NHL

Stenden

Kolomchromatografie met een spi

het scheiden van DE PIGMENTEN IN EEN SPINAZIE-EXTRACT MET
BEHULP VAN EEN KOLOMCHROMATOGRAFIE EN TLC PLAATJES
Thijn Leeflang

Uitgevoerd op 09-02-2024
Ingeleverd op 18-01-2024
Inhoud
Inleiding:..............................................................................................................2
Materialen en methode:......................................................................................2
Resultaten:...........................................................................................................3
Discussie:..............................................................................................................6
Conclusie:.............................................................................................................6

1
Inleiding:
Kolomchromatografie is een manier van scheiden, met nadruk het scheiden van pigmenten in een
stof of vloeistof. Er wordt een loopmiddel toegevoegd aan de stof die gescheiden wil worden in
verschillende pigmenten. Deze pigmenten hebben elk een verschillende oplosbaarheid wat ervoor
zorgt dat het ene pigment sneller naar beneden loopt dan de ander. Deze verschillende pigmenten
worden opgevangen, dit zijn de fracties.

Voor dit experiment wordt een spinazie-extract gescheiden in zijn verschillende pigmenten. Er wordt
een eerste gele ‘band’ verwacht, daarna een groene ‘band’ en als laatste nog een gele band. Deze
banden worden opgevangen in hun fracties, deze fracties zullen zelf ook weer gedruppeld worden op
TLC plaatjes om nog meer onderscheid te kunnen maken in wat er opgevangen is uit de kolom. Dit is
ook tegelijkertijd het doel van dit gehele experiment.

Materialen en methode:

Voor dit experiment zijn er verschillende materialen in gebruik geweest, namelijk:

- Pentaan (98,9%)
- Aceton (99,1%)
- Loopmiddel 1 (pentaan : aceton, 9;1)
- Loopmiddel 2 (pentaan : aceton, 1;4)
- Silicagel
- Zand
- Spinazie-extract
- Kolom met filtertip en kraantje
- Bekerglazen 50mL en 5 x 100mL
- Horlogeglazen
- Reageerbuizen + rekje
- Twee maatcilinders 10mL
- pasteurspipetten

Voor de gebruikte methode voor dit experiment verwijst dit rapport u naar de gegeven werkwijze.

2
Resultaten:
In dit experiment zijn er enige wijzigingen gehanteerd. Zoals in de werkwijze aangegeven begint het
bij de kolomchromatografie met het toevoegen van loopmiddel 1 en de kolom laten lopen en hiervan
de fracties opvangen. Loopmiddel 1 is ook toegevoegd als eerst, maar in verband met tijd is
loopmiddel 2 toegevoegd aan de kolom voor de fracties van loopmiddel 1 konden worden
opgevangen. Ook was het de bedoeling om per loopmiddel 3 fracties op te vangen in reageerbuizen
en dus totaal 6 fracties. Omdat de fracties van loopmiddel 1 niet opgevangen zijn, is er gekozen om
van de fracties van loopmiddel 2 alsnog 6 reageerbuizen te vullen. Dus 2 fracties voor de eerste band,
2 fracties van de “groene” band en 2 fracties hierna.

Bij de analyse van de fracties met TLC plaatjes is er ook één wijziging gemaakt. In de bekerglazen waar
de TLC plaatjes in zouden staan, moest een laagje van ongeveer 1cm worden toegevoegd van
loopmiddel 1, echter is er loopmiddel 2 gebruikt omdat die de pigmenten sneller scheidt en sneller
het TLC plaatje op liep.

De meest rechter stip op beide TLC plaatjes zijn

van de spinazie-extract, dat zijn de referenties
voor de andere 6 stippen die komen van de 6
fracties. De fracties staan aangegeven onder
stippen.

1 2 3 4 5 6

Figuur 1 TLC plaatje onder UV-licht

Figuur 3 Opstelling Kolom

Figuur 2 TLC plaatje onder UV-licht

3
Discussie:
Zoals al eerder is benoemd bij de resultaten, is loopmiddel 2 al toegevoegd aan de kolom voordat de
fracties van loopmiddel 1 waren opgevangen. Dit was omdat er tijdstekort was om de fracties die
zouden ontstaan bij loopmiddel 1 op te vangen. Er waren medestudenten die al eerder waren
begonnen aan de kolomchromatografie, die vertelden dat loopmiddel 1 wel uren duurde, dit
betekende dat het experiment niet afgerond kon worden voor het lab opgeruimd moest worden. De
tip was gegeven om de 3 fracties behorende bij loopmiddel 1 over te slaan en simpelweg loopmiddel
2 toe te voegen omdat dan de scheiding van de pigmenten sneller zou verlopen. Het nut van de twee
verschillende loopmiddelen was om de gele pigment te scheiden van de groene, wat dus niet gelukt
is. Het wordt dus aangeraden om zo vroeg mogelijk met dit experiment bezig te gaan.

Bij figuur 1 is aan de bovenkant zijn duidelijk oranje kleurige vlekken te zien, dit is het pigment. Er is
verder geen duidelijke scheiding hierop te zien van de pigmenten, mogelijk omdat loopmiddel 2 niet
ver genoeg het TLC plaatje was opgelopen. Een ander loopmiddel gebruiken zou ook kunnen helpen.

Conclusie:
Het doel van dit experiment was het scheiden van de verschillende pigmenten in een spinazie-
extract. Die scheiding is uitgevoerd met behulp van kolomchromatografie, twee verschillende
loopmiddelen en uiteindelijk een TLC plaatje. Dit scheiden is helaas niet goed verlopen zoals al eerder
was aangegeven. Er was geen sprake van een duidelijk gele en groene fractie, meer een mengsel van
de twee.