Machine Translated by Google

FROM MACROMOLECULES TO BIOLOGICAL

CONVENTUS
Praelectiones Nobeliana, diei 8 decembris, anno 1982

by
AARON KLUG

MRC Laboratorium biologiae Moleculares,

Cambridge CB2 2QH, UK

Intra cellam vivam incedunt multae processus et variae processus biochemicae, fere
omnes quae involvunt vel reguntur moleculis magnis, quorum praecipua exempla sunt
servo et acida nucleica. Hae macromoleculae non quidem seiunctim agunt, sed saepe
inter se occurrunt ut aggregata vel complexiones macromoleculares ordinata, interdum
tam forma et functione distinctiva, ut organelle nomen mereantur. In tam biologicis
conventibus proprietates singulorum macromoleculorum saepe in cellula exprimuntur.
Est in aliquibus ex illis conventibus, in quibus per XXV annos laboravi, et quae hodie in
praelectionibus meis agitur.

Propositum nostrae campi structuralis biologiae hypotheticae est machinae biologicae,

in hypothetica, seu chemica, detail. Initia huius campi proxime ante XX annos anno
MCMLXII signata sunt cum Max Perutz et Ioannes Kendrew praemium Nobelianum
primae solutionis machinarum structurae acceperunt. Eodem anno Franciscus Crick,
Iacobus Watson, et Mauritius Wilkins etiam honorati sunt ad elucidandam structuram
geminae helicis DNA. In praelectione Nobeliano Perutz revocavit quomodo ante annos
XL, anno 1922, Sir Laurentius Bragg, cuius auditor fuerat, huc accessit ut gratias
Academiae praemio Nobeliano sibi et patri suo, Domino Willelmo, ob novam scientiam
fundatam, gratias ageret. de crystallographia X-radii, qua struc atomica tura compositorum
simplicium et molecularum explicari potuit. Hi non solum antecessores mei fuerunt, sed
aliqui ex illis quasi fratres maiores scientifici mihi fuerunt, et valde superbum sentio, nunc
mihi vicissim hoc maximum honorem tribui debere. Praecipuae operis mei subditi fuerunt
tam acida nucleica quam servo, inter eas interationes, et methodorum evolutio necessaria
ad investigandum magnas complexiones leculares macromorum, quae ex his
interactiones oriuntur.

In quaerendo intelligere quomodo proteins et acida nucleica penitus se habeant,

imprimis problema particulare est inire, et nullam fidem affirmare possum pro electione
primi subiecti mei, viri tobacco musivi. Fuit nuper Rosalind Franklin qui me ad studium
virus introduxit et quem felix essem obviam cum praesidiariis JD Bernal in Londini 1954
coniunxi inceperat
Machine Translated by Google

78 Chemishy 1982

Fig. 1. Diagramma comprehendens eventus primi stadii

structurae analyseos viri tobacci musaici (71). Sunt tres nucleotides
per interdum subunita et subunits per vices helix. Tantum
fere sexta longitudinis particulae integrae ostenditur.

06

Fig . Non est hoc schema conventionale: terminus trahitur ubi species maior detectabilis fit
nec implicat species minores acriter evanescere. Quod "cincinno washer" indicavit in
terminus inter 20S orbis et

Helix non bene definitum gerit metastable transitorium statum cum orbis sunt
conversus ad helices per abrupta demissione pH.
Machine Translated by Google

A. Klug 79

a Bernal anno 1936. Rosalind Franklin fuit qui me exemplum posuit problematum
magnarum et difficilium armamentorum. Nisi tragice vita defecisset, antea hoc loco stare
posset.

TOBACCO MOSAIC VIRUS

Virus musivum tabaci (TMV) simplex est virus tantum constans ex uno genere moleculi
dapibus et RNA, tabellarius notitiae geneticae. Figura simplex virgae ex consilio suo
consequitur, nimirum regularis helicarum harum dapibus moleculis, vel subunitis, in
quibus unum moleculum RNA immergitur. Haec imago generalis iam ab anno 1958
completa erat cum Rosalind Franklin mortuus est (fig. 1). Patet interdum dapibus ultimo
architecturam viri determinare, ordinationem subunitatum per vices Helix magis planae
cum vicinis vicibus in contactu. RNA inter has vices intercalata est cum 3 nucleotide
residua per interdum subunita et sita est ad radialem distantiam 40Å ab axe centrali
ideoque ab exteriori mundo a dapibus tunicae semotus est. Geometria interdum
dispositionis RNA narum in modum configura- tionis unicae extensae cogit. Accurrens
axis virii centralis particula cylindrica foraminis diametri 40 est, quod tunc leve consecutio
dapibus sarcinarum putabatur, sed postea evasit ad instar prominenter in historia
conventus.

In primo aspectu, incrementum helicae structurae sicut TMV talis, nullum problema
comprehensionis exhibet. Unaquaeque interdum subunitas parium contactuum cum
proximis efficit ut compages inter eos iterum atque iterum repetatur.
Subunitates certas in geometria aedificatas habere possunt ut se veluti gradus in spirali
gradibus singulari modo convenire possint. Subunitas simpliciter unum vel paucos ad
tempus adderet super gradum in fine helix crescentis, RNA capiens quae ibi promineret
et novum gradum generaret, et sic porro. Retrospectum sic non nimis admirandum fuit
cum experimenta classica Fraenkel-Conrat et Williams anno 1955 (6) demonstravit TMV
ex interdum solitariis et acidi nuclei componi posse. Virum infectiosum simplicis remixing
particulas formatas esse demonstraverunt quae structuram ab originali viro discerni non
posse demonstraverunt. Ita omnes informationes necessariae ad congregandum
particulam in suis componentibus contineri debent, id est, virus "seipsum congregat".
Postea experimenta ('7) manifestaverunt coagulum satis specificum pro RNA virali, quae
facillime cum RNA homologa ad tunicam interdum occurrens.

Haec omnia satis placebant, sed quaedam adhuc erant quae dubitandi causam
reddebant. Primum, alia experimenta (8) demonstraverunt RNAs alienas in virgas virus
incorporari posse, et hae dubitationem reiciebant ex opinione quod proprietas vivorum in
ipsa ecclesia effecta erat. Alia notatio de coeundi, quod suadet adhuc elementa desunt
in historia, rate sua tarda erat. Tempora 8 ad 24 horas requirebantur ut maximae fruges
particulorum conglobatorum dare debebant. Hoc lentius nobis visum est pro congregatione
virus in vivo, cum acidum nucleicum solum plene munitur
Machine Translated by Google

80 Chemiae 1982

perfectio. Dubia autem haec in futuro iacebant et antequam ad eorum solutionem

perveniremus, ad analysin structuralem virus et dapibus revertor.

Analysis X-ray de TM V: discus

dapibus dapibus Post Franklin mortem, Holmes et ego analysi X-radii virus continuavi.
Specimina operis X-radii praeparari possunt in forma geliorum in qua particulae
inter se parallelae ordinantur, sed passim circa axes suos revolvuntur. Hae nes
bonae X-radii exemplaria diffractionem dant, sed propter naturam suam tres-
dimensionales X-radii indicia in duas dimen- siones diripienda sunt. Haec notitia
reserans ut structuram 3 dimensivam instaurare maiorem inceptum probavit, et
solum anno 1965 Holmes et primas 3 dimensivas tabulas Fourieriani consecutus
sum ad solutionem circiter 12Å. Re vera, nuper solum analysin ab Holmes et
collegis suis in Heidelberga (ubi anno 1968) movit, solutionem accedens 4 in
optimis regionibus densitatis electronici, sed in aliis partibus insigniter defluentibus
(IX). In hoc proposito non potest cognoscere singulas residuas amino-acides cum
quavis certitudine et ambiguitatibus nimis magnae ad exempla nuclei unica
aedificandi. Attamen, tabula, simul sumpta cum mappis subunitis, quam
Cantabrigiae consecuti sumus (vide infra), notam praebet notitiarum de natura
contactuum cum RNA (10).

Hae difficultates in analysi X-radii viri praevisae sunt, et a primis annis 1960
animadverti veniebam circa hanc difficultatem tentare solutionem dapibus
subunitis viri solitariam crystallificare, structuram suam solvere per diffractionem
X-radii. ac deinde hoc referre conantur ut structuram virus solutionis humilis
solvitur. Conamur ergo nos interdum monomer crystallize. Ut frustraretur inclinatio
naturalis interdum in helice aggregata, Leberman varias modificationes chemicas
in spem induxit ad locorum normalium contactum claudendi, sed nullae ex his
servo- rum cristallo mutatis. Secundus modus erat ut aggregarent parva
aggregata ex dapibus subunitis immodificatis. Aliquandiu notum erat, praesertim
ex opere Schramm et Zillig (11), interdum in RNA, sine RNA, in plures formas
distinctas, praeterquam helix, aggregare posse. Conditiones elegi, quibus
dapibus apparebat maxime aggregatus in forma cum sedimentatione constanti
circiter 4S, quae a Casparo tanquam trimer notata (12). Crystalla fere statim
consecuti sumus, sed invenimus (13) eas continere non parvum aggregatum
speratum, sed magnum, aggregato respondente sedimentatione constanti 20S.
Analysis X-radius demonstravit hoc ex duobus laminis appositis, seu circulis XVII
subunitis singulis constructum esse, et hanc formam discorum duorum iacorum
nominavimus (Fig. 3 et 4). Nostra perturbatio initialis in tanta structura,
molecularium pondere 600,000, temperabatur eo quod geometria disci ad
particulam virus evidenter relata est. Annuli cylindrici 17 subunits continebant
inter se comparati cum unitatibus per vicem viri helix, ita ut ligatio lateralis intra
discos propterea in viro propinquam esse verisimile esset. Nos quoque
Machine Translated by Google

A. Klug 81

Fig. 3. Discus a gradibus resolutionis desuper spectatus. A centro exteriori sequitur imago microscopii electronici
circulariter eliquata circiter 25Å solutionis (72); (ii) frustum per 5Å electronici tabulae densitatis orbis ab analysi X-ray
consecuti, ostendens helices virgas (26) et (iii) partem exemplaris atomici ex 2.8 tabula (Bloomer et al. 15).
Machine Translated by Google

82 Chemiae 1982

Fig. 4. Sectio per orbem per axem suum ab analysi X-radii proventuum ad solutionem 2.8 (15). Vittae viam
monstrant catenae polypeptidis subunitum subunitatum.
Subunitates duorum annulorum super parvam aream attingere videri possunt ad extra orbis, sed aperientes
usque in "molares" versus centrum. Lineae elisae sub radio humili indicant schematical tionem mobilem dapibus
in disco, ex prope RYA ad locum ligaminis protensum.
ore media foraminis

ostendit per micrographas electronicas analysando discum polarium fuisse, id

est duos eius anulos in eandem partem versos ac successivas virus helix.
Haec fuit prima amplissima structura semper per analysin X-ray singillatim
investigata et circiter duodecim annos per analysin ad altam resolutionem
perducenda suscepit. Formidabiles technicae difficultates superatae sunt
tantum post progressionem in laboratorio nostro tubularum X radiorum
potentiorum et instrumentorum specialium (camerarum, densitometrorum
computatrum-coniunctorum) pro notitia collectionis ex structura huius
magnitudinis. (Re vera inceperat melius fistulas X-radii in London aedificare ut
in obiectis tanquam virus inbecillis diffractentibus). 17 duplex symmetria
gyratoria disci etiam praebet redundantem informationem in notitia X-radii, quae
in ultima analysi abutitur (14), ad meliorem et amplificandam resolutionem
tabulae, quae principio in uno tantum gravi atomi derivativo est. . Tabula ad 2.8
resolutio (15) interpretata est per singula exemplar atomicum pro interdum (Fig.
3 et 4), licet singulae interactiones in RNA ligamine adhuc deducendae sint.

Interdum
polymorphismus Hi eventus in structura disci qui monstravit satis arcte
coniunctum esse ad virus Helix, miratus sum an discus aggregatus non posset
munus aliquod biologicum vitale implere. Facile erat dimittendum ut forte
adventitio aggregatum dapibus viscum vel forma repono. Polymorphismus
dapibus TMV primo in nonnullis speciebus a Casparo 1963 consideratus est
(12), qui praevidit aliquos status aggregationis perspicientiam modo functionum
interdum dare. Studia quantitatis aggregationis a Lauffer in anno 1950
inceperunt (16) in angustiis condicionum amplis contractis, praecipuum studium
ad intelligendas vires aggregationem impellentium (haec sunt late entropica).
Propter naturas dispersas observationum priorum, Dunelmensem, Finch et
percontationem systematicam incepit aggregationis statuum ex quibus lata
forma claruit (17, 18).
Eventus ut phase (Fig. 2) compendiari possunt.
Machine Translated by Google

A. Klug 83

In humili vel acido pH, dapibus solum helices longitudinum indefinitarum

formabunt quae structurae viro simillimae sunt nisi ob defectum RNA.
Super neutralitate interdum tendit ut mixtura aggregata minorum ab fere trimer
sursum, in aequilibrio celeri inter se, vulgo ad A- interdum. Prope pH 7 et circa
cella temperies dominans praesens est discus qui est in aequilibrio relative
tardo cum forma A-in ratione circiter 4:1. Factor dominans moderans statum
aggregationis interdum tunicae est ita pH. Moderatio mediatur per circulos,
residua acidum carboxylicum probabiliter, a Casparo notatum (12), quod protons
enormis in statu helical, non autem in disco vel in forma. Ita structura helica
stabiliri potest vel in virus per commercium RNA cum interdum, vel, in causa
liberorum dapibus, protonando coetus acidorum. Hi coetus sic "transitu negativo"
agunt, ut sub condicionibus physiologicis helix non formatur, et sic satis interdum
in forma discorum vel A-protein praesto est ut cum RNA durante conventum
virum inter se cohaereant.

Partes disci
Discus aggregati intermedii propterea numerum proprietatum significantium
habet. Non solum coniunctim ad virus helix, sed etiam forma dominans interdum
sub condicionibus "physiologicis" est; praeterea formae discus etiam in aliis
virus helicis observatae sunt. Hi persuaserunt mihi formam discorum adventitiae
non fuisse, sed munus significantem in coetu viri agere posse. Quid hoc munus
esse potest?
Coetus cuiusvis amplae aggregati identitatis unitatibus sicut crystallus
considerari potest ex parte corporis in duobus gradibus: primum nucleatio et
postea incrementum sequentis, vel, in lingua magis biochemica, sicut initiatio
et elongatio subsequentis. Processus nucleationis vel ruditer initii — saepe
difficilior est quam incrementum. Sic simplex modus initiationis quo liberum RNA
cum singulis dapibus subunitis interactibus problemata in initii poseit. Saltem
17 subunitates separatae ad moleculum RNA flexibile ligare debebunt antequam
compages linearis aggregata circum se claudere posset ut primum virus helix
formaret. Haec difficultas evitari posset, si discus praeformatus quasi figura
esset in quo paucae primae viralis helix vices convenire possent ad sufficientem
magnitudinem stabilis. Hoc
modus nucleationis helix conventus potest etiam mechanismum agnitionis
praebere per dapibus RNA homologorum eius. Superficies discus constituit
copiam 51 (= 17 × 3) nucleotide ligaturae sitae quae inter se occurrunt cum
speciali detegere basium, inde in ampliato discrimine, quod cum paucis
nucleotidis fieri non potest. Ita visum est ut discus tam physicas quam biologicas
necessitates solvere posset ad incrementum virus promovendum et
specificitatem in commercio conferendam. Haec hypothesis illustratur in Fig.
Versa sunt omnia quae in hoc schemate falluntur, sed tamen animus recte est.
Ut AN Whitehead semel observavit, magis interest ut idea fructuosa sit quam
vera sit.
Haec proposita machina nucleationis requiritur ut discus possit
Machine Translated by Google

84 Chemiae 1982

Fig. 5. Munus orbis sicut primitus concepti: specifica cognitio sequentis specialis (terminalis)
in TMV-RNA conversionem disci formae dapibus in duas vices helicis inchoat;
(Vide Fig. 7, pro mechanismo tandem stabilito).

in duo-vicem helix dislocare ad principium crescentis nucleopro tein virga

formare. Ad hoc probandum, experimentum simplicissimum perduximus, pH
experimentum decidere (19). Hoc ostendit abruptam demissionem pH discos
directe convertendos, intra secundas, in breves helices vel lockwashers (fig.
2), qui ACERVUS inter se dant helices longiores nicked, qui per tempora annea
ad hehces perfectius det. . Conversio haec in situ est una, non requirit
dissociationem ac deinde reassociationem in aliam formam. Successu
experimentum nos hortatus est ut ad experimenta cum ipsa RNA procederemus,
in dapibus naturalis "substrati" viri.
Primum experimenta restitutionis a Butlero facta et ipse dramatica esse
probatur (20). Cum mixtura facta est ad pH 7 viralis RNA et discus praeparatio,
particulae virus integrae intra 10 ad 15 minuta factae sunt, quam per spatium
horarum, sicut factum est in experimentis veterum coeundi in quibus dapibus
fuerat. disaggregated in forma (VI).
Notio quam discus involvitur in processu biologico initiationis naturali,
confirmata est a socio experimentis (20) in quibus conventus RNAs e diversis
auctoribus evectus est. Hi anteponebant RNAs in externis RNAs seu
polynucleotides simplicium seriei, a pluribus ordinibus magnitudinis discorum
viralium. Ita est discus status dapibus, qui ad proprietatem obtinendam in
commercio cum RNA necesse est. In experimentis antea citatis, in quibus
virgae virus fiebant continentes TMV A- interdum et RNA extraneorum (8),
motus in acido pH exercebantur, et sub his conditionibus artificialibus sola
dapibus helicas virgas formare ac ideo nulla rna adesse potuit.

Praeter hunc modum discorum in rate initiationis, quod praedictum erat,

etiam miramur nos apparuisse discos ad augendam distantiam, et idcirco in
incremento se actuosos esse conclusimus. Hoc eventum ab aliis operariis in
campo quaesitum est et adhuc argumento agitur (21, 22), sed recentia inventa
de configura tione RNA in incorporatione in particulam crescentem, de qua
infra, implicationem discorum fecerunt. in elongatione, tum in nucleis, multo
magis intelligibilia.

Discus ergo interdum formationem praebet elementis quae defuerunt

experimentorum restitutionis simplicium utens disaggregatis pro- .
Machine Translated by Google

A. Klug 85

Fig, 6. Postulata structura secundaria ofthr RNA in regione nucleationis (24). Hoc debiliter connexum est caulem duplicem
helicum et aspectum in summitate verisimiliter actualem originem conventus. Sequentia in et prope summam continet
repetita ratio trium basum habentium G in medio situ et A, seu U in exterioribus positionibus.

tein, scilicet celeritatem et proprietatem. Nunc cognovimus quid fecit discus,

tunc interrogatio quomodo fecit?

Commercium disci dapibusi cum initiatione sequentia in RNA

Specificity in initiatione efficit ut solum RNA viralis delectum efficiat pro dapibus
viralibus. Hoc fieri debet a praesentia unicae seriei in virali RNA ad commercium
cum discus dapibus. Zimmern et Butler regionem nuclei quae hic situs
segregavit, dapibus quantitates discorum limitatas suppeditans, sufficiens ad
nucleationem procedere permittit, sed incrementum non sequens, tunc RNA
uncoated cum nuclease concoquens (23, 24). Variis interdum: RNA rationibus
et condicionibus digestionis differentibus, invenerunt seriem RNA fragmentorum
secludere posse, quae omnia nucleum commune unicum cum variabilibus
extensionis ab utroque fine extensionis continebant. Haec fragmenta tunica
interdum cum in forma discorum resilire poterant. Inter hanc multitudinem
fragmentorum erat fragmentum nucleotidum tantum circiter 60 longum - modo
super longitudinem necessarium ad unum discum rotundum ligandum - et
apparuit nucleum minimum repraesentare. Propter validam huius fragmenti
retractationem ad discum reducendum, verisimile videbatur eam "originem
conventus" constituisse, ubi reactionis nucleationis normales incepit.

Nihilominus, opus de RNA productum in vicem alterius aenigmatis: manifesta

exspectatio nucleationis regionem prope unum finem RNA erravisse evasit.
Nucleatio circa sextam partem viae per RNA ab 3' fine (25) fit, ut supra 5000
nucleotides fiant.
Machine Translated by Google

86 Chemiae 1982

Fig. 7. Nucleatio virii conventus fit per insertionem capillorum RNA (Fig. 6) in medium
foveam disci dapibus et inter duas subunitatum ordines. Fascias in summitate dereptionis
alligat ad partem primi vicem pertinens, caulem basi-jugis aperiens et facit ut in brevem
Helixem detrudat. Hoc nimirum « fauces claudit », captans
RNA inter vices subunitatum intermediarum et initium dat nucleoprotein helix (quod tunc celeriter elongare
potest ad magnitudinem aliquam minimam stabilem).

obductis in maiorem partem elongationis (3'-5') et 1000 in oppositum. Adhuc

virgae nucleoproteinae crescentes quae in microscopio electronico observatae
sunt (20) semper inventae sunt omnes RNA incoctae solum ad unum finem:
cur virgae ab utraque parte numquam visae sunt? Hoc conundrum resolutum
venit ex consideratione structurae discorum dapibus, ad quam nunc converto.

Etsi disci structura anno 1977 singillatim soluta est, antecedens in analysi X-
ray dedit sensum quomodo posset cum RNA inter se cohaerere. In solutione
5Å (26) curriculum catenae polypeptidis investigari potuit et ratio fundamentalis
disci constitutae (cf. Fig. 4). Disci annuli superioris subunitae in plano
perpendiculo ad axem disci iacent, inferiores vero anuli deorsum versus
centrum iugo, ita ut duo anuli tantum versus extra discum attingant. In vicinia
foraminis centralis hucusque absunt, sicut patens fauces quae in faucibus RNA
per foramen medium ingredi potuit quasi "mordere" tractum. Ingressus autem
per centrum facilior est quia interior regio interdum, a circum RNA ligamen
interiorem, inordinata inventa est et in structuram regularem non referta.

Prospexit igitur valde ac si discus designatus esset ut RNA per foramen

medium intrare permitteret, efficaciter aucta flexibilitate ansa interioris interdum
et inter bina eius strata intercalata. RNA quae sic initurus utique esset ordo
nucleationis quae longe abest a fine RNA moleculi. Hoc tamen fieri posset, si
RNA retro in se duplicata in puncto prope originem conventus et quasi fasciam
derepta ingrederetur. Re quidem, fragmentum RNA minimum, quod in
nucleatione munitur, sequentiam basim habet, quae in caule duplicato helico
plicare potest cum ansa in summo, id est derepta (Fig. 6). Hoc a Zimmern
proponebatur (24). Fascias et summitas caulis insolitam
Machine Translated by Google

A. Klug 87

sequentia, continens argumentum repetitum trium nucleotidum, cum guanine G

in una positione specifico, et plerumque A vel aliquoties U in aliis duobus. Cum
tres nucleotide ligaturae sitae per dapibus subunitae sint, talis triplex iterum
exemplar ponet basim specificam in certo situ in moleculo interdum et bene
perducere ad agnitionem RNA ansam per discum in processu nucleationis
perducere potuit.

Nucleatio et
incrementum. Hypothesis nucleationis (27) tunc est quod speciale RNA derepta
per medium foraminis disci in fauces insereret a duobus strati subunitis dapibus
(Fig. 7). Dimensiones satis aptae sunt ad hoc evenire et ansam apertam tunc
ligare ad RNA sites ligaturae in interdum.
Plures de instabili duplici caule helico colliquefacti et aperiendi , sicut plus RNA
intra fauces discus nucleandi ligatus est. Nonnulli, adhuc incogniti, notam huius
commercii discus in brevem helicam segmentum dislocare causaret, RNA
capiens et, post celeri additione paucorum plurium discorum (23), primam
particulam nucleoprotein stabilis praeberet.
Posteriores eventus post nucleationem incrementum vocari possunt et, ut
supra dictum est, controversia est de certo modo quo hoc procedit.
Propositum nostrum est elongationem in maiori incrementi directione
verisimillimum esse per accessionem discum ulteriorum, quod quidem
experimenta prima restitutionis nos ad concludendum compulerunt. Configuratio
specialis generata per ansam in medium disci insertionem perpetuari debet ut
virga crescat, RNA per foramen medium sursum trahendo. Ita, elongatio fieri
potuit per similem mechanismum nucleationi substantialiter, nunc tantum, potius
quam postulans speciem nucleationis ansae RNA, occurrit per "panni iter itineris"
quae inseri potest in centrum discus proximi advenientis . . Haec mechanismus
igitur praecipuam difficultatem superat ad cogitandum quomodo totus discus
subunitatum intermediarum cum RNA in Helix crescenti se cohaerere possit.
Exstant nunc plura documenta incrementi per incorporationem caudices
subunitatum rudium discorum magnitudine (22), sed subiectum adhuc
controversiae est et propterea ulterius cum eo non procedo.
Contra, nunc patet experimentalis nostrae hypothesis confirmatio pro
mechanismo nucleationis. Hoc praedicit (1) duas caudas RNA remanere in uno
fine virgae nucleoprotein crescentis formatae, et (2) unam harum caudarum
directe ab uno fine proiicere, altera vero duplicari ab omni via. activum increscens
punctum ad extremam virgae medium foramen crescentis baculi descendit.
Haec utraque nunc confirmata sunt. Circulus Hirth in Argentorati obtinuit
micrographas electronicorum virgarum crescentium in quibus RNA per denatur
ationem partialem diffusa est, et multae particulae duas caudas ab eodem fine
prominentes demonstrant (28). In Cantabrigia collegae mei microscopio
electronico magno resolutioni usi sunt, in qua duo virgarum extremitates a suis
formis cognosci possunt, ut ostendant caudam quidem longiorem esse quae
rursus per virgam crescentem duplicatur (29).
Alia experimenta ostendunt RNA configurationem effectum substantialem in
ratam habere conventus (29).
Machine Translated by Google

88 Chemiae 1982

Consilium et constructione: physica et biologica

requisita Perspicimus formationem orbis dapibus clavem esse mechanismi
congregationis TMV. Dapibus subunitis designatus est non helix infinitam
formare, sed duplicem iacuit clausam variare, discus qui stabilis est et qui
facile converti potest ad formam lockwasher vel helix-iens. Discus igitur
medium sub-conventuum repraesentat, per quod problema nucleandi helicae
incrementi entropically difficile superatur. Eodem tempore nucleatio discus
sub-conventus mechanismum praebet ad agnitionem viralis RNA homologorum
(et rejectionem RNAs peregrinarum) praebens longum spatium nucleotide
ligandi situm ad commercium cum speciali serie basium in RNA. Discus sic
obligatorium intermedium comedit in conventu viri, qui simul implet exigentiam
corporis ad nucleandum incrementum particulae helicae et postulatum
biologicum pro certa recognitione viralis RNA. TMV se congregare, se
nucleare et se-reprehendere.

Morum plures sunt e historia TMV collectae desumptae (1). Primum est quod
distinguendum est inter consilium structurae et processus constructionis usus ad eam
consequendam. Hoc est, dum TMV quasi crystallum helicum spectat et eius consilium se
praebet ad processum simplicium subunitatum accessionis, eius constructio viam implicatam
valde moderatam sequitur. Illustrat punctum quod munus inextricabiliter cum structura
connexum est et quantum uno interdum fieri potest. Intricatissima mechanismus structuralis
evoluta est ad efficiendum et propositum, cuius fundamentum nunc intellegimus. Moralis
generalis omnium haec est, quod non solum natura nostras obvios praeceptiones iterum
confundit, sed satis reliquit nobis clues ut tandem id quod eveniunt perplexe possit. Ut
Einstein olim posuit, “Raffmiert ist der Herr Gott, aber bösartig ist er nicht: Subtiliter Dominus,
sed malignus non est”.

CRYSTALLOGRAPHIC VEL QUARTUS ELECTRON MICROSCOPY

Anno 1955, Finch et I in London, et Caspar, tunc Cantabrigiae, analysin crystallorum

sphaericorum virus X-radii susceperunt. Hi primum a Bernal et collegis suis paulo ante et
post bellum quaesiti sunt, utentes "pulverem" et "adhuc" consequat. Finch et laboravi in rapa
virus Mosaici Flavi et eius concha vacua adiuncta, et virum Gasparum in Tomato Bushy
Stunt. Crick et Watson praedixerant virus sphaericum habere debere unam ex formis
symmetriae cubicae, et ostendimus utrumque virus symmetriam icosaedram habuisse.

Postea, cum Finch et demonstravi polioviros etiam eandem symmetriam habuisse,

intelleximus aliquid subesse principium in opere, eoque casu socium Casparem et me
emittere ut theoriam de virium testarum structura (30).
Cum coetus investigationis meae ad Cantabrigiam anno 1962 movit, ad microscopiam
electronicam convertimus propter celeritatem qua permittit novas res occupare, tum etiam
quod imaginem directam producit, vel sic cogitavimus. Armatus cum theoria viri delineandi
et nonnullis X-ray notis, notionem habuimus quomodo conchas sphaericas virus construi
posse et cogitare possemus
Machine Translated by Google

A. Klug 89

ut subtiliter in electronicis micrographis. Ita sciebamus quid quaerebamus , sed

mox invenimus quod non intelleximus quid petebamus : micrographae simplices
directas specierum hominum imagines non exhibebant. Limites microscopii
electronici mox deteximus. Primum artificiata praeparatio et damnum radiorum
etiam in observatione.
Secundo modo artificialis antithesis amplificationis adhibenda est ut plures
atomi in speciminibus biologicis habent numerum atomicum nimis humilem ad
sufficientem discrepantiam in suo. Tertio, imago formata dependet ab operante
conditiones microscopii et a conditionibus positis et aberrationibus praesentibus.
Ante omnia, propter magnam altitudinem umbilici conventionalis microscopii,
omnes lineamenta secundum directionem visui superim in imagine sunt posita.
Denique in casu fortiter dispergendo vel denso speci- men, multiplex est
dispersio in specimine, quae etiam hanc relationem inter res et imaginem
destruere potest.
Quas ob res singillatim quae in rudi imagine conspicitur saepe leves sunt et
non facile sine methodo interpretabiles, quae emendant operando conditiones
microscopii et quae contributiones imagini a diversis gradibus speciminis
separare possunt. Etiam interest, ut gradum speciminis conservationis in
singulis casibus perpendere possit. Hae rationes pro processu imaginis
micrographorum electronicorum a me et collegis meis per spatium circiter 10
annorum evolutae sunt. Propositum est ex informationibus in micrographis
electronicis commemoratis extrahendi maximam copiam certarum informationum
de 2- vel 3-dimensionalibus structurarum quae ined nito sunt. Aliquae
methodorum applicationes ad varia problemata in laboratorio MRC per primum
15 annos quaesita traduntur in Tabula 1. Electron microscopii cum recretione
imagini coniuncta, ubi fieri potest suppleta.
Machine Translated by Google

90 Chemiae 1982

per X-radii studia in materia humida, integra materia, quae nunc generaliter recepta
sunt exempla ordinationis structurarum permulta systematum biologicorum,
qualia sunt in tabula recensita. In hac lectione paucas exempla describam quae
ad demonstrandam vim variorum technicorum et indolem eventus quos possunt
demonstrare. Pleniores rationes methodorum ac theoriae alibi traduntur (II, 3),
sed hic illustrare volumus has methodos ortos esse e practicis curis et in
progressu problematum concretarum crescentium; nervorum vero late patet.

Reconstructiones dimensivae duae: processus

digitalis computandi studia nostra in virus, tum sphaericum et helicum
incepimus, utentes methodo negationis maculae quae nuper ab Huxley
introductae sunt et a Brenner et Horne (31). Hoc modo specimen inest in tenui
amorpho salis metalli gravis, quae simul servat et mappam regionum e quibus
excluditur figura. Multa subtiliter apparebant, sed in pluribus non facile
sentiebam. Putarunt simpliciter specimina turbata esse, quia positum erat
maculam negativam quasi vestigium particuli dare. Sensim sensimus ortam
esse tumultum, non tam propter perturbationem quam maculam, sed quia
particulae particulae a fronte et aversa superposita erat; id est, maculam totam
particulam involvebat, tam jactum quam vestigium formans. Haec autem
interpretatio duobus modis probata est, quae in parallela procedebat. Primo, in
virus sphaericum, exemplar aedificare et computare vel aliter in proiectione
ostendere posse reperimus et invenimus hoc posse rationem multorum, si non
omnes imagines antea inexplicabiles (32). Singularitas exemplaris probare
potest lubenter experimentis in quibus specimina in euismod et exemplar
eodem modo per angulos magnos iugo sunt (cf. fig. 10, ref.

LXXIII). Secundus accessus applicatus est ad structuras helicas, quae

translaticia ratione periodica sunt, et ideo analysi imaginis rectae se praebent,
quam nunc illustrabimus.
Figura 8a ostendit electronicum micrographum speciminis negativi maculati
"polycapitis", quod est variatio capitis T4 bacteriophagi, maxime dapibus maioris
capitis constans. Particula complanata et sic pristinam formam tubulosam
amisit. Imago clare indicat quaedam structurales periodicas necessitudines,
sed hae difficiles sunt ad discernendum et tales interpretationes adhibitae
iudicio subiectivo relinquantur. Intellexi diffractionem opticam (Fraunhofer)
exemplaris ex tali imagine productam permittere posse analysin obiectivam
omnium periodicorum quae praesentes efficiendae sunt (33). Hoc ostenditur in
Figura 8b. Patet hic diffractio maxima videri potest: hi cadunt in duos terminos qui esse possunt
ex propinquis et longinquis partibus speci- men oriunda reputantur. Hoc modo
statutum est maculam negativam potius quam unum vestigium lateris illius
particulae integram producere (33). Cum haec structura helice periodica sit,
diffractio maxima in cancello posita est et ideo genuina repetens lineamenta
intra structuram eligunt. In
Machine Translated by Google

A. Klug 91

Fig. (a) Micrographus micrographus negative maculatus particulae complanatae x 200,000.

(h) Optical diffractionis exemplar (a), circulis circumducta diffractionis cacumina

correspondentes uno ordine structurae.
(c) Imago sacci unius tabulati in (a) larva diffactionis in persona (b). Aperturas in
larva eliguntur, ut fere hic localiter tantum extendit super paucas cellulas unitas. Moles singulae in hcxamers
dispositae videri possunt.

hic casus regularis diffractionis maximae extensa est ad spatium circiter XX ,

quo demonstravimus longum ordinem in specimine huic resolutioni conservatum
esse, quod quidem sufficit ad singulas interdum culas molas componendas.

Confusio imaginis late ex superpositione particuli propinquorum et longe

laterum, et quaelibet talis pars eliquari potest in systemate optica a persona
convenienti posita, quae tantum radios diffractos desideratos transmittit (34). .
Imago eliquata, figura 8c, statim interpretabilis est secundum certas dapibus
molecularum dispositiones (35).
Claritas imaginis processionalis inde etiam derivatur quod sonus curriculi in
diffractione exemplaris eliquata est. Hic strepitus oritur propter singulas
variationes inter moleculas in specimine, id est inordinationem, quae passim in
omnibus partibus diffractionis conferunt. Re vera, quod factum est, signum est
quod rationi soni in imagine auctum est, fere supra exemplaria molecularum
quae in dispositione sunt. Haec notio permultis exemplaribus repetitae motionis
media est ad potentissimas artes evolutas usque ad certas imagines speciminum
biologicarum producendas, et tres rationes dimensiones quas postea
describemus hac etiam arte uti possunt.

Essentia imaginis huius generis est processus, quod est processus duplex
post primam imaginem consecutus est. Primum Fourieriani transformationis rudis
Machine Translated by Google

92 Chemiae 1982

imago producitur. Fourieriani coefficientes tunc manipulantur vel aliter corriguntur

et iterum transformantur ut imaginem reformatam repraesentent. Hae
operationes in computatro digitali facillime peragi possunt, et processus
imaginatio digitalis ut primum a DeRosier et me inducta (36), multo maiorem
flexibilitatem concedit quam methodus optica originalis et tres rationes
dimensiones possibilis facit.

Primum exemplum in tres-

dimensionales reconstructionis exemplum quod dedi (Fig. 8) est casus simplicis
relativi ubi problema essentialiter est a contributionibus separandi a duobus
laminis crystallinis imbricatis et vidimus quomodo methodus analysin Fourieriani
superpositionem in resolvit. spatium reale in separatis mutationibus
contributionum in spatio Fourieriani. Attamen iam ex simplici analysi virus
sphaericis liquet quod ad imaginem unicam vel certam trium dimensionis
structurae accipiendam, specimen ex permultis diversis partibus videre poterit
(32). Haec diversae opiniones saepe a speciminibus in diversis orientationibus
iacentes praebebantur, sed etiam perspiciuntur per speciem speciminis in
microscopio, ut supra dictum est. Primitus, ut supra dictum est, variae opiniones
ab aedificatione exemplorum interpretatae sunt, sed tandem vidi imagines
transmissionis in diversis sententiis positas componi posse obiectivum ad
restitutionem obiecti trium dimensivarum.
Hoc factum est cum DeRosier et caudam bacteriophagi T4 investigabam et
nostra analysin monstravit additamenta imaginis ex structura interna tum a
superficiebus anterioribus et retro (36). Ad operari in tribus dimensionibus
formam generativam processus eliquationis dimensionalis inveniendam oportuit,
et - nexum cum analysis X-radii faciendo - intellexi quod opus est synthesis
Fourieriani tria dimensiva. In analysi diffractionis X-radii exemplarium TMV,
usus sum idea structuram helicam ex statuto functionum harmonicarum
cylindricarum mathematice aedificari posse; relatio est inter numerum functionum
quae obtineri possunt et numerus diversarum sententiarum in promptu. Quisque
nova sententia esset
insuper harmonicas frequentia localium superiorum adjiciant, et ideo, si satis
visum fuerit, integram structuram edificare possit. Postea videndum est (36)
hanc synthesim tantum fuisse specialem theorematis generalis theorematis
crystallographis notis ut theorematis proiectionis.
Methodus generalis reconstructionis quam evolvit (Fig. 9) innititur proiectionis
theorematis, quae affirmat duplicem dimensionem Fourieriani transmutationem
plani proiectionis densitatis trium dimensivarum idem esse cum sectione centrali
trium respondentium. —dimensional trans- form normal to the direction of
visum. Tres dimensiones can
quare sectio construatur per sectionem transmutationes diversarum opinionum
obiecti, et tres dimensiones reconstructione tunc a Fourierio inversione
productae. Magni momenti notam methodi est quod unum docet quot variae
sententiae requirantur ad solutionem requisitam et quomodo hae reponendae
sint in tres dimensiones obiecti (36, 37). Processus tam quantitatis quam ab
arbitrariis suppositis est immunis. Accessus similis est
Machine Translated by Google

A. Klug 93

Fig
prominentia (36).

ad crystallographiam conventionalem X-radii, nisi quod augmenta diffractionis

exemplaris X-radii directe metiri non possunt, hic autem ex imagine digitali
computari possunt. Nisi ob radiorum damnum, variae sententiae ex una particula
colligi possent utendo gradu in microscopio, sed pluribus particulis in diversis
identificabilibus orientationibus magis realistice adhibendum est. In genere,
expedit notitias e diversis particulis coniungere, ut imperfectiones Curabitur ex.

Methodus Fourieriani unus est tantum modus ex pluribus ad solvendas

aequationes mathematicas quae incognitae tres densitatem dimensivam referunt.
Machine Translated by Google

Chemiae 1982

directio sem axis

Fig. 10. (a) Micrographae electronicae eiusdem campi de particulis verruci humani virii (HWV) ante (i) et post (ii) speciminis
eiectis per angulum prope inclinatis.
to (73). x 100,000.
b) Tria dimensiva imago virus verruci humani restitutum (38, 39). Prope est ostensum
subest cancelli superficiei icosaedralis (30) verticibus 5-plicaribus et 6-plicabilibus notatis.

distributio cum proiectionibus notis in varias partes (37), sed re vera nulla alia methodus certa
superior esse monstrata est et in CAT Scanner adhibita est. Modus autem Fourieriani
commodum habet quod quia in gradibus exercetur, id est formatio duarum dimensivarum
mutationum, et tunc recombinatio in tribus dimensionibus, fieri potest, ut supra dictum est,
perpendere, eligere, et corrigere notitias ire. ad ultimam refectionem.

Multae applicationes factae sunt. Prima applicatio erat quidem ad caudam T4 phage, in qua
quaestio orta erat. Particulae symmetriae helicae rectissimae sunt ad reficiendum, quia
reconstru- tio potest fieri ex unico totius particulae intuitu, ad determinatam resolutionem, quae
helix symmetria posuit. In physicis verbis, hoc est quod una imago particulae helicae multas
diversas opiniones repetendi praebet
Machine Translated by Google

95
A. Klug

subunita, et haec simplicitas erat quae nos caudam phage uti primum specimen pro
3-D imaginis reconstructione duxi. Fere plures quam una sententia necessaria est,
sed quaelibet symmetria praesens numerum requisitum reducet. Typi tico ad virus
icosaedral minutum, tres vel quattuor sententiae sufficiunt, sed plura specimina
investiganda sunt antequam numerus conveniens inveniatur et fere peractus sit (38).
Exemplum ex Crowther et Amos (39), in fig.

Phase discrepantia
microscopia microscopia electronica, cum aliqua methodo analyseos imaginis
coniuncta, speciminibus maculatis negative applicata, specimen probavit ad
determinandum dispositionem et figuram parvarum subunitarum in vestimentis
naturalibus vel artificialibus, inter duo crystalla dimensiva et coetus macromoleculares
sicut virus. et microtubules (2). Informatio structilis obtinebilis probavit valde locuples
quoad singula usque ad 20Å15 circiter gradu. Patuit tamen, granularitatem maculaeor *
negativae et fidelitatem cum qua superficiem speciminis consequitur, gradum
revelatum limitatum esse (40). T o multo altioris solutionis informationes obtinere,
melius quam circa 10 , quis cum labe et dapibus ipsum dapibus considerare debet. In
summo proposito secunda quaestio est: damnum irradiatio. Hoc minui potest per
excisionem trabem illuminantis, sed statistica vox augetur, et imago rudis minus et
minus certa fit. Sed haec difficultas satis superari potest per imaginando ordinatas
molecularum vestes, ut informationes e diversis culculis moleculae aestimari possint,
ut supra dictum est, ad imaginem peraeque signantem reddendam. Prima quaestio
de reponendo labem negativam, vitando tamen siccitatem drationis, duobus modis
solvi potest. Una, nunc intensive pervestigata est, speciminibus hydratis congelatis
utatur (41). Secunda methodus probata est Unwin et Henderson, qui, radicali accessu
ad determinandum structuram speciminum biologicorum immaculatam per microscopia
electronica (42, 43) solutione glucosi siccatae ad conservandam materiam usus est.

Inde quaesitum est quomodo hoc specimen immaculatum, ad electrons efficaciter

pellucidum, subjiciatur. In luce microscopia transparis speciminum notae Zernike
phase antithesin methodi adhibita est. Hic periodus radiorum dispersorum ad trabem
sparsam per Phase laminam transfertur et deinde radii disjecti et illigati permittuntur
in planum imaginem ad imaginem producendam intromittere. Prosperum Phase
electrostaticae discrepantiae fabrica microscopio electronico, admodum analogo ad
laminam Phase in levi microscopio adhibito, ab Unwin (44) constructa est; Modus
practicus producendi Phase discrepantiam in microscopio electronico simpliciter
memorare imaginem, cum obiectiva lens undcrfocussus, et haec fuit methodus usus
ab Unwin et Henderson.

Oppositio defocussing periodus methodus orta est e studio academico ab Erickson

et me de formatione imaginis in microscopio electronico (45). Hoc susceptum est
propter controversiam quae de natura ipsius imaginis rudis elaborata est. Cum tres
dimensionis imaginem refectionis
Machine Translated by Google

96 Chemiae 1982

inducta et applicata particulis biologicis in macula negativa immersis, obiectiones a variis

operariis in scientia materiarum campo, assuetis dynamicis effectibus in materias valde
spargentes, ad praemissam imaginem essentialiter repraesentabant simplicem
proiectionem distributionis maculae. . Quaesitum est an multiplex vel dynamica dissipatio
hanc assumptionem non vitiet. Ad hanc quaestionem investigandam, Erickson et studium
experimentum suscepi negativae tenues crystallis catalasii maculatas tamquam
functionem profunditatis focussing (45). Invenimus theoriam linearis seu primi ordinis de
formatione imaginis explicaturum fere omnino mutationes in imaginis Fourieriani
transformatione. Conclusimus directam imaginem, idoneam valorem underfoci dependens
ab usuris frequentiae, validam esse imaginem proiectionis densitatis objecti. Cum maiora
underfoci valores ad antithesin augendam adhibiti sunt, imago corrigi potuit ad imaginem
validam reddendam.

Hoc studium, licet in media solutionis extensione conclusum, demonstrationem

practicam inclusit, quod processus imaginis digitalis posteriori adhiberi posset ad
metiendum et compensandum effectus defocussandi, et innuebamus accessum hunc
posse directe extendi ad altam resolutionem ad compensandam. pro effectibus
aberrationis sphaericae necnon defocussionis. Etiam opportunus modus ad producendi
phase antithesin in microscopio electronico in speciminibus integerrimis praebet. Imago
lens underfocussus obiectiva commemoratur, ita mutatis gradibus radiorum sparsorum
respectu trabis sparsi (vel ordo nullus). Defocussus autem non agit ut laminam perfectam
Phase analogam cum Zernike, cum incrementa non omnes tantundem mutentur, et
nexus frequentiorum localium ad imaginem alternatim contra positivos et negativos
conferant. Ad imaginem "veri" producendam, electronico imago discursum est ad
translationem microscopii contrahendam corrigendam, ita ut omnes frequentiae locales
eodem signo discrepantiae conferant.

Ad spectaculas suas spectaculas tres dimensivas imaginem membranae purpureae

Halobacterii restitutae ad solutionem circiter 7 Å (44), Hender filius et Unwin sumpsit
seriem imaginum vilissimarum dosis diversorum membrorum in diversis angulis collatis.
Ultima tabula medium repraesentavit supra aliquot 100,000 moleculas. Parva copia
antithesis in micrographis indivis ualis producta est a underfocussing quae tunc
compensatur in refectione computatrali per modum supra descriptum. Primum interna
structura dapibus moleculae ab microscopio electronico "visa est".

DE STRUCTURA CHROMATIN

Opus de virus eventus dedit non solum interest intrinsecae, sed, ut supra demonstravimus,
difficultates occupandi magnas aggregationes hypotheticas ad progressionem
methodorum et technicarum, quae aliis systematibus applicari possent. Recens
accessionis exemplum, et quod non sine priore usu venisse puto, chromatinorum est.
Chroma-
Machine Translated by Google

A. Klug 97

stannum nomen datur ad materiam chromosomalem extractam. Maxime in DNA, cum

pari pondere arcte coniungitur, parvae re- cipuae servolis appellatae histonae. Studium
chromatin Cantabrigiensis ante decem fere annos suscepimus cum chemici dapibus
chemici tantum quinque principales generum histonum esse ostendissent, apparentibus
proliferation specierum ob modificationes post-syntheticae, ita ut quaestio structuralis
tracta bilis appareret. .

DNA chromosomatum eukaryoticum probabiliter unum moleculum est, plures

centimetras in longitudine, si rectas expositas habeat, et valde complicatas esse
debet ut structuram compactam in chromosomate videre possit. Simul ordinatur in
singulas unitates geneticas vel functiones, et modus quo haec plicatio obtinetur,
genesis ordinatae et eorum expressio, intensum studium per totum mundum est
subiectum. Coetus investigationis nostrae propositum fuit ut intellegere conaretur
structuralem ordinationem chromatinorum in variis ordinibus comprehendere et videre
quaenam coniunctiones cum iis effici possent.
munus regens.
Magnum pondus, in quo historici occurrunt, suadet munus suum esse
structural, et annis 1972-1975 ostensum est quattuor histonos H2A, H2B, H3 et H4
in primo gradu organisae structurae chromatin. Seg- menta successiva DNA circiter
200 paria basin longa plicant in corpora compacta circiter 100 diametro, quae
nucleosoma vocantur.
Filum nucleosommum vel iteratio unitatum ita creatur et cum eae arcte confertae
filamentum fere 100 diametro efformant. Quintae histonis H1 munus primo non liquet.
Multo ergo magis variatur per ordinem quam alia quatuor, utpote species et textus
speciei. Annis 1975-1976 docuimus HI curare de plicando filamentorum nucleosomc
in gradum altiorem organizationis, et postea quomodo hoc munus expleverit.

Hoc loco non est singillatim exponere quomodo haec imago fundamentalis
ordinationem chromatin emersit (4), sed idea nucleosomi orta est ex conversione
plurium diversarum operis. Primae notae ad structuram regularem accesserunt ex
diffractione studiorum X-radii in chromatin, quibus monstraverunt debere esse aliquam
iterationem unitatis, licet non bene ordinatam, in libra circiter 100 Å (46, 47). Primum
documenta biochemica regularitatis ex opere Hewish et Burgoyne (48) orta sunt, qui
ostenderunt DNA nucleases in rat iecore secare posse DNA in multiplices magnitudinis
unitatis, quod postea Noll, diverso enzyme, micrococcali utens, monstravit. nuclasc,
ad 200 circiter basin paria (49). Quod nuclcascus DNA chromatis stagni secat locis
regulariter distantibus, actioni suae gratis DNA satis dissimilis, tribuitur eo quod DNA
ita complicatum est, ut solum breves liberae DNA spatia inter haec complicata faciat.
unitates in enzyme. Tertium testimonium, quod ad notionem nucleosomi perduxit,
observatio fuit Kornberg et Thomas (50) duas histonas valde conservatas, H3 et H4,
in solutione exstitisse ut certae oligomrr, tetramerus (H3)2( H4 ) 4, qui magis factitavit
sicut dapibus globosis multi- gregariis subunitis. Ratione habita harum variarum
testimoniorum, Kornbrrg anno 1974 (51) definitum exemplar proposuit chromatin basic
unitas quasi capita circiter 100 diametri;
Machine Translated by Google

98 Chemiae 1982

continens tractus DNA 200 basium jugorum longorum condensatorum circa nucleum
interdum e moleculis histonum 8 factis, nempe (H3) 2(H4) 2 tetramer et II "
singulae H2A et H2B. Quintus histonus, H1, extrinsecus cuiusque nucleosomi
quodammodo fuit coniunctus. Prorsus inopinatum exemplar erat quod DNA
"histonum" "linivit" potius quam e contrario.
Autem, anno 1972, cum Kornberg Cantabrigiam venit, haec omnia in futuro
iacuerunt. Disfractionem X-ray incepimus sequi restitutionem histonum et DNA,
quia exemplar X-radii a nucleis datum, vel chromatin ab eis segregatum, prout erat
limitatum, solum tentare tunc praesto erat ut sarcinam ordinatam sequerentur. ad
DNA. Haec studia X-radii demonstraverunt fere 90% restitutionem fieri posse cum
DNA simpliciter mixta cum praeparatione totali histonis non fracto, sed omnes
conatus chro matin noviter permixti DNA cum statuto omnium quattuor purificatorum
unius speciei histonis defecerunt; quasi processus quo separabantur histones
denatur. Lenioribus igitur methodis extractionis histonicae quaesivimus, et nativam
structuram facile emendari posse comperimus, si quatuor histonae simul in duobus
binis, H3 et H4 simul, et H2A et H2B simul, sed non semel distincti fuissent. Hoc
opus erat quod Kornberg perduxit ad investigandas ulteriores proprietates
physicochemicae histonum et ad inventionem (50) tetramerorum histoni (H3)
2(H4)2, quae vicissim eum ad exemplar nucleosimi de quo supra. .

Constructio nucleosomi
Accedit ut digestio nucleasi et X-radii dispersa in specimina chromatinorum vel
nucleosomm non orientea in solutione aliquas notas nucleosomi revelare potuit,
sed plena descriptio structurae nonnisi ex analysi crystallographica provenire
potest, quae completa tria dat. -dimensional structural notitia. Aestate anni
MCMLXXV collegae mei sunt et idcirco aggressus sum nucleosomos praeparare in
formis crystallisationi congruentibus. Nucleus quidam e nucleis micrococcalis
nuclease purgatus mediocris circiter 200 paria nucleotide DNA continent, sed latior
est distributio circa medium, et haec praeparatio non satis est ad crystallizandum
homogenea. Attamen haec variabilitas quantitatis per ulteriorem digestionem cum
nucleaso micrococcali eliminari potest. Cum actio nucleasi micrococcalis in
chromatin inter nucleosomatos primum inhaereat, deinde ut exonuclease in
nucleosoma exciso agit, primum DNA usque ad circiter 166 basium paria brevians,
ubi in digestione brevis est mora (52), et dein circa 146 basin binae, ubi in
concoctionibus patet planities, antequam plus degradationis fiat. In hoc ultimo
gradu histonus Hl solutus est (52), relicto ut intermedio majore mestabili particulam
continens basim 146 paria DNA cum moleculis histonis statuto 8 implicatam.

Haec enzymatice forma nucleosomi reducta appellatur particula nucleus et eius

DNA contenta in multis diversis speciebus constans inventa est. DNA digestionem
prolixam remotam, quae prius unum nucleosmum ad proximum coniunxerat, DNA
ligans appellatur.
Particula igitur cori continet longitudinem bene definitam DNA et is
Machine Translated by Google

A. Klug 99

homogenea in interdum compositione sua. Praeparata particularum nucleorum natura crystallizare

conati sumus, sed primo probabiliter non fuimus propter parva vestigia quinti histonis Hl. Tandem
collega meus Leonardus Lutter viam invenit ad producendas praeparationes particularum
nucleosomm eximie homogeneas, et hae formaverunt bonum crystallum unum (53).

Conditiones crystallorum crescendi in crystallising transfer-RNA superiore experientia fundatae

sunt, quia cogitabamus bonam superficiem nucleosomi partem DNA constare. Haec experimenta
biologorum forsitan mirantur in ostensione dramatica fere omnia DNA in nucleo modo admodum
iusto constituto.

Derivatio trium dimensivarum structurarum e crystallo complexi magnae hypotheticae est,

sicut in orbe TMV, processus qui multos annos capere potest.
Intendimus igitur ad obtinendam imaginem nucleosomi particulae humili resolutionis per X-radii
diffractionem et microscopii compositionem, ubi fieri potest per studia biochemica et
physicochemica suppleta. Primum fasciculum in crystallis solvimus per micrographas
electronicorum tenuium crystallorum examinando, et deinde proiectiones densitatis electronici
per tres principales axes crystallorum, utentes diffractionem X-radii amplitudinum et electronicorum
augmentorum microscopiorum (53, 54). Particula nucleosoma nuclei evasit objectum discum
informatum, circa 110 Å by 110 by 57 , aliquantum cuneatum, et in duas ordines valde divisum.
proposuimus

exemplar in quo DNA vulnerabatur vices vadum

superhelix picis circa 27 circa histonum octamcr. Ita fere 80 nucleotides in utroque tractu
superhelix sunt. Hoc exemplar pro organi satione DNA in nucleo nucleoso etiam explicationem
praebet proventuum quorundam enzyme digestionis studiorum in chromatin (53, 55) ita
ostendens id quod vitreizavimus, essentialiter nativam structuram esse.

Prima crystalla consecuta inventa sunt habere in iis renes histonicos partim proteolysos, at
eorum proprietates physicochemicae simillimae manserunt illis particulae integrae. Crystalla iam
adulta habemus ab nucleis integris nucleosomm, quae ad resolutionem circiter 5Å distrahunt et
in progressu accurata analysi sunt (56). Annis Daniela Rhodes, Ray Brown et Barbara Rushton
creverunt crystallis nucleorum particulis septem diversis organismis praeparatis: omnes
exemplaria essentialiter identica X-ray praebent universalitate nucleosomm testificata. Axis
symmetriae est dyas intra particulam, quod mirum non est, cum 8 histonae in binis occurrunt et
DNA cum axibus localibus dualitatem obstringitur. Princeps angulus diffusus X-radius e crystallis
dispersus ostendit DNA particulam cori esse in forma B-.

Electron density map unius e praecipuorum proiectionum crystalli in Fig. Haec tabula totam
densitatem dat in nucleosome, densitatem DNA ab illa dapibus non distincta. Conlationes
interdum et DNA distingui possunt utendo neutroni dispergendo cum methodo variationis
antithesis et tali studio incohatum est a John Finch et coetus in Instituto Laue Langevin, Grenoble,
cum satis magna crystalla suppeterent (57). .

Tabulas DNA et interdum in tribus prominentiis principalibus consecuti (vide Fig.

Machine Translated by Google

100

Fig. II. Fourieriani proiectionis mappis nucleosomi particulae nuclei. (a) Tabula ex X-ray data (56); (b) et (c) ex
neutrorum notitia dispersa utens variatione antithesi (57): (b) DNA component cum
semita superhelix densitatis superimposita; (c) the dapibus core component.

11b et c). Tabula DNA congruit cum proiectione conversionum

superhelicarum circa sicut antea propositas, et tabula dapibus ostendit ipsum
histonum octamerum cum figura cunei consentaneum esse.

Tres imaginis dimensivarum refectio histonis octamerorum et localium

histonum
interiorum dispositio Vel jocus ad DNA contributiones secernens et interdum
per diffractionem neutronis histonum octamerum directe studeat. Histon oc
domitor, qui nucleum interdum nucleosomi format, in solutione in sale magno,
qui DNA diducit, exsistere potest in illa forma libera (58). In decursu crystallize
temptata, aggregata ordinata - structurae tubulares concavae - per microscopia
electronica investigata sunt (59). Imago methodi refectionis supra descripta
adhibita ad solutionem trium dimensivarum tabularum et exemplar octamerorum
humilem producere solebat (fig. 12a). Ut perscriptio quod remotio DNA non
mutaverat structuram octamerorum histoni, proiectiones huius exemplaris
computatae et comparatae sunt cum proiectionibus nuclei intermedii nucleosimi
consecuti e neutro discursu studiorum, de quibus supra dictum est. Bona
concordia inter tres tabulas ostendens crassam structuram non mutatam esse.

Ad solutionem anlysis (20 axem ostensum est quod histon octamer

symmetriae duplicem habet, sicut ipsa particula nucleosomes. Sicut nucleus

nucleosome, histon octamerus est particula cuneata characteris bipartiti. Eius
peripheria systema iugiorum ostendit. aggerem helicum continuum diametri
externae plus minusve 70 et picem circiter 27 , ei prorsus aptam ad agendum
sicut FUSUS in quo vulnerari posset circa vices superhelix DNA in propriis
dimensionibus (Fig. 12b).
Machine Translated by Google

A. Klug 101

Fig. 12. (a) Exemplar octamerorum histonis ex micrographis electronicis retractationis

imaginis trium dimensivarum obtentum (59). Axis dyas signatur. lira in peripheria exemplaris formae
utebatur helica aggerem in quo 1 3/4 ad 2 vices superhelix DNA vulnerari posset.
(b) The histon octamer structure (a) cum duabus vicibus de DNA superhelix circumvoluto.

(Nota quod ad claritatem, diameter fistulae plasticae minor quam scala vera pro DNA electa est.) Distantiae per DNA indicantur numeris -7
ad +7, axi dyad originis sumendo, ad notandum XIV. repetit duplicem helicem, quae in 146 basi nuclei nucleosmi continetur. Singulorum
histonum variis locis ad exemplar adsignatio est

de quo in textu.

Resolutio octamae tabulae nimis humilis est ad singulas moleculas histonas

definiendas, sed relationem octamerorum ad superhelix DNA in singulis
histonibus interpretandi sumus (59). Haec interpretatio eventus Mirzabekov
eiusque collegae utitur (60) in cruce chemica nexus histonum cum DNA
nucleosomal, ac etiam informationes de histonellis histonicis propinquitatibus a
interdum transversis datos. Haec notitia sine exemplo trium dimensiva certo
inter se fingi non potest, quia cognitio punctorum contactuum histonum
secundum filum DNA non sufficit ad dispositionem spatialem histonorum in
nucleo nucleoso figere. Praeterea, cum duae vices superhelicae DNA inter se
cohaerent, exemplar histonum/DNA crosslinks non est necesse directe
considerare ordinem histonum secundum DNA linearem. Tabula densitatis tres
dimensiva numerum possibilitatum restringit et electiones faciendas dat.

In dispositione spatiali proposita, ramus densitatis helicae in tabula

octamerorum componitur ex peculiari serie octo histonum, ordine H2A-H2B-H4-
H3-H3-H4-H2B-H2A, cum dualitate in medium.
In (H3) 2(H4) 2 tetramer figuram habet discus prolapsus vel singula vice a
Machine Translated by Google

102 Chemiae 1982

helicoid, quod superhelix DNA vertentem centralem definit. Constructio pro

histonis tetrameronis inventa plurium operarum explicat, observationibus
originalibus Felsenfeld (61), quod H3 et H4 solum, absentibus H2A et H2B,
nucleosomi-modi possessiones in DNA conferre possunt, praesertim
supercoilantes. et resistentia ad digestionem micrococcalem, sed H2A et H2B
sola non possunt. Etiam dissociationem asymmetricam octamerus histonis
explicat cum intentio salis deprimitur: octamer dissoci.
ates, per medium hexamericum, in a (H3)2(H4) 2 tetramer et duo H2A.H2B
dimers (58, 62).

Munus H1 et altioris ordinis structurae

Haec studia satis accuratam imaginem structurae nucleosimi internae dederunt,
sed usque dum 1975 nulla adhuc clara notio relationis unius nucleosimi ad
alterum per catenam nucleosam vel chromatin fila mentum fundamentalis erat.
neque proximi altioris ordinis. Per aliquod tempus notum fuerat fibrarum
crassitudinem in studiis microscopicis electronicis observatam specimina totius
montis chromosomatum ab 100 ad 250 diametro variata, pendentes sive
fraudantes in praeparatione adhibita vel non. Hoc ut sensus, Finch et
experimenta quaedam in vitro de brevibus chromatin confectis per brevem
digestionem nuclei micrococcalem confectam (63). Coram detrahendis agentibus
chromatin indigena haec apparuerunt sicut filamenta aequabiliter 100Å diametri.
Cum adiectae sunt Mg++ iones, hae in crassiores, fibrae nodi circiter 250-300
diametri, inter se transverse striatae inter intervalla circiter 120-150 , apparent
in vices ordinatae, sed non perfecte regulares vel helix. supercoil.

Cum vocabulum "supercoil" iam alio in contextu adhibitum est, id solenoidum

appellavimus, quod vices inter se distantes erant. Ratione habita harum
micrographarum et studiorum sodalium X-ray (64), secundo gradu plicarum
chromatinorum suggessimus per flexuram filamentorum nucleosmi in helicum
libre cum fere 6 nucleosomes per vices consecutum.
Invenimus autem cum eadem experimenta in H1- percelli chromatin peracta,
filicum tantum irregulares formatum esse, ostendentes quintum histonum H1
opus esse ad constitutionem seu stabilizationem libri ordinati.
compages.

Haec experimenta nobis narraverunt planum in quo H1 munus suum chromatin

condensationis exercet, sed modus quo molecula H1 mediante gyro filamentorum
100 in 300 libre tantum patuit postea collatis testimoniis e biochemisticis, ex. de
analysi crystallographica, et ex observationibus microscopii electronico magis
renitentibus.
Ex observationibus digestionis nuclease, coniuncta cum notis X-radii structura
nuclei nucleosmi, deduci potest ubi Hl in nucleosmo perfecto esset.
Memoravimus in chromatin micrococcali nucleasi inter 166 fere paria DNA
basium esse intermediam et per hoc passum ab 166 ad 146 paria basium Hl
liberatum esse (52). Cum basi 146 paria particulae vices superhelicae
correspondent, ideo suggesserunt 166 basim coniugalem esse particulam
Machine Translated by Google

A. Klug 103

Fig . _ _
vertit, dein 166 basin particula respondet circa 2 vices superhelicae plenae. Cum autem 166 basis coniugationis
particula sit terminus punctus pro retentione H1 (52), collocari debet ut ostensum est. (Bottom)
Schematica schematis de filamentis nucleosomi humilis viribus ionicis, originem obliquam ostendens
compages (fig. 14). In iure extractionis variatio obliqua structurae quae saepe observatur ostenditur: hoc formatur
nucleosomo per 180° circa axem filamentum.

binas vices DNA continet (53). Hoc duos fines DNA in nucleosomo inter se
coniungit ut utrumque cum eodem moleculo H 1 coniungi possit (Fig. 13).
Particula constans ex histono octameris et 166 binis basinensibus
chromatosome (65) appellata est et a nobis et aliis indita est ad constituendum
chromatin elementum fundamentale structurae. In hac particula, H 1 igitur
esset ex parte nucleosomi in regione introitus et exitus DNA superhelix.

Sequitur hic locus in logica: sed fuitne histone H 1 vere ibi? Tametsi H 1
nimis parvum est moleculum ut microscopio electronico directe conspiciatur,
eius positio in nucleosomate colligi potest ex effectu ex specie chromatin, in
media latitudine inter C nucleosmum filamentum et 300 Å solenoidale. fibra.
Hae periodi intermediae in processu systematicae studii a Thoma et Koller
detectae sunt (66), valvae chromatinae cum ionicis viribus auctae. salibus
monovalentibus magis quam divalentibus adhibendo, varias structuras
demonstrabant compactionis gradus auctos sicut vires ionicae levatae erant.
Ita, ex filamento nucleosomm circa 1 mM, amplitudo structurae augetur per
familiam structurarum intermediarum helicarum, donec, per 60 mM, compages
compacta 300 fibrarum formata est, in omnibus identicis cum Finch et ipse
primitus observatus. .

Locus Hl deduci potest considerando differentiam structurarum in vi ionicarum

vi l-5 mM observatarum in praesentia vel
Machine Translated by Google

104 Chemiae 1982

Fig. Cum H1 est

praesentem primam cognoscibilem structuram ordinatam esse (a) laxa obliquum est in qua DNA intrat et
nucleosomcum in locis propinquis relinquit; ad altiorem aliquantum salis concentratio (b) obliqua arctior est. In
absentia H1 nullus ordo est in sensu certae directionis filamento; (cattus
inferiores concentratio salis, globuli nucleosimi non amplius conspicui, compages aperta ad fibra DNA cum
histonibus obducta est; (d) in altiori ionica vi, globuli denuo conspicui sunt sed DNA plus minusve temere
nucleosomum intrat ac relinquit. In bar represents
100 um.

absentia H1 (Fig. 14). In chromatin continente H1, structura ordinata conspicitur

in qua nucleosomes in obliquum regulariter disponuntur cum planis faciebus
suis in subsidiis craticulae descendentes. Forma obliqua oritur quia DNA intrat
et relinquit nucleososos in locis coniunctis, sicut crederes ex compositione X-
radii et argumenti biochemici, de quo in ultimo paragrapho (fig. 13). In chromatin
infrequenti H1, introitus et exitus puncta plus minusve in lateribus oppositis et in
casu quovis passim locantur. Re vera, ad ionicam vim demissam, structura
nucleosomata evolvit formam linearistam in qua singula capita non amplius
videntur. Cum H1 praesens hoc impeditur. Conclusimus igitur H1, vel stricte
eius partem, situm esse et stabilimenta, regionem in qua DNA intrat et
nucleosmum relinquit, ut praedictum est.

In obliqua intermedia H1 regiones nucleosomes adiacentibus apparent

Machine Translated by Google

A. Klug

Fig, 15. "Explicatae" sententiae nucleosae, partes histonorum constituentium ostendentes. Resarcio in nucleo
histonis locos singularum moleculis histonum indicant, sed limites
inter eos noti sunt et sic signata sunt. (a) (H3) 2( H 4 ) 2 tetramerus formam claui fullonis habet et ut FUSUS
70-80 bp of DNA agere potest, circa unum vice superhelicum efformans. (b) H2A.H2B dimer socii una facie
tetrameri. (c) H2A.H2B dimersae facies oppositas singulas ligant 30-40 bp DNA, vel dimidia vice superhelicam,
ut particulam integram reddat. histon HI correspondent cum unica DNA in the . conformatione

ingressum et exitum demonstrat obsignandum nucleosium.

Machine Translated by Google

106 Chemiae 1982

propinqui aut tactus. Nos igitur suggesimus, crescentibus ionicis viribus magis
regionum Hl inter se mutuo se cohaerentium, tandem in polymerum helicum per
centrum solinoidi aggregatum, et sic eius geometricae formae rationem.
Polymerus H1 quidem demonstratum est experimentis chemicis transversis in
vi tam humilis quam alte ionica (61), sed restat demonstrandum ea in centro
libri locata esse.
Praecipuum autem punctum est, quod videtur esse aggregatio H1, quae
comitatur, et quidem moderari potest, formationem 300 fibrarum.

Partes histonarum
Ex dispositionibus moleculis pro histono octamerorum et ex loco deductis pro
histono H1 propositis, videre potest (59) partes singulorum histonarum in
plicandis DNA in nucleosmo (fig. 15) . The (H3) 2(H4) 2 tetramerus figuram fere
unius helicoidis vertentis habet et haec media vice DNA superhelix definit. H2A,
H2B addunt heterodimeros duos, H2A.H2B, H3-H4 tetrameros unum in utraque
facie, ligans quodlibet DNA dimidia vice extrahens, perficiens utrumque
superhelix. Denique H1 tunc ligat ad singularem regionem ad latus duarum
vicissim particulae, ubi tria DNA segmenta conveniunt, stabiliens et "obsignatio"
nucleosomatum, ac etiam medians plicatilem ad gradum organationis proximum.
Talis rerum in tempore ordo praeberet sistens rationem structuralem ordini
temporali coetuum historiarum in DNA nuper replicata (68, 69, 70).

Nunc pervenimus ad exemplar nucleosmi modice expressum et descriptionem

pro altiori gradu plicatilis. Firma igitur est structura et chemica compages in qua
consideretur processus dynamicus qui fiunt in chromatin in cellula, id est,
transcriptio, replicatio et mitosis.

DECERNENTES EASDEM DICTIS

In primis volui ad opus chromatin delineatum quod inservire potest pro hodierno
paradigma studiorum structurarum quae cellulosa et hypothetica conantur
coniungere. Unius systematis complexi studet ly, chemica vel enzymatice
physice eam dissecare, et deinde per X-radii analysin et chemicam studia
partium accuratam imaginem obtinere, ac altiore picturae integrae congregationis
ab electronico. microscopii. Sensus tamen est, quo virus et chromatin, quos in
hac lectione descripsimus, adhuc systemata simplicia relative dicuntur. Multo
magis implicatae disciplinae, ribosomes, apparatus mitotici, coram nobis
mentiuntur et posteritati agnoscent eorum studium grave esse negotium, in
nonnullis tantum inchoatum. Libenter manum habuisse in initiis fundationis
biologiae structuralis hypotheticae.

agnitiones

In quo perspicue patebit omnia quae hic perstringuntur sine multorum

praestantissimorum et plurium collegarum auxilio non possem efficere.
Machine Translated by Google

A. Klug 107

et adiutores. Post Rosalind Franklin mortem, virus opus continuare et extendere potui
cum John Finch et Kenneth Holmes, qui tunc discipuli erant, et qui collegae facti sunt.
Per annos mihi cum Donaldo Casparo societatem transatlanam habui et eius consiliis,
criticis et perceptis profuit. Hic tantum commemorare possum nonnulla nomina aliorum
adiutorum meorum in singulis calamis in quibus versatus sum: in.

studium chemiae virus et conventus, Reuben Leberman, Tony Dunelmensis, Jo Butler

et David Zimmern; in crystallographia virus, William Longley, Petrus Gilbert, Ioannes
Champness, Gerardus Bricogne et Anna Bloomer; in microscopio microscopio et imagine
reconstructionis, David DeRosier, Harold Erickson, Tony Crowther, Linda Amos, Jan
Mellema, Nigel Unwin et per totum, John Finch; in studiorum structurarum translatione
RNA, Brian Clark, qui curriculum biochemicum praebebat sine quo opus inchoari non
poterat, Jon Robertus, Jane Ladner et Tony Jack; in chromatin, Rogerus Kornberg, cuius
sollertia et perspicientia "nuntium" in luculentam quaestionem proponunt, Markus Noll,
Len Lutter, nec non Daniela Rhodes et Ray Brown, qui experientiam suam ab trNA ad
nucleosomes fructuose transtulerunt, ac tandem Tim Rich mond. et Ioannes Finch, qui
in studiis altioribus constanter X-ray nunc in progressu versantur.

REFERENCES

Recognitiones

(1) Klug, A. Synagoga virus tabaci musivo: structura et specie. Harvey

Praelectiones, 74, 141-172, (1979).
(2) Crowther, RA et Klug, A. Analysis structuralis conventuum macromolecularium per imaginem retractationis
ex micrographis electronicis. Ann. Rev. Biochem. 44, 161- 182, (1975).
(3) Klug, A. Imago analysis et refectionis in microscopio electronico biologico
macromolecules. Chemica Scripta, 14, 245-256 (1979).
(4) a. Kornberg, RD Structure chromatin. Ann Rev. Biochem. 46,931-954 (1977).
b. Kornberg, RD et Klug, A. De nucleosome. Scientilica Americana, 244, 52-64 (1981).
(5) Butler, PJG et Klug, A. De structura nucleosomorum et chromatinorum. in "horizontibus in biochemistry
et biophysicis". (ed. F. Palmieri), Wiley, 1983 in press.

alii
(6) Fraenkel-Conrat, H. and Williams, RC Proc. Natl. Acad. Sci. USA 41, 690-698 (1955).
(7) Fraenkel-Conrat, H. et Cantor, B. Biochim. Biophys. Acta. 33,359-370 (1959).
(8) Matthews, REF (1966) Virology 30,82-96 (1966).
(9) Strbbs, G., Warren, S., and Holmes, K. Nature (London) 267, 216-221 (1977).
(10) Holmes, KCJ Supramolec. Structura 12, 305-320 (1979).
(11) Schramm, G., and Zillig, WZ Naturforsch. Ser. b. 10, 493-498 (1955).
(12) Caspar, DLD Adv. Dapibus Chem. 18, 37- 121 (1963).
(13) Finch, JT, Leberman, R., Chang, Y.-S., and Klug, A. Nature (London), 212, 349-350.
(1966).
(14) Bricogne, G. Acta Crystallogr. Sect. A32,832-847 (1976).
(15) Bloomer, AC, Champness, JN, Bricogne, G., Staden, R., Klug, A. Nature (London)
276, 362-368 (1978).
(16) Lauffer, MA, et Stevens, CL Adv. Virus Res. 13, l-6 (1968).
(17) Durham, ACH, Finch, JT, Klug. A. Nature (London) New Biol. 299, 37-42 (1971).
Machine Translated by Google

108 Chemiae 1982

(18) Durham, ACH and Klug, A. Nature (London), New Biol. 299, 42-46 (1971).
(19) Klug, A., Durham, ACH Frigidus Spring Harbour Symp. Quant. Biol. XXXVI, 449-460
(1971).
(20) Butler, PJG, et Klug, A. Nature (London), New Biol. 229, 47-50 (1971).
(21) Fukuda, M., Ohno, T., Okada, Y., Otsuki, Y., et Takebe, I. Proc. Natl. Acad, Sci. USA
75, 1727-1730 (1978).
(22) Butler, PJG, Lomonossoff, GP Biophys. J. 32, 295-312 (1980).
(23) Zimmern, D., et Butler, PJG Cell II, 455-462 (1977).
(24) Zimmern, D. Cell II, 463-482.
(25) Zimmern, D., Wilson, TMA FEBS, Litt. 71, 294-298 (1976).
(26) Champness, JN, Bloomer, AC, Bricogne, G., Butler, PJG, et Klug, A. Nature
(London) 259, 20-24 (1976).
(27) Butler, PJG, Bloomer, AC, Bricogne, G., Champness, JN, Graham, J., Guiley, H.
Klug, A. et Zimmern, D. In "structuris functionibus relationum dapibus" (R. Markham et RW Home, eds.),
3rd John Innes Symp. pp. 101-l 10. North-Holland/Elsevier, Amsterdam. (1976).

(28) Lebeurier, G. (1976), Nicolaieff, A., and Richards, KE Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74,
149-153 (1977).
(29) Butler, PJG, Finch, JT, Zimmern, D. Natura (London) 265, 217-219 (1977).
(30) Caspar, DLD, et Klug, A. Frigidi Spring Harbour Symp. Quant. Biol. 27, l-24 (1962).
(31) Brenner, S., Home RW Biochim. Biphys. Acta. 34, 103- 110 (1959).
(32) Klug, A., et Finch, JTJ .Mol. Biol. 11, 403-423 (1965).
(33) Klug, A., and Berger, JEJ Mol. Biol. 10, 565-569 (1964).
(34) Klug, A. and DeRosier, DJ Nature (London). 212, 29-32 (1966).
(35) DeRosier, DJ et Klug, AJ Mol. Biol. 65, 469-488 (1972).
(36) DeRosier, DJ, Klug, A. Nature (London), 217, 130- 134 (1968).
(37) Crowther, RA, DeRosier, DJ et Klug, 4. Proc. Roy. Soc. Lond. A. 317, 319-340
(1970).
(38) Crowther, RA, Amos, LA, Finch, JT, DeRosier, DJ, et Klug, A. Nature (London)
226, 421-425 (1970).
(39) Crowther, RA, Amos, LA Fons Frigidus Harbour Symp. Quant. Biol. XXXVI, 489-494
(1971).
(40) Unwin, PNTJ Mol. Biol. 87, 657-670 (1974).
(41) Taylor, KA et Glaeser, RMJ Res Ultrastructure. 55, 448-456 (1976).
(42) Unwin, PNT, and Henderson, RJ Mol. Biol. 94, 425-440 (1975).
(43) Henderson, R., and Unwin, PNT Naturae 257, 28-32 (1975).
(44) Unwin, PNT Proc. Roy. Soc. Land. A. 329, 327-359 (1972).
(45) Erickson, HP, and Klug, A. Ber. Bunsenges, Phys. Chem. 74, 1129-1137 (1970); Phil.
Trans. Roy. Soc. ser B. 261, 105-118 (1971).
(46) Wilkins, MHF, Zubay, G., Wilson, HRJ Mol. Biol. I, 179-185 (1959).
(47) Luzzati, V., et Nicolaieff, AJ Mol. Biol. I, 127-133 (1959).
(48) Hewish, DR, Burgoyne, I. A. Biochem. Biophys. Res. Communi. 52, 504-510 (1973).
(49) Noll, M. Nature (London) 251, 249-251 (1974) ;
(50) Kornberg, RD, Thomas, JO Scientiarum 184, 865-868 (1974).
(51) Kornberg, RD Science 184, 868-871 (1974).
(52) Noll, M., Kornberg, RDJ Mol. Biol. 109, 393-404 (1977).
(53) Finch, JT, Lutter, LC, Rh o es, D. Brown,
d* RS, Rushton, B. Levitt, M., Klug, A.
Naturae (London) 269, 29-36 (1977).
(54) Finch, JT, Klug, A. Frigidi Spring Harbour Symp. Quant. Biol. 42, I- 15 (1978).
(55) Lutter, LCJ Mol. Biol. 124, 391-420 (1978).
(56) Finch, JT, Brown, RS, Rhodes, D., Richmond, T., Rushton, B., Lutter, I,. C., and Klug, AJ Mol. Biol. 14.5,
757-769 (1981).
(57) Finch, JT, Lewit-Bentley, A., Bentley, GA, Roth, M., et Timmins, PA Phil. Trans.
Roy. Soc. Lond. B. 2901,635-638 (1980).
(58) THOMAS, JO, Kornberg, RD Proc. Natl. Acad. Sci. USA 72, 2626-2630 (1975).
Machine Translated by Google

A. Klug 109

(59) Klug, A., Rhodes, D., Smith, J., Finch, JT, Thomas, J. 0. Nature (London) 287,509-
516 (1980).
(60) Mirzabekov, AD, Shick, VV, Belyavsky, AV, Bavykin, SG Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 75, 4184-4188 (1978).
(61) Camerini-Otero, RD, Felsenfeld, G. Acids Nucleic Res. 4, 1159-1181 (1977a).
(62) Thomas, JO, Kornberg, RD FEBS, Litt. 58, 353-358 (1975).
(63) Finch, JT, Klug, A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73, 1897- 1901 (1976).
(64) Sperling, L., et Klug, AJ Mol. Biol. 112, 253-263 (1977).
(65) Simpson, RT Biochemistry 27, 5524-5531 (1978).
(66) Thomas, F., Keller, Th., et Klug, AJ Cell Biol. 83, 403-427 (1979).
(67) Thomas, JO, Khabaza, AJA Eur. J. Biochem. 112, 501-511 (1980).
(68) Worcel, A., Han, S., Wong, ML Cell 15, 969-977 (1978).
(69) Senshu, T., Fukuda, M., Ohashi, MJ Biochem. (Japan) 84,985-988 (1978).
(70) Cremisi, C., Yaniv, M. Biochem. Biophys. Res. Communi. 92, 1 1117-1123 (1980).
(71) Klug, A., Caspar, DLD Adv. Virus Res. 7, 225-325 (1960).
(72) Crowther, RC, Amos, LAJ Mol. Biol. 60, 123-130 (1971).
(73) Klug, A., et Finch, JTJ Mol. Biol. 31, 1-12 (1968).