гострої діареї у немовлят і дітей, а також одним із збудників гастроентериту

ІНСТРУКЦІЯ З ВИКОРИСТАННЯ дорослих. Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих;

Хоча загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він
все ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому
Назва продукту: світі. Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в
Набір для ПЛР у реальному часі на панель організм людини через травний тракт. блювання та симптоми з боку
дихальних шляхів. Ротавірус (РВ) є одним із основних збудників діареї
вірусів діареї (8) немовлят, клінічних проявів гострого гастроентериту, осмотичної діареї,
симптомів тяжкого зневоднення. Ротавіруси можна розділити на сім груп
відповідно до відмінностей генома. Ротавірус А є основним збудником
Для використання з Bioperfectus STC-96A, STC-96A PLUS, Applied Biosystems гострої діареї у немовлят і дітей, а також одним із збудників гастроентериту
7500, QuantStudio™ 5, Roche LightCycler®480, Bio-Rad CFX96™, QIAGEN Rotor- дорослих. Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих;
Gene Q, Analytik Jena qTOWER3 та іншими відповідними машинами. Хоча загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він
все ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому
світі. Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в
YJC160801NW 25/50 організм людини через травний тракт. Ротавірус (РВ) є одним із основних
збудників діареї немовлят, клінічних проявів гострого гастроентериту,
Jiangsu Bioperfectus Technologies Co., Ltd осмотичної діареї, симптомів тяжкого зневоднення. Ротавіруси можна
No. 837, Yaocheng Avenue, 225300 Taizhou City, Jiangsu Province, розділити на сім груп відповідно до відмінностей генома. Ротавірус А є
основним збудником гострої діареї у немовлят і дітей, а також одним із
Китайська Народна Республіка. збудників гастроентериту дорослих. Діарея, спричинена групою В,
www.bioperfectus.com тел.: +86-21-34637616 переважно переважала у дорослих; Хоча загальний рівень виявлення групи
С у пацієнтів з діареєю низький, він все ще викликає спорадичні та спалахи
діареї у дітей і дорослих у всьому світі. Основним шляхом передачі цих
1. Передбачуване використання вірусів є фекально-оральний шлях в організм людини через травний тракт.
Набір для ПЛР у реальному часі на панель вірусів діареї (8) заснований на Ротавірус (РВ) є одним із основних збудників діареї немовлят, клінічних
технології ПЛР у реальному часі для виявлення РНК норовірусу GI/GII, проявів гострого гастроентериту, осмотичної діареї, симптомів тяжкого
ротавірусу групи A/B/C, саповірусу, астровірусу, ентерального аденовірусу. зневоднення. Ротавіруси можна розділити на сім груп відповідно до
Зразки можна взяти з людського калу та анального мазка. відмінностей генома. Ротавірус А є основним збудником гострої діареї у
немовлят і дітей, а також одним із збудників гастроентериту дорослих.
2. Компоненти набору Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих; Хоча
загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він все
Компоненти Флакони/ Об’єм/10Т Об’єм/25T ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому світі.
набір Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в
Буфер RT-PCR 1 563 мкл 1125 мкл організм людини через травний тракт. сильні симптоми зневоднення.
Ротавіруси можна розділити на сім груп відповідно до відмінностей генома.
Фермент RT-PCR 1 375 мкл 750 мкл Ротавірус А є основним збудником гострої діареї у немовлят і дітей, а також
A Суміш для виявлення 1 188 мкл 375 мкл одним із збудників гастроентериту дорослих. Діарея, спричинена групою В,
B Суміш для виявлення 1 188 мкл 375 мкл переважно переважала у дорослих; Хоча загальний рівень виявлення групи
С у пацієнтів з діареєю низький, він все ще викликає спорадичні та спалахи
C Суміш для виявлення 1 188 мкл 375 мкл діареї у дітей і дорослих у всьому світі. Основним шляхом передачі цих
А Позитивний КОНТРОЛЬ 1 25 мкл 50 мкл вірусів є фекально-оральний шлях в організм людини через травний тракт.
сильні симптоми зневоднення. Ротавіруси можна розділити на сім груп
B Позитивний КОНТРОЛЬ 1 25 мкл 50 мкл відповідно до відмінностей генома. Ротавірус А є основним збудником
C Позитивний контроль 1 25 мкл 50 мкл гострої діареї у немовлят і дітей, а також одним із збудників гастроентериту
Пустий контроль 1 250 мкл 250 мкл дорослих. Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих;
Хоча загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він
все ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому
3. Зберігання світі. Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в
 Усі реагенти слід зберігати при температурі -20±50C. організм людини через травний тракт. Діарея, спричинена групою В,
 Перевірте термін придатності перед використанням і не використовуйте переважно переважала у дорослих; Хоча загальний рівень виявлення групи
прострочений реагент. С у пацієнтів з діареєю низький, він все ще викликає спорадичні та спалахи
 Тримайте суміш для виявлення подалі від світла. діареї у дітей і дорослих у всьому світі. Основним шляхом передачі цих
 Уникайте багаторазового заморожування-розморожування. вірусів є фекально-оральний шлях в організм людини через травний тракт.
 Дата виготовлення та термін придатності: див. зовнішню упаковку. Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих; Хоча
загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він все
4. Необхідні матеріали та пристрої, що не надаються ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому світі.
 Відповідний прилад для ПЛР у реальному часі: Bioperfectus STC-96A, STC- Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в
96A PLUS, Applied Biosystems 7500, QuantStudio™ 5, Roche LightCycler ®480, організм людини через травний тракт.
Bio-Rad CFX96™, QIAGEN Rotor-Gene Q, Analytik Jena qTOWER3 та інші
відповідні машини. 6. Технічний принцип
 Відповідний екстрактор нуклеїнової кислоти: SSNP-2000B (32 канали), Набір для ПЛР у реальному часі на панель вірусів діареї (8) базується на
SSNP-3000A (64 канали), SSNP-9600A (96 каналів), SMPE-960 (96 технології ПЛР у реальному часі. Специфічні праймери та зонди розроблені
каналів), SAW-96 (96 каналів), SAW-48 (48 каналів) ) та інші відповідні на основі конкретного гена області панелі вірусів діареї (8). Зонди
машини. складаються з репортерного барвника на 5' та гасячого барвника на 3'.
 Магнітна решітка для центрифужних пробірок на 1,5 мл. Флуоресцентні сигнали, випромінювані репортерним барвником,
 Полиця для центрифужних пробірок. поглинаються гасником, тому він не випромінює сигналів. Під час
 Центрифуга з ротором для реакційних пробірок на 1,5 мл. ампліфікації зонди, приєднані до матриць, відсікаються ферментом Taq
 Центрифуга з ротором для реакційних пробірок або планшета на 0,2 мл. (5'→3' екзонуклеазна активність), відокремлюючи репортерний барвник
 Вихровий змішувач. від гасника, генеруючи флуоресцентні сигнали, потім прилад ПЛР
 Калібровані регульовані піпетки або багатоканальна піпетка. автоматично малює криву ампліфікації в реальному часі на основі зміни
 Наконечники для піпеток з фільтрами. сигналу, нарешті реалізуючи якісне виявлення та диференціювання РНК з
 Центрифужні пробірки на 1,5 мл. панелі вірусу діареї (8). Крім того, набір також містить домашній ген
 Пробірки або планшети для ПЛР на 0,2 мл. (РНКаза P) як внутрішній контроль (IC) для взяття зразків і екстракції
 Одноразові рукавички без частинок і операційні виросли. нуклеїнової кислоти.
 10% гіпохлориту натрію або пастеризований дезінфікуючий засіб.
 Шафа біологічної безпеки або ПЛР витяжка. 7. Попередження та запобіжні заходи
 Оператори повинні бути навчені методам ПЛР у реальному часі.
5. Довідкова інформація  Усі зразки пацієнтів слід інактивувати при 56 0C протягом 30 хвилин і
Норовірус (NV) був одним із основних збудників вірусної діареї у світі. NV обробити відповідно до лабораторних вимог біобезпеки.
містив п'ять генотипів, серед яких інфіковані люди включали генотипи I, II  Екстракцію нуклеїнової кислоти слід проводити вручну в біозахисній
та IV. Основними клінічними проявами НВ-інфекції були нудота, блювання, шафі або за допомогою автоматичної системи екстракції нуклеїнової
біль у животі та діарея. Саповірус є одним із найпоширеніших вірусів, що кислоти.
спричиняє гострий вірусний гастроентерит, який зазвичай викликає легкий  Одягайте засоби індивідуального захисту (ЗІЗ), включаючи (але не
гастроентерит у маленьких дітей; Доведено, що астровірус є одним із обмежуючись) одноразові чисті неопудрені рукавички, маску, окуляри.
важливих збудників діареї у немовлят, людей похилого віку та людей з  Робочі зони в лабораторії повинні бути строго відокремлені.
ослабленим імунітетом. Клінічні прояви включають рідкий стілець, що Використовуйте відокремлені робочі зони для (i) підготовки
супроводжується блювотою, діареєю та лихоманкою. ентеральний реагентів, (ii) підготовки зразка та (iii) ампліфікації. Робочий процес у
аденовірус (EAdv) належав до підроду F аденовірусів типу 40 і типу 41, які лабораторії має відбуватися однонаправлено. Експериментальні
були одними з основних патогенів, що викликають вірусну діарею у дітей. процеси повинні відповідати належній клінічній лабораторній
Основними клінічними симптомами були діарея, що супроводжувалася практиці (GCLP) для молекулярних тестів, що використовуються в
лихоманкою, блюванням та симптомами з боку дихальних шляхів. Ротавірус діагностичних лабораторіях.
(РВ) є одним із основних збудників діареї немовлят, клінічних проявів  Робочі столи слід мити відразу після використання. Слід уникати
гострого гастроентериту, осмотичної діареї, симптомів тяжкого забруднення ампліконом.
зневоднення. Ротавіруси можна розділити на сім груп відповідно до  Очистіть робочі столи, піпетки та центрифугу, використовуючи 10%
відмінностей генома. Ротавірус А є основним збудником гострої діареї у гіпохлориту натрію та 70% етанолу.
немовлят і дітей, а також одним із збудників гастроентериту дорослих.  Рекомендується використання стерильних одноразових піпеток і
Діарея, спричинена групою В, переважно переважала у дорослих; Хоча наконечників без нуклеази.
загальний рівень виявлення групи С у пацієнтів з діареєю низький, він все  Використовуйте відповідний інструмент ПЛР у реальному часі та
ще викликає спорадичні та спалахи діареї у дітей і дорослих у всьому світі. систему екстракції нуклеїнових кислот, щоб забезпечити оптимальну
Основним шляхом передачі цих вірусів є фекально-оральний шлях в продуктивність тесту.
організм людини через травний тракт. блювання та симптоми з боку  Використовувати реагенти до закінчення терміну придатності. НЕ
дихальних шляхів. Ротавірус (РВ) є одним із основних збудників діареї замінюйте реагенти різних партій або виробників.
немовлят, клінічних проявів гострого гастроентериту, осмотичної діареї,  Утилізуйте зразки та відходи аналізу згідно з місцевими правилами
симптомів тяжкого зневоднення. Ротавіруси можна розділити на сім груп безпеки.
відповідно до відмінностей генома. Ротавірус А є основним збудником

NO.01010028EU 1/2 05/2023, версія 2.0

 10.1 Протокол ампліфікації системи ПЛР у реальному часі Bioperfectus
8. Збір, транспортування та зберігання зразків STC-96A/96A PLUS
8.1 Метод відбору зразків 1. Увімкніть систему ПЛР у реальному часі Bioperfectus STC-96A/96A PLUS.
Для калу 2. Запустіть програмне забезпечення Bioperfectus STC-96A/96A PLUS Real-
Для рідкого зразку калу Time PCR System Version 1.0.
 Перенесіть 200 мкл супернатанту для екстракції нуклеїнової кислоти. 3. Натисніть «Experiment Wizard» і встановіть відповідні параметри в
Для твердих зразків калу «Project» і «Setup».
 Перенесіть 0,25-0,5 г у мікроцентрифужну пробірку; 4. Налаштувати « Plate ».
5. Налаштуйте « Sample».
 Додайте 700 мкл буфера TE та 0,25 г шліфувальних кульок;
6. Початок ПЛР
 Перемішайте за допомогою вортексу або гомогенізатора для тканин; a. Вставте 96-лунковий планшет для ПЛР або реакційні пробірки в апарат.
 Центрифуга при 12 000 об/хв протягом 1 хв; b. Виберіть кнопку « Start Run »,
 Перенесіть 200 мкл супернатанту для екстракції нуклеїнової кислоти. 7. Аналіз після ПЛР, натисніть кнопку «Analysis» у лівій частині меню, і
Інші типи зразків слід збирати згідно з рекомендаціями клінічної проаналізуйте дані за допомогою «Analyze».
лабораторії.
8.2 Транспортування та зберігання зразків 11. Контроль якості
 Зразок зберігається при 2-8°C до 24 годин після отримання. Перш ніж оцінювати результати зразків, позитивний контроль і пустий
 Зразок зберігається при -20°C або нижче, якщо екстракцію організовано контроль слід інтерпретувати за допомогою таблиці нижче.
через 24 години. Канали
 Екстрагована нуклеїнова кислота зберігається при -20°C або нижче. Порогове значення циклу (Ct).
Контролі
FAM VIC ROX CY5
9. Процедура Пустий контроль УНДЕТ УНДЕТ УНДЕТ УНДЕТ
9.1 Екстракція РНК
Для відтворюваної ізоляції нуклеїнової кислоти рекомендуються такі Позитивний контроль Ct≤30 Ct≤30 Ct≤30 Ct≤30
системи та набори екстракції нуклеїнової кислоти: ПРИМІТКА: Внутрішній контроль спеціально розроблений для виявлення в
Виробник Набір для виділення Кат. № каналі флуориметра CY5.
нуклеїнових кислот  Позитивний контроль і бланк-контроль повинні бути включені в цикл
Набір для екстракції вірусних ПЛР.
SDK60102  Якщо позитивний контроль і бланк-контроль не відповідають
нуклеїнових кислот
(Спинова колонка на основі критеріям, весь цикл є недійсним і результати не повинні
Bioperfectus кремнезему) повідомлятися. Повторіть весь процес (підготовка зразка та контролю,
Набір для екстракції вірусних ампліфікація та детекція). Якщо повторний запуск все ще недійсний,
SDK60104 зверніться до служби технічної підтримки.
нуклеїнових кислот
(Метод магнітних кульок)  Транспортне середовище патогенів або попередньо охарактеризований
Набір для швидкого вилучення негативний зразок можна використовувати як зовнішній негативний
SDKF60101 контроль. З ним слід поводитися як зі зразком пацієнта під час кожної
нуклеїнових кислот
екстракції та ПЛР.
(метод магнітних кульок)
 Додаткові засоби контролю можуть використовуватися згідно з
52904 місцевими, державними, федеральними акредитаційними
Qiagen Міні-набір QIAamp Viral RNA
52906 організаціями, залежно від обставин.
9.2 Приготування основної суміші
Об’єм основної суміші для кожної реакції слід відпіпетувати наступним 12. Аналіз та інтерпретація даних
чином: Можливі такі результати:
Master Mix A Master Mix B Master Mix C Канал FAM для норовірусу GI, канал VIC для норовірусу GII, канал CY5 для IC.
Компоненти Master Mix A
Суміш для
виявлення FAM VIC CY5 Інтерпретація результатів
Буфер RT-PCR 7,5 мкл 7,5 мкл 7,5 мкл
Фермент RT-PCR 5 мкл 5 мкл 5 мкл + - +/- Виявлено норовірус GI
A Суміш для
виявлення

A Суміш для виявлення 7,5 мкл - -

- + +/- Виявлено норовірус GII
B Суміш для виявлення - 7,5 мкл -
C Суміш для виявлення - - 7,5 мкл - - + Обидва не виявлені

Загальний обєм (Master Mix) 20 мкл 20 мкл 20 мкл - - - Недійсний

Визначте кількість вилучених зразків для дослідження, розморозьте
компоненти. Для максимального відновлення вмісту коротко прокрутіть
Канал FAM для ротавірусу групи B, канал VIC для ротавірусу групи A, канал
флакони в центрифузі перед відкриттям. Обережно та ретельно
перемішайте піпеткою вгору та вниз. ROX для ротавірусу групи C, канал CY5 для IC.
9.3 Процедура налаштування RT-PCR Суміш для
Помістіть зразки на лід. Виконайте наведену нижче процедуру, щоб виявлення FAM VIC ROX CY5 Інтерпретація результатів
приготувати майстер-мікс RT-PCR.
B Суміш для виявлення

a. Додайте 20 мкл основної суміші A/B/C у кожну необхідну реакційну + - - -/+ Виявлено ротавірус групи В
пробірку/планшет.
b. Додайте 5 мкл ізольованої нуклеїнової кислоти або 5 мкл контролів - + - -/+ Виявлено ротавірус групи А
(позитивний контроль або порожній контроль).
c. Переконайтеся, що кожен цикл включає принаймні один позитивний - - + -/+ Виявлено ротавірус групи С
контроль і один порожній контроль.
d. Закрийте або герметизуйте реакційні пробірки/планшет і
центрифугуйте за допомогою відповідної центрифуги протягом 30 секунд - - - + Усі не виявлені
при приблизно 2000 об/хв.
e. Переконайтеся, що вся рідина знаходиться на дні пробірок/тарілки. - - - - Недійсний
f. Виконайте наступний протокол в приладі.
Канал FAM для- саповірусу,
- - VIC для
канал Недійсний канал ROX
- кишкового аденовірусу,
для астровірусу, канал CY5 для IC.
Крок Температура Час Цикл
Суміш для
1 Зворотна транскрипція 50 °C 10 хв 1 цикл FAM VIC ROX CY5 Інтерпретація результатів
виявлення
2 Початкова денатурація 95 °C 5 хв 1 цикл
+ - - +/- Виявлено саповірус
Денатурація 95 °C 10 сек
C Суміш для
виявлення

3 Відпал, розширення та 45 циклів - + - +/- Виявлено кишковий

58 °C 30 сек аденовірус
збір флуоресцентного
сигналу* - - + +/- Виявлено астровірус
* Флуоресцентний сигнал слід зібрати під час цього етапу через канали FAM,
VIC, ROX і CY5. - - - + Усі не виявлені
Примітка: Для гена збудника: значення Ct ≤40 вважається позитивним
(+); Значення Ct > 40 вважається негативним (-). Для РНКази P: значення
Ct ≤40 вважається позитивним (+); Значення Ct > 40 вважається 13. Обмеження
негативним (-)  Негативні результати не виключають інфікування панеллю вірусів
1. Позитивний звіт: Збудник виявлено. діареї (8) і не повинні бути єдиною основою для прийняття рішення
2. Повідомлення негативне: Збудник не виявлено. Це можливо через про лікування пацієнта.
низьке вірусне навантаження, і його слід аналізувати за сукупністю  Надійні результати залежать від відповідних процедур збирання,
клінічних ознак. транспортування, зберігання та обробки зразків.
3. Недійсний: повторіть забір зразків або візьміть зразок з різних частин  Присутність інгібіторів у зразку та/або помилки в дотриманні
пацієнта та повторіть тест, якщо підозрюються клінічні ознаки та інші процедури аналізу можуть призвести до хибнонегативних
дослідження. результатів.
 Кваліфікований медичний працівник повинен інтерпретувати
результати аналізу в поєднанні з історією хвороби пацієнта,
10. Робота системи ПЛР у реальному часі клінічними ознаками та симптомами та результатами інших
Наступний протокол ампліфікації був розроблений для використання на діагностичних тестів.
Bioperfectus STC-96A, STC-96A PLUS. Детальну інформацію дивіться в  Потенційні мутації в цільових областях геному вірусу, охоплених
посібнику користувача приладу. Інші відповідні прилади ПЛР у реальному тестовими праймерами та/або зондами, можуть призвести до
часі див. у посібнику користувача відповідного приладу. неможливості виявлення присутності патогенів.

NO.01010028EU 2/2 05/2023, версія 2.0

 Існує ризик хибнопозитивних значень в результаті перехресного
зараження цільовими організмами, їх нуклеїновими кислотами або
ампліфікованим продуктом або через неспецифічні сигнали в аналізі.

14. Оцінка ефективності

14.1 Аналітична чутливість
Межа виявлення набору для виявлення РНК, специфічної для панелі
вірусу діареї (8), у людському калі та анальному мазку становить 2,5
копії/реакцію (500 копій/мл).
14.2 Аналітична специфічність
Перехресної реактивності набору з наступними вибраними
мікроорганізмами не спостерігалося.

Збудник Збудник
Diarrheogenic E. coli Yersinia Yersinia enterocolitica
enterocolitica
Vibrio parahaemolyticus Campylobacter jejuni
Vibrio cholerae /
14.3 Точність
Для оцінки точності набору було використано прецизійні стандарти.
Результати показують, що для прецизійних зразків коефіцієнти варіації
(CV%) повторюваності та внутрішньолабораторної точності становлять
менше 5%.

15. Додаток
Покажчик символів
Цією стороною вгору Термін придатності

Виробник Дата виготовлення

Каталожний номер Містить достатньо для <n>

тестів
Зверніться до
Обмеження температури
інструкцій для
використання
Код партії / /

16. Контакти та підтримка

Для отримання додаткової інформації про Bioperfectus Technologies
відвідайте наш веб-сайт за адресою: http://www.bioperfectus.comабо
звертайтеся за електронною поштою:info@bioperfectus.com .
Щоб отримати докладні інструкції з програмування щодо використання
наборів Bioperfectus Technologies для ПЛР у реальному часі на конкретних
інструментах для ПЛР у реальному часі, будь ласка, зв’яжіться з нашою
технічною підтримкою за електронною адресою:support@bioperfectus.com
.

NO.01010028EU 3/2 05/2023, версія 2.0