TẠO HaPyV-VP1 TÁI TỔ HỢP

Bắt đầu từ việc phải tạo ra được plasmid có khả năng mã hóa trình tự
HaPyV-VP1. Để biểu hiện ở Escherichia coli, trình tự mã hóa toàn bộ VP1 kéo
dài ở đầu amino (trong sớ 388 gốc amino axit) đã được tách dòng thành plasmid
pET15b theo quy trình chuẩn. Plasmid biểu hiện được gọi là pKP3. Trình tự kết
quả thu được bao gồm 1 taq hexahistidine và các vị trí giới hạn bổ sung 5' và 3'
đối với trình tự VP1-mã hóa.

H6: taq hexahistidine

MCS: các vị trí tạo dòng (multiple cloning sites)
VP1: protein cấu trúc chính trong protein vỏ capsid
Hình 1. Hình ảnh của HaPyV-VP1 tái tổ hợp. Toàn bộ trình tự mã hóa
VP1 của pFR36-VP1/2-9 được tách dòng thành plasmid pET15b tạo ra
prorein gồm 1 đầu H6 taq ở đầu amino.
Để bắt đầu quy trình tạo ra HaPyV-VP1, 1 lít môi trường LB bao gồm 50
μg/ml carbpenicillin đã được cấy với 10 ml môi trường nuôi cấy qua đêm của
chủng E.coli biến nạp Rosettagami DE3 (Merck KgaG-Novagen, Darmstadt,
Germany). Sau đó, môi trường nuôi cấy được ủ ở 37 và lắc ở tốc độ 150
vòng/phút cho đến khi OD600 vào khoảng 0.6. Quá trình tổng hợp HaPyV-VP1
được thực hiện bằng cách bổ sung IPTG (nồng độ đạt được cuối cùng là 1 mM).
Quá trình được tiếp tục trong 15h ở 18C và lắc ở tốc độ 100 vòng/phút. Cuối
cùng, các tế bào E.coli được thu hoạch bằng cách ly tâm ở tốc độ 13.000g trong
5 phút ở 4C, các tế bào được vo thành viên và bảo quản ở -20C cho đến khi
siêu âm.