TRIGLYCERIDES (LIQUID)

REAGENT
CALIBRATION
INTENDED USE SPECIMEN COLLECTION AND STORAGE A calibrator such as JAS Chemistry Calibrator (P/N: CAL1-5) , or an appropriate
For the in vitro quantitative determination of Triglycerides in serum. 1. Serum specimens from fasting individuals is recommended. aqueous standard should be used to calibrate this test.
2. Do not use grossly hemolyzed or highly icteric specimens.
SUMMARY AND EXPLANATION 3. Triglycerides in serum is stable for several days when stored at 2-8°C. QUALITY CONTROL
Triglycerides concentrations are used in the diagnosis and management of diseases 4. Do not store samples at room temperature as phospholipids may hydrolyze, The integrity of the reaction should be monitored by use of a two level control with
involving lipid metabolism, diabetes mellitus, nephrosis, liver disease, and various releasing free glycerol and falsely elevating Triglyceride values. known values such as JAS Chemistry Controls (P/N: CON1-5 and CON2-5)
endocrine disorders.
METHODOLOGY INTERFERENCES EXPECTED VALUES 10
Triglycerides have been commonly determined by methods that liberated and then 1. Studies to determine the level of interference for hemoglobin, and bilirubin, Normal: <150 mg/dL
measured Glycerol. Liberation has been performed by either enzymatic hydrolysis were carried out, the following results were obtained: Borderline: 150 - 199 mg/dL
or with the use of an alkali.1,2 The first fully enzymatic method was described by Hemoglobin: High: 200 - 499 mg/dL
Bucolo and David3 in 1973. This method was modified to a colorimetric test by No significant interference ( 10%) from hemoglobin up to 300 mg/dL. Very High: > 500 mg/dL
Megraw et al4 in 1979. Bilirubin: Each laboratory should establish it’s own normal range.
The present method uses a modified Trinder 5,6 color reaction to produce a fast, Do not use any visible icteric samples.
linear, endpoint reaction.7,8 2. A number of drugs and substances may affect the accuracy of this test. See PERFORMANCE
Young, et al 9 Linearity:
PRINCIPLE 3. Glycerol in rubber stoppers or as a contaminant in glassware, etc., will elevate When run as recommended the assay is linear from 2.6 - 800 mg/dL.
values.
Lipase 4. Samples with gross hemolysis or very high bilirubin values will produce Method Comparison:
Triglycerides + H2O Glycerol + Fatty Acids falsely elevated Triglyceride values. Studies performed between this procedure and a similar methodology yielded the
5. Some detergents interfere with the reaction by producing a precipitate and/or following results:
GK red color. Rinse glassware well. Number of samples pairs: 45
Glycerol + ATP G3P + ADP Range of samples: 50-380.0 (mg/dL)
ADDITIONAL EQUIPMENT REQUIRED BUT NOT Correlation Coefficient: 0.9933
GPO PROVIDED Slope: 1.099
G3P + O2 DAP + H2O2 1. A clinical chemistry analyzer capable maintaining constant temperature Intercept: 0.2 (mg/dL)
(37°C) and measuring absorbance at 500 – 510 nm.
POD 2. Deionized water and related equipment, e.g.: pipettes Precision:
H2O2 + 4AAP + 3,5DHBS Ouinoneimine + 2H2O 3. Analyzer specific consumables, e.g.: sample cups Within Run Level 1 Level 2 Level 3
Dye 4. Control and Calibrator materials such as those provided by JAS Diagnostics. Mean (mg/dL) 52.7 147.4 271.6
S.D. (mg/dL) 2.7 2.6 1.16
Triglycerides in the sample are hydrolyzed by lipase to glycerol and fatty acids. ASSAY PROCEDURE C.V. (%) 5.2 1.7 2.8
The glycerol is then phosphorylated by adenosine-5-triphosphate (ATP) to These instructions are to be used as a general guideline for adapting to select
glycerol-3-phosphate (G3P) and adenosine-5-diphosphate in a reaction catalyzed by automated instruments. Refer to your specific JAS instrument application Total Level 1 Level 2 Level 3
glycerol kinase (GK). Glycerol-3-phosphate is then converted to dihydroxyacetone instructions available upon request. S.D. (mg/dL) 2.8 4.4 13.0
phosphate (DAP) and hydrogen peroxide by glycerophosphate oxidase (GPO). The C.V. (%) 5.4 3.0 4.8
hydrogen peroxide then reacts with 4-aminoantipyrine (4-AAP) and 3,5 dichloro-2- SYSTEM PARAMETERS
hydroxybenzene (3,5DHBS) in a reaction catalyzed by peroxidase to yield a red Triglycerides Sensitivity:
colored quinoneimine dye. TEMPERATURE: 37°C A calibration factor of approximately 980.71 was obtained, which is equivalent to a
The intensity of the color produced is directly proportional to the concentration of WAVELENGTH: 500-510 nm sensitivity of 0.0010  Abs per mg/dL.
Triglycerides in the sample. ASSAY TYPE: Endpoint
DIRECTION: Increase Note: Performance established on the Synchron CX.
REAGENT COMPOSITION SAMPLE / RGT RATIO: 1: 100
Active Ingredients Concentrations e.g. Sample Vol. 0.01 mL (10L) REFERENCES
ATP 2.5 mM Reagent Vol. 1.0 mL 1. Wieland, 0., Methods of Enzymatic AnaIysis, H.O. Bergermayer, Ed.,
Magnesium Salt 2.6 mM INCUBATION TIME: 5 Min Academic Press pp. 211-214 (1963).
4-Aminoantipyrine 0.8 mM 2. Eggstein, M., Kreutz, F.H., Klin. Wochenschr. 44:262 (1966).
3,5DHBS 1.0 mM PROCEDURE NOTES 3. Bucolo, G., David, H., Clin. Chem. 19:656 (1973).
GPO (Microbial) 11,000 U/L 1. The reagent and sample volumes may be altered proportionally to accommodate 4. Megraw, R., et al Clin. Chem. 25:273 (1979).
Lipoprotein Lipase (microbial) 4,400 U/L various instrument requirements. 5. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem 6:24 (1969).
GK (Microbial) 660 U/L 2. Final color is stable for fifteen minutes. 6, Barham, D., Trinder, P., Analyst 97:142 (1972).
Peroxidase (Horseradish) 2,900 U/L 3. Samples with values above 800 mg/dL should be diluted 1:1 with water, rerun, 7. Fossati, P., Prencipe, L., Clin. Chem, 28:2077 (1982).
Buffer 50 mM and results multiplied by 2. 8. McGowan, MW., et al, Clin. Chem, 29:538 (1983).
Sodium azide (0.05%) as a preservative 9. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
pH (6.8 – 7.2) Calculation 10. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3rd Report of NCEP
Abs. = Absorbance Expert Panel on Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in
PRECAUTIONS Abs. Sample x Concentration = mg/dL as triolein Adults (Adult Treatment Panel III) May (2001).
I. Reagent contains Sodium Azide as a preservative. This may react with copper Abs. Standard of Standard
or lead plumbing to form explosive metal azides. Upon disposal, flush with
large amounts of water to prevent azide build up. Sample calculation: JAS Diagnostics, Inc.
2. This reagent is for in vitro diagnostic use only. Abs. Sample = 0.300 7220 NW 58 th St., Miami Florida 33166
Abs. of Standard = 0.200 Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
REAGENT PREPARATION Concentration of Standard =300 mg/dL www.jasdiagnostics.com
Reagent comes in a ready to use form.
0.300 x 300 mg/dL = 450 mg/dL Triglycerides Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
REAGENT STORAGE 0.200 Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
Store the reagent at 2-8°C (refrigerated). NOTE: To obtain values in S.I. units multiply mg/dL x 0.113 = mmol/L Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
The reagent is stable until the expiration date when stored at 2-8°C. Email: mail@obelis.net
Limitations
REAGENT DETERIORATION Glycerol (free glycerol and glycerol released upon hydrolysis of triglycerides) is
DO NOT USE THE REAGENT IF: measured by this procedure. Free glycerol levels in serum are generally low, but PI: TRI2.JS01 REV: 06/04/07
1. Reagent is turbid elevations may be caused by improper storage or sample contamination.
2. The reagent has an absorbance greater than 0.200 against water at 500-510 nm.
3. The reagent fails to recover stated values in control sera.
 TRIGLICERIDOS (LIQUIDO)

Bilirubina:
No usar muestras visiblemente itericas. Limitaciones:
2.Un número de drogas y sustancias afectan la determinación de triglicéridos. Ver El Glicerol (libre y el liberado mediante la hidrólisis de triglicéridos) es medido por
Young, et al. 9 este procedimiento. Los niveles de glicerol libre en suero son generalmente bajos,
USO: 3.Glicerol en tapones de goma o cristalería contaminada, etc. puede causar pero resultados falsos elevados en la muestra pueden ser causados por
Reactivo utilizado para la determinación cuantitativa “in vitro” de Triglicéridos en resultados elevados. contaminación o por un almacenaje inadecuado.
suero. 4.Muestras altamente hemolisadas con valores altos de bilirrubinas puede producir
falsos resultados elevados de triglicéridos. CALIBRACION:
RESUMEN Y EXPLICACION: 5.Algunos detergentes interfieren con la reacción mediante la producción de un Esta prueba debe ser calibrada utilizando un calibrador como el Calibrador de
Las concentraciones de Trigliceridos son usadas en el diagnóstico y la dirección de precipitante de color rojo. Se recomienda Lavar bien la cristalería utilizada. Quimica de JAS ( P/N: CAL1-5) o un estandard apropiado.
enfermedades que implican metabolismo de lípido, diabetes mellitus, nephrosis,
enfermedad de hígado, y varios desórdenes endocrinos. EQUIPO ADICIONAL REQUERIDO PERO NO INCLUIDO: CONTROL DE CALIDAD:
1. Analizador de química clínica capaz de mantener temperatura de 37°C La integridad de la reaccion debe ser evaluada usando un control de dos niveles con
METODOLOGIA: constante y medir absorbancia a 500 - 510nm. valores conocidos como el JAS Control de Quimica ( P/N: CON1-5 y CON2-5).
Los Triglicéridos han sido comúnmente determinados por métodos que liberan y miden glicerol. 2. Agua destilada y equipo relacionado, ejemplo. Pipetas.
1,2
Esta liberación se ha desarrollado ya sea por hidrólisis enzimática o con el uso de un álcali. El 3. Consumibles específicos para el analizador ejemplo. Copillas de muestras VALORES ESPERADOS: 10
primer método completamente enzimático fue descrito por Bucolo y David3 en 1973. Este método
fue modificado a una prueba colorimetrica por Megraw et al 4 en 1979. El presente método usa una 4. Material control como los proporcionados por JAS Normales: <150 mg/dL
5,6
modificación del método Trinder , que es una reacción rápida de color de punto final y lineal.
7,8 Limite: 150 - 199 mg/dL
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: Alto: 200 - 499 mg/dL
PRINCIPIOS: Procedimiento para uso manual. Muy Alto: > 500 mg/dL
Triglicéridos + H2O Lipasa Glicerol + ácidos grasos 1. El reactivo se usa como se presenta. El reactivo debe estar a temperatura Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores
ambiente antes de su uso. normales.
Glicerol + ATP GK G3P + ADP 2. Identificar perfectamente los tubos de prueba, tanto para controles, estándar
y muestras desconocidas. DESEMPEÑO:
3. Coloque 1000 µL del reactivo en cada tubo de prueba e incubar a 37ºC. Linearidad:
G3P + O2 GPO DAP + H2O2 4. Agregar 10 µL de Estándar, muestra problema y/o suero control a su Cuando el ensayo se trabaja bajo las recomendado éste linear de 2.6 - 800 mg/dL.
correspondiente tubo de prueba. Mezclar mientras se mantiene constante la
temperatura. Comparacion del Metodo:
H2O2 + 4AAP + 3,5DHBS POD Tinte Quinoneimina + 2H2O 5. Ajustar a cero el espectrofotómetro con blanco de reactivo a 500 - 510 nm. Los siguientes resultados fueron obtenidos mediante estudios realizados entre éste
6. Incubar todos los tubos a 37ºC. durante 5 minutos. procedimiento y uno similar:
COMPOSICION DEL REACTIVO: 7. Tome la medición de absorbancia exactamente a los 5 minutos después de Numero de pares de muestras 45
Ingredientes activos Concentración la adición de cada muestra. Lea y registre la absorbancia del estándar y los Rango de muestras 50.0 – 380.0 (mg/dL)
ATP 2.5 mM controles de la misma forma. Coeficiente de Correlación 0.9933
Sal de magnesio 2.6 mM Notas: Pendiente 1.099
4-Amino antipirina 0.8 mM 1. Este ensayo requiere el uso de un Suero Estandar o Estándar apropiado. Intercepto 0.2 (mg/dL)
3,5 DHBS 1.0 mM 2. Los volúmenes de muestra y reactivo pueden ser modificados proporcionalmente
GPO (microbial) 11,000 U/L para adaptarlos a los requisitos de varios instrumentos. Precision:
Lipoproteína Lipasa (microbial) 4,400 U/L Entre Corridas Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
GK (microbial) 660 U/L PROCEDIMIENTO AUTOMATIZADO. Promedio (mg/dL) 52.7 147.4 271.6
Peroxidase de rábano 2,900 U/L Estas instrucciones son para ser utilizadas como guía general para la adaptación al S.D. (mg/dL) 2.7 2.6 1.16
Buffer 50 mM instrumento automatizado. Se encuentran disponibles a petición las aplicaciones de C.V. (%) 5.2 1.7 2.8
Ázida de sodio (0.05%) como preservativo los reactivos JAS para los analizadores más comunes.
pH (6.8 – 7.2) Entre Series: Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3
PARÁMETROS S.D. (mg/dL) 2.8 4.4 13.0
PRECAUCION: Trigliceridos C.V. (%) 5.4 3.0 4.8
1. Este reactivo contiene ázida de sodio como preservativo. Esto puede Temperatura 37ºC
reaccionar con la tubería de cobre o plomo. Cuando descarte, utilice Longitud de onda 500 - 510 nm Sensitividad:
abundante agua. Tipo Punto Final Un factor de calibración aproximado a 980.71 fue obtenido, lo cual es equivalente a
2. Este reactivo es solo para uso “in vitro”. Dirección Creciente una sensibilidad de 0.0010 ∆ Abs por mg/dL.
Proporción muestra/reactivo 1:100
PREPARACION DE LOS REACTIVOS: Volumen de reactivo 1.0 mL NOTA: Estudios realizados en Synchron CX.
El reactivo esta listo para usarse. Volumen de muestra 0.010 mL REFERENCES
Tiempo de incubación 5 Min. 1. Wieland, 0., Methods of Enzymatic AnaIysis, H.O. Bergermayer, Ed., Academic Press pp.
211-214 (1963).
ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO: NOTAS: 2. Eggstein, M., Kreutz, F.H., Klin. Wochenschr. 44:262 (1966).
1. Almacenar el reactivo en refrigeración (2-8°C) 1.Los volúmenes de reactivo y muestras pueden ser alterados proporcionalmente 3. Bucolo, G., David, H., Clin. Chem. 19:656 (1973).
2. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta para adaptarlos a los requisitos del instrumento automatizado seleccionado. 4. Megraw, R., et al Clin. Chem. 25:273 (1979).
cuando se almacena de 2-8°C. 2.El color final es estable por 15 minutos. 5. Trinder, P., Ann. Clin. Biochem 6:24 (1969).
3.Las muestras con valores de triglicéridos mayores de 800 mg/dL deben ser 6, Barham, D., Trinder, P., Analyst 97:142 (1972).
7. Fossati, P., Prencipe, L., Clin. Chem, 28:2077 (1982).
DETERIORO DEL REACTIVO: diluidas 1:1 con agua y reensayadas, y los resultados multiplicados por 2. 8. McGowan, MW., et al, Clin. Chem, 29:538 (1983).
NO USE EL REACTIVO SI: 9. Young, D.S., et al, Clin. Chem. 21:1D (1975).
1. El reactivo esta turbio. CALCULOS 10. National Institute of Health Publication No.01-3670, 3 rd Report of NCEP Expert Panel on
2. El reactivo tiene una absorbancia mayor de 0.200 usando agua como ABS. = Absorbancia Detection, Evaluation, & Treatment of High Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III)
referencia a 500 - 510 nm. Absorbancia de la muestra x Concentración del estándar (mg/dL) May (2001).
3. El reactivo no recupera los valores indicados en el suero control. Absorbancia del estándar.
JAS Diagnostics, Inc.
TOMA Y MANEJO DE MUESTRA: Ejemplo de cálculos: 7220 NW 58 th St., Miami Florida 33166
1. Se recomienda el uso de muestras en suero de pacientes con un ayuno mínimo de 7 horas. Abs. Muestra = 0.300 Tel. 305.418.2320 Fax. 305.418.2321
2. No usar muestras hemolizadas o altamente ictéricas. Abs. Estandar = 0.200 www.jasdiagnostics.com
3. Los Triglicéridos estables en suero son por varios días cuando son almacenadas de 2 a 8°C.
4. No almacene muestras a temperatura ambiente.
Valor Estandar = 300 mg/dL
Obelis (O.E.A.R.C.) “European Authorized Representative”
Avenue de Tervuren, 34 box 44 1040 Brussels
INTERFERENCIAS: 0.300 x 300 = 450 mg/dL Triglicéridos Tel.: +32.2.732.59.54 Fax: +32.2.732.60.03
1. Los siguientes resultados fueron obtenidos en estudios para determinar el nivel de 0.200 Email: mail@obelis.net
interferencia de hemoglobina, y bilirubina.
Hemoglobina: Nota: Para obtener resultados en S.I., multiplicar los resultados en mg/dL x 0.113 = PI: TRI2.JS01 REV: 06/04/07
No interferencia (±10%) hasta 300 mg/dL mmol/L