‫أ‬

‫قسم الحياء الدقيقة‬

‫• األوساط الزراعية‬
‫• شروط جمع العينات و حفظها‬
‫• معايير رفض العينات الزراعية‬
‫• تعليمات زراعة العينات‬
‫• انتقاء األوساط الزراعية‬
‫• األصباغ‬
‫• التحضيرات الرطبة & ‪India ink & KOH‬‬
‫‪• Stool for ZN Stain‬‬
‫‪• CD TOXIN: C. DIFFICILE‬‬
‫• تشخيص البكتيريا‬
‫• الفحوصات التشخيصيه‬
‫• اجراء فحص الحساسية‬
‫• توزيع المضادات الحيوية‬
‫• معالجة عينات زراعة السل‬
‫• معالجة عينات الدم و نخاع العظم لزراعه السل‬
‫• تحضير مواد البكتيريا‬
‫‪• Candida Chromo agar‬‬
‫• بعض االختصارات‬
‫• البكتريا الممرضه وغير الممرضه في عينات الجسم‬
‫• قراءه فحص الحساسية‬
‫اعداد‬
‫حسن بطاح‬
 ‫األوساط الزراعية‬
‫األوساط الصلبة ‪:‬‬
‫‪Macconkey agar‬‬
‫وهو وسط اختياري ‪ Selective‬يختار البكتيريا السالبة و تفريقي ( ‪ ) Differential‬يفرق البكتيريا‬
‫الى ثالثة انواع حسب تخميرها لالكتوز وهي‬
‫ا‪ -‬مخمرة لالكتوز و تظهر بالون الوردي ‪.‬‬
‫ب‪ -‬متأخرة التخمير و تضهر بلون مائل الى الوردي ‪)LLF ( .‬‬
‫ح‪ -‬غير مخمرة لالكتوز و تظهر بدون لون او مائل للصفرة ‪(NLF(.‬‬

‫‪Blood Agar‬‬
‫وهو وسط غني ‪ Enrichment media‬تنمو علية البكتيريا السالبة و الموجبة‬
‫كما يمكن تمييز البكتيريا السبحية من خاللة بناء على التحليل الذي تحدثة ( الفا ‪ ،‬بيتا ‪ ،‬جاما )‬

‫‪Chocolate Agar‬‬
‫وهو وسط غني جدا ً حيث تسطيع جميع انواع البكتيريا النمو علية و خصوصا ً البكتيريا‬
‫المدللة – صعبة األرضاء – ( ‪ )Fastidious Bacteria‬مثل الهيموفليس و النيسيريا‬
‫و البروسيال ‪ .‬ويكمن من خاللة تمييز البكتيريا السبحية نوع الفا بوضوح حيث تعطي لون أخضر ‪.‬‬

‫‪Muller Hinton‬‬
‫وهو وسط خاص لعمل فحص الحساسية‬
 ‫األوساط السائلة ‪:‬‬
‫ا – ‪Thioglycolate‬‬
‫يستخدم لزراعة العينات المأخوذه من مناطق معقمة ( ال يوجد فيها ‪ ) normal flora‬مثل سوائل الجسم ‪.‬‬
‫ب‪Selenite broth -‬‬
‫وهو وسط خاص بتكثير السالمونيال في عينات البراز ‪.‬‬
‫ج – ‪Nutrient Broth‬‬
‫وسط خاص لتنمية البكتيريا النقية تمهيدا ً لعمل فحص الحساسية للمضادات الحيوية ‪.‬‬
‫مالحظات ‪:‬‬
‫يتم تحضير األوساط الزراعية حسب التعليمات الموجودة على كل عبوة ‪.‬‬
‫لعمل ‪ Blood agar‬يضاف ‪ % 5‬من الدم و يفضل ان يكون من األنعام ( الماعز و الخاروف )‬
‫لعمل ‪ Chocolate agar‬تسخن اطباق الدم في الفرن الحراري على درجه ‪ 80‬م لمده ‪ 45‬دقيقه‬
‫يتم صب األطباق في جو معقم لضمان عدم حدوث تلوث ‪.‬‬

‫اوساط زراعية اخرى‬

‫‪EMB = Eosin methylene blue agar‬‬

‫وسط اختياري للبكيريا السالبه وتفريقي للمخمره لالكتوز وتظهر فية‬
‫‪ E.coli‬بلون ‪metallic sheen‬‬
S.S Agar
‫ ويجب ان‬SS Agar ‫تكون السالمونيال على شكل مستعمرات سوداء والشيجال على شكل مستعمرات صفراء على وسط ال‬
‫تكون نتائج الفحوصات الكيميائيه لهم كالتالي‬
‫مستعمرات‬ ‫مستعمرات‬
salmonell‫سوداء‬ Shigell‫صفراء‬
a a
Urea Negative Negative
MIO motile Non motile
K/A
TSI H2S+Gas+ K/A

E. coli O157
E. coli O157 differs from most other strains of E. coli in being unable to
ferment sorbitol. In sorbitol-MacConkey agar, lactose is replaced by sorbitol. Non-
pathogenic strains of E. coli ferment sorbitol to produce acid: Pathogenic E.
coli cannot ferment sorbitol, so this strain uses peptone to grow. This raises
the pH of the medium, allowing the pathogenic strain to be differentiated from
other non-pathogenic E.coli strains through the action of the pH indicator in the
medium
XLD Agar

Hektoen Enteric (HE) Agar:

 CLED (cysteine-, lactose-, and electrolyte-deficient) agar

Benefits and Disadvantages of Using CLED Agar for Urine Culture

1.Good discrimination of gram-negative bacteria on the basis of lactose fermentation and colony appearance;
2.Inhibits swarming of Proteus spp (Proteus mirabilis and siragluv suetorP are frequently involved in urinary
tract infection;)
3.Relatively low cost (compared with combined use of Blood Agar and MacConkey agar for urine culture).
Note: fo gnimraws eht tneverp osla stlas elib gniniatnoc muidem ykenoCcaM Proteus.pps
Disadvantages.airetcab evitisop -marg emos fo htworg roop :
 ‫‪BLOOD CULTURE Automated‬‬

‫‪special nutrient media as‬‬

‫‪Tryptic soy broth‬‬
‫‪· or Brain Heart Infusion Broth‬‬
‫مع مانع تجلط ( ‪) SPS: Sodium polyanesthol sulphonate‬‬

‫لزراعه الدم توضع العينات على درجه حرارة ‪ 37- 35‬م لمده ‪ 5‬ايام‬

‫يفضل سحب اكثرمن عينة لزراعة الدم ( ‪ 3- 1‬عينات هوائية وال هوائية)ومن اوردة مختلفة (‬
‫الستبعاد إحتمالية تلوث العينات من الجلد او غيره اثناء السحب ) بفارق زمني ‪ 15‬دقيقة تقريبا‬
‫بين السحبة واألخرى باستخدام معقم مثل اليود أو ‪Chlorhexidine‬‬
‫و للكشف عن البكتيريا والفطريات التي قد تكون بأعداد صغيرة أو تدخل الدم بشكل متقطع (‬
‫تجرثم الدم العابر او قصير األمد ‪ ) Transient Bacteremia‬والتي تدخل مجرى الدم عن طريق‬
‫الجروح المصابة أو األعضاء أو تجاويف الجسم وكذلك للكشف عن ال ‪ Septicemia‬وهي وجود‬
‫البكتيريا وسمومها وتكاثرها باعداد كبيرة داخل مجرى الدم‬
‫وتكون استجابة الجسم الطبيعية هي ارتفاع درجة الحرارة ( قشعريرة متقطعة )في محاولة لتدمير‬
‫البكتيريا التي تتدفق في مجرى الدم عندما يصل عددها لحد معين ( قد يكون الدم عقيما في وقت‬
‫الحمى )‬
‫لذا يفضل سحب الدم بعد ارتفاع الحرارة وقبل اخذ المضادات الحيوية‬
‫‪False positive‬‬
‫‪-Elevated patient leukocyte count‬‬
‫‪-High sensitivity of the system to increase in Co2 concentration like the one‬‬
‫‪with heavy smokers‬‬
 ‫زراعة الفطريات‬
‫‪SDA = Sabouraud dextrose agar‬‬ ‫‪(for‬‬
‫)‪fungus‬‬
‫للفطريات تزرع لمده ‪ 14‬يوم على درجه حراره‬
‫الغرفه‬

‫تحضير لقراءة نوع الفطريات‬

‫• نضع على الشريحة نقطة من ‪lactophenol Cotton Blue‬‬
‫•بواسطة شريط الصق شفاف نضغط على الفطر‬
‫• نلصق الشريط على الشريحة ونقراء بواسطة المجهر على تكبير ‪x40‬‬
 ‫فحوصات الفطريات‬
‫‪KOH for Fungus‬‬
‫يطلب للكشف عن الفطريات‬
‫حيث تمزج ‪ 1‬مل من ‪ KOH‬بتركيز ‪ % 15 – 10‬مع جزء من العينة‬ ‫‪.1‬‬
‫‪ -2‬توضع في الحاضنة لمدة ‪ 15 – 10‬دقيقة‬ ‫‪.2‬‬
‫ثم تفصل في جهاز الطردي المركزي‬ ‫‪.3‬‬
‫تؤخذ من الراسب و تقرأ على عدسة ‪40‬‬ ‫‪.4‬‬
‫( ‪ KOH‬يحطم ال ‪ Keratin‬وهو بروتين قوي جدا يتكون من االحماض االمينية وهو العنصر االساسي‬
‫في تركيب الجلد واالسنان والشعر واالظافر )‬
‫‪Germ Tube‬‬
‫يستخدم لتمييز ‪ Candida Albcans‬عن غيرها من باقي األنواع ‪.‬‬
‫نذيب عدة مستعمرات من الفطريات في حوالي ‪ 0.5‬مل من البالزما في انبوب ‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫يوضع األنبوب في حاضنة لمدة ‪ 3 – 2‬ساعات‬ ‫‪.2‬‬
‫توضع نقطة من المحلول على شريحة و تفحص على عدسة ‪40‬‬ ‫‪.3‬‬
‫النتيجة ‪ :‬اذا كان هناك براعم على شكل انابيب فهذا يعني انها ‪Candida Albcans‬‬

‫‪INDIAN INK PREP‬‬

‫يطلب للكشف عن فطر ‪ Cryptococcus neoformans‬والذي يسبب التهاب السحايا او السل‬
‫الرئوي‬
‫نضع نقطتين من الحبر في انبوب بالستيكي‬
‫نضع نقطتين من العينه نتركهم ‪15‬‬
‫دقيقه في الحاضنه ناخذ نقطه من االنبوب ونفردها على شريحه ونقراها على عدسه ‪40‬‬
‫النتيجه تظهر كل الشريحه مصبوغه بلون الحبر ما عدا الفطر على شكل خليه بيضاويه ذات جدار سميك‬
‫محاطه بطبقه عريضه من الكابسول الجالتيني غير مصبوغه‬
 Candida Chromo agar

Selective medium for isolation and quick identification of Candida

species

Staining of species:
1 -Candida albicans--------------------- -green
2 -Candida krusei-------------------------dry irregular
pink brown
3 -Candida tropicalis----------------------dark blue
4-Candida parpasilosis---------------------brown
5-C. glabrata------------------------------- yellow

Application: Use 45.9 g for 1 l agar.

Formulation:
Peptone 10 g/l
Glucose 20 g/l
Chloroamphenicol 0,5 g/l
Chromogene Mixture 0,4 g/l
Agar 15 g/l
pH-value 6,1 ±0,2
 ‫تشخيص الكوليرا‬

‫عند وجود عينة براز مائية مثل ماء االرز ‪Rice –water stool‬‬
‫‪ -1‬تزرع على وسط ) ‪ Alkaline peptone water ( APW‬وتوضع في‬
‫الحاضنة بدرجة حرارة ‪ 37-36‬م لمدة ‪ 8-5‬ساعات‬
‫‪ -2‬يعمل ‪ Sub culture‬على وسط ‪ TCBS‬بحرارة ‪ 37-36‬م لمدة ‪-18‬‬
‫‪ 24‬ساعة‬

‫عند ظهور مستعمرات صفراء‬

‫وصبغة الغرام يظهر فيها عصيات منحنية سالبة ‪Curved rods‬‬
‫نعمل الفحوصات التالية ‪:‬‬
‫‪Oxidase +ve‬‬
‫‪Motile active‬‬
‫‪Indol +ve‬‬
‫‪Ornithin –ve‬‬
‫‪Urea -ve‬‬
‫‪K/A without gas and without H2S‬‬
‫‪Lysin –ve‬‬
‫‪TCBS thiosulfate –citrate- bile salt sucrose agar‬‬
‫• تثبط نمو معظم الـ ‪ Enterbacteria‬والبكتيريا الموجبة لصبغة جرام بسبب‬
‫احتوائها‬
‫على مواد مثبطة وكذلك قلوية ‪ PH‬الوسط العالية‪.‬‬
 LJ Media = Lowenstein Jensen media ( for TB)
‫ اسابيع ) في الحاضنه‬6 ( ‫ يوم‬42 ‫لزراعه عينات السل تزرع‬
‫ ساعة‬20-15 ‫الن انقسامها يأخذ فترة طويلة من‬

Typical appearance of some mycobacteria on solid agar media.

A, M. tuberculosis colonies on Lِwenstein-Jensen agar after 8 weeks of incubation.
B, A different colonial morphology is seen on culture of one strain of M. avium complex.
C, M. kansasii coloniesexposed to light
. D, Scotochromogen M. gordonae showing yellow colonies
. E, Smooth, multilobate colonies of M. fortuitum on Lِwenstein-Jensen medium
MAC(MYCOBACTERIUM AVIUM COMPLEX)
was the most common cause of systemic
bacterial infection in patients with AIDS
 ‫معالجة عينات زراعة السل) ‪(Modified PETROFFS METHOD‬‬
‫‪BRONCH. LAVAGE TB. CULT‬‬
‫‪SPUTUM /AFB CULTURE‬‬
‫‪ENDOTRACHEAL AS. TB CULT‬‬
‫الطريقة ‪:‬‬
‫ضع نفس كمية العينة من ‪NaOH 4 %‬‬
‫ضعها على المازج لمدة ‪ 15‬دقيقة‬
‫فصل العينة على سرعة ‪ 3000‬لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬
‫تخلص من الطافي‬
‫أضف للراسب ‪ 20‬مل من الماء المقطر المعقم و حركة جيدا ً ‪.‬‬
‫فصل العينة على سرعة ‪ 3000‬لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬
‫تخلص من الطافي‬
‫ضع ‪ 1‬مل من الراسب في زجاجة زراعة ‪T.B‬‬
‫اكمال الطريقة بأضافة ‪ 1‬مل من ) ‪Growth Supplement ( GS‬و ‪ 0.5‬مل من ) ‪Antibiotic Supplement ( AS‬‬
‫‪URINE FOR AFB CULTURE‬‬
‫اجمع ثالث عينات صباحية من البول ( كل يوم عينة )‬
‫أفصل العينات على سرعة ‪ 1500‬دورة في الدقيقه لمدة ‪ 30‬دقيقة‬
‫تخلص من الطافي و أجمع الراسب و استخدمة في المعالجة كما في الطريقة السابقة ‪.‬‬

‫‪TISSUE FOR T.B CULTURE‬‬

‫أهرس عينة النسيج في وعاء معقم ‪.‬‬
‫خذ مسحة من العينة و ازرعها في انبوب ‪L.G media‬‬
 ‫معالجة عينات الدم و نخاع العظم لزراعه السل‬

‫تعالج بطريقتيين‬

‫‪Distilled water lysis -1‬‬

‫انقل كامل عينة الهباريين إلى انبوب يحتوي على ‪ 50‬مل ماء مقطرمعقم بارد و حركه جيدا ً حتى يتحلل الدم ‪.‬‬
‫أفصل العينة على سرعة ‪ 3000‬لمدة ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬
‫تخلص من الطافي ‪.‬‬
‫أضف إلى الراسب ‪ 2‬مل من محلول ( ‪) PPS:phosphate buffer‬‬
‫أحقن ‪ 1‬مل من العينة في الزجاجه الخاصه بـــ ‪T.B‬‬
‫اكمال الطريقة بأضافة ‪ 1‬مل من ‪ Supplement‬و ‪ 0.5‬مل من المضاد الحيوي‬

‫‪Buffy coat -2‬‬

‫‪ -1‬افصل عينة الهبارين على سرعه ‪ 1000‬لمدة ‪ 10‬دقائق ‪.‬‬
‫‪ -2‬استخدم باستور بايبت ألخذ ‪ Buffy coat‬مع مراعاة عدم أخذ كريات دم حمراء معها ‪.‬‬
‫‪ -3‬احقن ‪ 1‬مل من ‪ Buffy coat‬في الزجاجة الخاصة بـ ‪T.B‬‬
‫مالحظات ‪:‬‬
‫نوع العينة ‪ 10-5‬مل من الدم او نخاع العظم في انبوب ( هبارين – غير متجلطة )‬
‫اكمال الطريقة بأضافة ‪ 1‬مل من ‪ Supplement‬و ‪ 0.5‬مل من المضاد الحيوي‬
 ‫شروط جمع العينات و حفظها‬
‫‪Urine‬‬
‫عينة صباحية من وسط البول مع تنظيف المنطقة بالماء و الصابون ثم بالماء لوحدة‬
‫( أول البول آلفات األحليل و آخرة آلفات المثانة )‬
‫( للسل يفضل تجميع البول ‪ 24‬ساعة او كامل العينة الصباحية ) خاصه اخرها الن عصيات السل تترسب في قعر المثانه‬

‫‪Sputum‬‬
‫‪ -‬عينة صباحية بعد االستيقاظ مباشرةالن القشع يتجمع في القصبات طول الليل ويجب ان يكون المريض بوضعية قائمة‬
‫و يأخذ شهيقا ً عميقا ً و يجري عملية الزفير مصحوب بالسعال بقوة و دفعة واحدة في الوعاء‬
‫‪ -‬تؤخذ عينه لالطفال من غسيل القصبات الهوائيه من قبل الطبيب الصدري‬

‫‪Throat Swab‬‬
‫عينة صباحية على الريق خيشه التلوث ببقايا الطعام او ابتالع القيح مع الطعام‬

‫‪Urethral & Prostate‬‬

‫‪ -‬يوصى المريض بالمجيئ للمختبر صباحا ً و قبل ان يتبول حتى التنجرف المفرزات مع البول‬
‫‪ -‬تنظيف بالماء و الصابون ثم يمسد األحليل و يعصر من جذورة الى الفوهه و نأخذ من وسط المفرزات حال خروجها‬

‫‪Body Fluid‬‬
‫يتم تعقيم الجلد قبل أخذ العينة و توضع في انابيب معقمة تحتوي على مانع تخثر‬

‫‪Blood or B.M‬‬
‫يتم تعقيم الجلد قبل أخذ العينة بالكحول و اليود و يتحرى الجمع قبيل ارتفاع الحرارة المتوقعة و يسحب اكثر من عينة من اليد اليمنى و اليسرى بفاصل من‬
‫الوقت ‪.‬‬

‫‪Abscess‬‬
‫‪ -‬تغمر المنطقة بالمحلول الملحي المعقم أو الكحول الطبي ‪ % 70‬و يتم األنتباة بأخذ العينة بطريقه صحيحة لألبتعاد عن البكتيريا الطبيعية الموجودة على‬
‫الجلد والشعر‬
‫‪ -‬المناطق العميقه توخذ بواسطه السيرينج‬
 ‫معايير رفض العينات الزراعية‬

‫‪ .1‬استخدام وعاء غير معقم ‪.‬‬

‫‪ .2‬تسرب العينة من الوعاء لسبب او آلخر ‪.‬‬
‫‪ .3‬وجود ماده حافظه مع العينة مثل الفورمالين التي تقتل البكتيريا‬
‫‪ .4‬اذا وضعت العينة في انابيب ال ‪EDTA‬او ‪ Na.citrate‬النها ترتبط بالكالسيوم الضروري لنمو البكتيريا‬
‫وتكاثرها فتموت البكتيريا ‪.‬‬
‫‪ .5‬مضي وقت طويل ( اكثر من ساعة ) على العينة ‪ ،‬خاصة عينة البول و نصف ساعة لعينة البراز ‪.‬‬
‫‪ .6‬عدم وضوح او عدم مطابقه المعلومات على العينة لمعلومات المريض ‪.‬‬
‫‪ .7‬اذا كان المريض يأخذ مضاد حيوي قبل اعطاء العينة لمدة تقل عن ‪ 4‬ايام ‪.‬‬
‫‪ .8‬عدم كفاية العينة ألجراء كافه الفحوصات المطلوبة ‪.‬‬
‫‪ .9‬عدم وضوح الفحوصات المطلوبة او عدم تحديدها بدقة ‪.‬‬
‫‪ .10‬إذا كانت العينة مأخوذه على مسحة و كانت العينة جافة ‪.‬‬
‫‪ .11‬إذا كانت العينة مأخوذه لزراعة الهوائية من مكان يحتوي فقط على بكتيريا هوائية ‪.‬‬
 ‫استقبال وزراعة العينات ‪ :‬ويتم وفقا ً لما يلي ‪:‬‬
‫‪ - 1‬يتم إستالم العينة بعد مطابقة المعلومات الموجودة على العينة مع المعلومات الموجودة على النموذج المرفق ‪.‬‬
‫‪ - 2‬يتم التأكد من صالحية العينة المرسلة و الوعاء و تعاد العينات غير المطابقة لشعبة اإلستقبال إلجراء الالزم ‪.‬‬
‫‪ - 3‬يتم زراعة العينات العينات على األوساط الزراعية المناسبة و حسب مصدر العينة و كما هو مبين في الجدول الموجود‬
‫في القسم ‪.‬‬
‫‪ - 4‬تعطى العينة رقم متسلسل يثبت على النموذج المرفق و على األطباق الخاصة بها حيث يكتب على كل طبق الرقم‬
‫المتسلسل إسم المريض ‪ +‬مصدر العينة ‪.‬‬
‫‪ - 5‬توضع األطباق المزروعة في الحاضنة ‪.‬‬
‫‪ - 6‬يتم تسجيل النماذج المرسلة على السجل الخاص بذلك ‪.‬‬
‫‪ - 7‬يتم التخلص من العينات بإلقائها بالسلة المخصصة للحرق ‪ .‬أما العينات المشتركة فيتم إرسالها إلى القسم المعني ‪ ،‬و‬
‫العينات الخاصة مثل ‪ CSF, Pleural F., Synovial‬فيتم األحتفاظ بالمتبقي منها لمــــــــدة ‪ 24‬ساعة للحاجة ‪.‬‬
Selection of primary culture media for bacteriology specimens

Specimen type Suitable culture media

Abscess, Pus swab, Wound swab, Skin swab, Cyst, Ulcer, Cord, Bile. BA, MA, Thio.
Nasal sinuses BA, MA, CA, Thio.
Pleural fluid, Peritoneal (Ascitic) fluid, Pericardial fluid. BA, MA, CA, Thio.
Synovial fluid (Joint fluid). BA, MA, CA, Thio.
CSF, Ventricular fluid. BA, MA, CA.
Gastric aspirate, Gastric juice. BA, MA, CA.
Tissue, Catheter (Tip or piece), Cornea, Any solid object. Thio.
Urine (Void or suprapubic aspiration). BA, MA.
Vaginal swab, Cervical swab, Urethral discharge, Prostatic fluid, Semen. BA, MA, CA.
Sputum, Bronchial or tracheal aspirate, Nasal or nasopharynfial swab. BA, MA, CA.
Throat swab, Mouth swab. BA, MA, CA.
Transtracheal swab. BA, MA, CA, Thio.
Ear swab (External or internal). BA, MA, CA, Thio.
Eye swab BA, MA, CA, Thio.
Any other swabs from sterile body site. BA, MA, CA, Thio.
Any other fluid from sterile body cavity. BA, MA, CA, Thio.
Stool, Anal swab. SSA, Selenite broth.
BA: Blood agar.
MA: MacKonky Agar.
CA: Chocolate agar.
SSA: Salmonella Shigella agar.
 ‫تعليمات زراعة العينات لغايات تشخيص البكتيريا‬

‫يوجد طريقتين رئيسيتين لزراعة العينات بقصد تكثير البكتيريا‪ ،‬إحدى هاتين الطريقتين تستخدم لزراعة عينات البول باستخدام اللولب المعياري وحجمه ‪،1ul‬‬
‫واألُخرى لزراعة باقي أنواع العينات باستخدام اللولب العادي وحجمه ‪ ، 10 ul‬والهدف من كلتا الطريقتين هو تخفيف العينة تدريجيا ً للحصول على مستعمرات‬
‫منفصلة عن بعضها البعض‪.‬‬
‫أوالً‪ :‬زراعة عينات البول‬
‫يحمى اللوب لمعياري ثم نتركه ليبرد‬
‫نزرع عينه البول بطريقه ال ‪zigzag‬‬

‫ثانيا ً‪ :‬زراعة باقي أنواع العينات‬

‫ِ‪ -1‬يحمى اللولب العادي ثم نتركه ليبرد‬
‫‪ -2‬بعمل منطقة دائرية صغيرة في أقصى نقطة على شق الطبق‬
‫صة‬
‫‪ -3‬ويُسحب خط مستقيم إلى خارج المنطقة األولى ويُعمل منه عدَّة خطوط مترا َّ‬
‫‪ -4‬بُسحب خط مستقيم من آخر خط في المنطقة الثانيه‪ ،‬ويُعمل منه عدَّة خطوط‬

‫ثالثا ً‪ :‬الزراعة الالهوائية (‪: )Anaerobic Culture‬‬

‫يجب زراعة العينة بأسرع وقت ممكن على أطباق الزراعة الثالثة المعروفة باستخدام الطريقة الواردة في بند ثانياً‪ ،‬وتوضع‬
‫جميع االطباق في قارورة الشمعة‪ ،‬ويوضع فيها كيس خاص لتوفير بيئة الهوائية وتغلق القارورة بإحكام وتوضع في الحاضنة‬
‫لمدة ‪ 48‬ساعة بعدها يتم التعرف على النمو بالطرق الموصوفة لذلك‪ ،‬وتعطى النتيجة بدون فحص الحساسية حيث أنه يوجد‬
‫مضادات خاصة بالبكتيريا الالهوائية‪.‬‬
‫كيس البيئة الالهوائية توفره شركة ‪ Oxoid‬باسم )‪Gas generating kit (Carbon dioxide system‬‬
 ‫األصباغ‬
‫‪Gram Stain‬‬
‫اكثر الصبغات استعماال ً و فيها يعمل اليود على تشكيل مركب مع ‪ Crystal Violet‬و اذا استطاعت البكتيريا ان تحتفظ بهذا‬
‫المركب بعد اضافة مزيل اللون فأنها تظهر بلون بنفسجي و تعتبر موجبة الجرام و اذا فقدت المركب فانها تأخذ لون‬
‫الصبغة المعاكسة ‪ Safranin‬و تظهر بلون أحمر و تعتبر سالبة الجرام ‪.‬‬
‫الطريقة ‪:‬‬
‫‪ Crystal Violet .1‬لمدة دقيقة ثم شطف بماء الحنفية ‪.‬‬
‫‪ Iodine .2‬لمدة دقيقة ثم شطف بماء الحنفية ‪.‬‬
‫‪ ) Decolorizer ( Acetone Alcohol .3‬حتى يتوقف اللون من الخروج من العينة حوالي ‪ 5 – 3‬ثواني‬
‫‪ .4‬ثم شطف بماء الحنفية‪.‬‬
‫‪ Safranin .5‬لمدة ‪ 30‬ثانية ثم شطف بماء الحنفية‪.‬‬

‫صبغة ) ‪( Kinyoun or Acid Fast Stain or Z.N stain‬‬

‫األصباغ العادية ال تسطيع أختراق الطبقه الشمعية المحيطه بجرثومه السل لذا يستخدم محلول مركز من ‪Carbol Fcuchsin‬‬
‫و الذي يحتوي على فينول حيث تستطيع بكتيريا السل بالمحافظه على الصبغة بعد معماملتها بمزيل لون قوي ‪Acid‬‬
‫‪ Alcohol‬بينما باقي انواع البكتيريا ال تسطيع األحتفاظ بها و تأخذ لون الصبغة الثانوية أما األزرق عند استخدام‬
‫‪ Methylene Blue‬أو أخضر عند استخدام ‪Malachite green‬‬
‫الطريقه‬
‫‪ kinyoun stain -1‬لمده ‪ 5‬دقائق ( ال داعي للتسخين مع هذه الصبغه) ثم شطف بالماء‬
‫‪ Acid alcohol 3 % -2‬لمده ‪ 3‬دقائق ثم شطف بالماء‬
‫‪ Methylene Blue -3‬لمده دقيقتين ثم شطف بالماء‬
‫النتيجه ‪:‬‬
‫تظهر عصيات السل باللون االحمر‬
‫‪Red baciili curved and some are beaded‬‬
‫‪HVS /WET PREPARATION‬‬
‫يطلب للكشف عن‬
‫‪-1‬الخاليا االلتهابية ‪PUS Cells‬‬
‫‪ -2‬الفطريات‬
‫‪Trichomonas vaginalis -3‬‬

‫حيث يتم وضع نقطة من المحلول الملحي على شريحة نظيفة‬

‫و تفرك المسحة جيدا ً ثم تقرأ على تكبير ‪40‬‬

‫ومالحظة وجود ‪clue cells‬‬

‫والتي تدل على وجود بكتيريا ‪Gardnerella vaginalis‬‬
 Stool for ZN Stain

This technique is useful for the identification of oocysts of the coccidian species
(Cryptosporidium, Cystoisospora, Cyclospora and.Isospora)
These protozoa are known as the enteric coccidia
‫يظهر عند الذين عندهم نقص مناعه مثل مرضى االيدز‬
‫ويظهر على شكل دوائر حمراء‬
 ‫‪CD TOXIN: C. DIFFICILE‬‬

‫فحص يطلب للبحث عن سموم ‪ Clostridium Difficile‬للحاالت المرتبطة بتناول كمية من المضادات الحيوية لفترات‬
‫طويلة ‪Antibiotic associated diarrhoea‬‬
‫(مما يؤدي الى قتل البكتيريا الغير ممرضة وانتعاش هذه البكتيريا االنتهازية الموجودة اصال في االمعاء)‬
‫وهذه البكتيريا لها اكثر من نوع من السموم اشهرها‬
‫) ‪ Toxin A ( Entrotoxin‬يجذب كريات الدم البيضاء ‪Neutrophil and Monocyte‬‬ ‫أ‪-‬‬
‫) ‪ Toxin B( Cytotoxin‬يحلل خاليا القولون‬ ‫ب‪-‬‬
‫مما يسبب أسهال شديد مائي و التهاب غشاء األمعاء ‪Pseudomembranous colitis .‬‬

‫للعلم ‪ -‬كلمة ‪ Difficile‬فرنسية تعني صعب النها تحتاج توفير ظروف صعبة لتنميتها‬
‫تعتبر بكتيريا خطيرة النها تنتج ابواغ ويجب غسل االيدي جيدا بالماء والصابون عند الخروج من عند المريض بينما نكتفي بتعقيم‬ ‫‪-‬‬
‫االيدي بالمعقم لالنواع االخرى )‬

‫الطريقة ‪:‬‬
‫ضع ‪ 0.5‬غرام من البراز( اذا كان البراز سائل خذ منة ‪ 200‬مايكروليتر ) في المحلول ( ‪Extraction Solution‬‬ ‫‪.1‬‬
‫) و امزجها جيدا ًواتركها لفترة كافية حتى تترسب االجزاء الصلبة في قاع االنبوب ‪.‬‬
‫ضعها في جهاز الطرد المركزي على سرعة ‪RPM 1000‬لمدة ‪ 1‬دقيقة ‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫خذ من الطافي ‪ 6‬نقاط ( حوالي ‪ 200‬مايكرو ليتر ) وضعه على الشريحة المخصصه ‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫اقرأ النتيجة بعد ‪ 15‬دقيقة ‪.‬‬ ‫‪.4‬‬

‫النتيجة ‪ :‬موجبة عند ظهور خطين‬

 ‫‪CSF LATEX‬‬
‫وهو فحص سريع للكشف عن اشهر انواع البكتيريا التي تسبب السحايا‬
‫‪Strep B‬‬ ‫•‬
‫‪H.influenzae‬‬ ‫•‬
‫‪S.pneumoniae‬‬ ‫•‬
‫‪N.meningitidis‬‬ ‫•‬
‫‪E.coli‬‬ ‫•‬

‫الطريقة ‪:‬‬
‫نضع عينة ‪ CSF‬في ماء يغلي لمدة ‪ 5‬دقائق ‪ .‬ثم نتركها لتبرد ‪.‬‬ ‫•‬
‫نفصل العينة في جهاز الطرد المركزي ‪.‬‬ ‫•‬
‫نأخذ ‪ 40‬مايكرو ليتر من الطافي على الخمس مواقع المخصص‬ ‫•‬
‫للفحص ‪.‬‬ ‫•‬
‫نحركها لمدة ‪ 3‬دقائق ‪.‬‬ ‫•‬
‫النتيجة ‪:‬‬
‫ظهور تخثر مع احد المواقع الخمسة ( ‪) Positive‬‬

‫سبب الغلي‬ ‫•‬

‫الغلي يذيب ال ‪ lipids‬ويحطم االنتجين وال يؤثر على ال ‪Epitope‬‬
‫وهو جزء من االنتجن يميز من قبل الجهازالمناعي وبذلك نتخلص من‬
‫‪ Like structer material‬اي المواد التي تتشابه مع االنتجينات‬
‫التي نبحث عنها‬

‫‪URINE LATEX‬‬
‫يطلب للكشف عن بكتيريا ‪ Strep B‬ألطفال الخداج خوفا من ان تكون‬
‫انتقلت اليه من األم اثناء الوالدة‬
‫الطريقة ‪:‬‬
‫نضع عينة البول في ماء يغلي لمدة ‪ 5‬دقائق ‪ .‬ثم نتركها لتبرد ‪.‬‬ ‫•‬
‫نفصل العينة في جهاز الطرد المركزي ‪.‬‬ ‫•‬
‫نأخذ ‪ 40‬مايكرو ليتر من الطافي على الموقع المخصص للفحص ‪Strep B .‬‬ ‫•‬
‫نحركها لمدة ‪ 3‬دقائق ‪.‬‬ ‫•‬
‫النتيجة ‪:‬‬
‫ظهور تخثر يعتبر ( ‪) Positive‬‬
 ‫التشخيص و القراءة‬
‫بعد زراعة العينة توضع في الحاضنة على درجة حرار ‪37 – 35‬د لمدة تتراوح من ‪ 24 – 18‬ساعة‬
‫تتم قراءة و تحديد نوع البكتيريا الممرضه فيها ‪.‬‬
‫و هناك عينات تترك لمدة ‪ 48‬ساعة مثل عينات (البلغم ‪ ،‬المسحات المهبلية ‪ ،‬السائل المنوي ‪ ،‬بزل النخاع الشوكي )‬
‫و عند القراءة يجب اتباع ما يلي ‪:‬‬
‫التأكد من مطابقة األسم و الرقم على األطباق مع الطلب ‪.‬‬
‫التأكد من مضي الوقل الالزم في الحاضنة ‪.‬‬
‫التأكد من زراعة العينة على األوساط المناسبة ‪.‬‬
‫توفر مصدر اضاءة كافي ‪.‬‬
‫معايير اعتبار البكتيريا كمسبب للمرض في عينة البول ‪:‬‬
‫يجب ان يكون عدد المستعمرات فيها اكثر من ‪ 10.000‬مستعمرة من نوع واحد من البكتيريا لكل مل حيث يجب‬
‫استخدام لوب معياري معروف الحجم‬
 ‫وهناك انواع من البكتيريا يمكن تمييزها بسهوله‬

P. aeruginosa can secrete a variety of pigments, •

including pyocyanin (blue-green), pyoverdine (yellow-green
and fluorescent), and pyorubin (red-brown).
Pyoverdine in the absence of pyocyanin is a fluorescent-•
yellow color

B- Galactosidase ‫ال تخمر الالكتوز اذا كان عندها نقص في انزيم ال‬ E.Coli *

Morexella *
) Oxidase +ve ‫ و‬Gram –ve diplococci ( ‫ممرضه تشبه النيسيريا‬
‫ ولونها بني فاتح‬ch.agar ‫ اضافه الى ال‬blood agar ‫لكنها ناشفه تتحرك مع العود وتنمو على ال‬
 ‫ معا‬V ‫و‬X ‫ تحتاج ال‬influenza Homophiles ‫* ال‬
‫وبذلك نفرقها عن االنواع االخرى‬

Blood agar ‫ (موجود في ال‬NAD )-

Ch agar ‫ موجودان في ال‬X ‫و‬V
Nicotinamide adenine dinucleotide= NAD

‫ اذا عملت تعايش‬Blood agar ‫ على ال‬Homophiles ‫* يمكن ان تنمو ال‬

Staph aureas ‫ مع ال‬Satilitism
5
Genital Tract .
Pathogens
A. Beta hemolytic Streptococci Groups A and B in any amount
)B. Staphylococcus aureus (In predominant numbers
) C. Candida species (In predominant numbers
D . ) Haemophilus influenzae (pregnant women .
E. Neisseria gonorrhoeae (Report in any quantity.(
F. Staphylococcus saprophyticus
G. Any organism in pure culture is potentially a pathogen
) H. Gardnerella vaginalis (clue cells present
I. Listeria species
j.non-lactose-fermenting, gram-negative rods for Shigella spp. or other enteric pathogens,
especially from pediatric

Normal flora
) a. Lactobacillus sp. (predominant organism found in healthy vaginal specimens
b. Staphylococcus species
c. Diphtheroids
d. Microaerophilic and anaerobic cocci
e. Anaerobic gram-negative rods (Not routinely performed, )
f. Streptococcus species including Enterococcus species
g. Clostridium species
h. Enterics(Enterobacteriaceae are part of the normal microbiota of the vagina and should not
be reported(
If there is more than one type, do not identify them. Report as mixed coliforms.
 ‫الفحوصات التشخيصيه‬
‫‪Catalase‬‬
‫هذا األنزيم يحطم الماء الثقيل ‪ % 3‬إلى ماء وأكسجين ويظهر األوكسجين على شكل فقاعات‬
‫↑ ‪H2o2 3% +Catalase → H2O + 1/2 O2‬‬
‫يكون ايجابي مع المكورات العنقودية‬
‫ال يعمل على الدم الن الكريات الحمراء تحوي الكتاليز‬
‫‪Coagulase‬‬
‫إنزيم تفرزه المكورات العنقودية الذهبية يخثر البالزما محوال الفيبرينوجين إلى فيبرين‬
‫يفضل بالزما األرانب‬
‫يعمل بطريقتين‪:‬‬
‫‪-1‬الشريحة ( وتكشف عن اإلنزيم المرتبط بالخاليا البكتيرية)‬
‫* نأخذ نقطه من المحلول الملحي على شريحة زجاجيه ونضع عليها مستعمره من البكتيريا ونحرك‬
‫لنتأكد من عدم وجود التخثر الذاتي ‪autoagglutination‬‬
‫نضع عليها نقطه من البالزما الطازجة ونحرك لمده ‪ 20-5‬ثانيه‬
‫‪-2‬األنبوب( و تكشف عن األنزيم الحر (‬
‫‪ -‬نضع ‪ 0.5‬مل من البالزما في أنبوب ونضيف لها مستعمره من البكتيريا‬
‫‪ -‬نضعهم في الحاضنة ونراقب التخثر كل ساعة لمده ‪ 6-4‬ساعات‬
‫‪ -‬إذا لم يحدث تخثر نتركها على درجه حرارة الغرفة لليوم التالي حتى نتجنب النتيجة السلبية‬
‫الكاذبة‬
‫‪Urease‬‬ ‫‪Urea tube‬‬

‫انزيم اليورييز يحطم اليوريا الى امونيا‬

‫مما يجعل الوسط قلوي‬ ‫‪• Urea agar contains urea‬‬
‫‪and phenol red indicator‬‬

‫ويتحول اللون من اصفر الى وردي‬ ‫‪• splitting of urea is‬‬

‫‪indicated by the change‬‬
‫‪of the indicator phenol‬‬
‫‪red to bright pink color‬‬

‫‪TSI = Tripple Suger Iron‬‬

‫الكشف عن قدره البكتيريا على تخمير احد السكريات ( الجلوكوز‪-‬الالكتوز –‬
‫)السكروز‬
‫) مع او بدون تحرير غاز مع احتماليه انتاج كبريتيد الهيدروجين‬
 Bacitracin disk ( 0.04 )
Sensitive with Strep group A or Strep pyogenes

CAMP test:
It is used to differentiate Strep group B or Strep agalactiae from
other types of Strep.
which secrete a protein called CAMP factor or “protein B”
acts synergistically with the beta lysin produced by Staphylococcus aureus
to produce a zone of enhanced lysis of sheep or bovine erythrocytes.

CAMP test was first identified by Christie, Atkins, and Munch-Peterson in 1944
and CAMP test is an acronym of three researchers.
Bile Esculin Test
‫والتي لها القدره على النمو في وجود امالح‬group D streptococci ‫للكشف عن‬
‫ )هذه االمالح‬hydrolyze (‫الصفراء ولها القدره على تميؤ‬
‫حيث يتحول لون الميديا من االصفر الى االسود‬

The optochin disk

Sensitive with Streptococcus pneumoniae
Resistant with Streptococcus veridance
 MIO = Motility Indole Ornithine
‫النتائج الموجبه تكون كالتالي‬
motility (cloudiness – disregarding stab line)
decarboxylation of ornithine (anaerobic alkaline rx.)
indole production (red color with Kovacs reagent)
IMVIC :
· I: indole
· M: methyl red
· V: Voges-Proskauer
· C: citrate
Indol
‫الكشف عن قدره البكتيريا على انتاج االندول عند استخدامها‬
‫للحامض االميني التربتوفان‬
‫ لونه اصفر يعطي لون احمر‬% 1 ‫باضافه كاشف كوفاك‬
Citrate tube
• The tube contains ammonium
citrate and bromothymol blue
as indicator
• the indicator change from
green to blue indicates
positive results Citrate
‫الكشف عن قدره البكتيريا على استخدام السترات كمصدر وحيد للكربون‬
‫وانتاج الطاقه‬
‫يتحول اللون من اخضر الى ازرق‬
 ‫‪Methyl red &Voges proskauer test‬‬
‫اختبارين متالزمين او ان احدهما مكمل لفحص االخر‬
‫الوسط المستخدم للفحصين هو نفسه جلوكوز بروث لكن تختلف الكواشف المستخدمة في كل فحص‬
‫‪ :‬اساس العمل‬
‫ان الجلوكوز في بداية االمر خالل عملية الـتحلل يتحول الى حمض البايروفيك‬
‫‪ .‬بعدها هناك مسالك عدة ليمر بها حامض البايروفيك حسب نوع البكتريا اي كونها هوائية او الهوائية او اختيارية‬
‫بعض من هذه البكتريا تخمر الجلوكوز منتجة نواتج حامضية مثل‬
‫الفورميت واالستيت وهذه المركبات تخفض درجه الحموضه للوسط ويكشف عنها ب ميثيل ريد‬
‫اما البعض االخر من البكتريا فتستخدم مسار اخر لتخمرالجوكوز‬
‫اذ تكون نتيجتها مركبات مثل االسيتوين والبيوتانيدول‬
‫هذه النواتج تميل الى التعادل ولها خاصية انتاج لون احمر مع كاشف االلفانفثول الموجود في محيط قاعدي‬
‫‪ :‬طريقة العمل‬
‫تزرع البكتيريا في وسط جلوكوز بروث في انبوبتين لمده ‪ 48‬ساعه‬
‫بعد الحضن يضاف لالولى ‪0.5‬مل من ميثيل ريد وللثانيه ‪ 0.6‬من الكاشف االول و ‪ 0.2‬من الكاشف الثاني‬
‫‪ Voges proskauer‬كواشف اختبار‬
‫‪Reagent A alphanaphthol 5gr +Ethyl alcohol 100 ml‬‬
‫‪Reagent B KOH 40 gr in 100 ml Dist.water‬‬
‫ترج االنابيب برفق وتترك لمده ‪ 15‬دقيقه‬
‫النتيجه الموجبه للميثيل هو اللون االحمر والسلبيه اصفر‬
‫وكذلك للفوكاس الموجب احمر او برتقالي‬
‫مالحظه‬
‫الفحصين متعاكسين في النتائج‬

‫‪VP = Voges – Proskauer‬‬

‫قدره البكتيريا على انتاج ماده‬
‫‪Acetyl methyl carpinol‬‬
‫ايجابي‪ -‬وجود لون احمر بعد خمس دقائق‬
‫‪Oxidase‬‬
‫انزيم االوكسيديزيعمل على اكسده الصبغه المستخدمه ويحولها الى لون بنفسجي‬
‫‪ Tetramethyl-para-phenylendiamine‬الصبغه‬

‫‪ONPG = O- nitrophenyl B-galactosidase‬‬

‫‪Beta-Galactosidase Test‬‬

‫يستخدم الفحص للتعرف على البكتيريا التي تنتج إنزيم بيتا جاالكتو سيداز‬
‫ويطلب للتفريق بين البكتيريا اللتي تخمر الالكتوز بشكل متأخر ( تكون ايجابيه )والتي‬
‫التخمر الالكتوز نهائيا‬
‫هذا اإلنزيم قادر على تكسير(تحليل) سكر الالكتوز ليعطي جلوكوز وجالكتوز‪ ,‬ولكي يتحلل الالكتوز يجب عليه أن يعبر من خالل جدار الخلية‬
‫‪ Beta-Galactosidase‬و‬ ‫عن طريق إنزيم ‪ premise‬وبالتالي البكتيريا التي لديها القدرة على إفراز كال من اإلنزيمين‬
‫‪ premise‬ستخمر الالكتوز بسرعة ‪,‬بينما البكتيريا التي ليس لديها إنزيم ‪ premise‬ستعتبر أنها غير مخمرة لالكتوز‪...‬‬
‫لذلك هذا الفحص ‪ ONPG‬يعتبر فحص سريع ‪,‬حيث نستخدم فيه المادة ‪ ,‬مادة اللون لها ‪,‬تتكون من ‪o-nitrophenol‬‬
‫مرتبط مع جالكتوزبواسطة ‪ B-Galactoside bond‬فهذه المادة من السهل أن تعبر من خالل الجدار الخلوي للبكتيريا من غير وجود إنزيم‬
‫‪premise.‬‬
‫الطريقه‬
‫‪ -1‬ضع قرص ‪ ONPG‬في انبوب يحوي ‪ 2‬مل من المحلول الملحي‬
‫‪ -2‬اضف له البكتيريا وضعه في الحاضنه لمده ‪ 4‬ساعات‬
‫النتيجه ايجابيه ‪ :‬ظهور لون اصفر بعد ‪ 4‬ساعات‬
‫‪API = Analatical profile index‬‬
‫وهو عباره عن مجموعه من الفحوصات الكيميائيه‬
‫( ‪ 10‬فحوصات او ‪ 20‬فحص )‬
‫على شكل شريط جاهز توصلنا لنوع البكتيريا‬

‫‪LIA = Lysine iron agar‬‬ ‫‪Decarboxylase‬‬

‫قدره البكتيريا على ازاله مجموعه الكاربوكسيل من الحمض االميني الموجود في الوسط‬
‫منتجا امين وتحويل الوسط الى قلوي‬
‫قراءه النتيجه (الجزء السفلي من االنبوب )‬
‫•ايجابي‪ -‬استعاده اللون البنفسجي بسبب ازاله الكاربوكسيل المصحوب بانتاج امين‬
‫•وتحويل الوسط الى قلوي‬
‫* سلبي – ظهور اللون االصفر بسبب استهالك الجلوكوز وتحويل الوسط الى حامضي‬
‫ولعدم قدره البكتيريا على ازاله الكاربوكسيل وتحويل الوسط الى قاعدي‬
 ‫أجراء فحص الحساسية‬

‫اذا كانت البكتيريا عصيات سالبة او مكورات عنقودية‬

‫يتم تحضير محلول قياسي منها يسمى ‪ 0.5 Mcfarland‬بالطريقة التالية ‪:‬‬
‫تزرع ‪ 5 – 4‬مستعمرات نقية في وسط مائع مثل ‪ Nutrient Broth‬و توضع في الحاضنة بين ساعتين الى خمس ساعات‬
‫للحصول على عكورة توازي عكورة محلول ‪ Mcfarlan‬القياسي‬
‫ثم تغمس مسحة داخل المحلول ثم تعصر ألزالة الزائد منها و تمسح البكتيريا على كامل سطح الطبق باألتجاهات الثاللثة (‬
‫افقي & عامودي & قطري ) لضمان توزيع متجانس على كافة مساحة سطح الطبق‬
‫يترك الطبق ‪ 5 – 3‬دقائق ليجف ‪.‬‬
‫اذا كانت البكتيريا مكورات سبحية ابو بكتيريا صعبة األرضاء مثل الهيموفيلس‬
‫يتم انتقاء مستعمرة او اثنتين باللوب لكل طبق حساسية ‪.‬‬
‫يعمل خط على احد اقطار الطبق‬
‫يستخدم مسحة جافة لتوزيع البكتيريا بالتساوي بأتجاه معامد للخط األول ثم بأتجاه موازي لة ثم بأتجاة مائل‬
 ‫فحص الحساسية‬
‫يعمل فحص الحساسية بطريقتين‬
‫‪system Kirby Bauer.1‬‬
‫( ‪( disc diffusion method‬‬
‫وتعتمد على‬
‫‪.1‬الميديا المستخدمه هي ‪ Mueller Hinton agar‬مع ‪ % 2- 1.5‬اجار‬
‫‪.2‬درجه حموضة الميديا ‪7.4- 7.2‬‬
‫‪.3‬عمق الميديا ‪ 4‬ملم ( الرقيقه تزيد حلقه منع النمو والسميكة تقللها )‬
‫‪.4‬عكوره البكتيريا ‪ 0.5‬ماكفارلند ‪0.5 McFarland‬‬
‫‪.5‬المسافة بين القرص وحافة الطبق ‪ 15‬ملم وبين القرص واألخر ‪ 20‬ملم‬
‫‪.6‬الحضانه ‪ 24-18‬ساعة والحرارة من ‪ 37-35‬م‬
‫مال حظه ‪:‬‬
‫‪0.5 mcfarand‬‬
‫عكوره هذا المحلول توازي عكوره البكتيريا بتركيز ‪ 10‬خليه ‪ /‬مل‬
‫تحضيره‪ 0.5 :‬مل كلوريد الباريوم ( ‪ 99.5 + )BACL2‬حمض الكبرييك ( ‪( H2SO4‬‬
‫يحفظ في الظالم‬
‫يقاس على طول موجه ‪620 NM‬ويعطي قراءه ‪0.08-0.10‬‬

‫‪MIC= minimal inhibitory concentration -2‬‬

‫وهو اقل تركيز من المضاد الحيوي الذي يقتل البكتيريا‬
‫ و تحلل الدم ال تحسب‬proteus ‫امواج ال‬-
‫مع حلقه منع النمو‬

If we do sensetivity for
S.pneumonia in blood or CSf and
oxacillin ( OX ) was resistant we
must do MIC for penicillin
RESULT
In case of CNS
Less than 0.1 ----S
0.1-2-------I
More than 2--------R

In other case
Less than 2------S
2-4--------I
More than 4--------R
 ‫توزيع المضادات الحيوية‬

‫‪ -1‬يعتمد انتقاء األقراص المستخدمة لفحص الحساسية على عدة عوامل اهمها ‪:‬‬
‫عمر المريض ‪ +‬مصدر العينة ‪ +‬نوع البكتيريا‬
‫‪ -2‬يتم توزيع األقراص بشكل متساوي على محيط الطبق لمسافه معقولة عن حافة الطبق و يوضع‬
‫قرص في مركز الطبق ‪.‬‬
‫‪ -3‬يتم توزيع األقراص بأستخدام ملقط معقم او ابرة ( يراعى ضغط بسيط على كل قرص لضمان‬
‫التصاقة بالوسط ) ‪.‬‬
‫‪ -4‬توضع األطباق في الحاضنة على درجة ‪ 37‬مئوية و يراعى نوع البكتيريا فيما اذا كانت تحتاج الى‬
‫ظرووف معينة مثل تركيز معين من ‪ co2‬او ظروف الهوائية ‪.‬‬
‫‪ -5‬تقاس قطر منطقة منع النمو ‪ Zone of Inhibition‬بأستخدام مسطرة لقراءة حساسية او مقاومة‬
‫البكتيريا لكل مضاد بناء على مقايس خاصة بكل مضاد حيوي ‪.‬‬
1 Ceftazidime CAZ ‫على جميع العينات‬
2 Imipenem IPM ‫على جميع العينات‬
3 Tazobactam TPZ ‫على جميع العينات‬
5 Meropenem MEM ‫على جميع العينات‬
6 Cefepime FEP ‫على جميع العينات‬

7 Ciprofloxacin CIP . Strep ‫ سنوات وال‬9 ‫على جميع العينات ماعدا الحوامل و األطفال أقل من‬

8 Levofloxacin LEV . Strep ‫ سنوات وال‬9 ‫على جميع العينات ماعدا الحوامل و األطفال أقل من‬
9 Ceftizoxime ZOX Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
10 Cefotaxime CTX Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
11 Cefodox CPD Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
12 Cefuroxime CXM Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
13 Sulfamethox SXT Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
14 Amoxicillin AMC Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
15 Ceftriaxone CRO Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
16 Cephalexine CL Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
17 Ertapenem ETP Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
18 Tigecyclin TGC ‫ و األطفال‬Proteus ‫ و‬Psedo ‫على جميع العينات ما عدا‬
19 Teicoplanin TEC Stapth + Strep
20 Vancomycin VA Stapth + Strep
21 Erythromycin E (Stapth+Strep‫) ماعدا عينة البول‬+StrepPne+H+N)
22 Clindamycin DA Stapth
23 Doxycycline DO Stapth
24 Oxacillin OX Stapth , Strep Pne.
25 Novobiocin NV Stapth (Co.Ag Negative )in UR+HVS Female
26 Gentamycin CN Stapth + G - ve
27 Amikacin AK Stapth + G - ve
28 Penicillin P Strep + Haemophilus
29 Ampicillin AM Psedo + Staph ‫على جميع العينات ما عدا‬
30 Cefixime CFM Psedo + Staph + Strep ‫على جميع العينات ما عدا‬
31 Bacitracin B Streptococcus
32 Chloramphinico C ‫عينات األذن و العين‬
33 Colistin CT Acinetobacter + Psedomonas +NF
34 Optchion OP α.H.Streptococcus.
Haemophilus ‫ معاملة‬Moraxella ‫ و‬Neisseria ‫ تعامل‬: ‫مالحظة‬
‫ على عينات األطفال‬LEV ‫ و‬CIP ‫ يوضع‬: ‫مالحظة‬
‫لكل األعمار اذا كانت العينة مأخوذه من العين او األذن‬
‫أليه عمل المضادات الحيوية‪.‬‬
‫منع تكوين جدار الخليه ) ‪( Inhibition of cell wall synthesis‬‬
‫‪Penicillin‬‬
‫‪P-AM-AMC‬‬
‫‪Cephalosporin‬‬
‫الجيل االول‪CL‬‬
‫للبكتيريا الموجبه وبعض السالبه‬
‫الجيل الثاني‪CXM-ZIL‬‬
‫للسالبه اكثر من الموجبه‬
‫الجيل الثالث‪ZOX-CFM-CDR-CRO-CAZ-CTX-CPD‬‬
‫للسالبه على شكل ابروال ينفع مع ‪ESBL‬‬
‫الجيل الرابع‪FEP‬‬
‫‪VAncomycin‬‬
‫‪Bacitracin‬‬
‫قاتل للبكتيريا الموجبه ويستعل للعالج الموضعي فقط‬
‫‪ -2‬جرح غشاء الخلية) ‪( Injury of cell membrane‬‬
‫‪Colistin -1‬‬
‫‪Polymyxin B -2‬‬
‫‪Anti-fungal (Nystatin , Amphotercin B , Flucanazol ) -3‬‬
‫للسالبة أكثر من الموجبة خاصة ‪Acinitobacter and Pseudomonas‬‬

‫‪ -3‬منع تصنيع البروتين) ‪( Inhibition of Protein synthesis‬‬

‫‪Aminoglycosides‬‬
‫‪AK-CN‬‬
‫يرتبط بالريبوسومات ويحد من نشاطها في تكوين البروتين‬
‫سامه زيادته تؤدي الى‬
‫تخريب العصب السمعي‬
‫ايقاف عملية الترشيح للكببيات الكلويه‬
‫يعطى للبكتيريا السالبه غالبا وهو على شكل ابر‬
‫‪ Chloramphenicol‬يستخدم للسحايا وااللتهاب داخل الخاليا والكالميديا والميكوبالزما‬
‫‪Tetracycline‬للسالبة والموجبه‬
 Macrolides
E-CLR -AZT
‫للبكتيريا الموجبه خاصه التهاب المجاري التنفسيه‬
Clindamycin , lindomycin
‫للبكتيريا الموجبه في تجويف الفم والعظام‬
CD Toxin ‫تاثيراته الجانبيه االصابه بال‬

( Inhibition of DNA synthesis ) DNA ‫ تثبيط تصنيع ال‬-4

Nalidixic acid & Nitrofurnton
‫للبكتيريا السالبه في البول فقط‬
Nalidixic acid modified in to useful drug cald ( Fluroquiolone
LVE-CIP-LOM-NOR
‫للبكيريا السالبه والموجبه وليست لللسحايا‬
Rifampin -2
Affect mainly Mycobacterium , Chlamydia , Brucella
Metronedazol ( Flagyl )-3
‫للبكتيريا الالهوائيه واالميبا‬

( Inhibition synthesis of essential ‫ التدخل في استقالب بعض المواد الحيويه الالزمه لتكوين الفوليك اسيد ونمو الخليه‬-5
metabolites )
Sulfamethox (SXT)
T.B drugs
1- Isonazid
2-Ethabutol
3-Rifampin
T.B is not treated by one of these drugs but rather by a combination of 2 or 3 drugs tht can almost inhibit and destroy
Mycolic acid in the cell wall
Antibiotic synergism
Interaction between B- lactams .whitch damage the bacteria cell membrane .and Aminoglycosides which inhibit protein
synthesis.
Antibiotic Antagonism
Interaction between bacteriostatic and bactericidal antibiotic .
 Gram Stain (Solutions)
Crystal violet preparation for Gram-stain :
Crystal violet crystal 2 gm + 20 ml of 95% Alcohol .
Ammonium oxalate 0.8 gm + 80 ml of D. water .
Iodine for Gram-stain :
Potassium Iodide 2 gm + Iodine 1 gm . Mix in morter .
Disolve in 300 ml of D. water .
Aceton Alcohol for Gram-stain:
500 ml of Aceton + 500 Ethyl Alcohol 95% .

Safranin for Gram-stain:

Safranin 1 gm + D. water 100 ml . Filter after 24 hrs .
or
Safranin 4 gm + 100 Ethyl Alcohol 95% +D. water 900 ml . Filter after 24 hrs .

Z. N. Stain (Solution)
Methelen Blue for Z.N.:
0.3 gm . Methelen Blue chloride
100 ml . D. water
Acid Alcohol for Z.N.:
3 ml of concent. HCL .
97 ml of 95% ethyl Alcohol.
Carbal Fuchsin:
20 g . Basic fuchsin
100 ml . Ethyl Alcohol 95%
40 ml . Phenol
500 ml . D. water
Oxidase reagent
0.1 g . Tetramethyl -p- phenylenediamine
Dihydrochloride *
10 ml . D. water
NaOH 4%:
40 gm NaOH
1000 ml D.W.
0.04 gm Phenol Red
2N HCL:
16.6 ml HCL (12 N)
83.4 ml D.W.

H2O2 3%:
10 ml H2O2 (30%)
90ml D.W.
kovacs indole:
Isoamyl alcohol 150 ml
Patadimethyl aminobenzaldehyde 10 gm
HCL concentrated 50 ml
( Dissolve the aldehyde in the alcohol, and add the acid slowly)
 ‫اختصارات في علم االحياء الدقيقة‬
‫‪ESBL: Extended Spectrum Beta-Lactamase gram negative bacteria‬‬

‫‪B-Lactamase‬‬
‫وهو إنزيم تفرزه بعض أنواع البكتيريا‬
‫يحطم ال ‪ B-Lactam ring‬في المضاد الحيوي فال يستطيع االتحاد مع مستقبالت البنسلين في البكتيريا (‬
‫)‪Penicillin Bending Protein : PBD‬‬
‫* االموكالن يحتوي على ‪ clavulanic acid‬يتحد مع اإلنزيم وال ‪ Amoxicillin‬يحطم جدار الخلية‬
‫* ال ‪ Tazocin‬يحتوي على ‪ Tazobactam‬يتحد مع اإلنزيم وال ‪ Pipracillin‬يحطم جدار الخلية‬
‫‪ -‬اذا عملت هذه المضادات مشاركه ( ‪ )Synergistic‬مع الجيل الثالث تكون البكتيريا ‪ESBL‬‬
 Laboratory tests for ESBLs detection

Tests Method Presence of ESBLs if..

Double disk Disk of 3rd cephalosporin Enhanced inhibition

approximation or placed 30 mm from
double disk synergy amoxicillin-clavulanic acid

Combination disk Uses 2 disks of 3rd An increase of >5 mm in

cephalosporin alone and zone inhibition with use of
combined with clavulanic acid the combination disk

Microdilution A broth containing 1 g/mL Presence of growth

3rd cephalosporin
Confirmatory tests for ESBL detection

Stürenburg E, Mark D. J Infect 2003; 47: 273-95.

 ‫‪D-TEST‬‬
‫‪Inducible clindamycin resistance‬‬

‫طريقة العمل‬
‫نضع قرص ال ‪ Clindamycin‬و ال ‪ Erythromycin‬على مسافة ‪ 20-15‬ملم‬
‫من بعض‬

‫االيجابية‬
‫اذا ظهرت منطقة على شكل حرف ‪ D‬حول ال ‪ Clindamycin‬في الوقت الذي‬
‫يكون فيه ال ‪ Erythromycin‬مقاوم‬
‫عندها نسجل ال ‪ Clindamycin‬مقاوم‬

‫تفسير النتيجة‬
‫يدل على ان ال ‪Erythromycin‬حرضت ال ‪ Erm gene‬في البكتيريا على‬
‫انتاج انزيم ‪ Methylase‬بكميات كبيرة مما خرب عمل ال ‪ Clindamycin‬عن‬
‫طريق تغيير مواقع ارتباطه بالبكتيريا‬

‫الخالصة‬
‫هذا الفحص يعمل للكشف عن الجين المحرض ال( ‪ )Erm gene‬في البكتيريا‬
KPC :Klb .pnemonea Carbapenemase – produser •
IPM-ETP- carbapenems ‫• وهي مقاومه الغلب المضادات الحيوية وحتى مجموعة‬
)MEM)
•
Occurs in Enterobacteriaceae •
Most commonly in Klebsiella pneumoniae –
Also reported in: K.oxytoca, Citrobacter freundii, Enterobacter –
spp., Escherichia coli, Salmonella spp., Serratia spp.,
Also reported in Pseudomonas aeruginosa (Columbia) •
‫• الفحص التأكيدي لها هو‬
Modified Hodge Test •
100% sensitivity in detecting KPC; also positive when –
other carbapenemases are present
100% specificity –
Procedure described by Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001.
 Modified Hodge Test

Described by Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001.

• mCIM (modified Carbapenem Inactivation Method
for Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae (CRE)
 Susceptibility Profile of KPC-Producing K.
pneumoniae
Antimicrobial Interpretation Antimicrobial Interpretation
Amikacin I Chloramphenicol R
Amox/clav R Ciprofloxacin R
Ampicillin R Ertapenem R
Aztreonam R Gentamicin R
Cefazolin R Imipenem R
Cefpodoxime R Meropenem R
Cefotaxime R Pipercillin/Tazo R
Cetotetan R Tobramycin R
Cefoxitin R Trimeth/Sulfa R
Ceftazidime R Polymyxin B MIC >4g/ml
Ceftriaxone R Colistin MIC >4g/ml
Cefepime R Tigecycline S
MRSA: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus •
MRSE Methicillin – resistant Staphylococcus epedirmidis •
VRE: Vancomycin Resistant Enterococci
Enterococcus .Faecium ( 52 % VRE )
Enterococcus . Faecalis ( 1.9 % VRE )
MIC: Minimal inhibitory concentration
AFB Acid fast bacilli •
ATCC American Type Culture Collection •
EMB Eosin methylene blue agar •
Lj media Lowenstein Jensen media •
SDA Sabouraud dextrose agar •
TCBS thiosulfate –citrate- bile salt sucrose agar •
ONPG O-nitrophenyl-b -D-galactopyranoside •
ZN Ziehl Neelsen (staining •
MDR Multy drug resistance •
CFU Colony forming unit •
‫قراءه فحص الحساسية‬
‫‪ESBL‬‬
‫‪ -‬لمعرفه ال ‪ ESBL‬ننظر الى نتائج ال ( ‪ )CRO-CTX-CAZ‬تكون مقاومه‬
‫‪ -‬البنسلينات البسيطه والجيل االول والجيل الثاني والجيل الثالث من السيفالوسبورينات تكون مقاومه‬
‫‪ -‬ال نسجل الكلورامفينيكول‬
‫‪ -‬اذا عمل االموكالن مشاركه ( ‪)Synergistic‬‬
‫مع الجيل الثالث تكون البكتيريا ‪ESBL‬‬

‫‪ENTEROCOCUS‬‬
‫‪ -‬لمعلرفتها يكون فحص ال ‪Blile Esculin‬‬
‫ايجابي (لون اسود )‬
‫والمضاد الحيوي ‪ SXT‬مقاوم‬
‫‪ -‬ننظر الى نتائج ال ( ‪)CRO-CTX-CAZ‬‬
‫تكون مقاومه‬
‫‪ -‬نسجل كل السيفالوسبورينات مقاومه‬
‫وكذلك ال ‪ETP‬‬
 MRSA
‫مقاومة‬Betalactam ‫ تكون كل مجموعة ال‬Resistant OX ‫ اذا كان ال‬-
TGC -VA-TEC-CN-AK-CIP-LEV-SXT- ‫ تكون حساسه مع‬-
Do - DA ‫باالضافه الى‬
) - ( ‫نضع الباقي‬
‫ اذا كان الجيل الثالث من‬MRSA ‫ نعتبر البكتيريا‬-
‫ حساس‬OX ‫السيفالوسبورينات مقاوم حتى لو كان ال‬
CL-CXM ‫وفي هذه الحالة نسجل نتيجة ال‬

Examples of inhibition zones for Staphylococcus aureus with

benzylpenicillin.
a) Fuzzy zone edge and zone diameter ≥ 26 mm. Report
susceptible.
b) Sharp zone edge and zone diameter ≥ 26 mm. Report resistant.

Pseudomonas ‫ولقراءه ال‬

:‫مالحظة‬
‫ مقاوم‬ETP ‫ وكانت النتيجة ان‬NLF ‫اذا اشتغلنا بكتيريا‬
Pseudomonas ‫ حساس تكون هذه البكتيريا غالبا‬CAZ ‫و‬

) AM ( ‫ ) نضع ال‬Klebsiella( ‫ودائما عند قراءه ال‬

‫مقاوم‬
 ‫أسباب وجود كريات دم بيضاء في البول مع عدم وجود بكتيريا في الزراعة‬
‫‪ -1‬حصى المسالك البولية‬
‫‪ -2‬بكتيريا السل والتي تحتاج أوساط زراعية خاصة‬
‫‪-3‬الكالميديا بنسبة ‪ % 50‬واليوريبالزما ‪% 20‬‬
‫‪ -4‬بعض الفيروسات مثل الهربس و االدينوفيرس‬
‫‪ -5‬تلف حليمات الكلى‬
‫‪-6‬التلوث باإلفرازات المهبلية خاصة عند الحوامل‬
‫‪-7‬التهاب وتضخم البروستاتا‬
‫‪-8‬بعض الطفيليات مثل التريكوموناس‬
‫‪ -9‬أسباب ميكانيكية مثل جرح من بربيش البول أو المنظار أو حساسية من مواد كيميائية‬
‫‪-10‬بكتيريا النيسيريا والهيموفالس بعدوى من المهبل‬
‫‪-11‬تناول احد المضادات الحيوية قبل إجراء الفحص بمدة اقل من ‪ 3‬أيام‬
‫‪ -12‬سرطانات الجهاز البولي‬
‫‪ -13‬االلتهابات بسبب الفطريات‬
‫‪ -14‬بعض االدوية تسبب ظهور كريات الدم البيضاء في البول‬
‫•‬ ‫‪,‬‬ ‫وعند وجود البكتيريا او الفطريات في البول دون وجود االعراض ال تعالج اال في الحاالت التالية‬
‫•‬ ‫‪ 1‬عند الحوامل‬
‫•‬ ‫‪ -2‬عند من زرعوا كلى‬
‫•‬ ‫‪-3‬من عندهم نقص كريات الدم البيضاء في الدم‬
‫•‬ ‫‪ -4‬قبل الدخول للعمليات الجراحية خاصة المثانة والبروستاتا‬
markers for Urinary Tract Infections: complicated
*Male sex
•Elderly‫كبار السن‬
•Hospital-acquired infection
•Pregnancy
•Indwelling ‫لمدة طويلة‬urinary catheter
•Recent urinary tract intervention‫آخر تدخل جراحي مثل زراعة الكلى او وجود حصوات‬
•Functional or anatomical abnormality of the urinary tract ‫خللل وظيفى او تشريحي‬
•Recent antimicrobial use
•Symptoms for > 7 days at presentation
•Diabetes mellitus
•Immunosuppression
 ‫‪ 6‬اسباب رئيسية لمقاومة المضادات الحيوية‬
‫• االفراط في تناول المضادات الحيوية‬
‫•عدم اكمال كورس المضاد الحيوي‬
‫• االفراط في استخدام المضادات الحيوية للماشية و مزارع االسماك‬
‫• ضعف مكافحة العدوى في اماكن الرعاية الصحية‬
‫• سوء النظافة والتطهير‬
‫•قلة اكتشاف مضادات حيوية جديدة‬
High-Level Aminoglycoside Resistance in Enterococcus Species

HLAR was investigated by disk diffusion test using gentamicin (120 µg) and streptomycin
(300 µg) disks
Which are the two most active of the aminoglycosides
High-level resistance to gentamicin and/or streptomycin indicates that an enterococcal isolate will not
be killed by the synergistic action of a penicillin or glycopeptides ( Vancommycin .Teicoplanin )
combined with that aminoglycoside.

Procedure
•Using a pure 18-24 hour prepared suspension ( equivalent to a McFarland 0.5 opacity
standard )of the organism
•Dip a sterile cotton swab into the organism suspension
•Evenly inoculate the dried surface of Muller Hinton agar plate by streaking the swab over the
surface of the plate in three directions
•Place one gentamicin (120 µg) and streptomycin (300 µg) disks on the media surface away
from each other grater than 30 mm apart
•Invert plates in incubator at 35 C for 18-24 hours

Interpretation result
1-synergy-susceptible(> or = 10mm)
2-Synergy-inconclusive, referred for confirmation( 7-9 mm)
3-synergy-resistant (6mm)
 Endospore Staining

Primary Stain: Malachite green (0.5%

(wt/vol) aqueous solution)
0.5 gm of malachite green
100 ml of distilled water
Decolorizing agent
Tap water or Distilled Water
Counter Stain: Safranin
Stock solution (2.5% (wt/vol) alcoholic
solution)
2.5 gm of safranin O
100 ml of 95% ethanol

1-Take a clean grease free slide and make smear using sterile technique.
2-Air dry and heat fix the organism on a glass slide and cover with a square of blotting paper or toweling cut
to fit the slide.
3-Saturate the blotting paper with malachite green stain solution and steam for 5 minutes, keeping the
paper moist and adding more dye as required. Alternatively, the slide may be steamed over a container of
boiling water.
4-Wash the slide in tap water.
5- Counterstain with 0.5% safranin for 30 seconds.
6-Wash with tap water; blot dry.
7-Examine the slide under microscope for the presence of endospores. Endospores are bright green and
vegetative cells are brownish red to pink.
 Capsule Staining
Reagents used for Capsule Staining •
Crystal Violet (1%) •
Crystal Violet (85% dye content) = 1 gm
Distilled Water = 100 ml
Nigrosin •
Nigrosine, water soluble = 10 gm
Distilled Water = 100 ml

Procedure of Capsule Staining •

1- Place a small drop of a negative stain (India Ink, Congo Red, Nigrosin, or Eosin) on the slide. •
Congo Red is easier to see, but it does not work well with some strains. India Ink generally works, but it has tiny particles
that display Brownian motion that must be differentiated from your bacteria. Nigrosin may need to be kept very thin or
diluted.
2-Using sterile technique, add a loopful of bacterial culture to slide, smearing it in the dye. •
3-Use the other slide to drag the ink-cell mixture into a thin film along the first slide and let stand •
for 5-7 minutes.
Allow to air dry (do not heat fix). •
4- Flood the smear with crystal violet stain (this will stain the cells but not the capsules) for about 1 •
minutes. Drain the crystal violet by tilting the slide at a 45 degree angle and let stain run off until it
air dries .
5- Examine the smear microscopically (100X) for the presence of encapsulated cells as indicated by •
clear zones surrounding the cells
Chemotherapeutic Agents for Mycobacteria
Isoniazid
Rifampicin
Ethambutol
Streptomycin
Pyrazinamid

Antifungal
Amphotericin B
Fluconazole
Itraconazole
Ketoconazole
Miconazole
5-Fluorocytosine
Voriconazole

:‫المضادات التي على شكل ابر فقط‬

VA-TEC-ETP-ZOX-CRO-CAZ-TZP-IPM-CN-AK-CTX-ATM-FEP-TGC-C-MEM
‫المضادات التي على شكل حبوب‬
P-AM-AMC-E-CXM-CL-CPD-CIP-LEV-CDR-SXT-DA-DO