 Điều kiện chạy sắc ký:

- Pha động: (MeOH : THF : H2O) = ( 92: 3: 5)

- Cột sắc ký : cột Inertsil ODS 3 C18, cỡ hạt 5 µm, đường kính 4mm, dài
250mm

- Tốc độ dòng: 1,5 (ml/phút)

- Thời gian lưu: 25 phút
- Thể tích vòng chứa mẫu: 50 µl
- Nhiệt độ: Nhiệt độ phòng
- Detector DAD ở bước sóng 265 nm
 Hàm lượng chất phân tích (vitamin D):
- Bơm các mẫu vào cột HPLC, chạy sắc ký và xác định diện tích hay chiều
cao pic của mỗi chất, xây dựng đường chuẩn tương quan giữa diện tích
hoặc chiều cao pic với nồng độ dãy chuẩn.
- Căn cứ vào đường chuẩn để tính hàm lượng vitamin D trong mẫu theo
công thức:
X (µg/g) = V. Cm/m
Trong đó:
V: Thể tích dịch chiết cuối cùng để chạy sắc ký HPLC (ml)
Cm: Nồng đọ dung dịch chiết mẫu tính theo đường chuẩn (µg/ml)
m: Khối lượng của mẫu phân tích (g)
X: Hàm lượng Vitamin D trong mẫu thử (µg/g)
 Xác định độ lệch chuẩn (SD) và hệ số biến thiên Cv (%):
- Độ lệch chuẩn diễn tả độ lặp lại của một quy trình phân tích trong cùng
điều kiện thí nghiệm.
- Để xác định độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên chúng ta tiến hành phân tích
lặp lại 5 lần trong cùng điều kiện với mỗi mẫu thử ngiệm. Tính kết quả
hàm lượng chất thử trong mẫu và xác định SD, Cv (%) theo công thức
sau:

∑
√
2
(xi−x )
SD = n−1
100∗SD
Cv = x (%)