BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC


BÁO CÁO

THỰC HÀNH KỸ THUẬT SẮC KÝ

GVHD: TS. Huỳnh Văn Biết

Mã học phần: 211402

Nhóm sinh viên thực hiện: Nhóm 01

Tp. Hồ Chí Minh, tháng 1 năm 2023

 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC


BÁO CÁO

THỰC HÀNH KỸ THUẬT SẮC KÝ

Thành viên nhóm:

Họ và tên Mssv Lớp

Vũ Đình Anh Tuấn 20126403 DH20SHB

Đoàn Gia Huy 20126256 DH20SHD

Võ Huy Hoàng 20126024 DH20SHA

Cao Thị Thanh Giang 20126230 DH20SHA

Nguyễn Hoàng Anh Tiến 20126105 DH20SHD

Lê Văn Truyền 20126399 DH20SHA

Tp. Hồ Chí Minh, tháng 1 năm 2023

 MỤC LỤC
BÀI 1: QUÉT PHỔ HẤP THU BỨC XẠ UV-Vis ........................................................... 1

1.1. Nguyên tắc ................................................................................................................ 1

1.2. Nguyên liệu ............................................................................................................... 1

1.3. Quy trình thực hiện ................................................................................................... 1

1.4. Kết quả ...................................................................................................................... 3

Bài 2: ĐỊNH LƯỢNG HÀM LƯỢNG PHENOLIC TỔNG SỐ .................................... 5

2.1. Nguyên tắc ................................................................................................................ 5

2.2. Nguyên liệu ............................................................................................................... 5

2.3. Quy trình thực hiện ................................................................................................... 5

2.4. Kết quả ...................................................................................................................... 7

 BÀI 1: QUÉT PHỔ HẤP THU BỨC XẠ UV-Vis

1.1. Nguyên tắc

Mỗi chất có phổ hấp thu khác nhau và có bước sóng hấp thu cực đại khác nhau.
1.2. Nguyên liệu
- Lá điều
- thuốc thử KMnO4
1.3. Quy trình thực hiện
1.3.1. Chuẩn bị mẫu thử
Bước 1: Dùng một lượng lá điều đã xử lý, phơi khô, cắt vụn mang đi cân khoảng 1g.

Hình 1.1. Cân mẫu.

Bước 2: Cho mẫu đã cân vào cốc thủy tinh và thêm 30ml nước cất. Sau đó đi đánh
sóng siêu âm 10 phút.

Hình 1.2. Mẫu sau khi đánh sóng siêu âm.

1
 Bước 3: Lọc mẫu và thu dịch chiết gốc.

Hình 1.3. Lọc mẫu.

Bước 4: Pha loãng mẫu (pha loãng 5 lần) lấy 1µl mẫu chiết pha với 4µl nước cất trong
bình định mức 5µl.
1.3.2. Chuẩn bị mẫu chuẩn KMnO4
Bước 1: Lấy 1ml thuốc thử pha với 99ml nước tạo dung dịch chuẩn gốc.
Bước 2: Pha loãng mẫu đi 50 lần bằng cách hút 1ml dung dịch chuẩn gốc và thêm 49ml
nước cất vào bằng định mức 50ml.

Hình 1.4. Pha loãng KMnO4.

1.3.3. Tiến hành đo UV-Vis 4 dung dịch đã pha
2
1.4. Kết quả
1.4.1. Dịch chiết diệp lục tố
- Ở dịch chiết diệp lục pha loãng 5 lần:
+ Bước sóng hấp thụ cao nhất: 417 nm.
+ Độ hấp thụ Abs (417 nm): 0.61424 Au.
- Ở dịch chiết diệp lục gốc:
+ Bước sóng hấp thụ cao nhất: 665 nm.
+ Độ hấp thụ Abs (665 nm): 1.85520 Au.

Hình 1.5. Kết quả đo quang phổ dịch chiết diệp lục tố ở vùng khả kiến 400-800 nm.
1.4.2. KMnO4
- Ở dung dịch pha loãng 50 lần:
+ Bước sóng hấp thụ cao nhất 526 nm.
+ Độ hấp thụ Abs (526 nm): 1.0266 Au.
- Ở dung dịch gốc: do độ hấp thụ của dung dịch gốc cao hơn mức máy có thể đo được
nên không hiển thị được kết quả.

3
Hình 1.6. Kết quả đo quang phổ dung dịch KMnO4 ở vùng khả kiến 400-800nm.

4
 Bài 2: ĐỊNH LƯỢNG HÀM LƯỢNG PHENOLIC TỔNG SỐ

2.1. Nguyên tắc

- Phenolic tổng số trong thực vật được chiết bằng ethanol 96%.
- Phản ứng với thuốc thử Folin-Ciocalteu ( có phức Phospho – wolfram
phosphomolypdat. Phức này sẽ bị khử bởi các hợp chất polyphenol tạo thành sản
phẩm phản ứng có màu xanh thẩm).
- Cường độ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng độ phenolic ở bước sóng
750 nm.
2.2. Nguyên liệu
- Lá bàng biển
- Thuốc thử Folin-Ciocalteu
- Na2CO3 20%
- Dịch chuẩn Gallic acid
2.3. Quy trình thực hiện
2.3.1. Quy trình chiết mẫu
Bước 1: Cân 1g lá bàng biển.

Hình 2.1. Cân mẫu.

5
 Bước 2: Thêm 30 ml Ethanol 50% vào mẫu .

Hình 2.2. Mẫu sau khi thêm Ethanol.

Bước 3: Siêu âm hỗn hợp trên trong 10 phút.

Hình 2.3. Đánh sóng siêu âm mẫu.

Bước 4: Lọc hỗn hợp trên vào bình định mức 50 ml, sau đó lấy bã.
Bước 5: Thêm 30ml Ethanol 50% vào bã vừa lọc rồi tiếp tục siêu âm trong 10 phút.
Lọc bỏ bã.

Hình 2.4. Hoàn thành dịch chiết.

6
2.3.2. Quy trình phản ứng
- Lấy 100 thuốc thử Folin-Ciocalteu vào 100 mẫu, ủ trong 5 phút.
- Thêm 300 Na2CO3 20%, định mức bằng nước lên 5 ml.
- Ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng.
2.3.4. Chuẩn bị dung dịch chuẩn
- Dung dịch chuẩn Gallic acid gốc 1000 ppm.
- Chuẩn bị dung dịch chuẩn 100 ppm trong bình định mức 5ml.
- Phản ứng màu thực hiện tương tự mẫu thử, sau đó đo độ hấp thu trên UV/Vis.
2.4. Kết quả
- Phản ứng màu không xảy ra, không dựng được đường chuẩn.
• Biện luận:
Trong quá trình tiến hành thí nghiệm, thao tác thực hiện ở bước thêm Na2CO3 20% vào
mẫu và dịch chuẩn, có sự nhầm lẫn. Ký hiệu được ghi trên cốc là Na2CO3 nhưng bên trong
cốc là cồn. Vì không kiểm tra kỹ nên vẫn tiếp tục thực hiện thí nghiệm dẫn đến phản ứng
màu không thể xảy ra. Dịch chiết sau khi hoàn thành không cho ra được màu xanh dương
của thuốc thử Folin-Ciocalteu nên không thể tiến hành đo độ hấp thu trên UV/Vis và xây
dựng đường chuẩn.

Vì vậy thí nghiệm này cần được tiến hành lại và thao tác kỹ hơn để có được kết quả
chuẩn xác.

Hình 2.5. Cốc hóa chất ký hiệu sai.