiểm tra khác nhau, bao gồm RT-PCR và real-time PCR, đã xác nhận tính
chính xác của các kết quả này.