Trends in Quorum Sensing and Quorum

Quenching-New Perspectives and

Applications 1st Edition V. Ravishankar
Rai (Editor)
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Trends in Quorum Sensing
and Quorum Quenching
Trends in Quorum Sensing
and Quorum Quenching
New Perspectives and Applications

Edited by
V. Ravishankar Rai
Jamuna A Bai
CRC Press
Taylor & Francis Group
52 Vanderbilt Avenue,
New York, NY 10017

© 2020 by Taylor & Francis Group, LLC

CRC Press is an imprint of Taylor & Francis Group, an Informa business

No claim to original U.S. Government works

Printed on acid-free paper

International Standard Book Number-13: 978-0-367-22428-8 (Hardback)

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intent to infringe.
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http://www.crcpress.com
Contents

Preface................................................................................................................................................................................................... vii
Editors......................................................................................................................................................................................................ix
Contributors.............................................................................................................................................................................................xi

1. Expanding Roles and Regulatory Networks of LadS/RetS in Pseudomonas aeruginosa........................................................1

Chuanmin Zhou, Maryam Dadashi, and Min Wu

2. Autoinducer-1 Quorum Sensing Communication Mechanism in Gram-Negative Bacteria...................................................9

Maria Cristina Dantas Vanetti, Deisy Guimarães Carneiro, Felipe Alves de Almeida,
Erika Lorena Giraldo Vargas, Emília Maria França Lima, and Uelinton Manoel Pinto

3. Toward a Systematic Genomic Survey of Bacterial Quorum Sensing Genes: Cross Cutting Regulatory
and Genomic Concepts................................................................................................................................................................. 31
Juhász János, Sándor Pongor, and Balázs Ligeti

4. Old Acquaintances in a New Role: Regulation of Bacterial Communication Systems by Fatty Acids................................47
Humberto Cortes-López, Martha Juárez-Rodríguez, Rodolfo García-Contreras, Marcos Soto-Hernández,
and Israel Castillo-Juárez

5. Analysis of Quorum Sensing by Surface-Enhanced Raman Scattering Spectroscopy..........................................................59

Gustavo Bodelón, Sarah De Marchi-Lourenco, Jorge Pérez-Juste, Isabel Pastoriza-Santos, and Luis M. Liz-Marzán

6. Quorum Sensing in Pseudomonas aeruginosa: From Gene and Metabolic Networks to Bacterial Pathogenesis..............79
Stephen K. Dolan, Cauã Antunes Westmann, Greicy Kelly Bonifacio Pereira, Stephen Trigg,
Rafael Silva-Rocha, and Martin Welch

7. Quorum Sensing in Vibrios..........................................................................................................................................................89

H.A.D. Ruwandeepika, G.C.P. Fernando, J.L.P.C. Randika, and T.S.P. Jayaweera

8. Quorum Sensing in Lactic Acid Bacteria................................................................................................................................. 111

Xiaoyang Pang, Jiaping Lv, Shuwen Zhang, Jing Lu, Obaroakpo Joy Ujiroghene, and Lan Yang

9. Role of N-acyl-homoserine Lactone QS Signals in Bacteria-Plant Interactions................................................................... 119

Anton Hartmann and Michael Rothballer

10. Quorum Sensing and the Environment: Open Questions in Plant-Associated Bacteria..................................................... 131
Ana Carolina del V. Leguina, Elisa V. Bertini, Mariano J. Lacosegliaz, Lucía I. Castellanos de Figueroa,
and Carlos G. Nieto-Peñalver

11. In Silico Mining of Quorum Sensing Genes in Genomes and Metagenomes for Ecological
and Evolutionary Studies........................................................................................................................................................... 149
Iñigo de la Fuente and Jorge Barriuso

12. Bacterial Quorum Sensing in Multispecies Communities: The Presence, Functions and Applications............................ 157
Chuan Hao Tan, Sujatha Subramoni, and Hyun-Suk Oh

13. Breaking Bad: Understanding How Bacterial Communication Regulates Biofilm-Related Oral Diseases...................... 175
Andrea Muras and Ana Otero

14. Quorum Sensing in Autotrophic Nitrogen Removal Systems for Wastewater Treatment.................................................. 187
Guangxue Wu, Zhaolu Feng, Yuepeng Sun, and Tianle Li

v
vi Contents

15. Mechanism and Types of Quorum Sensing Inhibitors............................................................................................................199

Christiane Chbib

16. Role of Small Volatile Signaling Molecules in the Regulation of Bacterial Antibiotic Resistance
and Quorum Sensing Systems.................................................................................................................................................... 215
José E. Belizário, Marcos Sulca-Lopez, Marcelo Sircili, and Joel Faintuch

17. Recent Advances in Science of Quorum Sensing: An Overview of Natural Product Inhibitors........................................225
Ana Ćirić, Petrović Jovana, Ivanov Marija, Kostić Marina, and Soković Marina

18. Nanomaterials as Quorum Sensing Inhibitors.........................................................................................................................243

Jamuna A Bai and V. Ravishankar Rai

19. Phytochemical Compounds Targeting the Quorum Sensing System as a Tool to Reduce
the Virulence Factors of Food Pathogenic Bacteria.................................................................................................................257
Jesus M. Luna-Solorza, Francisco J. Vazquez-Armenta, A. Thalia Bernal-Mercado, M. Melissa Gutierrez-Pacheco,
Filomena Nazzaro, and J. Fernando Ayala-Zavala

20. Targeting Bacterial Communication to Improve Bacterial Infections Therapy:

Implications for Phage-Based Treatments—A Mathematical Perspective...........................................................................277
Adrián Cazares, Rodolfo García-Contreras, Christina Kuttler, and Judith Pérez-Velázquez

21. Quorum Quenching Monoclonal Antibodies for the Detection and Treatment of Gram-Negative
Bacterial Infections.....................................................................................................................................................................285
Soumya Palliyil

22. Novel Intervention Techniques in the Food Industry.............................................................................................................. 291

Carolina Ripolles-Avila and José Juan Rodríguez-Jerez

23. Quorum Sensing and Quorum Quenching in Food-Related Bacteria...................................................................................307

Barbara Tomadoni and Alejandra Ponce

24. Quorum Quenching as an Anti-biofouling Strategy for Wastewater Reuse and Biofouling Affected Industries............ 321
Ioannis D. Kampouris, Dimitra C. Banti, and Petros Samaras

25. Application of Quorum Sensing Inhibitors in Anti-biofouling Membranes......................................................................... 335

Sunny C. Jiang and Leda K. Tse

26. Quorum Sensing and Quorum Quenching Based Antifouling Mechanism: A Paradigm Shift for Biofouling
Mitigation in a Membrane Bioreactor (MBR).........................................................................................................................343
Shabila Parveen, Sher Jamal Khan, and Imran Hashmi

27. Application of Quorum Quenching in the Control of Animal Bacterial Pathogens............................................................363

Tsegay Teame, Rui Xia, Yalin Yang, Chenchen Gao, Fengli Zhang, Chao Ran, Zhen Zhang, Hongling Zhang,
and Zhigang Zhou

Index.....................................................................................................................................................................................................387
Preface
Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching: New
Perspectives and Applications focuses on the evolution and our
current understanding of quorum sensing mechanisms in bac-
teria and the potential application of quorum sensing inhibitors
in clinical and industrial settings. Discovered in the 1960s and
1970s, quorum sensing has garnered an increasing interest in the
research community. Elucidating the quorum sensing mecha-
nism in bacteria has revealed previously unknown coordinated
group behavior in bacteria. Studies on cell-cell signaling or
intercellular communication started with the understanding of
bioluminescence in marine vibrios, fruiting body development
in myxobacteria, and competence in pneumococci. Research on
quorum sensing further advanced when it was realized that it
had a central and crucial role in regulation of bacterial pathoge-
nicity. The discovery of quorum sensing inhibitory compound
furanones from red seaweed Delisea pulchra and the character-
ization of quorum quenching enzyme, the AiiA lactonase from
Bacillus, indicated the novel strategy that could be used to com-
bat and control bacterial infections.
This book has two major sections with key topics. Section one
deals with advances and perspectives on molecular mechanism
of QS in bacteria. The topics covered include influence of quo-
rum sensing on bacterial central metabolism; novel quorum
sensing signaling molecules and detection techniques; molecular
insights in the role of QS in clinical pathogens, foodborne bac-
teria, agriculturally important bacteria, industrial relevant bac-
teria and its application in metabolic engineering; the evolution
and role of QS in biofilm formation and development; and QS
in regulating morphology and metabolic pathways in eukaryotic
microbes (fungi).
The second section focuses on trends in the development and
application of quorum sensing inhibitors. The emphasis is on
the mechanism and types of QS inhibitors; evolution of quorum
quenching in bacteria; application of metagenomics tools for the
identification of novel quorum quenching genes and enzymes;
bioprospecting of bacteria, fungi, actinomycetes and endo-
phytes from rhizospheres and marine ecosystems for novel QS
inhibitors; design of QS inhibitors based on nanotechnology; etc.
The potential application of QS inhibitors as—anti-infectives
and therapeutics (quorum quenching monoclonal antibodies and
AHL acylase nanoparticles), novel intervention techniques in the
food industry (sanitizers for food contact surfaces and as preser-
vatives), anti-biofouling agents with commercial and industrial
applications, infection control strategies in aquaculture, and as
biocontrol agents for plant pathogens is discussed.
The book is comprehensive and detailed in nature, covering
all the important aspects and highly relevant topics in quorum
sensing and quorum quenching in bacteria. Special focus is given
on exploring quorum sensing inhibitors from microbes and flora
inhabiting biodiversity rich regions including tropical rain forests,
various tropical soils, and oceans. Graduate students, research-
ers and academicians from the field of Medical Microbiology,
Pharmaceutical Biology, Genetics and Food Biotechnology will
find the book an invaluable tool.
vii
Editors
Prof. V. Ravishankar Rai received his MSc (1980) and PhD
(1989) from the University of Mysore, India. Currently, he
is working at the Department of Studies in Microbiology,
University of Mysore, Mysore. His current research and publica-
tions in food microbiology, microbial quorum sensing, micro-
bial influenced corrosion, and nanotechnology has been well
received by the international scientific committee. His series
of edited books with reputed publishers such as CRC Press and
Wiley Publications—Biotechnology: Concepts and Applications
(2009), Microbial Food Safety and Preservation Techniques
(2014), Beneficial Microbes in Fermented and Functional Foods
(2014), Advances in Food Biotechnology (2015), Food Safety
and Protection (2016), and Nanotechnology Applications in the
Food Industry (2018)—are comprehensive in nature and have
contributions from international experts in the field. Prof. Rai has
received awards from UNESCO Biotechnology Action Council
Programme (Visiting Fellow, 1996), UGC Indo-Israel Culture
Exchange Programme (1998), DBT Overseas Fellowship (2008),
Indo-Hungarian Educational Exchange Programme fellowship
(2011), INSA—bilateral exchange fellowship (2015), Incoming
Fellowship (2017) from Cardiff University, UK, and an invitation
from Mauritius Research Council, Mauritius (2018) to conduct
collaborative research with renowned scientists from interna-
tional universities. He has been awarded the Bilateral Exchange
Fellowship by the Indian National Academy of Sciences to
visit Germany (2020) and Cambridge-Hamied Visiting Lecture
Scheme (2020) to visit University of Cambridge, UK.
Dr. Jamuna A Bai has completed her MSc and PhD in Micro­
biology from the University of Mysore, India. She is working
as an Assistant Professor in JSS Academy of Higher Education
and Research, Mysore. She has previously worked as a
Researcher in UGC sponsored University with the Potential
Excellence Project, University of Mysore, India and as ICMR
Senior Research Fellow. She has carried research work on
food safety, role of quorum sensing, and biofilms in food-
related bacteria and developing quorum-sensing inhibitors.
Her research interests also include antimicrobial application of
functionalized nanomaterials and peptides against pathogenic
bacteria.
ix
Contributors

J. Fernando Ayala-Zavala Deisy Guimarães Carneiro

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. Department of Microbiology
(CIAD, AC) Universidade Federal de Viçosa (UFV)
Carretera Gustavo Enrique Astiazarán Viçosa, Brazil
Hermosillo, Mexico
Lucía I. Castellanos de Figueroa
Jamuna A Bai Department of Microbiology
Department of Studies in Microbiology Faculty of Biochemistry, Chemistry and Pharmacy
University of Mysore National University of Tucumán
Mysore, India Tucumán, Argentina

Dimitra C. Banti Israel Castillo-Juárez

Department of Food Technology Department of Botany
Alexander Technological Educational Institute of Postgraduate College
Thessaloni Texcoco, Mexico
Thessaloníki, Greece
Adrián Cazares
Jorge Barriuso Institute of Infection and Global Health
Centro de Investigaciones Biológicas University of Liverpool
Consejo Superior de Investigaciones Científicas Liverpool, UK
Madrid, Spain
Christiane Chbib
José E. Belizário Department of Pharmaceutical Sciences
Department of Pharmacology College of Pharmacy
Institute of Biomedical Sciences of University of São Larkin University
Paulo Miami, Florida
São Paulo, Brazil
Ana Ćirić
A. Thalia Bernal-Mercado Institute for Biological Research “Siniša Stanković”- National
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. Institute of Republic of Serbia
(CIAD, AC) University of Belgrade
Carretera Gustavo Enrique Astiazarán Belgrade, Serbia
Hermosillo, Mexico
Humberto Cortes-López
Elisa V. Bertini Department of Botany
Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos Postgraduate College
Tucumán, Argentina Texcoco, Mexico

Gustavo Bodelón Maryam Dadashi

Department of Physical Chemistry and Biomedical Research Department of Oral Biology
Centre (CINBIO) Rady Faculty of Health Sciences
Universidade de Vigo University of Manitoba
Vigo, Spain Winnipeg, Manitoba, Canada

Greicy Kelly Bonifacio Pereira Felipe Alves de Almeida

Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto Department of Nutrition
Universidade de São Paulo Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
São Paulo, Brazil Governador Valadares, Brazil

xi
xii Contributors

Iñigo de la Fuente Imran Hashmi

Centro de Investigaciones Biológicas Institute of Environmental Sciences and Engineering (IESE)
Consejo Superior de Investigaciones Científicas School of Civil and Environmental Engineering (SCEE)
Madrid, Spain National University of Sciences and Technology (NUST)
Islamabad, Pakistan
Sarah De Marchi-Lourenco
Departament of Physical Chemistry and Juhász János
Biomedical Research Centre (CINBIO) Faculty of Information Technology and Bionics
Universidade de Vigo Pázmány Péter Catholic University
Vigo, Spain Budapest, Hungary

Stephen K. Dolan T.S.P. Jayaweera

Department of Biochemistry Faculty of Agricultural Sciences
University of Cambridge Deparment of Livestock Production
Cambridge, United Kingdom Sabaragamuwa University of Sri Lanka
Belihuloya, Sri Lanka
Joel Faintuch
Laboratory of Genetics Sunny C. Jiang
Butantan Institute Civil and Environmental Engineering
São Paulo, Brazil University of California Irvine
Irvine, California
Zhaolu Feng
Graduate School at Shenzhen Petrović Jovana
Tsinghua University Institute for Biological Research “Siniša Stanković”- National
Shenzhen, China Institute of Republic of Serbia
University of Belgrade
G.C.P. Fernando Belgrade, Serbia
Faculty of Agricultural Sciences
Deparment of Livestock Production Obaroakpo Joy Ujiroghene
Sabaragamuwa University of Sri Lanka Department of Food Science and Technology
Belihuloya, Sri Lanka Auchi Polytechnic
Auchi, Nigeria
Rodolfo García-Contreras
Faculty of Medicine Martha Juárez-Rodríguez
Department of Microbiology and Parasitology Department of Botany
Universidad Nacional Autónoma de México Postgraduate College
Mexico City, Mexico Texcoco, Mexico

Chenchen Gao Ioannis D. Kampouris

China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota Alexander Technological Educational Institute of Thessaloni
Feed Research Institute Department of Food Technology
Chinese Academy of Agricultural Sciences Thessaloníki, Greece
Beijing, China
Sher Jamal Khan
M. Melissa Gutierrez-Pacheco Institute of Environmental Sciences and Engineering
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. (IESE)
(CIAD, AC) School of Civil and Environmental Engineering (SCEE)
Carretera Gustavo Enrique Astiazarán National University of Sciences and Technology (NUST)
Hermosillo, Mexico Islamabad, Pakistan

Anton Hartmann Christina Kuttler

Faculty of Biology, Host-Microbe Interactions Zentrum Mathematik
Ludwig-Maximilians-Universität München Technical University of Munich
Munich, Germany Garching, Germany
Contributors xiii

Mariano J. Lacosegliaz Soković Marina

Pilot Plant for Microbiological Industrial Processes Institute for Biological Research “Siniša Stanković”- National
(PROIMI-CONICET) Institute of Republic of Serbia
Tucumán, Argentina University of Belgrade
Belgrade, Serbia
Ana Carolina del V. Leguina
Pilot Plant for Microbiological Industrial Processes Andrea Muras
(PROIMI-CONICET) Facultade de Bioloxía – CIBUS
Tucumán, Argentina Grupo de Acuicultura e Biotecnoloxía
Dpt. Microbioloxía e Parasitoloxía
Tianle Li Universidade de Santiago de Compostela
Graduate School at Shenzhen Santiago, Spain
Tsinghua University
Shenzhen, China Filomena Nazzaro
ISA CNR, Institute of Food Science
Balázs Ligeti Avellino, Italy
Institute of Medical Microbiology
Semmelweis University Carlos G. Nieto-Peñalver
Budapest, Hungary Faculty of Biochemistry, Chemistry and Pharmacy
Microbiology Department
Emília Maria França Lima National University of Tucumán
Food Research Center Tucumán, Argentina
Department of Food and Experimental Nutrition
Universidade de São Paulo (USP) Hyun-Suk Oh
São Paulo, Brazil Department of Environmental Engineering
Seoul National University of Science and Technology
Luis M. Liz-Marzán Seoul, South Korea
CIC biomaGUNE and CIBER-BBN
Donostia-San Sebastián, Spain Ana Otero
Facultade de Bioloxía – CIBUS
Jing Lu Grupo de Acuicultura e Biotecnoloxía
Institute of Food Science and Technology Dpt. Microbioloxía e Parasitoloxía
Chinese Academy of Agricultural Science Universidade de Santiago de Compostela
Beijing, China Santiago, Spain

Jesus M. Luna-Solorza Soumya Palliyil

Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. Scottish Biologics Facility
(CIAD, AC) University of Aberdeen
Carretera Gustavo Enrique Astiazarán Aberdeen, United Kingdom
Hermosillo, Mexico
Xiaoyang Pang
Jiaping Lv Institute of Food Science and Technology
Institute of Food Science and Technology Chinese Academy of Agricultural Science
Chinese Academy of Agricultural Science Beijing, China
Beijing, China
Shabila Parveen
Ivanov Marija Institute of Environmental Sciences and Engineering
Institute for Biological Research “Siniša Stanković”- National (IESE)
Institute of Republic of Serbia School of Civil and Environmental Engineering (SCEE)
University of Belgrade National University of Sciences and Technology (NUST)
Belgrade, Serbia Islamabad, Pakistan

Kostić Marina Isabel Pastoriza-Santos

Institute for Biological Research “Siniša Stanković”- National Departament of Physical Chemistry
Institute of Republic of Serbia Biomedical Research Centre (CINBIO)
University of Belgrade” Universidade de Vigo
Belgrade, Serbia Vigo, Spain
xiv Contributors

Jorge Pérez-Juste José Juan Rodríguez-Jerez

Departament of Physical Chemistry Veterinary Faculty
Biomedical Research Centre (CINBIO) Human Nutrition and Food Science
Universidade de Vigo Universitat Autònoma de Barcelona
Vigo, Spain Cerdanyola del Vallès, Spain

Judith Pérez-Velázquez Michael Rothballer

Departamento de Matemáticas y Mecánica Helmholtz Zentrum München
Instituto de Matemáticas Aplicadas y Sistemas German Research Center for Environmental Health
Universidad Nacional Autónoma de México Department of Environmental Sciences
México City, México Institute of Network Biology
Neuherberg, Germany
Uelinton Manoel Pinto
Food Research Center H.A.D. Ruwandeepika
Department of Food and Experimental Nutrition Faculty of Agricultural Sciences
Universidade de São Paulo (USP) Deparment of Livestock Production
São Paulo, Brazil Sabaragamuwa University of Sri Lanka
Belihuloya, Sri Lanka
Alejandra Ponce
Facultad de Ingeniería Petros Samaras
Grupo de Investigación en Ingeniería en Alimentos Department of Food Technology
Universidad Nacional de Mar del Plata y Consejo Alexander Technological Educational Institute of Thessaloni
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas Thessaloníki, Greece
(CONICET)
Mar del Plata, Argentina Rafael Silva-Rocha
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto
Sándor Pongor Universidade de São Paulo
Faculty of Information Technology and Bionics São Paulo, Brazil
Pázmány Péter Catholic University
Budapest, Hungary Marcelo Sircili
Department of Gastroenterology
Chao Ran University of São Paulo School of Medical
Key Laboratory for Feed Biotechnology of the Ministry São Paulo, Brazil
of Agriculture
Feed Research Institute Marcos Soto-Hernández
Chinese Academy of Agricultural Sciences Department of Botany
Beijing, China Postgraduate College
Texcoco, Mexico
J.L.P.C. Randika
Faculty of Agricultural Sciences Sujatha Subramoni
Deparment of Livestock Production Singapore Centre for Environmental Life Sciences
Sabaragamuwa University of Sri Lanka Engineering
Belihuloya, Sri Lanka Nanyang Technological University
Singapore
V. Ravishankar Rai
Department of Studies in Microbiology Marcos Sulca-Lopez
University of Mysore Department of Pharmacology
Mysore, India Institute of Biomedical Sciences of University of São Paulo
São Paulo, Brazil
Carolina Ripolles-Avila
Veterinary Faculty Yuepeng Sun
Human Nutrition and Food Science Graduate School at Shenzhen
Universitat Autònoma de Barcelona Tsinghua University
Cerdanyola del Vallès, Spain Shenzhen, China
Contributors xv

Chuan Hao Tan Min Wu

The School of Materials Science and Engineering Department of Biomedical Sciences
Nanyang Technological University University of North Dakota
Singapore Grand Forks, North Dakota

Tsegay Teame Rui Xia

China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota
Feed Research Institute Feed Research Institute
Chinese Academy of Agricultural Sciences Chinese Academy of Agricultural Sciences
Beijing, China Beijing, China

Stephen Trigg Lan Yang

Department of Biochemistry Institute of Food Science and Technology
University of Cambridge Chinese Academy of Agricultural Science
Cambridge, United Kingdom Beijing, China

Leda K. Tse Yalin Yang

Civil & Environmental Engineering Key Laboratory for Feed Biotechnology of the Ministry
University of California Irvine of Agriculture
Irvine, California Feed Research Institute
Chinese Academy of Agricultural Sciences
Barbara Tomadoni Beijing, China
Grupo de Materiales Compuestos Termoplásticos (CoMP)
Instituto de Ciencia y Tecnología de Materiales (INTEMA) Fengli Zhang
Universidad Nacional de Mar del Plata y Consejo Nacional de Key Laboratory for Feed Biotechnology of the Ministry
Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET) of Agriculture
Buenos Aires, Argentina Feed Research Institute
Chinese Academy of Agricultural Sciences
Maria Cristina Dantas Vanetti Beijing, China
Department of Microbiology
Universidade Federal de Viçosa (UFV) Hongling Zhang
Viçosa, Brazil China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota
Feed Research Institute
Erika Lorena Giraldo Vargas Chinese Academy of Agricultural Sciences
Department of Microbiology Beijing, China
Universidade Federal de Viçosa (UFV)
Viçosa, Brazil Shuwen Zhang
Institute of Food Science and Technology
Francisco J. Vazquez-Armenta Chinese Academy of Agricultural Science
Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. Beijing, China
(CIAD, AC)
Carretera Gustavo Enrique Astiazarán Zhen Zhang
Hermosillo, Mexico China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota
Feed Research Institute
Martin Welch Chinese Academy of Agricultural Sciences
Department of Biochemistry Beijing, China
University of Cambridge
Cambridge, United Kingdom Chuanmin Zhou
Department of Biomedical Sciences
Cauã Antunes Westmann University of North Dakota
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto Grand Forks, North Dakota
Universidade de São Paulo
São Paulo, Brazil Zhigang Zhou
China-Norway Joint Lab on Fish Gut Microbiota
Guangxue Wu Feed Research Institute
Graduate School at Shenzhen Chinese Academy of Agricultural Sciences
Tsinghua University Beijing, China
Shenzhen, China
1
Expanding Roles and Regulatory Networks
of LadS/RetS in Pseudomonas aeruginosa

Chuanmin Zhou, Maryam Dadashi, and Min Wu

CONTENTS
1.1 The Two-Component Systems........................................................................................................................................................1
1.2 Discovery of RetS and LadS...........................................................................................................................................................1
1.3 Opposing Roles of RetS and LadS..................................................................................................................................................2
1.4 Function of LadS/RetS Is Dependent on Small RNAs...................................................................................................................3
1.5 Other Hybrid Sensor Kinases in Gac/Rsm Pathway.......................................................................................................................3
1.6 Other sRNAs as Regulators............................................................................................................................................................4
1.6.1 P27 sRNA...........................................................................................................................................................................4
1.6.2 PhrS sRNA.........................................................................................................................................................................4
1.6.3 RsmV and RsmW sRNAs...................................................................................................................................................4
1.7 Is RetS a Calcium Sensitive Histidine Kinase?..............................................................................................................................4
1.8 Can RetS and LadS Interact with CRISPR-Cas Systems?.............................................................................................................4
1.9 Drug Targets....................................................................................................................................................................................5
1.10 Concluding Remarks.......................................................................................................................................................................5
References.................................................................................................................................................................................................6

exist (Laskowski, Osborn, and Kazmierczak 2004, Goodman

1.1 The Two-Component Systems
Gram-negative opportunistic pathogen Pseudomonas aeruginosa
is a severe host pathogen, found widely in nature, exposing in
dynamic environmental conditions. Of note, the two-component
system (TCS) is important for sensing those environmental
­challenges which in turn modulate a number of gene e­ xpressions
(Stock, Robinson, and Goudreau 2000). Typically, TCS is cou-
pled with a sensor histidine protein kinase and a response regula-
tor protein. Histidine protein kinase is responsible for detecting
extracellular signals, regulating the downstream effectors in
response to the stimuli through phosphorylated response regula-
tor protein (Stock, Robinson, and Goudreau 2000). To date, over
100 TCS genes have been found in P. aeruginosa (Rodrigue et al.
2000, Stover et al. 2000).
1.2 Discovery of RetS and LadS
Hybrid sensor kinase RetS (regulator of exopolysaccha-
ride and Type III secretion) was first described in P. aerugi-
nosa in 2004, which encoded 942 amino acids. This protein
not only contains N-terminal cleaved signal sequences, a
large periplasmic domain, and seven transmembrane domains
(associated with environmental signal transduction), but also
possesses TCS-like histidine kinase and response regulator
domains in tandem, revealing that other TCS regulators may
et al. 2004). RetS orthologs were also found in Pseudomonas
putida, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas syringae, and
Azotobacter vinelandii (Goodman et al. 2004). In 2005, another
hybrid sensor kinase named LadS (lost adherence sensor) was
noticed in P. aeruginosa PAO1 genome, which showed an oppo-
site role of RetS, promoting biofilm formation and inhibiting
T3SS activation (Ventre et al. 2006).
Domain analysis of LadS amino acids showed that LadS
contained 795 amino acids with similar domains seen in RetS,
including N-terminal cleaved signal sequences, a large peri-
plasmic domain, seven transmembrane domains, as well as a
histidine kinase and a response regulator domain (Ventre et al.
2006). These transmembrane domains in LadS and RetS were
also observed in a number of other carbohydrate binding proteins
(Ventre et al. 2006, Anantharaman and Aravind 2003). In particu-
lar, these domains exhibited 35% sequence identity, suggesting
that this periplasmic sensor may respond to similar but not 100%
identical environmental signals through its unique transmem-
brane domains (Ventre et al. 2006) (Figures 1.1 and 1.2).
FIGURE 1.1 Domain organization of LadS and RetS hybrid sensors.

1
2 Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching
FIGURE 1.2 Pel and TTSS expression levels in ▵ladS and ▵retS and WT P. aeruginosa. (From Goodman, A. L. et al., Dev. Cell., 7, 745–754, 2004; Ventre,
I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 171–176, 2006.)
1.3 Opposing Roles of RetS and LadS
RetS was characterized as a global pleiotropic regulatory protein,
and the expression levels of almost 400 genes were significantly
altered in a retS mutant strain (Goodman et al. 2004). RetS was
necessary for the transcription of the T3SS operons under low
calcium and host cell contact conditions. Deletion of retS signifi-
cantly prohibited the activation of T3SS (Laskowski, Osborn, and
Kazmierczak 2004). However, no DNA binding motifs were iden-
tified in RetS protein domains, indicating that it might modulate
T3SS function indirectly (Laskowski, Osborn, and Kazmierczak
2004). The retS deletion strain exhibited robust biofilm formation
by promoting the expression of biofilm related genes pel and psl
(Goodman et al. 2004). A mutant with a deletion of ladS behaved
in an opposite manner (Ventre et al. 2006). Transcriptome anal-
ysis of ladS mutant strain compared to WT strain showed that
79 genes were significantly affected, including that pel and psl
gene expression were repressed and T3SS were activated in ladS
mutant strain (Ventre et al. 2006). Compared to transcriptome
analysis in retS mutant strain, 49% were oppositely regulated in
ladS mutant strain, indicating that LadS and RetS signaling trans-
duction pathways are antagonistic (Ventre et al. 2006).
RetS promotes the formation of heterodimers with GacS,
reducing the GacS autophosphorylation. Gene screening of
transposon insertions showed that RetS may modulate GacS/
GacA (Goodman et al. 2004), whereas LadS showed an oppo-
site activity by promoting the activation of GacS/GacA pathway
(Ventre et al. 2006). Interestingly, LadS did not interact with
GacS and hence may upregulate the GacS/GacA pathway through
a phosphor-relay mechanism, resulting in phosphotransfer to the
HPT domain of GacS, which in turn promoted chronic infec-
tion (Chambonnier et al. 2016). Furthermore, another histidine
kinase PA1611 showed a similar role of GacS by interacting with
RetS to modulate the GacS/GacA pathway (Kong et al. 2013).
The phenotype of retS mutant strain was completely blocked
in gacS mutant strain, indicating that RetS works through the
GacS/GacA pathway (Ventre et al. 2006). Phosphorylated
GacA in turn directly modulated the expression of small non-
coding regulatory RNA (sRNA) rsmY/rsmZ. RsmA was a global
post-transcriptional regulator, influencing expression of over
500 genes by binding to targeted mRNAs, which was inhibited
by sRNA rsmY/rsmZ. Different pathogens including P. aeru-
ginosa, Escherichia coli, Legionella pneumophila, Vibrio
cholera, and Salmonella typhimurium, are found expressing
rsmA. Finally, deletion of rsmA also showed similar phenotypes
to retS deletion mutant strain, exhibiting activation of biofilm
and T3SS, which in turn contributes to acute infection (Coggan
and Wolfgang 2012).
Although the retS deletion mutant exhibited increased
attachment to host cells, it showed less cytotoxicity in eukary-
otes and less virulence in a pneumonia mouse model, indi-
cating that the retS mutant strain was unable to respond to
environmental signals (Laskowski, Osborn, and Kazmierczak
2004, Goodman et al. 2004). Deletion of ladS showed hyper
cytotoxicity compared to the WT strain, and the phenotype
of ladS/retS double mutant strain was similar to retS mutant,
showing no cytotoxicity, indicating that LadS may function at
the upstream of RetS in response to input signals (Ventre et al.
2006) (Figure 1.3).
The stimuli triggering RetS and LadS activity remain largely
uncharacterized. Recent research revealed that deletion of
ladS causes P. aeruginosa calcium-blind through genetic,
biochemical, and proteomic study (Broder, Jaeger, and Jenal
2016). LadS detected calcium, while did not respond to other
divalent cations (Mg2+, Fe2+, Zn2+, Mn2+ or Cu2+), through its
DISMED2 domain, promoting chronic infection. The presence
of an additional helix inhibited the binding of carbohydrate,
which in turn promoted the binding of calcium. In addition, dele-
tion of gacA, gacS, and rsmA also showed calcium unrespon-
sive, whereas rsmY or rsmZ single deletion remained calcium
sensitive. These studies suggest that calcium signaling plays a
key role in host-P. aeruginosa interaction by facilitating acute-
to-chronic infection transformation.
Expanding Roles and Regulatory Networks of LadS/RetS in Pseudomonas aeruginosa
FIGURE 1.3 Schematic representation of RsmA signaling in P. aeruginosa.
1.4 Function of LadS/RetS Is
Dependent on Small RNAs
Researchers have studied the mechanism of QS systems for
decades. To date, LasI/LasR, RhlI/RhlR QS systems are
found important for encoding AHLs, and more than 10% of
P. aeruginosa genes are affected by AHLs. It is noticed that
production of las and rhl dependent AHLs are positively modu-
lated by two sRNAs, rsmY and rsmZ, and negatively by RsmA.
Most QS-dependent genes are repressed by post-transcriptional
RsmA effector by bind to its mRNA motif. Considering that
LadS/RetS are in the upstream of RsmA, LadS and RetS also
showed important roles in influencing QS. Importantly, QS
showed important roles associated with acute and chronic infec-
tions, indicating that QS is also necessary for acute-to-chronic
infection transformation. In addition, RetS contributes in tran-
scriptional repression of sigma factor RpoS, Pel, Psl, and FleQ.
FleQ is a repressor of Pel in the absence of c-di-GMP. When
c-di-GMP is available, FleQ activates the Pel operon. It was
shown that the two-component system PhoQ/B directly interact
with RetS. TCS PhoQ/B is a Mg2+ sensing system. When exog-
enous Mg2+ content is low, the PhoQ/B represses RetS and pro-
motes biofilm formation.
3
1.5 Other Hybrid Sensor Kinases
in Gac/Rsm Pathway
When planktonic cells hit a proper surface, they form ­biofilms
stepwise. Several factors participate in establishment of
Pseudomonas biofilms. Below we looked into some role ­players
of biofilm formation. c-di-GMP is a secondary messenger, and
its abundance in the cell decides the transition between motility
and sessility of the bacterial cells. Biofilms of P. aeru­ginosa
have 75–110 pmol mg−1 c-di-GMP in total cell extracts com-
pared to planktonic cells, which bear merely 30 pmol mg−1
(Basu Roy and Sauer 2014). High levels of c-di-GMP are the
hallmark of a biofilm forming lifestyle, which is modulated
by diguanylate cyclases like SadC and phosphodiesterases
(Merritt et al. 2007).
Recent study indicated that another hybrid sensor kinase,
PA1611, modulated genes of acute and chronic infection,
which played an important role in downregulation of T3SS and
­upregulation of ­biofilm formation (Kong et al. 2013). PA1611
showed similar function to LadS. However, PA1611 did not show
a Lads dependent manner. In addition, PA1611 associated with
RetS which was similar to GacS showing phosphorelay indepen-
dent, causing PA1611 shared similar protein domains with GacS
4 Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching

(Kong et al. 2013). PA1611 is capable of influencing the Gac/

Rsm pathway by promoting the phosphorylation of HptB (Kong
et al. 2013). Phosphorylated HptB phosphorylates HsbR, which
further phosphorylates HsbA. HsbA is an anti-anti-sigma factor.
HsbA indirectly and positively modulates the expression of RsmY
(Bordi et al. 2010), resulting in modulation of RsmA function.
Further, two other hybrid sensor kinases, PA1976 and PA2824,
are also involved in phosphorylating HptB like PA1611 (Lin et al.
2006, Hsu et al. 2008). Additional research showed that deletion of
hptB and retS led to similar phenotypes. However, HptB signaling
only controlled the expression of rsmY, which is dependent on the
σ28 dependent genes (Bordi et al. 2010).

1.6 Other sRNAs as Regulators

1.6.1 P27 sRNA
Polynucleotide phosphorylase (PNPase) is an RNA processing
enzyme. It modulates several virulence factors by destabilizing
RsmY and RsmZ (Chen et al. 2019). PNPase mutant cells have an
increased level of rsmY/Z (Chen et al. 2016). Also, rhamnolipid
production is defective in this mutant, leading to lower biofilm
formation. Rhamnolipids are regulated by RhlI-RhlR QS sys-
tem, and PNPase modulates the translation of RhlI by sRNA P27.
P27 sRNA directly binds to 5ʹ-untranslated region (UTR) of
RhlI mRNA by recruiting Hfq and represses RhlI translation.
Mutations in P27 or 5ʹUTR of RhlI result in unpairing of these
two RNAs and RhlI expression restoration (Chen et al. 2019).
These results indicate that P27 sRNA may play critical roles in
RhlI QS through Hfq-mediated signaling.
1.6.2 PhrS sRNA
In addition to Las and Rhl QS molecules, Pseudomonas qui-
nolone signal (PQS), a member of 4-hydroxy-2-alkylquinolines
compounds, links the Las and Rhl systems. PQS controls its
own expression by inducing pqsABCDE operon when it binds to
PqsR responsive regulator (Sonnleitner et al. 2011). pqsABCDE
encodes for intermediate molecules called HHQ, which converts
to PQS by LasR-dependent PqsH. PqsR also regulates PqsE
and aids RhlR to respond to (C4-HSL) molecules (Farrow et al.
2008).
ANR is an oxygen-responsive regulator. When the oxygen con-
tent of the cell is low, ANR induces oxygen limiting-dependent
sRNA PhrS. PhrS is shown to activate the PqsR and found to be
the first sRNA, linking the QS system with oxygen availability
(Sonnleitner et al. 2011).
1.6.3 RsmV and RsmW sRNAs
In Pseudomonas, sRNAs play a pivotal role in cellular response
to signal molecules (Jakobsen et al. 2017). When RsmY and
RsmZ are abundant in the cell, RsmA is sequestered and the pro-
duction of AHL-based molecules is increased. The sRNA RsmV,
which shares sequence similarity to RsmY and RsmZ, is capable
of sequestering RsmA and is under control of RhlR. A predi-
cated RhlR binding site is found upstream of RsmV (Janssen
et al. 2018).
FIGURE 1.4 Schematic representation of sRNA and QS axis.
RsmW indeed is an additional sRNA whose expression is
increased during stationary phase in minimal media resembling
a biofilm forming environment (Janssen et al. 2018). RsmW
sequesters RsmA in a lower efficacy than RsmY and RsmZ.
RsmV and RsmW are not under positive regulation of GacA/S
system. The transcription regulation of RsmV and RsmW has
remained to be elucidated (Janssen et al. 2018) (Figure 1.4).
1.7 Is RetS a Calcium Sensitive Histidine Kinase?
It should be mentioned that RetS also contains a DISMED2
domain, but the RetS input signals are still elusive except that
the activation signal was noticed in lyzed kin cells (LeRoux
et al. 2015). It remains elusive whether calcium binds to the
DISMED2 domain of RetS to activate its kinase activity. Although
transcription of retS was not modulated in response to calcium,
RetS might be activated under low calcium conditions (Laskowski,
Osborn, and Kazmierczak 2004). Broder et al., reported that
deletion of retS led to a calcium blind (Broder, Jaeger, and Jenal
2016). Also, P. aeruginosa challenged with lower to higher cal-
cium concentrations promoted the transformation of acute infec-
tion to chronic status, indicating that low calcium might activate
RetS dependent acute infection. Also, deletion of ladS showed
lower chronic infection levels compared to the WT counterpart in
response to calcium treatment. Hence, this raises the possibility
that RetS also acts as a calcium responsive kinase and interacts
with LadS. The histidine kinase RetS/LadS are responsible for
lower or higher calcium concentration stimulation. Nevertheless,
it is unknown whether LadS/RetS play a role in detecting other
unknown exogenous signals, which is worth further investigating.
1.8 Can RetS and LadS Interact with
CRISPR-Cas Systems?
Bacteria possess multiple defense systems against the invading
bacteriophages (Mohanraju et al. 2016, Koonin, Makarova, and
Wolf 2017, Forsberg and Malik 2018). Among these, clustered
Expanding Roles and Regulatory Networks of LadS/RetS in Pseudomonas aeruginosa 5

regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR), first

described in 1987 (Ishino et al. 1987), was found as a herita-
ble immunity system in 2007 (Barrangou et al. 2007). To date,
2 classes and 6 types CRISPR-CRISPR-associated (Cas) sys-
tems, based on the characteristic of Cas proteins, have been
identified in various bacteria and archaea (Makarova et al. 2015,
Koonin, Makarova, and Zhang 2017). Class 1 CRISPR-Cas sys-
tems rely on multiple CRISPR-Cas protein effector complexes,
while Class 2 CRISPR-Cas systems are dependent on a single
CRISPR-Cas effector protein. CRISPR and their Cas proteins
function as prokaryotic adaptive immunity by targeting acquired
mobile genetic elements (MGEs) against invasion of bacte-
riophages or plasmids (Marraffini 2015, Makarova et al. 2015,
Mohanraju et al. 2016). Approximately 45% bacteria and 84%
archaea were found containing CRISPR-Cas systems (Grissa,
Vergnaud, and Pourcel 2007). Generally, CRISPR-Cas adaptive
immunity processes function through three sequential phases.
FIGURE 1.5 Predicted RsmA binding sites using RNA fold for cas
First, acquiring short DNA sequences occurs in CRISPR arrays ­promoter. GGA motif; long box, start codon; short box, predicted RBS
upon the bacteriophage invasion (Levy et al. 2015, Yosef, Goren, (proteins primarily bind to the sequence motif A(N)GGA in single-stranded
and Qimron 2012, Makarova et al. 2015). Then, the integrated mRNA regions).
CRISPR arrays containing the recently acquired foreign genetic
substance are transcribed and processed into crRNAs (Deltcheva (Barrangou et al. 2007, Barrangou and Doudna 2016, Hsu, Lander,
et al. 2011, Haurwitz et al. 2010). Finally, Cas proteins and and Zhang 2014), limited research has discussed the regulation
crRNAs are assembled together to degrade the invading comple- of CRISPR-Cas systems in bacteria (Patterson, Yevstigneyeva,
mentary nucleic acids (Brouns et al. 2008). and Fineran 2017). It is still unknown whether RsmA takes part
Most CRISPR-Cas regulators were found to target cas promot- in endogenous regulation of CRISPR. Furthermore, it remains to
ers (Patterson, Yevstigneyeva, and Fineran 2017). Quorum sensing be discovered whether CRISPR function is influenced by envi-
(QS) was found to modulate different CRISPR-Cas systems (I-E, ronmental signals and calcium through a LadS/RetS/Gac/Rsm
I-F and III-A) in Serratia sp. ATCC39006 and P. aeruginosa by cascade. We speculate that the LadS/RetS/Gac/Rsm axis may
influencing the expression of cas promoters (Patterson et al. 2016, also interact with or regulate CRISPR-Cas immunity.
Hoyland-Kroghsbo et al. 2017). Additionally, cAMP receptor pro-
tein (CRP) and histone-like nucleoid structuring proteins (H-NS)
play pleiotropic roles in regulating CRISPR-Cas systems (Agari
et al. 2010, Shinkai et al. 2007, Patterson et al. 2015, Pul et al. 1.9 Drug Targets
2010, Westra et al. 2010, Medina-Aparicio et al. 2011).
We showed that CRISPR-Cas targets endogenous RNA to Disruption of small molecules (i.e., QS molecules) is considered
regulate the master QS molecule, LasR and impacting the host as an antimicrobial strategy (Jakobsen et al. 2017). QS inhibi-
response in a TLR4-mediated manner (Li et al. 2016). Because the tors are found in many herbal extracts such as Ajoene p­ resenting
regulation is reciprocal, we recently identified some QS regulating in garlic. It is shown that, ajoene could block the ­production
signals, such as CdpR, can also modulate the activity of CRISPR- of ­rhamnolipid, which is regulated by QS. Ajoene helped
Cas (Lin et al. 2019). This line of research is recently broadened ­polymorphonuclear ­neutrophils (PMNs) phagocytize biofilms
to small RNAs that regulated CRISPR-Cas (Lin et al., manuscript more efficiently. Moreover, the biofilms were more susceptible to
under revision). Due to the necessity for precise regulation of antibiotics, like tobramycin, showed milder pulmonary i­nfection
CRISPR-Cas activity to respond to foreign invasion but avoid- in mice treated with ajoene. Ajoene exerts its effect through
ing potential autoimmunity or toxicity, the CRISPR-Cas is tightly ­modulation of RsmY and RsmZ (Jakobsen et al. 2017).
controlled by a complex network in the prokaryotes (Figure 1.5). Cells in biofilm state are 1,000 times more resistant to antimicro-
The Pseudomonas species has a well-characterized type I bial therapy. By manipulating the c-di-GMP content of the cell and
CRISPR-Cas system, which lead us to speculate that LadS/RetS switching the bacteria to planktonic lifestyle, the susceptibility of
may interact with the adaptive immune system to coordinate viru- the bacterial cells to antibiotics will increase (Valentini and Filloux
lence. Thus far, it remains unclear whether calcium and LadS/RetS 2016). Therefore, either direct regulating QS signaling or modulat-
are capable of modulating CRISPR-Cas systems. RsmA, the down- ing biofilm may affect the clinical control of bacterial infection.
stream regulator of LadS/RetS, is a global post-transcriptional
regulator through targeting 5’ untranslated regions (UTR) or early
coding regions of targeting mRNA motif (ANGGA). CRISPR
1.10 Concluding Remarks
mRNA blast in P. aeruginosa showed that a conserved RsmA bind-
ing site exists in the cas1 mRNA 5’ UTR, which may be worth- Although it is known that LadS/RetS are essential for the regu-
while to study in the future. lation of P. aeruginosa infection status, its roles in sensing other
Despite the function of CRISPR-Cas systems in adaptive exogenous signals and interacting with other endogenous signal
immunity and its biotechnological application being well studied pathways are still elusive. We are just a beginning to unravel the
6 Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching
detailed mechanisms of LadS/RetS. Several questions remain to
be discovered: Is RetS responsible for detecting exogenous envi-
ronmental signals? What is the structure mechanism of LadS/RetS
in detecting calcium and signal transduction? Are there any other
new co-factors that interact with LadS/RetS signal transduction?
Are LadS/RetS capable of being served as novel drug targets for
infection modulation? Are LadS/RetS taking part in modulation of
CRSIPR system? If so, how do LadS/RetS and CRSIPR systems
interact with each other? Are there other new exogenous signals
involved in modulating CRSIPR system? Discovery of homolo-
gous calcium sensors in other bacteria as well as answering and
dissecting those possible interconnections would enhance our
understanding of the functioning mechanisms of this unique immu-
nity system and bacterial virulence, meanwhile providing better
tools to enable accurate gene-editing or transcription regulation.
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8 Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching

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2
Autoinducer-1 Quorum Sensing Communication
Mechanism in Gram-Negative Bacteria

Maria Cristina Dantas Vanetti, Deisy Guimarães Carneiro, Felipe Alves de Almeida,
Erika Lorena Giraldo Vargas, Emília Maria França Lima, and Uelinton Manoel Pinto

CONTENTS
2.1 Introduction.....................................................................................................................................................................................9
2.2 Bacteria with Complete Auto-Inducer-1 Quorum Sensing Mechanism....................................................................................... 14
2.2.1 QS in Aliivibrio and Vibrio.............................................................................................................................................. 14
2.2.2 QS in Pseudomonas......................................................................................................................................................... 14
2.2.3 QS in Chromobacterium violaceum................................................................................................................................ 16
2.2.4 QS in Aeromonas hydrophila........................................................................................................................................... 16
2.2.5 QS in Serratia................................................................................................................................................................... 17
2.2.6 QS in Burkholderia.......................................................................................................................................................... 17
2.2.7 QS in Gram-Negative Phytopathogens............................................................................................................................ 17
2.3 Bacteria with Incomplete Auto-Inducer-1 Quorum Sensing Mechanisms................................................................................... 18
2.3.1 QS in E. coli..................................................................................................................................................................... 18
2.3.2 QS in Salmonella..............................................................................................................................................................19
2.4 Quorum Quenching of Autoinducer-1..........................................................................................................................................20
2.5 Concluding Remarks.....................................................................................................................................................................20
References...............................................................................................................................................................................................20

The ability of bacteria to communicate and to present social

2.1 Introduction
Bacteria have extraordinary ability to survive and grow in basically
every niche in the environment. Microbial life strategies should
consider stress tolerance such as high or low pH, temperature,
osmolarity, nutrient availability, antimicrobials, and population
density that lead to competitive relationships. In order to respond
to changes in their immediate environment, bacterial cells must be
able to alter the cellular pathways to survival or resume growth.
The response and adaptation to diverse environmental conditions
are related to reception and processing signals present outside their
borders. This adaptation process is mainly mediated by a striking
combination of transcriptional regulatory networks, which allow
bacteria to sense and convert physical or chemical extracellular
stimuli into a specific response that results in altered gene expres-
sion and enzyme activities. Whereas some of these alterations are
reversible and disappear when the stress is over, others are main-
tained and can even be passed on to surviving bacteria.
The bacterial response could be related to individual cells, but in
a community, bacteria are able to interact and regulate, in a coor-
dinated way, their response to environmental changes through the
sophisticated mechanism of cellular communication called quo-
rum sensing (QS) (Bassler and Losick 2006; Fuqua, Winans, and
Greenberg 1994). This signaling process allows communication
between cells leading to differential gene expression in response to
changes in population density and allows bacteria to act as a group.
interactions like a multi-cellular organism has provided sig-
nificant benefits to bacterial populations in host colonization,
formation of biofilm, defense against competitors, and adapta-
tion to changing environments (Li and Tian 2012). Bacteria are
not limited to communication within their own species but are
capable of “listening in” and “broadcasting to” unrelated spe-
cies to intercept messages and coerce cohabitants into behav-
ioral modifications, either for the good of the population or for
the benefit of one species over another (Atkinson and Williams
2009). The perception that bacteria are social organisms has pro-
duced new insights into bacterial physiology and gene regulation
from the point of view of population and evolutionary biology
(Goo et al. 2015).
The mechanism of QS is mediated by diffusible signaling
molecules called autoinducers (AIs) synthesized throughout
the growth of the bacteria and released into the surrounding
medium. At low population densities, the production and secre-
tion of QS signal molecules proceed at a basal level. As popu-
lation density increases, the signal molecules accumulate above
the threshold in the external environment and bind to and acti-
vate receptors inside bacterial cells, and collectively induce the
expression of specific target genes to activate behaviors that are
beneficial under the particular condition encountered. Therefore,
one of the common and often observed consequences of the
QS is gene regulation in the increased synthesis of the proteins

9
10
involved in the signaling molecule production. The higher the
concentration of signaling molecules, the greater the signaling
protein synthesis, which leads to positive feedback loop. This is
the reason for the term autoinducers; the signaling molecule ini-
tiates the synthesis of the protein responsible for its own produc-
tion (Geethanjali et al. 2019).
Over the years, since its introduction as a cell density dependent
mechanism, the use of the term quorum sensing has evolved to
become the general description of the signaling production pro-
cess and response at the level of gene expression. However, many
biotic and abiotic environmental factors can influence the chemi-
cal gradients of these signaling molecules. These factors include
the spatial distribution of signaling molecule-producing cells, the
rate at which the signaling molecule is produced and diffused, and
the stability of the signaling molecule. This has led to the propo-
sition of new terms, including diffusion sensing, confinement-
induced QS, and efficiency sensing, to describe these genetic and
biochemical processes (Platt and Fuqua 2010). These new names
emphasize different adaptive functions of regulation by the QS
mechanism, related to a specific subset of factors that influence the
concentration of signal molecules in the environment. However,
the use of a different term for each adaptive function may com-
plicate the understanding of the QS process rather than clarify it.
Thus, it is important to remember that the ecological context of
QS regulation, as the process itself, is complex and influenced by
multiple aspects of natural environments (Platt and Fuqua 2010).
The QS signaling molecules, also known as AIs, are chemi-
cally diverse, and many bacteria synthesize and utilize multi-
ple signaling molecules from the same or different classes that
constitute a regulatory hierarchy. Most signaling molecules are
small organic molecules (<1000 Da) or small peptides with five
to 20 amino acids in length (Williams 2007). Multiple QS sig-
nals have been identified in bacteria, and the most common ones
are N-acyl-homoserine lactones (AHLs, AI-1) in Gram-negative
bacteria, oligopeptides (AIPs) in Gram-positive bacteria, and
furanosyl borate diester (AI-2) in both Gram-negative and Gram-
positive bacteria. Other signals, such as auto-inducer-3 (AI-3),
2-heptyl-3-hydroxy-4(1H)-quinolone (Pseudomonas quinolone
signal [PQS]) and its precursor 2-heptyl-4(1H)-hydroxyquino-
line (HHQ), cis-11-methyl-2-dodecenoic acid (diffusible signal
factor [DSF]) (LaSarre and Federle 2013), 3-­hydroxypalmitic
acid methyl ester (3-OH PAME), indole (Lee et al. 2015),
­diketopiperazines (DKP), and others have been detected in a
limited number of bacteria or suggested as a signal molecule for
bacterial communication. A number of other extracellular bac-
terial metabolites, including compounds with antibiotic activ-
ity, have the potential to function as signal molecules. However,
it is important to differentiate between a true signal molecule
involved in cell-to-cell communication and other metabolites.
AHLs are the most studied QS signaling molecules, also
known as AI-1, and are produced by Gram-negative bacteria.
The AHLs are neutral lipid molecules normally produced by pro-
teins homologous to LuxI from the lactone fraction of S-adenosyl
methionine (SAM) and, in most cases, the acyl chain is obtained
from intermediates of the fatty acid biosynthesis pathway
(Papenfort and Bassler 2016). The length of the acyl chain can
range from four to 18 carbons and contains possibly a 3-oxo or
3-hydroxy function (Churchill and Chen 2011; Galloway et al.
Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching
2011; Yajima 2014). Short side-chain AHLs are directly released
out of the cell upon synthesis while long side-chain AHLs are
actively secreted to the environment (Liu et al. 2018). This diver-
sity in the AHLs is recognized by different and compatible LuxR
proteins promoting specificity to intraspecies-specific cell-cell
communication in bacteria (Husain et al. 2019).
Although all known QS mechanisms differ in the regulatory
components and molecular mechanisms, they are dependent on
three basic principles: first, secretion of signaling molecules
(AIs); second, detection of AIs by the receptors existing in the
cytoplasm or in the membrane; and third, activation of gene
expression necessary for cooperative behaviors (Figure 2.1).
Several bacterial phenotypes have been described as being
controlled by the QS, among them bioluminescence, compe-
tence, biofilm, metabolism, cell differentiation, sporulation, sur-
face motility, toxin production, expression of virulence genes,
and others (Table 2.1). Therefore, the mechanism of communica-
tion by QS plays a critical role for survival and colonization both
in symbiotic and pathogenic host-bacterial interactions. The use
of QS to regulate processes associated with virulence increases
the pathogen’s prospects for survival, because the coordinated
attack against the host will only be done when the bacterial pop-
ulation reaches high population density, increasing the probabil-
ity of successfully overcoming host defenses.
While it is advantageous that the regulation of some pheno-
types is quorum-dependent, the communication incurs a cost in
terms of signal production; therefore, the communication has only
been maintained throughout the evolution because this transfer of
information gives benefits to both parties, signaling and receiving
bacteria (Diggle et al. 2007; Keller and Surette 2006). The QS
regulators LuxI and LuxR arose early in the evolution of the
Proteobacteria and subsequently diverged within each group of
organisms (Gray and Garey 2001). The construction of phyloge-
netic trees indicates that duplication and horizontal gene transfer
have played an important role in the distribution of the system
across bacterial species (Lerat and Moran 2004). The inducer/
receptor elements in the LuxI/R systems evolved together and
maintained their paired functional relationship, but loss and
exchange of elements occurred in several γ-Proteobacteria lin-
eages (Lerat and Moran 2004). In a systematic survey for LuxR
QS-domains in sequenced bacterial genomes included in the
InterPro database, it was identified that 40%–70% have a com-
plete QS system depending on taxa, while the remaining species
have only LuxR solos or orphans (Subramoni, Florez Salcedo,
and Suarez-Moreno 2015). It is believed that in some bacteria
belonging to the Enterobacteriaceae family, such as Escherichia
coli and Salmonella, a deletion event has removed the luxI homo-
log after their divergence from Pantoea and Erwinia genera, leav-
ing only the LuxR homolog known as SdiA (Sabag-Daigle and
Ahmer 2012).
The mechanism of QS was first described in the regulation of
bioluminescence in Vibrio fischeri (Nealson, Platt, and Hastings
1970), now Aliivibrio fischeri, a marine bacterium found in a
Hawaiian squid known for its striking bioluminescence. The
luciferase operon in A. fischeri is regulated by two proteins, LuxI,
responsible for the production of the AHL, and LuxR protein,
which is activated by this auto-inducer to increase the transcrip-
tion of the luciferase operon (Engebrecht and Silverman 1984).
Autoinducer-1 Quorum Sensing Communication Mechanism in Gram-Negative Bacteria 11

FIGURE 2.1 LuxIR signaling circuit. The LuxIR QS circuit, represented in dark gray cells, is composed of an AHL synthase LuxI that synthesizes the AIs
which are exported to the exterior of the cell. When these AIs reach a threshold concentration, they are internalized, bind to the response regulatory protein
LuxR and bind to the DNA regulating the expression of target genes. Some bacteria (light gray) lack the LuxI protein and do not synthesize AHL. However,
they possess the LuxR homologue and are able to recognize and respond to molecules produced by other bacteria.

TABLE 2.1
Phenotypes Regulated by Auto-Inducer-1 Quorum Sensing Mechanisms
Bacteria
Bacteria with complete auto-inducer-1 quorum sensing mechanisms
A. fischeri MAV
A. fischeri B-61
A. fischeri MJ-1
A. fischeri ES114
A. salmonicida LFI1238
V. cholerae O1
V. harveyi BB120
P. aeruginosa PAO1
P. fluorescens B52
P. fluorescens NCIMB 10586
P. fluorescens 395
Phenotype
Bioluminescence
Bioluminescence
Bioluminescence
Bioluminescence
Persistence in squid
Motility
Biofilm formation in
polystyrene
Resuscitation of cell in the
viable but non-cultivable
state
Bioluminescence
Type III secretion system
Metalloprotease production
Elastase production
Elastase production
Pyocyanin production
Protease production
Rhamnolipid production
Rhamnolipid production
Lung infection
Biofilm formation in glass
Mupirocin biosynthesis
Protease production
Regulationa References
+ Nealson et al. (1970)
+ Eberhard et al. (1981)
+ Engebrecht and Silverman (1984)
+ Lupp et al. (2003)
+
− Lupp and Ruby (2005)
− Hansen et al. (2015)
+ Bari et al. (2013)
+ Henke and Bassler (2004)
+
+
+ Jones et al. (1993)
+ Brint and Ohman (1995)
+
+
+
+ Ochsner and Reiser (1995)
+ Wu et al. (2001)
+ Allison et al. (1998)
+ El-sayed, Hothersall, and Thomas (2001)
+ Liu, Wang, and Griffiths (2007)
(Continued)
12 Trends in Quorum Sensing and Quorum Quenching

TABLE 2.1 (Continued)

Phenotypes Regulated by Auto-Inducer-1 Quorum Sensing Mechanisms
Bacteria Phenotype Regulationa References
P. fluorescens 07A Growth Ø Pinto et al. (2010)
Proteolytic activity Ø
P. putida IsoF Biofilm formation +/Ø Steidle et al. (2002)
P. syringae B728a Epiphytic fitness + Quiñones, Pujol, and Lindow (2004)
B. cepacia H111 Swarming motility + Huber et al. (2001)
Biofilm formation +
B. glumae BGR1 Production of excreted + Goo et al. (2012)
oxalate
B. thailandensis E264 Production of excreted + Goo et al. (2012)
oxalate
A. hydrophila SSU Type VI secretion system + Khajanchi et al. (2009)
Metalloprotease production +
Biofilm formation +
A. hydrophila ATCC 7966 Proteolytic activity on casein + Ponce-Rossi et al. (2016)
Proteolytic activity on +
gelatin
Amylolytic activity +
Lipolytic activity +
β-hemolytic activity +
Biofilm formation on +
stainless steel
C. violaceum ATCC 31532 Violacein production +/− McClean et al. (1997), Chen et al. (2011)
Chitinase production + Chernin et al. (1998)
Swarming motility + Oca-Mejía et al. (2014)
Cell aggregation +
Biofilm formation in glass +
Oxidative stress resistance +
Exoprotease production +
C. violaceum ATCC 12472 Violacein production +/− Morohoshi et al. (2008), Chen et al. (2011)
Chitinase production + Liu et al. (2013)
Biofilm formation in glass +
S. liquefaciens MG1 Surfactant production + Lindum et al. (1998)
Growth Ø Givskov et al. (1998)
Cell elongation Ø
Cell flagellation Ø
Swarming motility +
S. plymuthica RVH1 Nuclease production + Van Houdt, Givskov, and Michiels (2007)
Chitinase production +
Protease production +
Butanediol fermentation +
S. proteamaculans B5a Lipolytic activity + Christensen et al. (2003)
Proteolytic activity +
Chitinolytic activity +
Serratia sp. ATCC 39006 Carbapenem antibiotic + Thomsonet al. (2000)
production
Prodigiosin pigment +
production
A. tumefaciens Ti plasmid copy number + Cho, Pinto, and Winans (2009)
Ti plasmid conjugation +
Tumorigenesis in plants +
(Continued)
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d’âme et de cœur, et me donna un cahier de papier avec un « Je
veux que tu m’écrives là ton tous les jours à Paris. » Oh ! pauvre
ami ! je l’ai bien écrit, mais il ne l’a pas lu [31] ! Il a été enlevé si
subitement, si rapidement, avant d’avoir le temps de rien faire, ce
jeune homme né pour tant de choses, ce semblait. Mais Dieu en a
disposé autrement que nous ne pensions. Il est de belles âmes dont
nous ne devons voir ici que les apparences, et dont l’entière
réalisation s’achève ailleurs, dans l’autre vie. Ce monde n’est qu’un
lieu de transition, comme les saints l’ont cru, comme l’âme qui
pressent le quelque autre part le croit aussi. Eh, quel bonheur que
tout ne soit pas ici ! Impossible, impossible ! Si nous finissions à la
tombe, le bon Dieu serait méchant ; oui, méchant, de créer pour
quelques jours des créatures malheureuses : horrible à penser. Rien
que les larmes font croire à l’immortalité. Maurice a fini son temps de
souffrance, j’espère, et aujourd’hui je le vois à tout moment parmi les
bienheureux ; je me dis qu’il doit y être, qu’il plaint ceux qu’il voit sur
la terre, qu’il me désire où il est, comme il me désirait à Paris. Ah !
mon Dieu, ceci me rappelle que nous étions ensemble à pareil jour
l’an dernier ; que j’avais un frère, un ami que je ne puis plus ni voir ni
entendre. Plus de rapports après tant d’intimité ! C’est en ceci que la
mort est désolante. Pour le retrouver, cet être aimé et tant uni au
cœur, il faut plonger dans la tombe et dans l’éternité. Qui n’a pas
Dieu avec soi en cet effroi, que devenir ? Que devenez-vous, vous,
ami tant atterré par sa mort, quand votre douleur se tourne vers
l’autre monde ? Oh ! la foi ne vous manque pas, sans doute ; mais
avez-vous une foi consolante, la foi pieuse ? Pensant que trop que
vous ne l’avez pas, je me prends à vous plaindre amèrement. Les
sollicitudes que j’avais à cet égard pour son âme de frère, se sont
toutes portées sur la vôtre, presque aussi chère. Je ne puis pas dire
à quel degré je l’aimais, ni auquel je l’aime : c’est quelque chose qui
monte vers l’infini, vers Dieu. Là je m’arrête ; à cette pensée
s’attache un million de pensées mortes et vives, mais surtout
mortes, mon mémorandum, commencé pour lui, continué pour vous
au même jour, daté de quelque joie l’an dernier et maintenant tout de
larmes. Mon pauvre Maurice, j’ai été délaissée en une terre où il y a
larmes continuelles et continuelles angoisses.
[31] Ce cahier a échappé aussi à nos recherches.

Le jour des Morts. —

Voilà les feuilles sans sève

Qui tombent sur le gazon ;
Voilà le vent qui s’élève
Et gémit dans le vallon.
. . . . . . . . .
C’est la saison où tout tombe,
Aux coups redoublés des vents :
Un vent qui vient de la tombe
Moissonne aussi les vivants.

Il y a peu d’années nous disions cela ; nous récitions ces vers,

Maurice et moi, errant sur des feuilles sèches, le jour des Morts.
Mon Dieu, le voilà tombé lui aussi, lui si jeune, le dernier né de la
famille, que je comptais bien laisser en ce monde, entouré d’enfants
qui m’auraient pleurée comme leur mère ! Au lieu de cela, c’est moi
qui pleure ; c’est moi qui vois une tombe, où est renfermé tout ce
que j’ai eu d’espérance, de bonheur en affection humaine. Oh ! que
cela déprend de toutes choses et porte l’âme affligée loin de cette
vie, vers le lieu où n’est pas la mort. Prié, pleuré, écrit, rien autre
chose aujourd’hui. O terrible fête des morts !

Le 3 novembre. — Je vous ai écrit hier, ami de Maurice, toute

triste que j’étais. Il n’y a qu’à vous que je puisse parler dans les
larmes, comme je l’ai fait dans ma lettre. A Marie, cela ferait mal, à
d’autres sans intérêt, et puis la douleur ne se laisse voir qu’aux
intimes.
 Le 5. — Posé mon front sur les mains de mon père posées sur
ses genoux. Oh ! le doux oreiller ! Tout mon cœur s’était porté à ma
tête dans ce repos pour en jouir. Mon père est bon, d’une bonté
tendre, ardente et pour ainsi dire amoureuse, comme on dit de la
bonté divine dont les pères tiennent, et il se fait aimer avec abandon.
Je ne lui cache que ce qui pourrait le peiner. Les lettres de Marie, les
vôtres, je lui fais tout voir. J’hésite pourtant encore à lui montrer mes
cahiers, à cause de ce fond de vie quelquefois triste qui s’y trouve.
Une visite, un curé du voisinage qui m’a fait plaisir. La vue d’un
prêtre, quand il est bon, est bonne aux affligés, et celui-ci est de
ceux à qui les saints tireraient leur chapeau. Il nous a parlé de sa
petite église, de sa petite paroisse, de ses petites croix, et, de l’un à
l’autre, nous a menés à une heure de conversation que j’ai trouvée
courte. En trouve-t-on autant dans le monde ? Plus d’une fois, dans
un salon, il m’est arrivé de bâiller dans mon mouchoir. Ce n’est pas
tant l’esprit ni ce qu’on dit qui attache, qu’une certaine façon de dire.
Le facteur ! des lettres ! Oh ! sait-on ce que c’est que des lettres à
la campagne ? Ces chers absents qui vous reviennent en cœur et en
âme. Que ne peut-on écrire au ciel !

Le 6. — Un enfant est venu m’apporter un oiseau mort qu’il avait

pris sous une pierre. Pauvre oiseau ! Je suis à penser comme cette
jolie petite vie d’indépendance, de chants, tout aérienne, a été
atteinte comme une autre, est tombée sous ce trébuchet de la mort
où tout tombe.
Je n’ai pas écrit hier et n’écrirai pas de suite. Que feriez-vous de
trois cent soixante-six de mes jours presque uniformes, à voir, un an
durant, passer des flots pareils ? La diversion fait l’intérêt des yeux
et de l’esprit, car nous ne nous plaisons qu’en curiosité. Où il n’y a
pas de nouveau, on s’ennuie. Il y a eu tels jours d’immobilité où j’ai
souhaité la foudre. Que serait donc pour vous mon calme
perpétuel ? car, excepté ce qui me vient du cœur ou monte à la tête,
rien ne fait mouvement dans ma vie.
 Dans ce moment, je rentre d’une petite promenade au soleil, et
rien ne bouge autour de moi, que quelques mouches qui
bourdonnent à l’air chaud. Seule au grand monastère désert. Ce
profond et complet isolement me fait vivre une heure comme ont
vécu des années les ermites, hommes et femmes, ces âmes retirées
du monde. Sans soins matériels, sans parole qu’intérieure, sans
sentiments que d’intelligence, sans vie que celle de l’âme : il y a
dans ce dégagement une liberté pleine de jouissances, un bonheur
inconnu, que je crois bien que pour faire durer on puisse aller cacher
à cent lieues du désert. Aussi en était-il qui quittaient la cour pour
cela, comme saint Arsène et tant d’autres qui, ayant goûté des deux,
ne voulurent pas retourner au monde. C’est que le monde ne
contente pas l’âme ; il l’amuse et ne la fait pas vivre : c’est ce qu’on
sent pour peu qu’on avance en âge, quand le cœur se déprend des
illusions comme il s’y était pris de lui-même. On se trouve tout
étonné et triste près du vide que font les plaisirs en se retirant. Que
devenir alors ? La foi l’enseigne, le chrétien le sait. Mon pauvre
Maurice ! que de fois je lui parlais ainsi, lui demandant s’il le trouvait
vrai, et il ne me disait pas non. Je ne hais pas le monde néanmoins ;
je sais y vivre et m’en passer, et je plains ceux qui sont ou ses
esclaves ou ses fidèles, ses malheureux ou ses fous.
Voilà certes ce que je ne pensais pas écrire en revenant du
soleil ; mais voilà où la solitude me mène, à l’aimer et à en parler, et
cela avec vous, ami du monde. Il faut bien que vous vous soyez fait
mon frère. A un frère on dit tout ce qui vient en pensée. Je ne sais si
vous vous plairez aux miennes. J’ai parfois douté si je n’ennuyais
pas Maurice ; mais écartant bientôt le doute (que pour rien je ne puis
souffrir), j’écrivais en pleine foi lettres et cahiers qu’il aimait. Je l’ai
su, bien su, ce qui lui venait de son amitié pour moi. Cher ami ! que
je pense à lui aujourd’hui ; que ce matin dans la prière je me sentais
portée vers l’autre vie où il est, où il m’attend comme il m’attendait à
Paris ! Eh ! que nous verrons là d’autres merveilles que dans ces
villes sur la boue ! Depuis cette mort, je n’estime rien la terre ; Dieu
m’en avait avant appris le prix ; mais le comprendre, le peu qu’est ce
monde, il faut que le cœur ait sa leçon, et le mien l’a eue !
Maintenant je vais m’occuper d’autre chose que d’écrire ici. Avec ou
sans plaisir, tant que l’âme est ici, tant qu’on a charge de vie, il faut
en remplir les obligations.

Le 8. — Louise, Marie des Coques me sont arrivées ce soir par

lettre : aimable rencontre des plus aimables femmes et amies que je
connaisse. Ressemblant beaucoup l’une à l’autre. Marie plus
développée dans le monde. Causé longuement à leur sujet avec
mon père et des affections du cœur. Je l’ai consulté à cette occasion
et sur un chapitre de l’Imitation qui m’avait troublée. Il m’a calmée et
fait voir que je prenais les choses dans un sens trop exclusif, que ma
lecture pieuse s’appliquait aux personnes des cloîtres et non à celles
qui sont dans le monde. Grâce à mon père, je puis donc garder sans
crainte toutes mes affections ; car, après des élans de cœur, je me
retire effrayée, craignant d’aimer trop. Si le cœur s’employait ici, il
n’y en aurait pas pour le ciel. Je veux porter ce qui aime dans l’autre
vie.

Le 10. — Caroline nous a écrit après un assez long silence,

assez long pour me donner le temps de croire à un oubli. J’en avais
de la peine ; je voudrais un avenir sinon d’amitié, du moins de
bienveillance avec cette jeune femme, cette femme de mon frère. Ce
titre l’attache tant à mon cœur ! Je serais sensiblement affectée si je
la voyais se détacher entièrement. Sa lettre est bonne, marquée
d’intérêt ; j’en suis contente. Pauvre chère veuve, que je voudrais
pouvoir l’embrasser en ce moment ! Je la regarde comme une sœur,
comme une sœur qui se trompe. Il ne faut pas lui en vouloir, elle ne
croit pas se tromper.
Demain matin, après l’aurore, je m’achemine chez des parents à
deux lieues d’ici. Journée perdue pour écrire et pour ma vie
d’habitude ; mais je reviendrai peut-être avec quelque chose de
neuf, comme font les touristes, qui ont tous vu de l’extraordinaire où
qu’ils aillent.
 Le 12. — Il fut un temps où je décrivais avec charme les
moindres petites choses. Quatre pas dehors, une course au soleil à
travers champs ou dans les bois, me laissait beaucoup à dire. Est-ce
parce que je disais à Lui, et que le cœur fournit abondamment ? Je
ne sais, mais n’ayant plus le plaisir de lui faire plaisir, ce que je vois
n’offre pas l’intérêt que j’y trouvais jadis. Cependant rien au dehors
n’est changé, c’est donc moi au dedans. Tout me devient d’une
même couleur triste, toutes mes pensées tournent à la mort. Ni
envie ni pouvoir d’écrire. Qu’écrirais-je d’ailleurs qui vous fût bon, à
vous à qui je voudrais tant de bien, à qui il est difficile d’en faire ?
Trouvé dans un livre une feuille de rose flétrie, qui sait depuis
quand ? Je me le demande en revenant sur les printemps passés,
sur les jours et les lieux où cette rose a fleuri ; mais rien ne revient
de ces choses perdues. Ce n’est pas un malheur d’être une fleur
sans date. Tout ce qui prend mystère a du charme. Cette feuille dans
ce livre m’intéresse plus qu’elle n’eût pu faire sur sa rose et son
rosier. J’en ai quitté de lire. Pour peu qu’on ait l’âme réfléchissante, il
y a de quoi s’arrêter à chaque instant et se mettre en pensée sur ce
qui se présente dans la vie.

Le front sur une fleur, je pensais à la tombe.

La pensée de la mort, de Dieu et de ceux que j’aime ne me quitte

pas.

Le 14. — Revenue encore à ma solitude complète. Mon père est

allé chercher quelques livres dans une bibliothèque voisine. Je ne
sais ce qu’il apportera. J’ai demandé Notre-Dame de Paris, que
jusqu’ici je n’avais pas voulu lire. Pourquoi le lirai-je à présent ? C’est
que je me sens le cœur assez mort pour que rien ne lui puisse
nuire ; qu’on dit qu’il y a des beautés là-dedans que j’ai envie de
connaître, et qu’un homme de Dieu qui a du crédit sur moi m’a dit
que je pouvais faire cette lecture, et que le mal est annulé par la
façon de le voir. Le diable même, quand il déplaît, que peut-il ? Le
rencontrer n’est pas le prendre. Peut-être serait-il mieux de rester
dans l’ignorance de tout livre et de toute chose ; mais je ne me
soucie pas non plus de savoir. Ce n’est pas pour m’instruire, c’est
pour m’élever que je lis ; tout m’est échelle pour le ciel, même ce
petit cahier que j’attache à une pensée céleste. Dieu la connaît.
Quand Dieu ne verrait pas tout, je lui ferais tout voir. Je ne saurais
me passer de l’approbation divine en ma vie et mes affections, mais
peu m’enquiers de celle des hommes, encore moins des femmes.

Le 15. — Mon Dieu, mon Dieu, quel jour ! le jour de son mariage.
A pareille heure, un an passé, nous étions à l’Abbaye-aux-Bois, lui,
vous, moi, moi à côté de lui. Je viens d’une église aussi, et d’auprès
de lui sur sa tombe.

Le 16. — Plus rien mis hier après ces lignes. Il est des
sentiments qui dépassent toute expression. Dieu sait dans quel
abîme j’étais plongée et accablée des souvenances de noces.
C’était lui et sa belle fiancée agenouillés devant l’autel, le Père
Buquet les bénissant et leur parlant d’avenir, la foule assistante, le
chant de l’orgue, cette quête pour les pauvres où j’avais quelque
embarras, la signature à la sacristie, tant de témoins de ce brillant
contrat avec la mort. — La rencontre dehors d’un char funèbre ; le
déjeuner à côté de vous où vous me disiez : « Que votre frère est
beau ! » où nous parlâmes tant de sa vie ; — la soirée, le bal où je
dansai pour la première et dernière fois. Je dois à Maurice des
choses uniques. Le plaisir de lui voir l’air content, d’être à sa fête, et
au fond de cette joie des serrements de cœur, et cette horrible vision
des cercueils autour du salon, — posés sur ces tabourets longs et
drapés à franges d’argent. Oh ! que je fus glacée au sortir de leur
chambre, en toilette avec des fleurs pour le bal, que cela me vînt !
J’en fermai les yeux. Journée, soirée si diversement mémorables,
date de tant de douleurs, je n’en puis ôter mon âme. Je m’enfonce
en toutes ces choses, et quand je songe à tout ce que j’avais mis de
bonheur dans un être qui n’est plus maintenant qu’en souvenir, j’en
éprouve une inénarrable tristesse, et j’en apprends à ne faire fond
sur aucune vie ni sur rien. Il y a un cercueil entre le monde et moi ;
c’est fini du peu qui m’y pouvait plaire. J’ai des liens de cœur, plus
aucun de bonheur, de fête. Maurice et moi nous nous tenions
intérieurement par des rubans roses. Tout m’était riant en lui, tout me
plaisait, jusqu’aux peines : mon Dieu ! mon Dieu ! avoir perdu cela !
que voulez-vous que j’aime à présent ?

Le 17. — Belle journée radieuse, chaleureuse, un plein air de

soleil. Cela ravive, fait du bien, tant à sentir qu’à jouir, qu’à admirer.
Quoiqu’à présent je m’informe beaucoup moins de l’état du ciel
qu’hélas ! il y a quelques mois, du temps du malade, je vois avec
plaisir un beau jour, la seule jolie chose à voir à la campagne en
novembre.
Ah ! hier au soir, belle surprise aussi de votre lettre. Je ne
l’attendais pas sitôt, ni presque si aimable, quoique ce ne soit pas
surprenant ; mais toute distinction qui me touche me surprend
toujours un peu. Je ne sais à quoi cela tient. Puis j’ai trouvé dans
cette lettre des choses qui m’ont affligée, de ces chagrins chrétiens
de l’âme pour une pauvre âme de frère, pour quelqu’un qui dit : Je
ne prie pas. Dieu sait là-dessus ce que je pense, ce que je souffre.
J’ai l’intérêt de la vie future de ceux que j’aime, et qui n’y croient pas,
tant en croyance et tant à cœur, que pour le leur procurer, je
souffrirais avec joie le martyre. Ceci n’est pas une exagération, mais
bien pris dans toute la raison et le sentiment de la foi. — Érembert,
Marie qui arrivent !

Le 28. — Laissé enfermé depuis quinze jours. Que de choses

dans cette lacune qui ne seront nulle part, pas même ici !… Repris
pour noter une lettre de Marie, ma belle amie, qui tremble de me
croire malade. Hélas ! non, je ne souffre pas dans mon corps. Oh !
que je trouve inutile d’écrire !
 Le 10 décembre. — Enfin pourrai-je écrire ? Que de fois j’ai pris
la plume depuis huit jours, et la plume m’est tombée des doigts sans
rien faire ! Il y a eu tant de tristesse dans mon âme, tant de
secousses dans mon être ! O Dieu ! je semblais toucher à ma fin, à
une sorte d’anéantissement moral. Que cet état est terrible ! Rien
n’apaise, rien ne soutient : travail, repos, livres, hommes, tout est à
dégoût. On voudrait mourir. Dans cette lutte, l’âme sans foi serait
perdue, oh ! perdue, si Dieu ne se montre ; mais il ne manque pas,
mais quelque chose d’inattendu vient d’en haut.
J’ai trouvé dans les paroles d’un prêtre (encore un ami de
Maurice !) un secours inespéré, un apaisement, un calme, un baume
religieux qui me fait sentir la foi dans ce qu’elle a de plus doux et de
plus fort, la puissance de consolation. De moi-même souvent je ne
puis pas y atteindre. Ce sont des efforts qui me fatiguent, me brisent.
Nous sommes trop petits pour les choses du ciel. Le besoin d’un
médiateur se fait sentir en nous-mêmes. Entre Dieu et l’homme,
Jésus-Christ. Entre Jésus-Christ et nous, le prêtre, celui qui met
l’Évangile à la portée d’un chacun. Aux uns il faut les menaces, aux
autres les espérances : à moi, il me faut l’amour, l’amour de Dieu,
l’unique véritable. Dès qu’on me remet là, dès que j’y suis en plein,
je cesse de souffrir de souffrances désespérées. Que béni soit le
saint prêtre, l’ami du frère qui a consolé la sœur ! C’est parce qu’il a
connu Maurice que je suis allée le trouver, que j’ai pensé qu’il me
connaîtrait plutôt qu’un autre. Je ne me suis pas trompée ; en effet, il
m’a comprise. Il a connaissance du cœur et des agonies de l’âme et
des tristesses jusqu’à la mort, et il vous soutient, cet ange…
Qui m’eût dit, il y a dix ans, quand ils étaient au collége, que cet
enfant saurait mes douleurs, que je les lui confierais, qu’il les
apaiserait par des paroles comme je n’en ai pas entendu, paroles
divines que j’irai de temps en temps écouter quoique ce soit un peu
loin d’ici ? Quand je souffrirai trop, je ferai ce pèlerinage. Frère de
cœur, vous me voyez toute ici jusqu’à l’intime, au fond de l’être,
comme voyait Maurice. Peut-être ne lirez-vous ceci qu’après ma
mort, et alors vous trouverez moins incomprenable, moins étrange
pour vous, ce qui se passait en cette pauvre anachorète pendant sa
vie, ce qu’elle vous contait de son âme.

Le 13. — Avant de sortir d’ici, de ma chambre, je veux dire à ce

cher mémorandum que vous me priez de continuer, que je viens de
lire une de vos lettres, lettre de frère et d’ami, toute franche
d’affection et d’épanchement, où ces mots surtout m’ont touchée : Je
veux que vous ayez le fil de mon âme, je veux que vous puissiez
vous dire ma sœur de prédestination autant que d’adoption
volontaire et réfléchie… Je me saisis de cela, et j’en forme de vous à
moi, de ce fil de votre âme, un nœud qui ne se détachera pas. Prié
pour Paula. Pauvre âme de jeune fille, où est-elle ? Cette mort qui
vous l’a prise, où l’aura-t-elle portée ? Il est plusieurs demeures dans
l’autre monde, et moi je tremble pour ceux qui partent, qui meurent
dans la jeunesse si passionnée, si fautive. Je ne connaissais pas
Paula, mais un mot de vous me fait craindre ; et puis qui sait
comment elle vous était liée, cette enfant qui vous était attachée plus
qu’âme vivante ? Mais laissons-la, aussi bien est-il de ne penser pas
à mal sur personne.

Le 14. — Lettre à Marie pour ce que vous me demandez d’elle.

Ni lu ni rien fait qu’écrire. La pensée renaît et coule, source arrêtée
par un cercueil, mais le flot a passé dessus. Je reprendrai ici mon
cours, tantôt torrent, tantôt filet d’eau, suivant ce qui vient à l’âme. La
nuit me sort d’ici et de ma chambrette, où j’ai passé tout un jour en
calme et en solitude. C’est singulier comme je l’aime, cet à part de
tout.

Le 15. — En revenant de la messe (il est dimanche), j’ai fait

chemin avec une femme qui me contait ses souffrances. Pauvre
meunière ! entourée de huit enfants, toute dévorée d’affections, et
qui néanmoins en pleure une, pleure toujours sa mère qui lui
manque. « Je la cherche partout, me disait-elle, et la nuit j’en rêve et
je sens qu’elle me caresse. » Il y a dans cette douleur et dans cette
façon de sentir une tendresse infinie, une expression du cœur de la
femme qui plaît tant au naturel, ce qui ne se voit peut-être pas si
bien dans le monde que dans ces pauvres femmes des champs. Ici
telles qu’on est ; ailleurs, comme on se fait sous les façonneries de
l’éducation, des coutumes, de la vanité. Tout est superficie dans le
monde. En vérité ; et dans peu de temps j’ai vu bien des comédies
de salon. On me l’avait dit, mais je n’aurais pas cru Paris ce qu’il est,
car c’est à Paris seulement qu’on voit la société en grand, en corps.
Nous n’en avons en province que des bouts de doigts, des
fragments, qui ne peuvent donner des idées complètes. Ma pauvre
meunière m’a fait voir entièrement ce qu’il y a pour moi de plus doux,
un cœur de femme dans sa sensibilité naturelle.

Le 16. — Marie, Marie, vous m’écrivez trop de choses, vous

m’avez trop remuée. Personne n’a eu comme cette femme tant
d’influence sur ma vie, depuis deux ans que date notre liaison. Tout
ce qui la remue m’agite.

Le 19. — Depuis deux jours au silence ; mais le retour de cette

date de mort ne se passe pas sans parole, sans le memento du
trépassé. Comme la meunière, je puis dire que toujours j’y pense et
le cherche, et que je souffre de cette affection qui me manque. Cette
nuit j’ai achevé un cantique pour lui, que j’ai mis sur le compte de
sainte Thérèse pour un frère qu’elle avait. Vous verrez cela, vous, à
qui va de moi tout ce qui allait à Maurice. Ah ! faut-il que tout passe
par son cercueil maintenant ! Cette pensée, vous le dirai-je ?
m’assombrit tellement l’âme qu’aucune chose ne me fait plaisir, que
ce cahier même que j’aurais écrit toute jubilante pour lui et que
j’aime à faire pour vous, je le fais avec peine et tristement comme
qui bâtit sur un cimetière.
Écrit ceci aux splendeurs du soleil, sous le ciel le plus gai, le plus
bleu, le plus printanier en décembre. Par cela je pense à celui de
Paris, ce gris de fer que vous voyez, qui vous déplaît et vous fait tant
de mal à l’âme. C’est bien fort pour un homme fort comme vous,
pour un être fort comme l’homme, d’être abattu par un peu d’air. Ce
temps si démoralisant, dites-vous : n’y a-t-il pas moyen d’échapper à
ces influences d’atmosphère ou de les écarter du moins ? Trop
grande question pour être traitée au Cayla, où, pour se préserver du
temps, on pense à l’éternité comme les pauvres ermites. Je ne
saurais vous dire l’influence heureuse qu’ont sur moi les hautes
pensées de la foi. Bienheureuse d’avoir cette assistance bénigne !
car souvent aussi un peu d’air me fait mal.
Deux visites : je les note parce que c’est rare à présent dans
notre désert, et qu’il s’y trouvait un homme admirablement laid, un
Pélisson, un visage marqueté, gravé, tout difforme et dont l’âme
efface les traits. Au premier regard il choque, au second il plaît, au
troisième il attire. Que l’intelligence fait plaisir et relève cette face de
chair de l’homme !

Le 20. — Lettre de Caroline avec un dessin de Maurice mort, pas

ressemblant du tout. Sa mémoire l’a mal servie, la pauvre veuve, ou
plutôt je crois que son crayon n’est pas capable de rendre son
souvenir, de saisir d’une prise assez forte cette grande image dans
son âme. Que n’ai-je aussi un crayon ! Je ne ferais pas mieux peut-
être, mais du moins j’essayerais. Celle qui dessina son ami sur un
mur, cette femme qui inventa, dit-on, la peinture, n’avait sans doute
d’autre talent que son amour. Que de fois je vois une ombre que je
voudrais fixer quelque part ! Quoi ! tout entier perdu ! Je vous écrirai
demain.

Le 22. — De la mort à la vie, de l’un à l’autre frère. J’écrivais une

poésie funéraire. Du temps que la feuille sèche, n’ayant pas de
poudre, je passe ici, j’y viens marquer un jour des plus doucement
calmes que j’aie passés de longtemps. Oh ! le grand bien que la paix
au dehors, au dedans ! La paix, ce grand vœu du pauvre Maurice
dans ses derniers jours troublés. « O paix, le cher objet de mon
cœur ! O Dieu, qui êtes ma paix, qui nous mettez en paix avec nous-
mêmes, avec tout le monde, qui par ce moyen pacifiez le ciel et la
terre ! Quand sera-ce, mon Dieu, quand sera-ce que, par la
tranquillité de ma conscience, par une douce confiance en votre
faveur, par un entier acquiescement ou plutôt un attachement, une
complaisance pour vos éternelles volontés dans tous les
événements de la vie, je posséderai cette paix qui est en vous, qui
vient de vous, et que vous êtes vous-même ? »
J’ai toujours trouvé cette exclamation, cette prière fort belle. Oh !
ces choses religieuses, j’y suis toujours. Ce sont les seules que je
crois et presque que j’aime. Hors cela, tout m’attriste toujours à la
mort. Un coup d’œil au ciel me ranime, me rattache à ce qui se
délaisse en moi.

Oh ! laissez-moi ma foi pieuse

Et l’espérance radieuse.

Le 24. — Écrit sans fin hier, aujourd’hui : maintenant rentrons, toi,

mon cahier, dans ton portefeuille, toi, mon âme, en toi-même ou
plutôt en Dieu, aux doux mystères du Sauveur. C’est la veille de
Noël. J’entends les cloches de tous nos clochers qui sonnent
nadalet, chant joyeux que quinze jours avant la fête on entend dans
l’air du pays, le soir, à trois heures et à neuf.

Le 28. — C’est étonnant le beau ciel que nous avons cet hiver !
J’en jouis en me promenant, en respirant au soleil un air qui fait
ouvrir les fleurs. Les amandiers bourgeonnent, mon lilas de la
terrasse est tout couvert de boutons. Tant de printemps fait bien
plaisir en hiver ; mais tout en m’y plaisant, j’y trouve une tristesse, un
regret de n’avoir pas eu cette douceur de temps l’an dernier pour
notre pauvre malade. Peut-être il aurait vécu davantage, se serait
guéri dans cette douce chaleur, car l’air fait la vie. L’air de Paris l’a
tué, je le crois, je le savais et je ne pouvais pas le tirer de là. Ç’a été
une de mes plus profondes souffrances de ce passé dont j’ai tant
souffert. Pauvre frère, tout m’est pente pour tomber à lui, tout m’y
ramène. Voyez, je voulais parler du soleil, mais le voilà bien éclipsé
de noir. Ainsi tout tourne au deuil quoi que je touche, même votre
souvenir si fort lié à une tombe. C’est ce qui me le rend si différent
de tout ce qui me va au cœur ; il prend quelque chose des reliques.
Vous êtes à part en moi. Quand je considère notre liaison et ce qui
l’a amenée, tant d’événements, tant de choses pour me sortir du
désert, et notre rencontre en Babylone, dans ce Paris dont j’étais si
loin ; quand je m’y vois si étrangère et sitôt connue, sitôt comprise et
sœur de vous, homme du monde, de vous prenant sœur à vos
antipodes, trouvant amie de choix, lien de vie dans la vie la plus
opposée à la vôtre : oh ! je dis qu’il y a merveilleuse chose en cela,
mystère de providence dans cet attachement qui ne ressemble à
aucun. Je tiens à vous par quelque chose du ciel, par prédestination,
comme vous avez dit. Dieu sait pourquoi et dans quel dessein il
nous a unis d’amitié. Oh ! que je veux votre bonheur, à commencer
par celui du ciel. Je doute d’y pouvoir grand’chose, car je vous crois
difficile en bonheur. Et que peut être pour vous une pauvre femme
mi-sortie de ce monde, mi-morte, qui ne sent plus rien que par le
côté religieux ? Vous ne l’êtes pas, mon ami. Cette différence qui
m’afflige pourrait bien vous ennuyer, dans nos rapports, et alors les
voilà changés, délaissés. Peut-être je vous juge mal.
Trouvé dans le bois une fleur que j’ai prise et mise ici en souvenir
du printemps de décembre. C’est une marguerite des bois, qui
plaisait à ma mère et que j’aime pour cela. Nos affections naissent
l’une de l’autre.

Le 31 décembre. — Ce dernier jour de l’an ne se passera pas

comme un autre : il est trop plein, trop solennel et touchant comme
tout ce qui prend fin, trop près de l’éternité pour ne pas m’affecter
l’âme, oh ! bien profondément. Quel jour, en effet, quelle année, qui
me laisse, en s’en allant, tant d’événements, tant de séparations,
tant de pertes, tant de larmes et un cercueil sur le cœur ! Un de
moins parmi nous, un vide dans le cercle de famille, dans celui de
mes affections. Voilà ce que le temps nous fait voir. Ainsi finit une
année ! Hélas ! hélas ! la vie s’avance comme l’eau, comme ce
ruisseau que j’entends couler sous ma fenêtre, qui s’élargit à mesure
que ses bords tombent. Que de bords tombés dans mes jours
étendus ! Ma première perte fut ma mère, dont la mort me vint entre
l’enfance et la jeunesse et mit ainsi des larmes entre les deux âges.
De vive et rieuse que j’étais, je devins pensive, recueillie, ma vie
changea tout à coup, ce fut une fleur renversée dans un cercueil. De
cette époque date un développement dans la foi, un élan religieux,
un amour de Dieu qui me ravissait par delà toutes choses et qui m’a
laissé ce qui me soutient à présent, un espoir en Dieu qui m’a
consolée de bonne heure. Puis je vis mourir un cousin, un ami
tendrement aimé, le charme de mon enfance, qui me prenait sur ses
genoux, m’enseignait à lire sans me faire pleurer, me disait des
contes. Plus grande, je m’en fis un frère aîné ; je lui confiai Maurice
quand il s’en fut à Paris. Mon cousin était garde du corps. Il est dit
que j’aurai toujours des frères à Paris et que toujours ils y mourront.
Celui-ci s’en alla au cimetière de Versailles en 1829. Je n’étais plus
enfant, je m’enfonçai dans les tombes : deux ou trois ans durant je
ne pensai qu’à la mort et presque à mourir. Mon pauvre Victor
auquel ressemblait Maurice ! Oh ! j’avais bien craint qu’ils se
ressembleraient jusqu’au bout. Tous deux si jeunes, tous deux
morts, tous deux tués à Paris ! Mon Dieu ! ce sont terribles choses et
poignants souvenirs que ces morts l’une sur l’autre. Voilà de quoi je
me souviens aujourd’hui en foule. Je ne vois que des trépassés : ma
mère, Victor, Philibert de l’île de France, Marie de Bretagne, Lili
d’Alby, Laure de Boisset, toutes affections plus ou moins près du
cœur, et maintenant celle qui les couvrait toutes, le cœur du cœur,
Maurice, mort aussi ! Quels passagers rapides nous sommes, mon
Dieu ! Oh ! que ce monde est court ! La terre n’est qu’un pas de
transition. Ils m’attendent là-haut. C’est dans ces funérailles que je
finis ma journée, ma dernière écriture, mes dernières pensées que je
vous laisse comme je les laissais à pareil jour et moment, l’an
dernier, à ce pauvre frère. Je lui écrivais de Nevers, encore assez
près de Paris et de lui. Oh ! que la mort nous sépare ! Que lui
adresser où il est, que des prières ? C’est à cela que je vais penser.
La prière, c’est la rosée en purgatoire. Si sa pauvre [âme] y souffrait !
Bonsoir à vous qui le remplacez sur la terre. Je ne puis vous rien
dire de plus en amitié. Je vous le dis devant Dieu et devant lui, qu’il
me semble voir à mon côté, souriant à cette adoption de son frère.

Le 1er janvier [1840]. — Que m’arrivera-t-il, ô mon Dieu, cette

année ? Je n’en sais rien, et, quand je le pourrais, je ne voudrais pas
soulever le rideau de l’avenir. Ce qui s’y cache serait peut-être trop
effrayant : pour soutenir la vue des choses futures, il faut être saint
ou prophète. Je regarde comme un bienfait de providence de ne voir
pas plus loin qu’un jour, que l’instant qu’on touche. Si nous n’étions
pas ainsi bornés par le présent, où ne s’en irait pas l’âme en
appréhensions, en douleurs tant pour soi que pour ce qu’on aime ?
Que ne fait point sentir et souffrir le seul pressentiment, cette ombre
de l’avenir, quand elle nous passe sur l’âme ! Dans ce moment, je
suis sans crainte, sans émotion pour personne ; mon année se
commence en confiance pour ceux que j’aime. Mon père est bien
portant, Érembert se relève, Marie a toujours ses joues de pomme
vermeille, et l’autre Marie, l’amie de mes larmes, la femme de
douleurs, se soutient avec plus de forces. De tout cela, grâces à
Dieu, que je prie de bénir et conserver ceux que j’aime. Les
chrétiens vont chercher leurs étrennes au ciel, et je me tourne pour
vous de ce côté, tandis que vous allez dans le monde, dans les
beaux salons de Paris, offrir dragées et compliments. Si j’étais là,
peut-être j’aurais les miennes ; peut-être aurai-je une pensée, un
souvenir de ce frère à qui Maurice m’a laissée pour sœur. Que le ciel
est beau, ce ciel d’hiver !
Une lettre de Louise, douce étrenne de cœur, mais rien ne me
fait plus grand plaisir, rien de ce qui me vient ne peut me consoler de
ce qui me manque. En embrassant mon père ce matin, ce pauvre
père qui, pour la première fois, à la première année, n’embrassait
pas tous ses enfants, j’étais bien triste. J’ai cru voir Jacob quand il lui
manqua Joseph.
 Ici mes premières pensées écrites, ma première date de 1840,
qui se lie par un crêpe à 1839 et à vous.

Le 2. — Je me sauve ici de l’ennui des lettres de premier de l’an

que j’ai à faire. L’ennuyeuse coutume de se faire des compliments
tout un jour, d’en envoyer au loin ! Mon paresseux d’esprit, qui aime
mieux rêvailler que travailler, ne s’empresse guère à ces
compositions louangeuses. Au demeurant, on le fait parce qu’il faut
le faire, mais en raccourci, avec seulement quelques mots d’époque,
de vœux au commencement ou à la fin. Le monde, ceux du monde
sont habiles en cela, en parler flatteur et joli ; non pas moi, je ne me
sens aucune facilité de parole dorée, brillante, de ce clinquant de
bouche qui se voit dans le monde. Dans le désert on n’apprend qu’à
penser. Je disais à Maurice, quand il me parlait de Paris, que je n’en
comprendrais pas la langue. Et cependant il y en a que j’ai
entendus. Certaines âmes de tous les lieux se comprennent. Cela
me fait croire ce qu’on dit des saints, qui communiquent avec les
anges, quoique de nature différente. L’une monte, l’autre s’incline, et
ainsi se fait la rencontre, ainsi le Fils de Dieu est descendu parmi
nous. Voilà qui me rappelle ce passage de l’abbé Gerbet dans un de
ses livres que j’aime : On dirait que la création repose sur un plan
incliné, de telle sorte que tous les êtres se penchent vers ceux qui
sont au-dessous d’eux pour les aimer et en être aimés. Maurice
m’avait fait remarquer cette pensée que nous trouvions charmante.
Cher ami, qui sait s’il ne se penche pas vers moi maintenant, vers
vous, vers ceux qu’il aimait, pour les attirer à ce haut rang où il est,
pour nous soulever de terre au ciel ! N’est-il pas croyable que ceux
qui nous devancent dans les splendeurs de la vie nous prennent en
pitié et nous envoient par amour quelque attrait vers l’autre monde,
quelque lueur de foi, quelque éclat de lumière qui n’avait pas lui
dans l’âme ? Si je demeurais près d’un roi et que vous fussiez en
prison, assurément je vous enverrais tout ce que je pourrais de la
cour. Ainsi dans l’ordre céleste, où nos affections nous suivent, sans
doute, et se divinisent et participent de l’amour de Dieu pour les
hommes.
 Le 4. — Du monde au salon que je laisse pour venir un moment
devant Dieu et ici me reposer. Oh ! quelle lassitude aujourd’hui dans
l’âme, mais je ne me lasse pas de la porter ici. Ce m’est comme une
église où l’on entre avec calme. Des lettres ! des lettres, et pas une
qui aille au portefeuille vert où vont celles, que j’aime, celles qui sont
miennes par l’intime. Marie ne peut pas tarder. Je l’ai tant pressée
pour l’affaire de Mme de Vaux. Quand je dois obliger, j’aime de le
faire vite. Deux lettres sont donc parties, pour vous, pour les
Coques, du temps… — Il faut que je sorte d’ici.

Le 6. — … Du temps qu’il semblait que je demeurais pour vous

au silence. Je reprends mon fil coupé d’hier, qui se liait à cette boîte
aux lettres d’Andillac qui vous a gardé en quarantaine de deux jours
la dernière que je vous ai adressée. Dans ce temps vous l’auriez
eue à ce Port-Mahon où vous sont débarqués sans doute d’autres
souvenirs moins pressés d’arriver que les miens. Que cette boîte
d’Andillac sait peu ce qu’elle renferme ! Elle est placée près de
l’église, à côté du cimetière, et je trouve qu’il est bien là, ce reposoir
du cœur ou d’affaires humaines, de tant de choses qui ne prennent
cours qu’après s’être arrêtées près de Dieu. Ce peut avoir de très-
heureux effets, et telle main portant de mauvais papiers se retirer à
la pensée de ce lieu pieux. Qui oserait faire le mal à la porte d’une
église, pour peu qu’il ait de foi ? Cette boîte au mur béni pourrait
donc en retenir plusieurs de mal intentionnés en écriture, comme
c’est assez commun, même dans nos campagnes où le savoir écrire
est venu. Du petit au grand, le choix moral en toutes choses aurait
plus de portée qu’on ne pense. Quant à moi, lorsque je jette là mes
chères correspondances, je sens qu’il me faut pouvoir dire : « A la
garde de Dieu ! » J’écris à beaucoup de monde, ayant, je ne sais
comment, des relations très-étendues. Il s’est élevé autour de nous
une plantation de cousines, jeunes filles toutes aimantes et
causantes, toutes liées à nous de cœur et d’esprit, de sorte qu’il me
faut répondre à toutes ces causeries. Puis Louise, la voix du cœur,
Marie que Dieu m’a donnée, Félicité qui m’aime, qui avait pris soin
de Maurice, Caroline, ma sœur, la femme de Maurice, et d’autres
encore, sans fin ; et dans tout cela, parmi tant de lettres, il y en a
trois qui les effacent, deux de femmes et une grosse écriture qui se
fait fine pour moi.

Le 7. — Lettre de Marie, mort de Mgr l’archevêque de Paris. —

Notes du soir d’une journée bien pleine. Les événements se
succèdent dans la vie avec une rapidité qui permet à peine de les
saisir. — Ainsi je le vois dans mon désert, où si peu de chose passe
en comparaison du monde.

Le 9. — Que m’arrivera-t-il aujourd’hui ? Un bonheur, quelque

chose de Marie, ses étrennes qu’elle m’annonce, une boîte
mystérieuse que m’apporte la diligence. Il me tarde de la tenir et de
l’ouvrir et de voir ce que m’envoie mon amie. Elle me dit après
quelques mots intimes à cette occasion : « Vous comprendrez quand
vous aurez vu la boîte. » Ce vous comprendrez me met l’esprit en
cherche. Qu’est-ce que ce peut-être ? Livres, musique, objet de
toilette ? De toilette, non ; Marie sait mieux ce qu’il me faut, et que
j’aurai plus de plaisir aux moindres choses du cœur qu’à toutes les
parures du monde. J’ai assez de mes robes de Paris, tandis que
l’âme n’a jamais trop de vêture. J’aimerais des livres, quelque chose
où je m’envelopperais la pensée toute transie au froid de ce monde,
quand je sors de mes prières, de mes pieuses méditations. Cela ne
peut pas durer tout le jour, et je souffre n’ayant nulle lecture où me
réfugier. Notre-Dame de Paris que j’avais demandée ne m’est pas
venue. On m’a porté la Cité de Dieu, de saint Augustin, ouvrage trop
savant pour moi. Ce n’est pas que partout on ne puisse glaner
quelque chose, mais sur ces hauteurs de théologie n’est pas mon
fait. J’aime d’errer en plaine ou en pente douce de quelque auteur
parlant à l’âme, à ma portée, comme, par exemple, M. Sainte-
Beuve, dont je faisais mes délices l’hiver dernier à Paris et dont
s’amusait fort votre gravité railleuse. C’était vous pourtant ou
quelqu’un de vous qui étiez cause que je lisais cette Volupté, parce
que Maurice m’avait dit que c’était ce qui avait converti votre frère et
jeté dans son séminaire. Le singulier livre, pensai-je, pour produire
de tels effets ! Il faut le voir, et ma curiosité n’a pas été mécontente. Il
y a des détails charmants, de délicieuses miniatures, des vérités de
cœur.