TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.

HCM
KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC
NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

BÁO CÁO THỰC HÀNH

VI SINH VẬT HỌC THỰC PHẨM

LỚP: DH22FT02
NHÓM: C3 – TỔ: 1
THÀNH VIÊN:

1. Nguyễn Thị Ngọc Trinh - 2253022158 3. Nguyễn Thị Phương Trâm - 2253022150

2. Nguyễn Thị Như Ý - 2253022171 4. Tạ Bùi Thanh Thảo - 2253022124

1
 Mục lục
BÀI 1: CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG ................................................................................4
BÀI 2: THỰC HIỆN CÁC THAO TÁC CẤY ...........................................................................................4
I. MÔ TẢ THAO TÁC CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ..................................................4
1.1. Thanh phân môi trương: ..................................................................................................................4
1.2. Cac bươc tiên hanh: .........................................................................................................................4
1.3. Cac lưu y trong qua trinh chuân bị môi trương: ..............................................................................5
II. THAO TÁC CẤY THẠCH NGHIÊNG TỪ DỊCH VI KHUẨN LỎNG .................................5
2.1. Mô tả cac bươc tiên hanh: .......................................................................................................... 5
2.2. Kêt quả cấy: ................................................................................................................................6
III. THAO TÁC CẤY THẠCH NGHIÊNG TỪ KHUẨN LẠC VI KHUẨN ............................... 7
3.1. Mô tả cac bươc tiên hanh: .......................................................................................................... 7
IV. THAO TÁC CẤY RIA – PHÂN LẬP TỪ KHUẨN LẠC VI KHUẨN ...................................7
4.1. Mô tả cac bươc tiên hanh: .......................................................................................................... 7
4.2. Kêt quả cấy: ................................................................................................................................8
V. THAO TÁC CẤY TRANG TỪ DỊCH VI KHUẨN LỎNG ......................................................... 9
5.1. Mô tả cac bươc tiên hanh: .......................................................................................................... 9
5.2. Kêt quả cấy: ................................................................................................................................9
BÀI 3: ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ VÀ TỔNG SỐ MEN MỐC BẰNG PHƯƠNG
PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC ....................................................................................................................... 11
I. ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ ..................................................................................11
1.1. Thanh phân môi trương sư dung: môi trương thạch tryptone agar. .................................................. 11
1.2. Mô tả thao tac: ...................................................................................................................................11
1.3. Kêt quả cấy: .......................................................................................................................................11
II. ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ MEN MỐC ................................................................................... 13
2.1. Thanh phân môi trương sư dung: ...................................................................................................... 13
2.2. Mô tả thao tac: ...................................................................................................................................13
2.3. Kêt quả cấy: .......................................................................................................................................14
III. XÁC ĐỊNH VI KHUẨN GRAM ÂM TRONG THỰC PHẨM TRÊN MÔI TRƯỜNG
MACCONKEY .......................................................................................................................................16
3.1. Mô tả thao tac ...................................................................................................................................16
3.2. Kêt quả cấy ........................................................................................................................................17

2
BÀI 4: ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT SINH HÓA CỦA VI KHUẨN TRÊN MÔI TRƯỜNG TSI ......... 19
I. MÔ TẢ THAO TÁC CẤY: ........................................................................................................... 19
II. ĐỌC KẾT QUẢ TRÊN MÔI TRƯỜNG TSI ..........................................................................19
2.1. Vi khuân 1: Lactobacillus acidophilus .........................................................................................19
2.2. Vi khuân 2: Bacillus clausii ......................................................................................................... 19
BÀI 5: QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT BẰNG KÍNH HIỂN VI ........................................... 21
I. QUAN SÁT HÌNH THÁI NẤM MEN ......................................................................................... 21
1.1. Mô tả thao tac thưc hiên: ..............................................................................................................21
1.2. Mô tả hinh thai nấm men: ............................................................................................................ 22
II. NHUỘM GRAM VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI KHUẨN ................................................23
2.1. Vi khuân 1: Vi khuân gram âm .................................................................................................... 23
2.2. Vi khuân 2: Vi khuân gram dương ...............................................................................................24

3
 BÀI 1: CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG DINH DƯỠNG
BÀI 2: THỰC HIỆN CÁC THAO TÁC CẤY
I. MÔ TẢ THAO TÁC CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY
1.1. Thanh phân môi trương:
- Glucose: 5g/L
- Yeast extract: 3g/L
- Peptone: 6g/L
- Agar: 15g/L
- NaCl: 5g/L

1.2. Cac bươc tiên hanh:

B1: Cân chinh xac khôi lương cac thanh phân môi trương vao pecher 500ml, thêm nươc
cho đu 100ml rôi đem đi đun cach thuy đê hoa tan hoan toan cac thanh phân. (trong qua
trinh đun khuấy đêu liên tuc)
B2: Sau khi cac thanh phân môi trương tan hoan toan, thêm nươc cho đu 100ml đê sôi rôi
lấy ra chia thanh 2 phân.
- Phân 1: rot vao lọ thuy tinh sau đo dùng bông gon bịt kin miêng lọ, bọc giấy trùm kin
miêng binh đê ngăn hơi nươc lam ươt bông gon trong qua trinh tiêt trùng, cuôi cùng bao
lọ thuy tinh băng tui ni long rôi đem đi tiêt trùng.
- Phân 2: rot vao 4 ông nghiêm môi ông 10ml (1/3 ông), dùng bông gon bịt kin miêng
ông, cô định 4 ông vơi nhau sau đo bao lại băng tui ni lông rôi đem đi tiêt trùng.
B3: Lam thach nghiêng: sau khi tiên hanh tiêt trùng, đăt 4 ông nghiêm co môi trương lên
gia đăt nghiêng đê yên cho đên khi môi trương đông đăc.
B4: Đô môi trương vao đia petri: sau khi môi trương trong lọ thuy tinh va đia petri đa
đươc tiêt trùng ta thưc hiên cac thao tac sau:
- Khư khuân hai tay va toan bô măt ban nơi thưc hiên.
- Mơ bao giấy goi cac đia petri.

4
 - Môt tay câm dung cu chưa môi trương, tay con lại mơ nut bông va hơ miêng binh trên
ngọn lưa đen côn. Đông thơi câm đia petri lại gân ngọn lưa xoay tron đê khư trùng xung
quang miêng.
- Mơ he năp đia petri, nghiêng binh va rot môi trương vao đia petri. (thưc hiên cac thao
tac phải gân vơi ngon lưa đen côn đê tranh vi khuân bên ngoai xâm nhâp vao)
- Đây năp đia lại, xoay tron đê môi trương đươc phân phôi đêu bên trong đia, đê yên
cho môi trương đông đăc.

1.3. Cac lưu y trong qua trinh chuân bị môi trương:

- Đôi vơi môi trương thạch nghiêng cân tiên hanh ngay sau khi khư trùng môi trương
va môi trương chưa đông đăc.
- Thao tac đô môi trương phải nhanh va khao leo đê hạn chê sư nhiễm khuân.
- Ghi chu tên môi trương.

II. THAO TÁC CẤY THẠCH NGHIÊNG TỪ DỊCH VI KHUẨN LỎNG

2.1. Mô tả cac bươc tiên hanh:
B1: Ghi thông tin lên ông nghiêm chưa môi trương thưc hiên thao tac.
B2: Chuân bị ông nghiêm lỏng chưa giông va ông thạch nghiêng đa thưc hiên vô trùng.
B3: Xịt côn diêt khuân trên tay va măt ban thưc nghiêm (lau sạch). Tiêt trùng que cấy
vong trên đen côn.
B4: Lăc nhẹ ông nghiêm lỏng chưa giông vi sinh vât giup tê bao vi khuân phân tan đông
đêu.
B5: Đưa que cấy vao huyên phù vi khuân, khuấy nhẹ nhang. (luôn hơ đen côn quanh
miêng ông nghiêm trươc va sau khi thao tac).
B6: Tiên hanh mơ năp ông nghiêm chưa môi trương thạch, thưc hiên đương cấy zic zac
trên măt thạch nghiêng.
B7: Hơ đen côn quanh đâu ông nghiêm sau đo đây năp ông nghiêm va đăt cân thân lên gia.
B8: Đôt que cấy băng đen côn sau thao tac cấy.
B9: Ủ vi khuân ơ nhiêt đô va thơi gian phù hơp trong tu ấm, thương la 37oC trong 48 giơ.

5
2.2.Kêt quả cấy:
 Hinh ảnh cấy:

Hinh 1 - Cây thach nghiêng tư dich vi khuân long

 Kêt quả cấy:
- Nêu cấy thanh công, sẽ xuất hiên cac khuân lạc dọc theo đương cấy. Ống nghiêm 1
va 3 thanh công xuất hiên cac khuân lạc lan rông dọc theo đương cấy, ông nghiêm 2
va 4 bị lôi trong thao tac cấy dẫn đên khuân lạc không xuất hiên.
- Hinh dạng, kich thươc, mau săc cua khuân lạc sẽ phu thuôc vao chung loại vi khuân.
 Kêt luân:
- Phải luôn đảm bảo vô trùng tất cả cac dung cu va môi trương cấy, chỉ cho phep sư
xuất hiên cua vi khuân cân nuôi cấy.
- Không đưa que cấy con qua nong vao huyên phù vi khuân, như vây sẽ tiêu diêt vi
khuân giông. Kêt quả cấy, cac khuân lạc sẽ không xuất hiên.
- Cân thao tac cấy cân thân, nhẹ nhang đê tranh lam lây nhiễm môi trương va bê thạch.
- Sau khi cấy, cân u cac ông nghiêm ơ nhiêt đô va thơi gian thich hơp cho từng loại vi
khuân.
- Phương phap cấy thạch nghiêng từ dịch vi khuân lỏng la môt kỹ thuât sinh học quan
trọng đươc sư dung đê phân lâp, nuôi cấy va thuân chung vi khuân từ cac mẫu sinh
học như mau, mu, nươc tiêu, dịch tiêt,...
- Ưu – Nhươc điêm cua phương phap cấy thạch nghiêng từ dịch vi khuân lỏng:

6
 + Ưu điêm: Đơn giản, dễ thưc hiên. Ít tôn thơi gian. Phù hơp vơi nhiêu loại vi khuân.
Giup phân biêt đươc vi khuân hiêu khi va vi khuân kỵ khi. Giup phân biêt đươc vi
khuân di chuyên va vi khuân không di chuyên.
+ Nhươc điêm: Co thê bị ảnh hương bơi đô day cua thạch. Co thê bị ảnh hương bơi đô
âm cua môi trương. Phải tỉ mỉ trong thao tac cấy, cân thân, nhẹ nhang.
III. THAO TÁC CẤY THẠCH NGHIÊNG TỪ KHUẨN LẠC VI KHUẨN
3.1.Mô tả cac bươc tiên hanh:
B1: Ghi thông tin lên ông nghiêm chưa môi trương thưc hiên thao tac.
B2: Chuân bị đia thạch chưa giông va ông thạch nghiêng đa thưc hiên vô trùng.
B3: Xịt côn diêt khuân trên tay va măt ban thưc nghiêm (lau sạch). Tiêt trùng que cấy
vong trên đen côn.
B4: Đưa que cấy lên bê măt thạch va lấy môt diên tich khuân lạc. (luôn hơ đen côn
quanh miêng ông nghiêm trươc va sau khi xong thao tac).
B5: Tiên hanh mơ năp ông nghiêm chưa môi trương thạch, thưc hiên đương cấy zic
zac trên măt thạch nghiêng.
B6: Đây ông nghiêm va đăt cân thân lên gia.
B7: Đôt que cấy băng đen côn sau thao tac cấy.
B8: Ủ vi khuân ơ nhiêt đô va thơi gian phù hơp trong tu ấm, thương la 37oC trong 48
giơ.
IV. THAO TÁC CẤY RIA – PHÂN LẬP TỪ KHUẨN LẠC VI KHUẨN
4.1.Mô tả cac bươc tiên hanh:
B1: Trươc khi thưc hiên thao tac cấy phải khư khuân dung cu cấy vơi côn.

B2: Sau khi hai đia thạch chưa môi trương đa đông lại hoan toan va ghi rõ thông tin lên
đia thạch. Đông thơi chuân bị sẵn đia petri răn chưa giông (khuân lạc Bacillus).
B3: Đôt đen côn lên, hơ que cấy vong trên ngọn lưa đen côn đê tiêt trùng, hơ đâu vong
tron nhỏ cua que cấy vong đên khi đỏ lên, rôi đê nguôi ( vẫn phải đê gân ngọn đen côn).
B4: Lấy đia petri chưa giông ( trươc khi mơ ra phải xoay đia petri chưa giông ba vong
trên ngọn lưa đen côn) mơ đia petri chưa giông ra, dùng que cấy vong lấy môt it vi khuân
Bacillus.
B5: Lấy dia petri chưa thạch môi trương, xoay hơ ba vong trên ngọn lưa đen côn rôi mơ
he ra. Tương tương măt dia petri như măt đông hô, đưa que cấy vong vừa lấy vi khuân
Bacillus vao bên trong chấm môt điêm ơ vị tri giữa sô 10 va sô 11, rôi di chuyên que cấy

7
theo đương ziczac từ sô 9 đên sô 12 ( di chuyên que cấy vong nhẹ nhang trên bê măt
thạch đê tranh lam rach bê măt thạch), tiêp tuc xoay dia petri lại rôi di chuyên que cấy
ziczac sô 6 đên sô 9, cư thao tac tương tư như vây từ sô 3 đên 6 va từ sô 12 đên sô 3, rôi
tiêp tuc di chuyên que cấy theo đương ziczac đên tâm rôi dừng lại.
B6: Rut que cấy vong ra rôi đâp lăp petri lại, hơ xoay ba vong trên ngọn lưa đen côn rôi
đăt xuông.
B7: Hơ que cấy vong lại trên ngọn lưa đen côn, đê nguôi, rôi bỏ que cấy lại vao côn.
B8: Thao tac tương tư cho dia thạch con lại, rôi bỏ hai dia petri vừa cấy vao bịch ni lông,
côt lại va bỏ vao tu ấm vơi nhiêt đô va thơi gian phù hơp, thương la 37°C va 48 giơ.
* Lưu y: khi tiên hanh cấy vi sinh vât thi tất cả cac thao tac cấy va dung cu cấy phải đê
gân ngọn lưa đen côn.
4.2.Kêt quả cấy:
 Hinh ảnh cấy:

Hinh 2 - Cây vi khuân bằng phương pháp cây ria

 Mô tả đương cấy va kêt quả cấy
- Đương cấy đi zic zac chưa đươc thẳng va đêu, con nhiêu đâu cua đương cấy ơ bôn goc
chưa chạm vao nhau, va thao tac con lam rach bê măt thạch.
- Mẫu 1 khi cấy con lam rach bê măt thạch kha nhiêu lam cho vi khuân lên kha it, không
đêu va đẹp.
- Mẫu 2 đương cấy chưa đêu nhưng vi khuân lên nhiêu, đêu va kha đẹp.

8
 Kêt luân
- Thao tac cấy ria kha kho cân sư tỉ mỉ va tâp chung cao vao cac thao tac cấy đê tranh sai
sot.
- Khi cấy ria thi phải vê sinh môi trương xung quanh thât ki, lau cac dung cu ki vơi côn,
trươc khi thưc hiên thao tac thi phải khư khuân vơi côn hoăc phải đeo bao tay đê tranh
mẫu bị nhiễm tạp chất bên ngoai.
- Mẫu sau khi cấy xong thi phải bỏ vao tu ấm vơi nhiêt đô phù hơp đê vi khuân lên tôt,
đêu va đẹp.
V. THAO TÁC CẤY TRANG TỪ DỊCH VI KHUẨN LỎNG
5.1.Mô tả cac bươc tiên hanh:
B1: Trươc khi cấy phải tiên hanh vê sinh dung cu cấy va khư khuân tay băng côn. Que
trang đia phải đươc ngâm trong côn.
B2: Ghi thông tin trên đia. Sau khi đia chưa thạch đa đông lại ta chuân bị qua trinh cấy
trang từ dịch vi khuân lỏng.
B3: Hơ xung quanh đia petri va que trang đia vơi đen côn, đê cho que trang đia nguôi
nhưng vẫn phải đê đia petri va que trang gân đen côn ơ môt khoảng cach không qua gân.
B4: Sau khi mơ năp hơ miêng lọ chưa dịch vi khuân Bacillus, dùng micrô pipet hut 0,1
mL dịch vi khuân, sau khi hut hơ miêng chai rôi đong năp lại, he mơ đia petri đô dịch vi
khuân vừa hut vao bên trong.
B5: Dùng que trang đia trang đêu dịch vi khuân trên bê măt thạch (lam nhẹ nhang đê
không bị rach bê măt thạch)
B6: Lấy que cấy ra va đây năp đia petri lại ngay lâp tưc, hơ xung quanh miêng đia vơi đen
côn. Que cấy khi đươc lấy ra cũng phải đươc hơ vơi đen côn đê diêt hêt cac vi sinh vât va
sau đo đê nguôi va nhung que cấy lại trong côn.
B7: Thao tac tương tư vơi đia petri con lại. Sau đo cho hai đia petri vao bịch nilong côt
kin lại va cho vao tu ấm vơi nhiêt đô va thơi gian phù hơp, thương la 370C trong thơi gian
48 giơ.
5.2.Kêt quả cấy:
 Hinh ảnh cấy:

9
 Hinh 3 - Cây vi khuân bằng phương pháp cây trang
 Mô tả đương cấy:
Cả hai đia đêu đươc dan vi khuân lên kha đêu
- Mẫu 1 vi khuân trải đêu đẹp hơn so vơi mẫu 2.
- Mẫu 2 con nhiêu net nưt nhin mẫu không đươc đẹp lăm.
 Kêt quả cấy:
- Vi khuân lên nhiêu, đêu va đươc dan đêu đia kha đẹp, con vai net nưt nhỏ nhưng
nhin tông quan thi không đang kê.
 Kêt luân:
+Khi cấy vi sinh vât băng thao tac cấy trang từ dịch lỏng vi khuân, chung ta cân phải
thao tac cân thân va tâp trung đê hạn chê những sai sot khiên cho vi khuân lên không
đêu hoăc bị lẫn cac vi khuân khac.
+Cân phải thao tac tỉ mỉ đê tranh lam rach thạch va cân phải vê sinh dung cu cũng như
môi trương xung quanh nơi cấy phải sạch sẽ.
+Mẫu sau khi cấy phải đươc u trong thơi gian va nhiêt đô thich hơp đê vi khuân co thê
phat triên ơ mưc tôi ưu nhất.

10
BÀI 3: ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ
VÀ TỔNG SỐ MEN MỐC BẰNG PHƯƠNG
PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC
I. ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ
1.1. Thanh phân môi trương sư dung: môi trương thạch tryptone agar.
- Tryptone: 5g
- Cao nấm men: 2,5g
- Glucose: 1g
- Agar: 15 - 20g
- Nươc cất vừa đu: 1L
1.2. Mô tả thao tac:
B1: chuân bị mẫu thưc phâm (tra sữa) pha loang ơ nông đô 10-5, 10-6.
B2: 2 đia petri sau khi đa tiêt trùng thưc hiên đô môi trương đa tiêt vao.
B3: Sau khi môi trương đông lại, tiên hanh ghi thông tin lên 2 đia rôi thưc hiên thao tac
cấy trang vơi 1ml mẫu pha loang ơ môi đia theo thư tư nông đô lân lươt la 10-5,10-6.
B4: Ủ trong 3 - 5 ngay ơ 37oC.
B5: Đêm cac đia co mât đô 25 - 250 khuân lạc.
1.3. Kêt quả cấy:
- Đô pha loang 10-5:
 Hinh ảnh cấy:

11
 Hinh 1.1: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-5
 Mât đô vi sinh vât hiêu khi:
N = ( C1 + C2 ) : 2d
= ( 32 + 32 ) : 2.10-5
= 3200000
Trong đo:
N: sô tê bao VSV trong 1ml mâu sau khi đinh mưc lên 100ml
C1,C2: sô khuân lac đêm đươc trên đĩa ở nông độ đã chon
d: hê sô pha loãng
- Đô pha loang 10-6:
 Hinh ảnh cấy:

12
 Hinh 1.2: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-6
 Mât đô vi sinh vât hiêu khi:
N = ( C1 + C2 ) : 2d
= ( 28 + 28 ) : 2.10-6
= 28000000
II. ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ MEN MỐC
2.1. Thanh phân môi trương sư dung:
- Cao nấm men: 3g
- Chất chiêt malt: 3g
- Peptone: 5g
- Glucose: 10g
- Agar: 20g
- Chloramphenicol 40ppm
- Nươc cất vừa đu: 1L
2.2. Mô tả thao tac:
B1: chuân bị mẫu thưc phâm (tra sữa) pha loang ơ nông đô 10-5, 10-6.
B2: 2 đia petri sau khi đa tiêt trùng thưc hiên đô môi trương đa tiêt vao.
B3: Sau khi môi trương đông lại, tiên hanh ghi thông tin lên 2 đia rôi thưc hiên thao tac
cấy trang vơi 1ml mẫu pha loang ơ môi đia theo thư tư nông đô lân lươt la 10-5,10-6.

13
B4: Chỉnh pH 6,2. Tiêt trùng môi trương 121 đô C/15 phut.
B5: Ủ trong 3 - 5 ngay, nuôi cấy: 25 – 30 đô C.
B6: Đêm 2 lân (48 giơ, 72 giơ). Sô lương khuân lạc 15 – 150.
2.3. Kêt quả cấy:
- Đô pha loang 10-5:

... Hinh ảnh cấy:

Hinh 2.1: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-5
 Mât đô vi sinh vât nấm men môc:
N = ( C1 + C2 ) : 2d
= ( 158 + 158 ) : 2.10-5
= 15800000

 Kêt luân:

14
- Khuân lạc ơ mẫu dung dịch pha loang 10-5 lên nhiêu, đăc, chông chất lên nhau nhưng vi
khuân phân bô không đêu, co chô lên nhiêu co chô không lên.
- Đô pha loang 10-6:

... Hinh ảnh cấy:

Hinh 2.2: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-6
 Mât đô vi sinh vât nấm men môc:
N = ( C1 + C2 ) : 2d
= ( 52 + 52 ) : 2.10-6
= 52000000

 Kêt luân:
- Khuân lạc ơ mẫu dung dịch pha loang 10-6 : lên nhiêu, day đăc, lên đêu phân bô
ra khăp đia

15
 III. XÁC ĐỊNH VI KHUẨN GRAM ÂM TRONG THỰC PHẨM TRÊN MÔI
TRƯỜNG MACCONKEY
3.1. Mô tả thao tac

 Chuân bị môi trương thạch Mac Cokey

B1: Cân 50g bôt môi trương Mac Conkey agar cho vao beches, thêm vao 1L nươc cất va
trôn đêu
B2: Gia nhiêt rôi đun sôi trong 1 phut đê hoa tan môi trương vao nươc, trong thơi gian
đun sôi co nươc bay hơi thi phải bô sung thêm nươc cho đu 1L
B3: Bỏ vao binh tam giac bịp miêng binh băng bông không thấm, cuôn kin binh băng bọc.
Rôi đem đi tiêt trùng ơ 121°C/ 15 phut
B4: Lam nguôi đên 45 – 50°C, đô vao đia petri từ 20 -25ml môi trương. Đê yên cho môi
trương đông đăc lại. -> Co môi trương thạch Mac Conkey.

 Chuân bị mẫu vi sinh vât

B1: Pha nươc peptone: cân 1g NaCl va 2g pepptone cho vao bacher, thêm tiêp 200ml
nươc, quấy cho tan
B2: Cho vao 6 ông nghiêm môi ông 9ml nươc beptone, bịp miêng ông nghiêm băng bông
không thấm. Rôi đem đi tiêt trùng trùng.
B3: Sau khi tiêt trùng, đê nguôi. Rôi tiên hanh pha loang:

 Cho vao ông 1 1ml mẫu thưc phâm (tra sữa), lăc đêu
 Hut 1ml từ ông 1 cho vao ông 2, ta co dung dịch pha loang 10-2 lân
 Cư lam như vây hut 1ml từ ông 2 sang ông 3, từ ông 3 sang ông 4, từ ông 4 sang
ông 5 va từ ông 5 sang ông 6
 Như vây ơ ông 5 co mẫu dung dịch pha loang 10-5 lân va ông 6 co dung dịch pha
loang 10-6 lân
 Cấy vi sinh vât vao môi trương thạch Mac Cokey:
B1: Vê sinh dung cu, nơi cấy va tay băng côn trươc khi tiên hanh cấy (đê tranh gây tạp
nhiễm vao mẫu)
B2: Tiên hanh ghi thông tin lên dia thạch môi trương, đôt đen côn lên
B3: Dùng micro pipep hut 0,1ml mẫu dung dịch từ ông nghiêm 5 rôi cho vao dia thạch
môi trương Mac Conkey đa chuân bị sẵn (xoay dia thạch môi trương trên lưa đen côn
trươc khi mơ)

16
B4: Lấy que cấy trang đa ngâm trong côn hơ qua lưa đen côn, tiên hanh trang đêu mẫu
trong dia thạch ( trang mẫu phải đêu, nhẹ nhang tranh lam rach thạch)
B5: Sau khi trang đêu mẫu, đê yên dia thạch khoảng 5 -10 cho mẫu khô. Rôi đem vao tu
ấm u trong 37°C/ 48 giơ.
Lam như cac bươc trên vơi dia môi trương con lại nhưng thay mẫu dung dịch băng mẫu
dung dịch vi sinh vât trong ông nghiêm 6.
3.2. Kêt quả cấy

- Đô pha loang 10-5

Hinh 3.1: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-5
 Kết luận:
- Khuân lạc ơ mẫu dung dịch pha loang 10-5 : lên it, yêu hâu như không lên khuân lạc

17
 - Đô pha loang 10-6

Hinh 3.2: Dĩa thach cây vi sinh vật ở độ pha loãng 10-6
 Kết luận:
- Khuân lạc ơ mẫu dung dịch pha loang 10-6 : lên it, yêu hâu như không lên khuân lạc

18
 BÀI 4: ĐÁNH GIÁ TÍNH CHẤT SINH HÓA
CỦA VI KHUẨN TRÊN MÔI TRƯỜNG TSI
I. MÔ TẢ THAO TÁC CẤY:
B1. Chuân bị môi trương TSI: Cân 1g NaCl va 2g nươc peptone cho vao becher, thêm
nươc cất vừa đu 200mL. Đun hoa tan hôn hơp trên, trong qua trinh đun nươc co thê vị bay
hơi nên sau khi cac chất tan hêt thi thêm cho đu 200mL nươc đun sôi trơ lại rôi tăt bêp.
B2. Đô vao ông nghiêm hôn hơp vừa đun xong, môi ông 9mL sau đo dùng gon không
thấm nươc đây ông nghiêm lại va đê nghiêng. Sau đo đem đi tiêt trùng.
B3. Chuân bị dung cu cấy(đen côn, que cấy đâm sâu, vi khuân gôc,…)
B4. Hơ que cấy trên đen côn cho nong đỏ lên rôi đê nguôi(nhưng vẫn phải đê gân đen côn)
lấy vi khuân Lactobacillus acidophilus sau đo hơ miêng đia rôi đong lại, cấy đâm sâu vao
2/3 ông nghiêm rôi rut ra cấy theo đương zizac trên bê măt nghiêng cua ông, cấy xong hơ
miêng ông nghiêm rôi đây năp lại, hơ que cấy đâm sâu trên đen côn rôi cho ngâm lại
trong côn. Vi khuân Bacillus clausii lam tương tư vơi ông nghiêm thư 2. Ủ trong tu ấm ơ
khoảng 37 đô C từ 18 đên 24 giơ.
II. ĐỌC KẾT QUẢ TRÊN MÔI TRƯỜNG TSI
2.1. Vi khuân 1: Lactobacillus acidophilus
2.2. Vi khuân 2: Bacillus clausii
Kết quả cấy:

19
 Hình ảnh cấy:

Hinh 2.1: Ống nghiêm cây vi sinh vật

 Kết luận:
- Môi trương thạch phia trong không đôi mau, ơ phia bê măt thạch nghiêng ơ cả 2 môi
trương đêu co sư xuất hiên cua vi khuân. Nhưng vi khuân lên rất it, ơ ông nghiêm co chưa
vi khuân Bacillus clausii co lên vi khuân nhiêu hơn. Vi khuân Lactobacillus acidophilus la
vi khuân lactic acid không thưc hiên đươc nhiêu phản ưng trao đôi chất trên môi trương
TSI. Vi khuân Bacillus clausii sư dung cac loại đương trong môi trương TSI đê sản xuất
acid va khi, tạo ra cac biêu hiên như mau vang va/hoăc đỏ trong môi trương, nhưng mưc
đô va mau săc nay co thê khac nhau tùy thuôc vao cac điêu kiên cu thê va biên thê cua
Bacillus clausii.

20
 BÀI 5: QUAN SÁT HÌNH THÁI VI SINH VẬT
BẰNG KÍNH HIỂN VI
I. QUAN SÁT HÌNH THÁI NẤM MEN
1.1. Mô tả thao tac thưc hiên:
B1: Chuân bị lame va lamelle đa đươc rưa sạch băng côn.
B2: dùng ông nhỏ giọt hut dung dịch nấm men trong pecher nhỏ môt đên hai giọt lên lame
đa chuân bị, sau đo đăt lamelle lên trên măt dung dịch nấm men.
B3: Đăt lame trên kinh hiên vi, tiên hanh soi va chỉnh kinh ơ mưc 4x cho đên khi nhin rõ
chỉnh nut chỉnh tinh ơ mưc 10x, 40x.
B4: Chup lại ảnh nấm men từ kinh hiên vi.

21
 1.2. Mô tả hinh thai nấm men:
- Tê bao nấm men co dạng hinh câu hoăc hinh bâu duc. Ơ môt sô tê bao co tê bao nấm
men con mọc chôi luôn trên cơ thê mẹ co hinh dạng giông xương rông. Nhưng hâu hêt la
hinh câu va tân sô day đăc.
- Hinh ảnh:

Hinh 1.1: Hinh dang của nâm men dưới kính hiển vi

22
 II. NHUỘM GRAM VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI VI KHUẨN
2.1. Vi khuân 1: Vi khuân gram âm
 Mô tả thao tác thực hiện
B1: Ngâm va lau sạch lame đưng mẫu băng côn
B2: Nhỏ 1 giọt nươc vô trùng lên giữa lame
B3: Dùng que cấy vong đa tiêt trùng trên ngọn lưa đen côn, lấy khuân lạc gram âm từ dia
thạch môi trương agar, cho vao giọt nươc vô trùng trên lame va phân tan đêu vi khuân.
Hơ trên ngọn lưa đen côn cho khô
B4: sau khi khô, nhỏ 1-2 giọt Crystal violet, đê yên trong vong 5 phut đê nhuôm mau vi
khuân
B5: Sau 5 phut, rưa mau dư băng nươc deion vô trùng, thấm khô nươc. Nhỏ lên tiêp 1-2
giọt dung dịch gram iod đê cô định mau, đê yên trong 5 phut
B6: Rưa vơi nươc deion vô trùng, sau đo tây mau crystal violet vơi cac tê bao không băt
mau băng Acetone Alcohol, rưa lại băng nươc deion va thấm khô
B7: nhỏ lên 1-2 giọt ma Safranin, đê nhuôm mau cho cac tê bao không băt mau crystal
violet, đê yên trong vong 5 phut.
B8: Sau đo rưa lại vơi nươc deion cho hêt mau dư, thấm khô. Tiên hanh quan sat hinh thai
mau săc vi khuân băng kinh hiên vi
 Kết quả

Hinh 2.1: Vi khuân gram âm sau khi nhuộm mau quan sát dưới kính hiển vi với vật
kính 40X
 Nhận xét: Vi khuân gram âm sau khi nhuôm mau vơi mau Crystal violet va mau
Safranin, quan sat ơ dươi kinh hiên vi thi co mau hông, hinh oval va hinh thuôn dai.

23
 2.2. Vi khuân 2: Vi khuân gram dương
 Mô tả thao tác thực hiện:
B1. Chuân bị lame đa rưa sạch băng côn, cho 1-2 giọt nươc muôi sinh ly lên trên mê măt
lame, dùng que cấy vong thưc hiên lấy vi khuân gram dương trong ông nghiêm theo đung
thao tac rôi dan đêu ra trong nươc muôi sinh ly. Sau đo hơ trên lưa đen côn sao cho nươc
khô lại.
B2. Nhuôm lân 1 vơi Crystal violet: nhỏ môt vai giọt lên trên bê măt lame nơi co chưa vi
khuân. Đê khô 5 phut.
B3. Rưa vơi nươc deion vô trùng( rưa xung quanh đên khi hêt mau tim).
B4. Cô định mau: Gram’s lodine, đê khô 5 phut.
B5. Rưa vơi nươc deion vô trùng
B6. Tây mau: Dùng Acetone Alcohol.
B7. Nhuôm lân 2: Dùng Safranin, đê khô trong 5 phut.
B8. Rưa vơi nươc deion vô trùng.
B9. Quan sat dươi kinh hiên vi: Đăt tấm lame lên kinh hiên vi tiên hanh xem trươc hêt la
ơ kinh 4x, sau khi chỉnh thô xong thi cô định sau đo tiêp tuc chỉnh tinh qua thấu kinh 10x
va 40x, cuôi cùng la chup lại kêt quả vi khuân gram dương.
 Mô tả hình thái:
- Vi khuân gram dương co hinh que hoăc côt va co mau tim đâm. Ơ môt sô vị tri cac vi
khuân chông lên nhau nên co những chấm tim kha to va hơi kho xem hinh dạng, trong
mẫu co nhiêu vi khuân gram dương.

24
 Hình ảnh:

Hinh 2.2: Hinh dang của vi khuân gram dương dưới kính hiển vi

25