Professional Documents
Culture Documents
Prednasky 2013 2014
Prednasky 2013 2014
EVOLUCE MIKROORGANISMŮ
- vznik před 3,0 – 1,5 . 109 let (prekambrium)
- charakteristika:
anaerobně heterotrofní (živiny – organické látky, vzniklé abiogenet.), nejstarší formy,
musely se měnit, vytvořila se kyslíkatá atmosféra (díky urč. mikroorganismům,
z anaerobních forem fotosyntézy se stali aerobní formy)
SMĚR VÝVOJE
SINICE
Viroidy
- 1 molekula RNA, fragmenty RNA, nemají kapsidy
- parazité rostlinných buněk, primitivní forma
Fylogenetický strom
(Morrel 1997 sestaveno dle analýzy rRNA)
Fialově – termofilní
Zeleně - netermofilní
Fylogenetická klasifikace – trichotomické členění
- Archebaktérie od roku 1977 – rozpoznání a vyčlěněn
- ARCHEÓNY od roku 1990 (Archea)
Charakteristika
1) považovány za NEJSTARŠÍ anaerobní bakterie, zahrnují ale i aerobní druhy
2) zvláštní podobnost s eukaryoty i s prokaryoty, ale současně odlišné od obou, jsou
pleomorfní – koky, tyčky, ..
3) dělí se na:
HALOFILNÍ
METANOGENNÍ – tvoří metan
HYPERTERMOFILNÍ – prostředí s vysokou teplotou
SIRNÉ
Thermoplasmy
4) přežily do současnosti a dnes byly nalezeny na všech kontinentech – jsou adaptovány na
EXTRÉMNÍ PODMÍNKY, jsou po celém světě (jsou plošné)
5) mutacemi z nich vznikly autotrofní buňky = zdroj uhlíku je oxid uhličitý
(hlenky)
OBJEVITEL MIKROORGANISMŮ
Robert Hooke - 1665 úplně první zpráva o pozorování mikroorganismů
van Leeuwenhoek - 1674 pozoroval mikroorganismy ve vzorku vody, zubním plaku… čočkou
zvětšující 300x; v roce 1684 objevil bakterie, nakreslil a poslal zprávu Kralovské Londýnské
Akademii
ZAKLADATELÉ MIKROBIOLOGIE
Louis Pasteur (1822-1895) původem chemik
- vyvinul sterilizační metody, zabýval se kyselinou vinnou (pozoroval krystaly kyseliny vinné) –
zjistil že se něco v tekutině pohybuje
- 1861 demonstroval přítomnost MO ve vzduchu, experiment s baňkou s labutím hrdlem
(baňka s převařeným sterilním vínem, do ní pronikal vzduch ale ne bakterie), popření teorie
„generacio spontanea – SAMOPLOZENÍ“ = mikroorganismy nevnikají samoplozením ale
dělením buněk
- studium fermentačních procesů (objevil), šťáva ve sterilním prostředí nezkvasí, až se
dostanou bakterie ze vzduchu tak zkvasí
- vyvinul vakcíny proti antraxu, drůbežímu moru, choleře, vzteklině
Robert Koch (1843-1910)
- důkaz, že mikroorganismy mohou způsobit nemoc (Kochovy postuláty) -
- metody studia bakterií v čisté kultuře
- Kochův hrnec = primitivní hrnec pro sterilizaci materiálu
- barvení anilínovými barvivy (zviditelnění mikroorganismů)
- objevitel původce tuberkulózy
OBECNÁ MIKROBIOLOGIE
Martinus Beijerinck (1851-1931)
obohacovací kultivace, selektivní izolace MO z přírodních vzorků
izolace čistých kultur půdních a vodních bakterií (železité a sirné)
MIKROBIOLOGIE
morfologie = systematika a diagnostika
cytologie = systematika
fyziologie a biochemie = diagnostika, biotechnologie
ekologie = ekologie mikroorganismů
rozmnožování = hygiena a medicína
dědičnost a proměnlivost = genetika mikroorganismů, genomika, proteomika
systematika a identifikace = diagnostika
HLAVNÍ DISCIPLÍNY
obecná mikrobiologie
speciální mikrobiologie:
podle objektu studia
PROTOZOOLOIE (prvoci)
MYKOLOGIE (plísně + kvasinky)
BAKTERIOLOGIE (baktérie)
VIROLOGIE
podle praktického zaměření
hospodářská mikrobiologie
potravin. (zemědělská) mikrobiologie
technická mikrobiologie
lékařská mikrobiologie
2. MORFOLOGIE PROKARYOTICKÉ BUŇKY
- balíčky, pakety = buňky po 4
- tyčinky s
- spirochéta bez pohybových orgánů
- plazma/mikroplazma, bez BS
- řetízky (tenké tyčky pospojované do řetízků)
Vnitřní struktury
NUKLEOID
• cirkulární (kruhová – nemá začátek ani konec) dvouřetězcová helikální DNA,
DNA může měřit až 1m
• není od základní cytoplazmy oddělena membránou
• neobsahuje histony (na molekulu DNA jsou vázány jiné asi 4 druhy proteinů
napomáhající replikaci a transkripci)
• vytváří kompaktní komplex tvořený obvykle více než 50 smyčkami
• tvoří s molekulami mRNA a proteiny komplex vyššího řádu
• nerostoucí buňka má jedno haploidní “jádro“
• žádná prokaryota nemá RNA, pouze DNA
• molekulová hmotnost DNA je 109-1010
• typická bakterie obsahuje 4x106 párů bazí
• nerostoucí buňka má 1 chromozom, genetická informace je haploidní (jedno vydání)
• rychle rostoucí bakterie mohou obsahovat 2 – 8 kopií chromozomové DNA (buněčný cyklus –
je ve fázi dělící se nebo nedělící se, nemá to jako u eukaryot), replikace se uskutečňuje do
fronty (proto může být až 8 kopií DNA)
• chromozom E.coli je tvořen 4 639 221 párů bazí a koduje 4397 genů; z toho je 108 genů pro
RNA (tRNA, rRNA) a 4 289 pro proteiny; z nich je 952 enzymů (703 zmapovaných)
POLYRIBOZOM
syntetizovaný peptidický řetězec
ZÁKLADNÍ CYTOPLAZMA
• vyplňuje celý vnitřní prostor, vazká tekutina, opaleskující -> obrovské množství bílkovin
(koloidní roztok, špatně rozpustný ve vodě)
• cytoplasma je velice koncentrovaný roztok mnoha biomolekul (malých, velkých i
supramolekulových komplexů)
• je hodně viskózní a podobá se spíše gelu (nebo sol? – buňky uspořádané do síťky, např. bílek
je gel, když vajíčko uvařím, mám tuhý bílek – molekuly se uspořádaly do síťky, tzv. sol?), kde
probíhají všechny reakce nutné pro život buňky (od vyhledávání odpovídajících molekul až po
uskutečnění vlastní reakce); existují specifické bílkoviny necitlivé k teplotě
• obsahuje více než 50% všech bílkovin buňky, z nichž většina má enzymatickou funkci
• protože bakteriální buňka nemá specifické organely, přebírá cytoplazma řadu jejich funkcí
• třebaže nemá viditelnou strukturu a je velice nepravděpodobné, že by umožnění reakcí
(limitovaných pohybem molekul v cytoplazmě a pravděpodobností jejich kolizí) mohlo
odehrávat bez jakékoliv organizace
CYTOPLAZMATICKÁ MEMBRÁNA
• odděluje základní cytoplazmu od vnějšího prostředí,
• její stavba odpovídá struktuře biologické membrány (u prokaryot je jediná) = jediná
membrána, která se nachází u prokaryot, nahrazuje všechny membrány, odděluje od
vnějšího prostředí, ale také uvnitř buňky odděluje dýchací řetězec
• CM tvoří 10 až 26% suché hmotnosti bakterie a je tlustá asi 8 nm
• jejím základem je tekuté kontinuum dvojvrstvy fosfolipidů se zanořenými bílkovinami;
bílkoviny jsou zanořené z vnitřní nebo vnější strany nebo jí procházejí a představují 10-20%
všech bílkovin buňky
• zanořené bílkoviny mají funkci strukturální nebo enzymatickou
• bílkoviny a lipidy CM nejsou lokalizovány staticky, ale “pohybují se“- TEKUTÁ MOZAIKA
• cytoplazmatická membrána je asymetrická
• charakteristickým rysem je nepřítomnost cholesterolu
• poměr mezi nasycenými a nenasycenými mastnými kyselinami se liší v závislosti na teplotě
kultivace
fosfolipidová dvouvrstva – mastné kyseliny jsou hydrofobní, glycerol hydrofilní, mají odlišný náboj,
jsou zde také globulární (směrem dolů) a fibrilární (směrem ven) bílkoviny, globule se pohybují,
protein se může vnořit i vynořit, pohybují se jako loďky plující po povrchu membrány; póry ve
fosfolipidech – důležité pro transport látek do buňky
Mesozom B.subtilis
CHROMATOFORY
• mají tvar měchýřku rozděleného na segmenty
• obsahují pigmenty zodpovědné za vazbu světelného kvanta (bakteriochlorofyl, karotenoidy),
pigmenty důležité pro fotosyntézu (anténové pigmenty – pigment má strukturu jako satelit,
do které se lapá světelná energie o urč. vlnové délce)
• buď spojeny s CM nebo se oddělí a vypadá to, že vytvářejí …?
• jsou místem syntézy ATP u fototrofních bakterií
BUNĚČNÁ STĚNA
• struktura - označovaná jako vnější kostra
• drží buňku pohromadě
• udává tvar buňky
• pevná
• je plně propustná - PERMEABILNÍ
Struktura peptidoglykenu
- složen z pravidelně se střídajících kovalentně vázaných molekul N- acetylmuramové kyseliny a
N-acetylglukosaminu spojené kyslíkovým můstkem
• glykan = složen z pravidelně se střídajících kovalentně vázaných molekul N-
acetylmuramové kyseliny a N-acetylglukosaminu
• peptid = tvořen řetězcem 4 aminokyselin, L-alanin, D-glutamová kyselina, R, D-alanin;
připojeny ke glykanové části molekuly
• G- složitější vlákna ale tenká, hutná, vice vláken, antigenně velmi dobře rozeznatelná –
serotypizační testy
• G+ mnohovrstvé ale je to síťka
protoplasty u G+
- vznikají u G+ bakterií po působení lysozymu (štěpením glykozidické vazby peptidoglykanu),
nebo po působení antibiotik blokujících syntézu buněčné stěny (peniciliny, cefalosporiny) –
léčebné preparáty, mohou také blokovat BS a vytvářet poškozené buňky
- protoplasty metabolizují, rostou, ale nemnoží se
- protoplasty se musí stabilizovat v hypertonickém prostředí
- za určitých podmínek je možná reverze na normální buňku, je to vzácné, podílí se na tom
cytoplazmatická membrána (cytoplazmatická membrána když se poruší tak se už nikdy
neobnoví, kdežto ta BS se může obnovit)
- G- bakterie protoplasty netvoří
sferoplasty u G-
- u G- bakterií není možná tvorba protoplastů, protože se lysozymem odstraní pouze
peptidoglykanová vrstva a zůstává vnější membrána
- sféroplast, metabolizuje, roste a množí se
- po odstranění faktoru, který vyvolal tvorbu sféroplastu, je možná reverze na normální buňku
- fixované L-formy → buňky ztratily schopnost reverze (patří mezi buňky, které nemají BS) –
mykoplazmata, buňky v podobě protoplastu jsou vždy L; sferoplasty pokud nedojde k reverzi,
jsou vždy sferoplasty
POUZDRO
• u mnohých bakterií se vytváří vně buněčné stěny silně hydratovaná vrstva – pouzdro neboli
kapsula
• mikrokapsula – tloušťka 0,2 nm – u enterobakterií je to komplex obsahující bílkovinu,
polysacharid a někdy stopy lipidu
• makrokapsula je podstatně silnější a je tvořena především polysacharidy a bílkovinami. Složení
je odlišné v závislosti na druhu bakterie
• kmeny produkující kapsulu jsou označovány jako S-formy (smooth, hladké), neprodukující jako
R-formy (rough, drsné); R drsné mají pouzdra?
• R-formy mohou vznikat z S-formy mutací
• přítomnost kapsuly je indikací pro virulenci, nepřítomnost pro avirulenci, kapsula je ochranná
vrstva (kmeny, které tvoří pouzdra jsou virulentnější, virulence = míra patogenity)
• přítomnost pouzdra může měnit antigenní vlastnosti – kapsulární antigen
• v pochvě bývají kromě jiného i oxidy železa a manganu, které dávají těmto bakteriím
charakteristickou žlutou až hnědou barvu, reprezentativním zástupcem je Leptothrix
• rod Leuconostoc produkuje velké množství polysacharidového slizu, čehož se využívá
k produkci dextranu, naopak je nežádoucí v potravinářském průmyslu, kde může způsobovat
rosolovatění materiálu popř. ucpání potrubí
• pouzdra jsou také příčinou, proč nějaké mikroorganismy tvoří takové útvary (pouzdry se
přilepují k sobě a tvoří charakteristické tvary)
ENDOSPÓRY U G-
• spora uvnitř buňky, dokonale chrání NK proti nepříznivým podmínkám
• funkce: ochrana vzhledem k nepříznivým podmínkám – toxické látky, termorezistence
• toxicita nízká propustnost přes blány
• termorezistence endospora má malý obsah vody, komplex Ca – dipikolinát (tvoří se na konci
vegetativního období, je to kortex)
• po rozdělení nukleotidu – 1 nově vzniklý nukleotid přechází do endospory, 1 nově vzniklý
nukleotid zůstává v buňce
• při rozdělení vzniká stěna spory
• spory udržují organismus dlouho v životaschopné formě; životaschopné spóry bakterií byly
nalezeny např. i ve starých herbářích ze 17. Století; Tutanchámova hrobka (otevřena r. 1923)
byla sterilní, pokud jde o bakterie – tzn. ani spóry nemohou vydržet věčně
Struktura spory
1. exosporium
2. vnější vnější, vnitřní => plášť (obal spór)
3. vnitřní
4. vnější membrána
5. kortex (několik vrstev peptidoglykanu)
6. vnitřní membrána (peptidoglykan)
7. cytoplazmatická membrána
8. cytoplazma
aminokyseliny
ŽIVINY glycidy klíčení
Průběh klíčení
1. bobtnání – nasávání vody
2. silně se zintenzivňuje dýchaní aktivace enzymů
3. vylučují se vápenaté soli kys. dipikolinová a rozpustné bílkoviny ztráta
termorezistence
4. nová vegetativní buňka opouští pouzdro spóry – na pólu, po stranách
5. roste + množení
Typy spór
1. Antraxový – uprostřed, bez změny tvaru, Bacillus antracis
MNOŽENÍ BAKTERIÍ
1. dělením – příčné – BINÁRNÍ mateřská buňka se prodlužuje až do dvojnásobné délky a potom
se rozděluje příčnou přehrádkou na dvě stejné sesterské buňky; veškeré potomstvo jedné
buňky je klon – geneticky identické potomstvo s mateřskou buňkou (přesně se geneticky
rozdělí DNA); dělení předchází replikace DNA
tvorba septa
- G+ mají mesozom, G- nemají, přesto se vždy DNA připojí na nějakém místě (replikace
nezačne, dokud není v kontaktu s cytoplazmatickou membránou)
- zůstanou u sebe, když bude na povrchu pouzdro u G+
- u G- není vychlípenina, membrána se vtahuje dovnitř směrem od povrchu
Tím jak se buňka rozdělí na 2 tak další na 4 a pak na 8 atd. = násobení geometrickou řadou.
Vznik kolonií
pojem kolonie – Kolonie je tvořena populací buněk, které všechny pochází z jedné buňky –
jde tedy o klon tzv. potomstvo vzniklé nepohlavně
konzistence:
1) mazlavá – lze dobře setřít kličkou
2) suché
nelze kličkou lehce sejmout
3) drsné
Tvary kolonií
- média obsahují různé indikátory, které různě barví kulturu?
Bakteriální pigmenty
- některé baktérie mají schopnost vytvářet pigmenty:
• hromadí-li se uvnitř = ENDOPIGMENTY
• hromadí-li se vně = EXOPIGMENTY
- pigmenty slouží zvláště v taxonomii
Bakteriochlorofyl
• endopigment, vyskytuje se u fototrofních baktérií, kde má funkci stejnou jako chlorofyl tzn.
umožňuje fotosyntetickou asimilaci
• podle stavby molekuly rozeznáváme 4 typy bakteriochlorofylu:
- a, b, c, d
- liší se od přítomností farnezylu místo fytylu na pyrol. Kruhu
- a, b mají místo vinylu acetyl
- vzájemně se liší zbytky R1 až R7 (radikálové)
• bakteriochlorofyly absorbují světelné záření ve dvou oblastech světla:
1) fialové 40 nm
2) infračervené + červené 600 – 800 nm
- jiné vlnové délky než chlorofyl
Další pigmenty
• prodigiozin = červený pigment, vytváří ho Serratia marcescens a některé aktinomycéty
• deriváty karotenu = žluté, oranžové, červené – u autotrofních baktérií r. Micrococcus,
Staphylococcus, Mycobacterium, Nocardia
• pigmenty skupiny fenčinu = pyocyanin, zelený chlororafin, fialový iodidin
• deriváty indolu = violacein – purpurový
• naftachinony
• antokyany = fialkové
• melaniny = tmavě hnědé, plísně, aktinomycety Azotobacter
BIČÍK (FLAGELA)
• organely pohybu
• monotrichie – 1 bičík
• více – lofotrichie
• po celém povrchu peritrichie
• spirální mikroorganismy, kde je namotán po celé buňky - amfitrichie
Struktura bičíku
- hlavní části bičíku
• vlákno bičíku tvořené z globulární bílkoviny – flagelinu, které jsou spojeny do několika
vláken spirálovitě stočených
• je dlouhé až 20 μm a v průměru má 10-30nm
• v živném mediu doroste asi za 10-20 minut
• háček – je složen z identických globulárních bílkovin (jsou jiné než flagelin); představuje
asi spojení mezi vláknem a bazální částí bičíku
• bazální část – kotví bičík do buněčné stěny a cytoplazmatické membrány; je zodpovědná
za pohyb bičíku; jde o disky, tvořené 9 různými bílkovinami; jejich počet a umístění je
závislé na G+ nebo G-
- ve směru hodinových ručiček – jako lodní šroub
- když proti směru – brzdí, nedokáže se v tom prostoru tak pohybovat
- bičík je dán geneticky (jestli tvoří nebo netvoří), některé geny mohou zmutovat a ty pak
ovlivňují patogenitu kmene (může se stát silně patogenní)
Prokaryota Eukaryota
malé buňky (1 -10m) velké buňky (10 - 100m)
jeden kompartment mnoho kompartmentů
nejsou organoidy četné organoidy
nehraničené jádro ohraničené jádro
cyklická DNA lineární DNA
nukleohistonová struktura chybí nukleohistonové vlákno
jedna RNA polymeráza RNA polymerázy I,II,III
ribozómy 70 S ( 50S, 30S) ribozómy 80S (60S, 40S)
ribozomy volné ribozomy volné i vázané na ER
haploidní haploidní i diploidní
prosté BINÁRNÍ dělení buněk mitóza, pentlicovité chromoz.
genetická rekombinace, konjugace meióza, syngamie
krátký generační čas životnost delší
není cytoskelet cytosk. v jádře i v cytoplazmě
exoenzymy, endoenzymy cytóza , lysozomy
aerobní i anaerobní většinou aerobní
jednobuněčné (kolonie) 1-buněčné i mnohobuněčné
4. RŮST A KULTIVAČNÍ PODMÍNKY, ZVL. SKUPINY MIKROORGANISMŮ I
BAKTERIÁLNÍ KOLONIE
- v přírodě existuje bakterie jako směsné populace různých druhů a rodů, které se adaptovaly
na dané prostředí
- čistí kultura -> obsahuje bakterie pouze jednoho druhu
- kolonie -> populace buněk vytvořená z jednotlivé bakteriální buňky
KULTIVAČNÍ MÉDIA
- agarová plotna, šikmý agar, tekuté médium, hluboký agar
- typy, složení a využití médií – viz texty do cvičení
Růstová křivka
KYSLÍK
• obligátně aerobní = (striktně - přísně) potřebují vždy O2 (Pseudomobas)
• obligátně anaerobní = (striktně - přísně) v přítomnosti O2 se nemohou množit
(Clostridium)
• fakultativněně anaerobní = množí se i za nepřítomnosti O2, avšak v jeho přítomnosti
rostou rychleji (Escherichia coli, kvasinky)
• mikroaerofilní = vyžadují pouze malé množství O2 -> 2 – 10% (Helicobacter pylori)
• aerotolerantní = indiferentní ke kyslíku (Streptococcus pyogenes)
pH
• většina bakterií roste nejlépe při neutrálním pH
• některé bakterie mohou růst v extrémně kyselém prostředí (acidofilní bakterie) –
Helicobacter pylori, Thiobacillus
• pH uvnitř buňky je přibližně neutrální
OSMOTICKÝ TLAK
• tlak nutný k zabránění volnému toku vody přes semipermeabilní membránu (např.
cytoplasmatickou)
• je určen koncentrací látek rozpuštěných v růstovém médiu
• za normálních podmínek je uvnitř buňky mírně vyšší osmotický tlak než vně (voda
vtéká do buňky)
• buňky jsou do určité míry schopny kompenzovat vysoký externí osmotický tlak
(Permeasy, syntéza aminokyselin)
• využití inhibičního účinku solí při uchovávání (konzervaci) potravin
Kultivační zařízení
- poloprovozní a velkopacitní kultivační reaktory – tanky
- pro průmyslové využití mikroorganismů
Synchronizace dělení
- metody navození synchronního množení
• chladový šok – zastavení buněčného cyklu ve fázi G1- blokována syntéza DNA
• zfázování hladověním – využití výživového signálu (ve fázi G1)
• filtrace membránovými filtry (zachycení buněk o přibližně stejné velikosti)
Treponema pallidum
- treponemy osídlují ústní dutinu, střevní trakt a pohlavní ústrojí člověka a zvířat (sliznice);
některé druhy jsou patogenní
- T. pallidum – původce syfilis (lues, příjice); přenos pohlavním stykem; onemocnění se může
přenést přes placentu i na plod; onemocnění probíhá v několika stadiích
- buňky mají vnější periplast!
Leptospiry
- flexibilní helikální buňky (průměr 0,1 μm a délka od 6 do 24 μm), pohyblivé
- jeden nebo oba konce buněk mají typické zahnutí; každá buňka obsahuje dva axiální bičíky
(po jednom na každém konci)
- leptospiry jsou rozšířené v půdě, sladké vodě nebo mořském prostředí odkud kolonizují
zvířata včetně člověka
- způsobují leptospirózu, což je zoonóza primárně infikující divoká i domestikovaná zvířata,
která jsou rezervoárem; člověk se může nakazit leptospirózou jako náhodný hostitel
- antropozoonóza – může se přenést na člověka, ale není to primární, např. z hlodavce
bičíky
Borelie
- helikální buňky velikosti 0,2 až 0,5 x 3 až 20 mikrometrů složené ze 3
až 10 volných smyček
- buňky jsou pohyblivé pomocí 7 až 30 axiálních bičíků
- borélie jsou patogenní pro člověka a jiné savce a ptáky, vektorem pro
přenos jsou členovci (klíště, veš)
- přenašečem je hmyz (klíště, veš), klíšťata přenášejí kromě boreliózy i
encefalitidu
- borelióza má opět 3 stádia (1. stádium – červené kolečko, uvnitř bílé,
2. stádium – pokud se borélie nepřeléčí antibiotiky dochází k
pomnožení v krvi, projevy jako chřipka, slabost, malátnost, 3. stádium
– napadení všech vnitřních orgánů -> smrt, selhání srdce), léčit se dá
jen první stádium
- způsobuje gastritidy (žaludeční vředy) – infekční choroba, zánět žaludeční sliznice -> vznik
vředů, mohou praskat do žaludku nebo do dutiny břišní (nebezpečnější, na hranici života a
smrti), krev ve stolici ze střeva je světlá, natrávená v žaludku je tmavá, černá; účinná léčba
v prvním stádiu, ani nemusí dojít k tvorbě vředů
- bičík není axiální (obtočený) ale je to bičík volný
Spirochaeta
Oceanospirillum vodní saprofytické – nepatogenní druhy
Actinomycety G+
tř. Thalobacteria,
odd. Firmicutes – jsou větvené
Charakteristika Actinomycet:
- tvoří MYCELIUM – vzdušné, substrátové
• mycelium se může rozpadat: - kokoidní strukt. (kulatější), bacilární strukt. (tyčinkovité,
delší)
- rozmnožují se SPORAMI (na rozdíl od jiných bakterií, které se sporami nerozmnožují)
- jsou větvené, grampozitivní
- jsou řazeny k prokaryotickým organismům shodují se, protože mají stejnou strukturu
buněčnou a stejné chemické složení, metabolismus N2 , citivost k ATB a citlivost na FÁGY
- zabírají na ně antibiotika a ne antifugální preparáty – proto to nejsou houby
- POZOR! Jsou odolní vůči antifugálním léčivům
Spory
liší se od endospor eubakterií svým způsobem vzniku a funkcí
nosí ve sporangioforech spory
jsou méně odolné vůči T
nejvýznamnější půdní organismy, mohou být patogenní
tvoří se na speciálních Hyfách – označených jako sporofóry a to
buď po jedné, dvou , čtyřech (sporangiospory),
příp. tvoří řetízky (konidiospory)
každá spora obsahuje haploidní genom
DESTRUENTI dekompozitoři využití při BIODEGRADACI
výskyt a využití: v přírodě velmi rozšíření v půdě – ovlivňují kvalitu půdy; mohou být
patogenní; důležité při výrobě ATB (z některých se vytvářejí antibiotika)
Zástupci: Mycobacteriaceae
Actinomycetaceae
Dermatophilaceae
Actinoplanaceae
Microsmonosparaceae
Streptomycetaceae
Nocardiaceae
A. bovis
Myxobakterie G-
- gramnegativní, vyskytují se ve vnějším prostředí
- jsou saprofytní – rozkládají organickou hmotu
- jsou tvořeny paličkovitými vegetativními buňky, které jsou ohebné
- klouzavý pohyb
- příčné dělení
- tvoří PLODNICE – za vhodných podmínek (vyskytují se ve hnoji nebo v práchnivějícím dřevě)
- životní cyklus podle složení média:
• je-li přítomen PEPTON, SOLI – rostou jako bakterie a příčně se dělí
• nejsou-li aminokyseliny tvoří se PLODNICE jako kupky buněk na substrátě nebo
vyvýšené stopce
• v PLODNIČKÁCH se vegetativní buňky přemění na odpočinková stádia MYXOSPORY, které se
mohou např. u rodu Myxococcus nacházet ve SPORANGIÍCH (cystách), ty se pak otvírají a klíčí
• myxobakterie jsou chemoheterotrofní (využívají organické látky jako zdroj uhlíku) – vyžadují v
kultiv. médiu hydrolyzáty bílkovin
• tvorba plodnic se urychluje v přítomnosti jiných mikroorganismů (eubakterií, řas, kvasinek) a
zdá se, že se jimi mohou živit po jejich odumření
MYKOPLASMATA
Třída Mollicutes
odd. Tenericutes
Řád Mycoplasmatales
Čeleď Mycoplasmataceae
Rod Mycoplasma
CHARAKTERISTIKA:
1. nemají buněčnou blánu, stěnu – pleiomorfní, jsou to nahé bakterie, buněčná blána udržuje tvar
buňky -> tvar je pleiomorfní, není přesně tyčka, atd.
2. parazitické – jsou patogenní, přenášejí chorobu, projevuje se to infekcí dýchací soustavy,
• patogenní – vyvolávají pleropneumonie (PPLO) – může způsobit zápal plic
• ureaplasma způsobuje urogenitální infekce
• rezistentní k PNC, citlivé k C2H5OH, deterg., k osmo. tlaku
3. saprofytické
4. jsou VELMI MALÉ 0,33 – 1,0 µm
5. rozmnožují se příčným dělením nebo pučením
- infekce jsou velmi nebezpečné
ZÁSTUPCI: Rody: 1. MYCOPLASMA (vyžadují steroly) – 100 druhů
2. ACHOLEPLASMA (nevyžaduje k růstu steroly)
3. THERMOPLASMA
….
Σ 6.
Systematické zařazení
• dříve řazeny k rostlinám – Cyanophyta
• od r. 1980 do prokaryot!!!! – Cyanobacteria G-
Problémy!
1) typizace – laboratorní kultury se liší od přirozeně se vyskytujících, kterých je popsáno asi 3
000.
2) popsáno 21 biochemických vlastností, kterými se sinice liší od bakterií.
• lze kultivovat sinice, ale rostou v laboratorním prostředí v jiné podobě, protože mají velmi
dobré podmínky
• autotrofní, fototrofní mikroorganismy, mají dokonalejší fotosyntézu než fotosyntetizující
bakterie (ty mají bakteriochlorofyl), sinice mají chlorofyl A, fotosyntetizují z aaerobních
podmínek (ale kdy se změní z aerobního na anaerobní rostředí – klidně se přepnou a jsou
schpny fotosyntetizovat i za anaerobního prostředí, jsou flexibilní, za aerobního prostředí –
fotolýza vody, za anaerobního prostředí využívají H2S, síro
Fotosyntéza sinic
• vývojově souvisí s PRIMITIVNĚJŠÍ FOTOSYNTÉZOU PURPUROVÝCH + ZELENÝCH BAKTERIÍ
• ZVLÁŠTNOST! MOHOU ZA ANAEROBNÍCH PODMÍNEK PŘEJÍT NA BAKTERIÁLNÍ TYP
FOTOSYNTÉZY. Včetně využívání H2S.
• tvoří různé pigmenty
• cyano = modrá, fialová apod.
• silný slizovitý povrch, silná buněčná stěna L1-L4, jádro nepravé bez karyolemy (haploidní),
fykobilisomy (zelené tečky, nacházejí se na thylakoidech) cytoplazmatická membrána,
vakuoly, heterocysty,
Symbiotické vztahy sinic
• extracelulární symbiózy:
- role fotobionta ve stélkách lišejníků
- tzv. cyanely v tělech mechorostů, kapraďorostů a nahosemenných rostlin (v dutinách
v listovém pletivu, v hlízkovitých útvarech na kořenech) - dodávají rostlinách dusík
v organické formě)
• intracelulární symbiózy:
- zoocyanely v buňkách prvoků,
- cyanely u oddělení Glaucophyta (řasa)
- u hub jediný známý případ endocyanózy – Geosiphon
Využití sinic
• dodávání organického dusíku využíváno pro zvýšení úrodnosti rýžových polí v Asii
• preparáty ze sinic jako složka potravy ve východní Asii (možné i jako složka diety, obsahují
vitamíny, ale i vysoký obsah nukleových kyselin - omezená poživatelnost)
• fikobiliny - potravinářská barviva
• využití v biomedicíně (značkování, díky fluorescenci možná náhrada radionuklidů)
Výskyt sinic
• sladké i slané vody
• povrch vlhké půdy a skal
• v mořích složka planktonu v litorálu a sublitorálu (až do 200 m hloubky)
• ve vodách s dostatkem živin tvoří řada zástupců v průběhu vegetační sezóny "vodní květ" –
při přemnožení, vyčerpají živiny (např. Rudé moře dostalo své jméno podle červeně
zbarveného vodního květu), při jejich fotosyntéze se využívá kyslík, ve vodě je pak tedy
nedostatek kyslíku – hnilobné procesy – hromadí se obrovské množství organické hmoty,
voda se stává pro ostatní organismy toxickou
• dvojí ohrožení ostatního života:
- přímou kompeticí mohutné biomasy
- na konci vegetační sezóny jejím hromadným odumíráním (hnilobné procesy => “otrávení
vody“)
• sinice snášejí extrémní hodnoty teploty i pH (teplota až 73°C, rozsah pH 5-13)
• na suchozemských substrátech - růst na holém substrátu, pionýrské druhy (ukládání živin,
zejména termální minerální prameny vysoký obsah CO2 ve vodě rozpuštěné vápenaté a
železité soli => činností sinic poklesne obsah CO2 => soli se srážejí a usazují (vznik travertinu)
proces biomineralizace = minerály vznikající činností mikroorganismů a organismů, kámen
travertin – vápenec, srážely se soli
• dobré osmoregulačních mechanismy umožňují růst i v silně salinním prostředí
• vydrží dlouho (i několik let) dehydratovány, po opětovném navlhčení začínají znovu růst !!!
Toxiny sinic
• cyanotoxiny jsou produkty sekundárního metabolismu, tedy látky, které nejsou využívány
organismem pro jeho primární metabolismus
• toxiny sinic jsou toxičtější než toxiny vyšších rostlin a hub, ale méně toxické než bakteriální
toxiny (např. botulotoxiny)
• cyanotoxiny dělíme na (podle toho na který finální orgán, systém působí daný toxin)
• neurotoxiny, hepatotoxiny, cytotoxiny, embryotoxiny, dermatotoxiny, genotoxiny a
mutageny, imunotoxiny, imunomodulatory a tzv. Tumor Promoting Factors (stimulují 2. a
3. fázi kancerogeneze) – ne indukce genetické změny ale přeměna benigního nádoru na
maligní
• dělení podle chemické struktury: alkaloidní neurotoxiny..
Alkaloidní neurotoxiny sinic
• Producenti: Anabaena, Oscillatoria, Lyngbya, Planktothrix, Nostoc (nemusíme pamatovat)
• Název toxinů: anatoxin a, anatoxin a(s), anatoxin b , homoanatoxin, saxitoxin, neosaxitoxin,
aphantoxin
• Symptomy intoxikace: nekoordinované pohyby, vypouklé oči, ztráta kontrolovaného ovládání
svalové kontrakce, záchvaty zuřivosti, srdeční zástava, udušení. Efekt během 5 minut. Vliv na
srdeční sval i u korýšů
Genotoxiny a mutageny
• mutagenní a genotoxická aktivita byla prokázána z frakcí sinic obsahující microcystiny a další
neidentifikovatelné biotoxiny
• mutagenní metabolity jsou často potenciálními karcinogeny
Cytotoxiny
• sinice produkují širokou skupinu látek s cytotoxickými a cytostatickými účinky
• často jsou zařazovány mezi organismy biotechnologicky nadějné z pohledu farmaceutických
výzkumů
• obecně lze říci, že “čerstvé izoláty“ z přírodních podmínek vykazují vyšší schopnost produkce
výše citovaných látek než čisté kmeny, které jsou po mnoho generací pasážovány ve
sterilních podmínkách
KVASINKY a PLÍSNĚ
o zařazení do systému
– eukaryontní mikroorganismy
– patří mezi houby
• podle vegetativního rozmnožování (nepohlavní rozmnožování): pučení a dělení
• podle pohlavního rozmnožování možno je rozdělit: askomycety, basidiomycety
známo asi 700 druhů kvasinek
5) růst na pevném médiu vytvářejí pseudomycelium = některé tvoří pravé hyfy na nichž po
stranách nebo na koncích vznikají:
blastokonidie
artrokonidie
chlamydospory
– nutno odlišovat od askospór, které vznikají v sexuálním procesu
– prvky FRUKTIFIKACE - slouží k rozšíření v přírodě
6) buněčná stěna je tvořena: - glukanem
- manamem
- proteiny
- lipidy
- chitin (polymer N-acetyl-D-glukosaminu)
- fosfát
Po enzymatické lyzi - oddělení pupenu - na povrchu zůstávají jizvy.
7) další části buňky - cytoplasmatická membrána = plasmalema
- jádro = pravé dělí se:
mitozou – při veg. děl.
meiozou – při pohlav.
- endoplazmatické retikulum
- golgiho aparát
- vakuloly – obsahující: volutin, tuky, bílkoviny, aminokyseliny,
puriny, pigmenty, krystalky močoviny a izognaninu, (hydrolytické
enzymy = funkce lyzozymu)
- mitochondrie
- ribozómy
- cytoplasma
8) rozmnožování
a. vegetativní – příčné nebo pučením multilaterálním nebo bilaterálním
schéma pučící buňky
1. jádro -> mitóza
2. mitochondrie
3. vakuola
4. ER
5. pólové tělísko vřeténka
6. mikrotubuly
7. vřeténko
• bipolární = u některých druhů s protáhlými buňkami se popeny neoddělují a
vytváří se tzv. pseudomycelium, v určitých místech pseudomycelia vznikají
svazky kratších elipsoidních buněk (blastospory), blastospory vznikají
postupným pučením, aniž by se buňky oddělovaly, vytvářejí nepravé
mycelium – jsou to neoddělené pupeny
• přehrádečné dělení (1 a 2 – 2 vede ke vzniku mycelia), polysacharidové
pouzdro
Patogenní kvasinky
nezabírají antibiotika, ale antifugální prostředky -> silné vedlejší účinky, nárazové, nebo lokální
podávání
Trichosporon cutanea – ve vlasech a vousech
Cryptococcus neoformans – nervová soustava
Candida albicans – urogenitální trakt
Candida tropicalis – se zařazuje mezi patogenní kvasinky, nejčastěji se však
vyskytuje jako všeobecný komenzál v ústech, trávícím ústrojí, v plících, ve
vagíně, na pokožce lidí a zvířat
v posledních letech přibývají klinické nálezy i dalších kvasinek (Geotrichum, Rhodotula,
Saccharomyces, Hansenula anomala) u pacientů se sníženou imunitou
Malassezia spp. je součástí běžné kožní mikroflóry lidí i zvířat, u oslabeného organismu může
způsobovat kožní i systémové onemocnění
Pekařské kvasinky
rod Saccharomyces – požaduje se, aby se rychle množily, měly co nejmenší sklon
k alkoholovému kvašení, protože zdroj C a energie (cukr) má být maximálně využit k tvorbě
biomasy, nesmí u nich být autolýza (trvanlivost)
Pichia – biotechnologická výroba nejrůznějších látek – inzulin, antigeny, enzymy
Yarowia lipolytica – biodegradace, genové inženýrství – gen pro lidský cytochrom P450 a
NADPH
MIKROMYCETY
vláknité houby – plísně -------- mikromycety nebyly na přednášce
Mikromycety
• pro vláknité mikromycety se všeobecně používá termín plísně
• v mykologii má však termín "plísně" užší význam, označuje pouze houby podkmene
Oomycota (např. Phytophtora infestans - plíseň bramborová), Chytridiomycota (např.
Synchytrium endobioticum) a Zygomycota (např. Mucor mucedo - plíseň hlavičková)
• v některých populárních lékařských příručkách se tento termín používá dokonce i pro
označení kvasinek
Cytoplazmatická membrána
• je zodpovědná za transport látek a osmoregulaci
• je místem syntézy některých komponent buněčné stěny
• není sídlem enzymů oxidativní fosforylace
• invaginace nejsou tak časté jako u kvasinek
Jádro
• dvojitá jaderná membrána s velkými póry
• umístěno přibližně ve středu buňky
• buňky hyf jsou cenocytické (mnohojaderné – obrázek vpravo)
• ve sporách je jádro jedno
• počet chromozomů v haploidním jádře – 7 až 40
Základní cytoplazma
• složením a funkcí se neliší od cytoplazmy kvasinek
• hlavní zásobní látkou jsou lipidy
• lipidy jsou ukládány ve vakuole, základní cytoplazmě
• u starších buněk jsou lipidy z buněk uvolňovány a mohou být zaměněny za spory
Mycelium
• spora
• hyfa
• postupné větvení
• mycelium – spleť hyf
• skleromycelium – tvrdý polokulovitý útvar tvořený hustou spletí hyf
• stroma – kožovitá spleť hyf
Zygomycota – Rhizopus
• houba s kosmopolitním výskytem
• častý je zvláště na potravinách nebo v krmivech, způsobuje též
hnilobu ovoce
• neprodukuje mykotoxiny
• v laboratoři je vzhledem ke svému rychlému růstu a snadnému šíření považována za
nebezpečnou kontaminantu
• příležitostně bývá izolován z klinického materiálu
Ascomycota- Byssochlamys
• vyskytuje se často především na kazících se potravinách nedostatečně tepelně ošetřených
(mošty, ovocné dřeně, kompoty) nebo i v krmivech
• askospory mohou po určitou dobu přežívat i teploty vyšší než 80°c
• některé izoláty mohou produkovat mykotoxin patulin
Deuteromycetes – Penicillium
• používá se pro výrobu sýrů typu Roquefort
• může se vyskytnout i jako kontaminanta jiných potravin či krmiv (např. siláží)
• v čisté kultuře je schopen produkovat PR toxin, avšak na sýrech je jeho produkce velmi slabá
a látka se rozkládá
7. PROSTŘEDÍ A MIKROORGANISMY
• mikroorganismy jako jediné organismy obývají všechna prostředí
• ekologie mikroorg.= studuje vztahy mezi mikroorganismy a prostředím a ostatními org.
Půdní bakterie
▫ heterotrofní – mikroorgasnimy, které rozkládají organickou hmotu, r. Pseudomonas,
Arthrobacter, Agrobacterium, Flavobacterium, Achromobacter a aktinomycety (r.
Streptomyces a Nocardia)
▫ autotrofní – k rozkladu využívají oxid uhličitý, CO2 jako zdroj uhlíku, druhy jsou
zastoupeny málo – jde např. o některé druhy cyanobakterií (r. Nostoc,
Cylindrospermum, Anabaena).
▫ aktinomycety = podílejí se většinou na rozkladu složek rezistentních k běžnému
rozkladu nebo k rozkladu houbami, např. ligninu, chitinu a humusových látek; rod
Streptomyces je zastoupen v půdě nejvíce a je významný také tím, že produkuje látku
geosmin, díky které má půda svou typickou půdní vůní
▫ myxobakterie, např. r. Nannocystis, Lysobacter a Cytophaga
Mikroorganismy ve vodě
• podle kvality užití dělíme vodu na: pitnou, užitkovou, odpadní
• ČSN norma pro pitnou vodu nepřipouští výskyt patogenních mikroorganismů a nepatogenní
jsou povoleny jen v množství 102/l ve vodě z lokálního zdroje – studniční
• voda z kohoutku - Voda povrchová – voda srážková – jsou zde mikroorganismy – upravit vodu
aby splňovalanrmu – nesmějí se zde vyskytovat žádné patogenní mikroorganimy, pokud
patogenní tak jen lokální zdroje
3. Tělo disponují mechanismy, které zabraňují nežádoucí invazi a růstů mikroorganismů (při
množení). => epifitní mikroflóra
Mukózní membrány jsou tvořeny vícevrstvými epitely – kontakt s vnějším prostředím, mají
ochranný charakter. Na povrchu vrstva MUKÓZY, na tuto vrstvu mohou být buňky
přichyceny volně nebo pevně:
A) přichycení VOLNĚ = lze snadno mechanicky odstranit (biofilm zubů = zubní povlak,
ten ale nejde nikdy mechanicky zcela odstranit)
B) přichycení PEVNĚ = adheze = mikrob může proniknout do buňky.
5. Běžně jsou osídleny: kůže asi 2m2, ústní dutina, horní cesty respiračního traktu, části
zažívacího traktu, genitálie a močová trubice.
Běžně se mikroorganizmy nevyskytují v: krvi, lymfě, lymfatickém systému. Jsou-li v
tělních tekutinách, obvykle to indikuje onemocnění.
NORMÁLNÍ MIKROFLÓRA - EPIFYTNÍ = osídlují vnitřní i zevní povrchy u zdravých lidí (epifytní = na
povrchu)
• Rezidentní mikroflóra: autochtonní mikroflóra, stálé – fixní typy – charakteristické pro určitou
část těla v daném věku – rychle se obnovují při narušení. Tyto mikroorganismy se označují
jako KOMENSÁLOVÉ mikroorganismy využívají hostitele jako vhodný zdroj výživy. Jsou pro
člověka nezbytné, napomáhají udržet zdraví někdy přechod k SYMBIOZE (tvorba vitamínů,
potlačují infekce)
• Transientní mikroflóra: aloktonní mikroflóra, (dočasná přechodná) je nepatogenní nebo
potenciálně patogenní OPORTUNNÍ. Pocházejí z vnějšího prostředí a nevyvolávají
onemocnění. Nemají větší význam, pokud není normální mikroflóra narušena nebo není
oslaben imunitní systém. V opačném případě může docházet k vyvolání chorob – zejména u
nemocných
Kůže
význam nevysýchající části
výskyt mikroorganismů ve vlasových folikulech a mazových či potních žláz
faktory limitující výskyt:
pH
živiny – mastné kyseliny, močové soli, kyselina mléčná
přítomnost lysozymu (látka běžně se tvořící ve sliznicích – slinách, atd. brání rozvoji
růstu mikrobů, působí hlavně na BS, vznikají protoplasty), beta defensiny
životní styl – osobní, slunění, (vývoj a degenerativní změny pleti), jak často se
myjeme, jestli používáme mýdla atd.
věk
rezidentní mikroflóra je konstantní
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus hominis
Staphylococcus aureus
Propionibacterium acnes (P. Vulgaris) = způsobuje akné (někteří mají imunitní systém,
který je nechrání proti tomuto mikroorg.)
Candida
Torulopsis
Pityrosporum
vlivy působící na osídlení:
1) počasí – suché, vlhké, slunné
2) věk
3) životní styl
4) pracovní prostředí
Propionibacterium acnes = v mazových žlázách kůže produkuje vysoce aktivní lipázu, která
hydrolyzuje triglyceridy v mazu, vzniklé mastné kyseliny mohou lokálně dráždit – zánět (v
mazových žlázách dochází k rozkladu působením enzymu, vznik mastných kyselin, které se
hromadí a vytváří ložisko, které může až zahnisat; trpí člověk v pubertě)
pozn. na kůži ochranný film – výběžky kožních buněk, tuky, kyselina mléčná, soli; nemydlit se
pořádně každý den (1x za tři dny), jinak kůže onemocní – plísněmi atd.; ale denně mýt ruce,
obličej, vlhké a potící se místa (chodidla, podpaží, genitálie, za krkem, jamky na lokti, pod
kolenem atd.)
Ústní dutina
vyznačuje se velmi různorodou mikroflórou
co do obsahu proměnlivé, spíše anaerobní prostředí
sliny = nejsou příliš vhodným (médiem) pro výskyt či růst mikroorganismů. Obsahují značné
množství nerozpustných solí: (chloridy, bikarbonáty, fosfáty, Ca, K), proteiny (enzymy,
monoproteiny, sirné proteiny), a malé množství tuků, vitamínů, čpavku, aminokyselin.
lysozym – enzym štěpící glykosidické vazby peptidoglykanu→ vznikají „protoplasty“
lactoperoxidinin – zejména u kojenců, (mléko + sliny) – usmrcují baktérie prostřednictvím
H2O2 a Cl- iontů (peroxid vodíku, chlorovodíkové ionty); může vzniknout mastitida – zánět
prsu, popraskání bradavek apod.
pH = 5,7 – 7,0; Ø 6,7 (je kontrolováno primárními bikarbonáty) H 2CO3 HCO3 H
choroby:
zubní kazy
paradontóza – záněty dásní (chronické)
gingivitidy – záněty slinných žláz
abscesy
afty
PATOGENITA
patogenita = choroboplodnost = schopnost mikroorganismů poškodit makroorganismy tj.
vyvolat onemocnění
specifita …… onemocnění určitého druhu u člověka ANTROPOPATOGENNÍ;
ANTROPOZOOPATOGENNÍ
virulence = stupeň, míra patogenity, je určena: 1) toxicitou, 2) invazivitou, 3) adhezivitou
toxicita = produkce bakteriálních exotoxinů a endotoxinů - prostudovány později (hemolyziny,
toxické fermenty, neurotoxiny, karditoxiny atd.)
invazivita = schopnost mikroorganismů pronikat do tkání
kmen není patogenní, jestliže tvoří toxiny, patogenní kmen nemusí vytvářet toxiny, může se
jednat o vnitrobuněčné parazity
neurotoxiny:
1.) tetanospanzin … C. tetani – vyvolává křeče
2.) botulotoxin … C. botulini – největší přírodní jed
3.) difterický toxin
4.) shigatoxin
Horečka
• vlivem endogenních pyrogenů se objevuje za několik minut
• zevní stimulace (exotoxinem), nastupuje za několik desítek minut
• jako obrana před infekcí nemá valný význam, ale může zpomalit rychlost množení některých
mikroorganismů
• zvyšuje rychlost imunitní odpovědi
• je však důležitým příznakem
• může být nebezpečná – fibrilární křeče
Teplota
1. MIKROBIOLOGIE
2. IMUNOLOGIE
3. EPIDEMIOLOGIE
Epidemiologie
je hygienický obor zabývající se ochranou obyvatelstva před infekčními chorobami
• v teoretické částí zkoumá zákonitosti, které podmiňují vznik choroby
• v praktické části stanovuje opatření proti infekčním chorobám
epidemiologové se zabývají: kde je zdroj, jak se infekce šíří a kde je konečný akcept?
infekční choroby mohou přecházet v epidemie – zasáhnout velké území (velké množství lidí)
– epidemiologové vyhlašují karantény (když se překročí určitý počet nemocných lidí), mohou
vzniknout i pandemie – postihuje celé světadíly (velká území, šíří se z jednoho světadílu na
druhý)
infekční choroby mohou být smrtelné
vyjmenujte choroby, které způsobují smrt – na testu
dělení infekčních chorob z různých pohledů:
přenos může být kontaktem, vodou, potravinami (alimentární nákazy), věcmi, pohlavním
stykem, vzduchem
Rizika infekcí
příčina 1/3 chorob během roku
oslabují organismus, narušují vývoj
mohou zanechat trvalé následky až invaliditu
mohou výt smrtelné
Rozdělení ATB
1. Podle způsobu aplikace: lokální (bacitracin, neomycin, framykoin), celková (PNC, STM)
2. Podle spektra účinnosti: úzkospektrální (viomycin), středně (PNC, erytromycin), široko
(tetracyklin, chloramfen)
3. Podle způsobu účinku: bakteriocidní (ničící bakterie, PNC, STM, KMC), bakteriostatická (bránící
růstu, TTC, chloramfen, erytromycin)
• CELKOVÁ (ta která pozřeme a čekáme, než se dostanou do organismu)
• penicilin původně nebyl vyvinut jako tabletka, 10 let se aplikoval jen injekčně
• spektra – úzkospektrální (když víme, co přesně vyvolalo infekci), středně, široko
• způsob účinku
• infekce ledvin, močového měchýře – širokospektrální ATB (může tam být cokoliv)
• v krku víme co je nejčastěji tak proto středně spektrální ATB
Mechanismus rezistence
1) schopnost tvořit enzym inaktiv. ATB (přirozená) – nebo chybí receptory, na který se ATB
váže, změna cílového místa
2) vznik mutace => rezistence – chromosonalní, plasmidová, (genotypický charakter)
Plasmidová – R-faktory (extrachromozomální)…konjugace u G-, transdukce u stafylokoků
3) fyziologická adaptace…L- varianty, adaptace na změněné metabolické poměry =>
schopnost přežívat ve tkáni i pod vlivem ATB
in vitro - citlivost nezměněna, např. u tyfu a TBC
• zkřížená rezistence – objevuje se u příbuzných ATB (tetracyklinová řada apod.)
Typy rezistence
přirozená Pseudomonas aeruginosa
primární jednostupňová – část citlivá, část necitlivá
sekundární – původně citlivá, později necitlivá
METABOLISMUS
- každá živá buňka je otevřený systém, s výměnou látek, energie, informací s prostředím
- živiny z prostředí do buňky → transformace – tvorba energie, syntéza biomolekul, exkrece
metabolitů
- metabolická aktivita mikroorganizmů je mimořádně různorodá
- metabolizmus je tvořen biochemickými reakcemi dvou protichůdných kategorií
1. anabolizmus – ASIMILAČNÍ
2. katabolizmus – DISIMILAČNÍ
katabolizmus = představuje degradativní procesy, vedoucí ke tvorbě energie (-ΔG).
anabolizmus = vede k syntéze jednotlivých složek buňky a je spojen se spotřebou
energie (+ΔG).
- katabolizmus a anabolizmus jsou dva protichůdné procesy, které vedle sebe existují v
prostoru a čase a vzájemně se podmiňují.
- spřažení katabolizmu (exergonické reakce) a anabolizmu (endergonické reakce):
Regulace metabolismu
• každá metabolická dráha – metabolický pochod – je řízen specifickým regulačním systémem
• regulační systém se uplatňuje
→ již při syntéze enzymů
→ nebo má vliv na aktivitu enzymu
• řídící funkce regulačního systému se uplatňuje i při změněných podmínkách vnějšího prostředí
Energický metabolismus
- všechny chemické reakce probíhající v buňce lze považovat za termodynamicky reverzibilní
změny
- v průběhu izotermního děje je na uskutečnění reakce spotřebována jen malá část celkové
vnitřní energie systému – volná energie
- zbytek představuje energii ztrátovou (entropii) – projeví se v podobě tepla
Energie
- v rovnovážném stavu je volná energie minimální a nedochází k její změně
- A +B B +C
- potom ΔGo = 0, pak ΔGo = - RT ln K = -2,303 RT log K
- při vysoké hodnotě K směřuje reakce k dokončení a ΔGo je negativní; při těchto reakcích je
energie uvolňována (exergonické reakce)
- probíhá-li reakce opačným směrem, hodnota K je nízká, musí být systému energie dodána
(endergonické reakce)
Oxidoredukční metabolismus
• průběh reakcí lze vyjádřit také redox potenciálem
H+,e-
A+B B+C
redukce oxidace
E0 = n FΔE
Makroergické vazby
• energetický metabolizmus probíhá při spřažení exergonických a enderonických reakcí
• pro uskutečnění syntézy je nutné, aby součet změn volné energie obou spřažených reakcí byl
negativní nebo alespoň s nulovou hodnotou
• syntetické reakce neprobíhají samovolně- nutné je dodání – uvolnění energie z energeticky
bohaté sloučeniny schopné vytvářet makroergickou vazbu ~
• díky vysoké hladině ΔG makroergické vazby, se aktivuje substrát a umožní se tím vlastní
reakce
• příklad – spřažené reakce při fosforylaci glukózy na glukóza-6-fosfát
Glu + Pan → Glu-6-fosfát (ΔGo = +12,6kJ)
Při účasti ATP, poskytne jeho makroergická vazba (ΔGo =-20,3kJ) potřebnou energii pro
reakci, ale odštěpením P také fosforylaci Glu.
Glu + ATP → Glu-6-fosfát + ADP (ΔGo = -16,7kJ)
• příklady energeticky bohatých sloučenin:
změny ΔGo při hydrolýze některých sloučenin
- ΔGo (KJ.mol-1)
ATP + H2O → ADP + Pan 30,9
ATP + H2O →AMP + pyrofosfát 31,8
Glu-6P + H2O → Glu + Pan 12,5
Acetylfosfát + H2O → HAc + Pan 43,9
P-enolpyruvát + H2O →pyruvát + Pan 54,4
Acyl-KoA + H2O →HAc + KoASH 32,2
ATP
- univerzální přenašeč energie – univerzální donor fosfátu v anabolických reakcích
- soustava ADP ↔ ATP je univerzálním “spřahovačem“ katabolizmu a anabolizmu
- kterákoliv exergonická reakce může “pohánět“ jakoukoliv endergonickou reakci
- proto je metabolizmus jako celek vysoce spolehlivý
Tvorba ATP
- na úrovni substrátu
- na úrovni membrány
- pozor:
• u prokaryot na cytoplazmatické membráně
• u eukaryot na vnitřní membráně mitochondrií
- tvorba ATP na úrovni substrátu za anaerobních podmínek
Metabolismus
1. rozdělení mikroorganizmů ve vztahu ke zdrojům energie
• chemotrofní
a) chemoorganotrofní
b) chemolitotrofní
• fototrofní
Glykolýza – EMP
Etanolové kvašení u bakterií
- ketodeoxyglukonátová (Entner-Doudorofova) dráha
Úloha pyruvátu
kvašení pentóz
propionové kvašení
máselné kvašení
Kvašení polysacharidů
• glykogen a škrob amylázy oligosacharidy maltóza maltáza glukóza
(Clostridium, Bacillus)
• celulóza celuláza celobióza celobióza glukóza
(Clostridium)
• pektin protopektinázy celulóza + protopektiny pektináza
metanol + kys. galaktouronová + arabinóza + galaktóza + xylóza + kys.máselná + octová +
CO2+ H2
(Clostridium, Bacillus macerans)
Probiotické mikroorganismy
Aerobní respirace
- neúplná oxidace substrátu
a) primárních alkoholů
b) glukózy
- úplná oxidace substrátu (nedochází k rozložení až na konečné látky, ale vznikají metabolity,
tvorba metabolitu, který se hromadí v prostředí)?
a) krebsův cyklus
b) cyklus dikarbonových kyselin
c) cyklus kyseliny glyoxalové
d) pentózový cyklus (hexózomonofosfátová dráha)
Neúplná oxidace alkoholů
zpracovávají látky typu alkoholu nebo cukry
kyseliny i ketony mohou být dále mikroorganismy využívány
• oxidace primárních alkoholů -> kyseliny
• oxidace sekundárních alkoholů -> ketony
neúplná oxidace (octové kvašení)
Úplná oxidace
výchozí substrát glukóza -> glykolýza (vznik pyruvátu) – ten dál přes dekarboxylovou dráhů na
acetyl koenzym A vstupující do Krebsova cyklu
elektrony a vodíky přenášeny na akceptor
Štěpení bílkovin
- atak z aminového konce bílkovinného řetězce
Oxidace aminokyselin
• oxidace aminokyselin v aerobních podmínkách začíná oxidativní deminací
• R-CHCOOH + ½ O2 R-COCOOH + NH3
NH2
• aminokyseliny mohou být oxidovány jednotlivě nebo několik současně
NITRIFIKACE
oxidace amoniaku probíhá ve dvou stupních
účastní se nitrifikační organismy
mimo tvorbu ATP na úrovni membrány, byl prokázán vznik ATP na úrovni substrátu
je to jediný příklad tvorby ATP u chemolitotrofů na úrovni substrátu (první dvě reakce jsou
opačné než u desulfurikačních bakterií)
kmeny Thiobacillus thioparus a Thiobacillus thiooxidans oxidují thiosíran nejprve na siřičitan a
pak až na síran
rod Thiobacillus – Thiobacillus denitrificans vedle aerobní respirace má i anaerobní respiraci
nitrátu (denitrifikační typ), přeměna dusičnanů až na molekulový dusík
Oxidace Mn2+
Leptothrix je schopný oxidovat vedle železa i mangan
vznik čtyřmocných sloučenin
OXIDACE VODÍKU
Vodíkové bakterie
chemoorganotrofní bakterie schopné získávat energii oxidací H2
obligatorní chemolitotrofní vodíkové bakterie nejsou známy
OXIDACE METANU
Metanové bakterie
metan je oxidován metanovými bakteriemi (rod Methylomonas – chemolitotrofní,
Hyphomicrobium – chemoorganotrofní)
mezistupněm oxidace je formaldehyd
Anaerobní respirace
chemoorganotrofní bakterie
chemolitotrofní bakterie – vzácněji
3. stupeň denitrifikace
denitrifikace = proces redukce dusitanů na N2 nebo N2O nebo směs obou plynů
METANOVÉ KVAŠENÍ
Redukce metanogenními mikroorganismy
Redukce na CO2 a CO
1. stupeň (neúplná redukce)
konečným produktem je metan
organismy jsou striktní anaerobní !! (jsou podstatně citlivější ke kyslíku než denitrifikační
nebo desulfurikační bakterie)
jako zdroj vodíku a elektronů nikdy nevyužívají cukry a aminokyseliny
jsou dvě skupinny metanogenních organismů
a) využívajích jako akceptor protonů a elektronů CO2 metanogenní
b) jako substrát slouží H2, nižší mastné kyseliny, primární alkoholy, izoalkoholy
homoacetogenní
Redukce CO
Desulfotomaculum auripigmentum
redukuje arsenát po redukci síranů – As2S3 – je vytvářen intracelulárně i extracelulárně
produkce „minerálů“ se označuje jako biomineralizace
tvorba As2S3 v prostředí je součástí detoxikačních procesů v prostředí
13. ÚVOD DO VIROLOGIE
- virus chřipky, virus EBOLA, virus HIV – obrázky
Stavba virů
- tvar je určen tvarem proteinového kapsidu:
1. kubický – má hrany seseknuté, vypadá jako diamant (ikosaitrická struktura)
2. helikální – bílkovina obtočena kolem spirálně stočené DNA uvnitř
3. kombinovaný
- kapsid
složen z kapsomerů (identické proteinové podjednotky – pentony, hexony)
nukleokapsid = kapsid + NK
obalený virus – další lipidová membrána získaná z cytoplazmatické membrány
infikované buňky; často živočišné viry
• Bakteriofág – virus napadající bakteriální buňky (každý typ buňky může být napaden virem,
specifita spočívá v tom, že ne každý virus může napadnout každou buňku), hlava je kubická,
bičík je helikální, příchytné vlákno, bazální destička; bičík může stlačit, vystoupne pochva –
z něho hrot – propíchne buňku bakterie a tím projde NK do buňky; má kapsid a NK
Chemické složení virů
• NK
• bílkoviny (obal)
• lipidy – u obalených virů (v membráně)
• sacharidy – u obalených virů
Nukleové kyseliny
- všechny typy NK jaké existují
- dvouřetězcová DNA (lineární, kruhová)
- jednořetězcová DNA (lineární, kruhová)
- dvouřetězcová RNA
- jednořetězcová RNA
Bílkoviny
- kapsidové – vytvářejí spontánně kapsomery a kapsid z polypeptidových řetězců (kapsomery
tvoří kapsidy)
- jednotlivé polypeptidové řetězce tvoří shluky, které se nazývají kapsomery
- funkce bílkovin:
• ochranná (ochrana virového genomu)
• rozpoznávací (vyhledávání citlivých hostitelských buněk)
• katalytická (enzymy u složitějších virů)
• regulační (mohou ovlivňovat např. replikaci buněčné DNA
• antigenní (schopnost vyvolávat v napadeném organismu tvorbu protilátky)
Lyzogenní konverze
• represe genů, integrace do cDNA – vznik profágu (proviru), udržení lyzogenního stavu
• excize z DNA (UV, chemické I.), maturace (shromáždění fágové DNA a proteinů za tvorby
zralých virionů), eluce (uvolnění virionů z hostitelské buňky pomocí lysozomu, který se
syntetizuje v pozdější fázi infekce)
• excize uvolnění, maturace dozrávání, eluce uvolnění
• latentní stav = virální NK je zabudována do chromozomu hostitele a replikuje se jako součást
chromozomu hostitele
• profág může kódovat proteiny, které mění vlastnosti hostitele, např. u bakterií zvyšuje
patogenitu
- Clostridium botulinum botulismus
- Corynebacterium diphteriae černý kašel
- Streptococcus pyogenes spála
• patogenita je určena přítomností genů nesoucí profágy napadající buňky
• po eliminaci profága nejsou bakterie schopny syntetizovat toxiny způsobující nemoci
(botulismus, záškrt, spálu)
• toxiny kódovány fágovými geny, které jsou exprimovány pouze po integraci fágové DNA do
bakteriálního chromozomu
• viry způsobující nádory u zvířat = exprese virální DNA vede k získání nových vlastností
hostitelské buňky (Vong viry ? VO viry)
Klasifikace virů
• obtížná
a) proměnlivost
b) účel přírodovědná klasifikace (fylogeneze a evoluce – vlastnosti genetické,
morfologické)
medicína (patogenita, způsob přenosu, specifita hostitelské buňky,
imunitní odpověď)
• základní kritéria klasifikace stanovuje ICTV (International Committee on Taxonomy of
Viruses), vydává, publikuje pro nově identifikované viry klasifikační přístupy
• polytetický klasifikační přístup – komplexní dynamický přístup – spojuje biologické i
medicínské kritéria – morfologie, typ DNA, stanovení nukleotidových sekvencí, typ
hostitelské buňky, serologické vlastnosti) - tak abychom se strefili do specifičnosti viru
• základní jednotkou klasifikace je DRUH (je však abstraktním pojmem) charakterizovaný
prototypovým kmenem (soubor relativně homogenních laboratorně izolovaných kmenů)
• dnes indetifikováno 1550 druhů rozdělených do 3 řádů, 69 čeledí, 243 rodů
• viry jsou mnohem více proměnné než bakterie
Perzistentní
- virus nelýzuje buňku, ale virus pučí z buňky
- hostitelská buňka přežije a množí se
- latentní
- integrace virálního genomu do genomu buňky – provirus
Adenoviry
- dvoušroubovicová DNA
- vnímavé k cylindrickému výstelkovému a přechodnému epitelu (sliznice)
- přenos kapénkovou infekcí (vzduchem)
- virus je vylučován hleny a stolicí a vodou při koupání
- vyvolávají akutní záněty nosohltanu, spojivek, moč. měchýře
Papilomaviry
- DNA virus
- váže se přímo nebo nepřímo (po interakci s onkoproteiny pRb a p53) na jadernou cDNA –
zasahují do regulace syntézy DNA (může vytvářet provirus)
- indukují tvorbu papilomů (bradavic) - způsobují na kůži degenerativní změny v podobě
bradaviček
- indukují tvorbu Ca – děložního krčku HPV
• HR HPC high risk - 40 typů, nejčastější u nás typy 16 a 18 – prekarconogenozy a CA –
celosvětově 270 tis. úmrtí /ročně; v ČR 1 tis. Onemocnění, z toho 400 úmrtí/ročně na
rakovinu děložního čípku)
• LR HPV – low risk – původci genitální bradavice
• prevence – očkování – ve věku 13let – 2 vakcíny – kvadrivalentní – proti typům 6, 11 a 16
a 18; a duální – jen proti 16 a 18 typu
Herpes viry
- DNA viry
• alfa herpes (HSV1 – stomatitida keratitida - puchýřky na kůži, rtu a HSV2 – encefalitida),
opary u různých obratlovců včetně člověka, HSV3 – varicella (plané neštovice), varicella
zoster (pásový opar)
• beta herpes u lidí – cytomegalovirus HSV5 – infekční mononukleóza (jaterní onemocnění
podobné žloutence, má následky – může zanechat prekarcinogenní malformační změny),
malformační změny novorozenců (mozek); mononukleóza typická pro pubertu a
adolescenci (projeví se bolestí v krku, zvětšení jater – doktor často nasadí ATB, ale ty
nefungují – je to virus – nejde ze začátku poznat, že to není angína)
• gama herpes (EB virus, KSHV) – Burkitův lymfom, hepatitida, kaposiho syndrom, CA
nasofaryngu (rakovina) atd.
Životní cyklus Herpex simplex
- normální herpes
- buňka dlaždicovitého epitelu – sliznice
- infekční viry – kapsida a nahoře je nukleokapsida, nahoře ještě plášť, dovnitř není známo, jak
se dostane, ale pravděpodobně pinocytózou
- virus nechá obal venku, dovnitř vstupuje kapsida, z ní se uvolňuje dvoušroubovicová DNA a ta
hledá jádro a jadernými póry vstupuje do jádra, zde dochází k transkripci do mRNA a přepisu
gen. inf. na ribozomech v ER, současně dochází k replikaci DNA
- natvoří se bílkoviny virového charakteru vstupující dovnitř jádra, kde obalují repliky, vytvoří
se kapsida a prorůstají jadernou membránou a ER, přičemž napovrch dávají membránu
z těchto struktur – to je jejich obal (ukradnou obal z těchto struktur)
Picornaviry
- 1 řetězcová RNA
- rod Enteroviry – gastrointestinální infekce lidí i zvířat
• poliovirus – vyvolává poliomyelitidu (obrna)
• echoviry (aseptická encefalitida)
- rod Rhinoviry (jsou citlivé na nízké pH, jsou inaktivovány žaludečními šťávami) – vyvolávají
rýmy (virová rýma skončí do 5 dnů, rýma se dá rozeznat podle hlenu - zelený a páchnoucí je
bakteriální původ – je třeba léčit jinak)
Arboviry
- viry přenášené hmyzím vektorem – množí se v krev sajících členovcích (klíšťata, komáří,
muchničky)
- dvojí cyklus hmyz x obratlovci (střídání hostitele)
- viry encefalomyelitidy (klíšťová encefalitida – očkování, virus žluté zimnice), ohniska nákaz
klíšťaty se mění
- viry horečky dengue – oblast Afriky
Retroviry
- dřeň obsahuje 2 molekuly negativní RNA
- dělí se na:
• onkogenní – nesou gen vonc (onkoviry)
• lentiviry – HIV a HTLV – množí se v makrofázích, HIV v T4 lymfocytech, detekce
přítomnosti HIV se provádí ELISA testem na protein p24
- HIV končí smrtí
- AIDS způsobuje HIV virus, několik skupin HIV virů (je možné že se množí i jinou cestou než
krví)
1. onkogenní - viry této podčeledi vyvolávají u ptáků a celé řady savců leukózy a solidní tumor,
pro člověka jsou patogenní onkoviry, napadající lymfocyty: HTLV I (Human T-cell Leukemia
Virus) a HTLV II
2. lentiviry - lidské viry imunologické nedostatečnosti označované zkratkou HIV – způsobují
onemocnění AIDS
AIDS
• Průběh onemocnění = AIDS probíhá tak, že u pacienta střídavě dochází ke zhoršení a zlepšení
stavu, přičemž období zlepšení znamená návrat k více či méně normálnímu klinickému stavu.
V průběhu 2. až 6. týdne (nejčastěji 3. a 4. týden) po infikaci HIV se u 60 - 70 % infikovaných
osob projeví příznaky připomínající chřipku nebo mononukleózu. (U dalších infikovaných lidí
se žádné příznaky neprojeví.) V tomto případě hovoříme o primoinfekci nebo-li akutní
primární HIV infekci. U infikovaných jedinců se začnou vytvářet protilátky proti HIV, které
bude možno prokázat sérologickým testem v průměru do 2 měsíců od infekce. Stanou se tedy
HIV pozitivními.
• Prevence = Účinnou prevencí je chráněná soulož, s použitím prezervativu. Přerušovaná soulož
ani užívání hormonální antikoncepce a poševního pesaru nejsou ani při nejmenším
dostatečnou ochranou. Dále by měl každý, kdo je ve styku s HIV postiženým, užívat vlastní
hygienické potřeby a těhotné ženy s AIDS by neměly své děti kojit.
• Pandemie = Šíření pandemie AIDS je jedním z hlavních problémů řady rozvojových zemí. Na
světě je dnes okolo 40 milionů nakažených, 3/4 z nich žijí v subsaharské Africe. V některých
afrických zemích je nakažena i čtvrtina populace. Silně postižena je také jižní Asie, zejména
Indie. V Evropě pak země bývalého Sovětského svazu. Největší počet nakažených HIV žije v
Jižní Africe, Nigerii a Indii.
• Léčba = Současná lékařská věda není schopna AIDS vyléčit, dokáže ale oddálit jeho propuknutí
a zpomalit jeho průběh. Nejúčinnější je v současné době použití antiretrovirových virostatik v
režimu tzv. kombinované antiretrovirové terapie, ve stadiu AIDS je součástí léčby také
potlačování oportunních infekcí.
Rostlinné viry
- značné množství vážných rostlinných chorob je způsobeno viry
- žloutnutí lístků, kroužků a čáry na listech, nevyvinuté rostliny, někdy abnormální růst
- rostliny se většinou z virové infekce nevzpamatuje
- pěstování rostlin záměrně infikovaných viry – panašované listy, pestrobarevné tulipány
Mechanismus přenosu rostlinných virů
- rostlinné viry se neváží na specifické receptory
- vstupují různými poraněními v buněčné stěně
- velmi odolné proti inaktivaci – virus tabákové mozaiky
- přenášeny například z půdy, semeny, hlízami, pylem, roubováním, hmyzem, houbami…
40 otázek ke zkoušce - končí prionama, to dál v otázkách nebude, v otázkách je také co je to karanténa =
Karanténa je držení osob nebo zvířat na izolovaném místě za účelem pozorování, zda se u nich projeví příznaky
nějaké nemoci. Je užívána na lidech, které přicházejí z regionů ohrožených epidemií. dočasná izolace