BÀI TẬP 2

1/[S] I=0 I=2 I=5

20 0.008 0.019 0.035
10 0.005 0.012 0.022
5 0.0035 0.008 0.015
2.5 0.0028 0.006 0.012
1.25 0.0024 0.006 0.01

0.04
a. 0.035
f(x) = 0.00132903225806452 x + 0.0085
0.03
1/V (mM/min-1)

0.025
I=0
0.02 Linear (I=0)
f(x) = 0.000719926267281106 x + 0.00461714285714286 I=2
0.015
Linear (I=2)
0.01 I=5
f(x)0.005
= 0.000298838709677419 x + 0.00202 Linear (I=5)
0
-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25
1/[S] (mM-1)

Tính Km của Enzyme và Vmax của phản ứng

 Trường hợp phản ứng thủy phân Enzyme khi không có mặt chất ức chế:
 Phương trình đường thẳng y = 0.0003x+0.002
o Vmax (không có chất ức chế)

Có: Intercept = b = 1/Vmax

0.002 = 1/Vmax  Vmax = 1/0.002 = 500 m3/s

o Km (không có chất ức chế)

Slope = a = Km/Vmax

0.0003 = Km/500  Km = 0.0003*500 = 0.15

 Trường hợp phản ứng thủy phân Enzyme khi có mặt chất ức chế:
  Trường hợp I=2 (mM)
 Phương trình đường thẳng y = 0.0007x+0.0046
o Vmax (có chất ức chế I=2 mM)

Có: Intercept = b = 1/Vmax

0.0046 = 1/Vmax  Vmax = 1/0.0046 = 217.4 m3/s

o Km (có chất ức chế I=2 mM)

Slope = a = Km/Vmax

0.0046 = Km/217.4  Km = 0.0046*217.4 = 1

 Trường hợp I=5 (mM)

 Phương trình đường thẳng y = 0.0013x+0.0085
o Vmax (có chất ức chế I=5 mM)

Có: Intercept = b = 1/Vmax

0.0085 = 1/Vmax  Vmax = 1/0.0085 = 117.65 m3/s

o Km (có chất ức chế I=5 mM)

Slope = a = Km/Vmax

0.0013 = Km/117.65  Km = 0.0013*117.65 = 0.153

b. Đây là dạng ức chế gì? Ức chế không cạnh tranh.

c. Tính KI của chất ức chế.
 KI
0.0015
0.001 f(x) = 0.0002 x + 0.0003
a
0.0005 Linear (a)

0
0 1 2 3 4 5 6
[I] (mM)

Từ 3 phương trình đường thẳng của phản ứng thủy phân Enzyme khi có mặt
hoặc không có mặt chất ức chế ta có được phương trình đường thẳng của KI:
y=0.0002x+0.0003
 KI của chất ức chế = 0.0003/0.0002 =1.5
d. KI thay đổi ra sao nếu sử dụng cơ chất khác, giả sử chất khác kết hợp tốt hơn
với Enzyme (vd: Km thấp hơn) nhưng cho Vmax tương tự.
 KI không thay đổi vì KI không phụ thuộc vào cơ chất, chất kìm hãm chỉ
liên kết với phức hợp ES mà không liên kết với cơ chất của Enzyme tự do.