HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA DPPH

Tài liệu tham khảo:

Khảo sát sơ bộ hoạt tính sinh học của cao chiết từ vỏ và hạt bơ. (Persea Americana,
Lauraceae)
Hoạt tính kháng oxy hóa được xác định bằng thử nghiệm DPPH (Nguyễn Thị Thu
Hương, 2006)
Nguyên tắc: Dựa vào khả năng bắt giữ gốc tự do DPPH của chất có tác dụng chống
oxy hóa. DPPH là một gốc tự do bền, có màu tím đặc trưng trong dung môi và có độ
hấp thu cực đại ở bước sóng 517 nm. Trong phương pháp này, các chất chống oxy hóa
nhường nguyên tử hydro để làm giảm các gốc tự do ổn định trong DPPH. Khi các chất
chống oxy hóa làm sạch hoạt động của các gốc tự do thì màu tím đặc trưng sẽ mất dần
và chuyển màu vàng, chuyển màu càng về vàng thì tính kháng oxy hóa càng mạnh Đo
độ giảm độ hấp thu ở bước sóng 517nm để xác định khả năng khử gốc DPPH của chất
chống oxy hóa. Vitamin C được dùng làm chất chuẩn, kết quả được thể hiện thông qua
hàm lượng tương đương vitamin C (ppm).
Thuốc thử: DPPH 0,6 mM
Pha dung dịch DPPH 0,6Mm TRONG methanol bằng cách hòa tan 5,915 mg DPPH
với một lượng methanol vừa đủ tan DPPH. Sau đó cho vào bình định mức và thêm
methanol vừa đủ 25ml. Pha xong dùng ngay, đựng trong chai thủy tinh màu.
Mẫu thử: Cao chiết được hòa tan với methanol để đạt được nồng độ 50; 100; 250;
500; 1000 µg/ml
Đối chứng dương được sử dụng là acid ascorbic pha với nồng độ 0.5; 1; 1.5; 2; 2.5 3;
4µg/ml
Tiến hành thử nghiệm:
Hút lần lượt 0.5ml dịch chiết được cho vào ống nghiệm và 3ml metanol và thêm 0,5ml
0.6 mM DPPH.
Mẫu đối chứng được chuẩn bị bằng cách thêm 0,5ml DPPH và 3,5 ml metanol.
Hỗn hợp sau khi pha để trong tối, ở nhiệt độ phòng (25-30 0C) trong 30 phút. Xác định
hoạt tính của chiết xuất chống lại gốc DPPH được thực hiện bằng máy quang phổ ở
bước sóng 517nm. Ghi nhận kết quả và xây dựng phương trình đường chuẩn.
OD C −OD t
Hoạt tính chống oxy hóa HTCO (%): HTCO(%):=( )×100
OD C

1
OD C : Mật độ quang của dung dịch DPPH và MeOH.

OD t : Mật độ quang của DPPH và mẫu thử.

Bảng 1. Phản ứng thử nghiệm DPPH

Ống Dung dịch thử Dung dịch MeOH Dung dịch DPPH
(ml) (ml) (ml)
Mẫu trắng 0 4
Mẫu đối chứng 0 3,5 0,5
Mẫu thử 0,5 3 0,5

Phân tích số liệu trên phần mềm Excel được phương trình logarit giữa nồng độ mẫu
thử và HTCO (%) có dạng y=ax + b, thế y =50 để suy ra IC50 (khả năng trung hòa 50%
DPPH của mẫu). Gía trị IC50 càng thấp tương ứng với HTCO càng cao và ngược lại.
Các số liệu kết quả thử nghiệm được biểu thị trung bình của 3 lần đo khác nhau.
Lưu ý:
Voltex ống nghiệm trước khi đo
Kết quả dựng đường chuẩn được ghi vào file excel: dựng đường chuẩn DPPH ngày
18/11/2021