Trong HPLC, việc phản ứng dẫn xuất thường được yêu cầu để giải quyết vấn đề phát

hiện
hoặc trong một số trường hợp khó khăn về phân tách. Đầu dò UV và fluorimetric rất phổ
biến trong phân tích HPLC hoặc TLC. Tuy nhiên, các chất phân tích cần chứa một nhóm
chromophore hoặc fluorophore để có thể được phát hiện. Do đó, hầu hết các phản ứng
dẫn xuất bao gồm việc tổng hợp các dẫn xuất có màu sắc, hấp thụ UV hoặc phát quang để
tăng cường khả năng phát hiện của chất phân tích. Việc dẫn xuất trước hoặc sau cột có
thể được thực hiện trước hoặc sau quá trình phân tách. Trong trường hợp đầu tiên, các
chất phân tách được dẫn xuất trước khi tiêm vào cột và lượng dư của chất dẫn xuất và các
sản phẩm phụ có thể dễ dàng loại bỏ. Đối với việc dẫn xuất sau cột, chất dẫn xuất được
thêm vào pha di động sau cột. Phản ứng được thực hiện trong một bình phản ứng được
đặt giữa cột và máy dò. Thiết kế của bình phản ứng phụ thuộc vào thời gian phản ứng nên
phải ngắn để tránh làm mờ đỉnh. Trong trường hợp sau, lượng dư của chất dẫn xuất và
các sản phẩm phụ tiềm năng không thể được loại bỏ khỏi hỗn hợp và vì vậy không nên
gây trở ngại cho việc phát hiện chất phân tích.
Khái niệm
Tạo dẫn xuất là quá trình trong đó một hợp chất hóa học được chuyển đổi thành một sản
phẩm khác thông qua một phản ứng hóa học phù hợp dể hợp chất đó có thể được phân
tích một cách thuận tiện bằng phương pháp phù hợp .
Đối với đầu dò UV
Có nhiều loại thuốc thử cho phép đưa vào nhóm hấp thụ tia UV cao. Các thuốc thử này
thường là các hợp chất thơm liên hợp cao cũng chứa một nhóm phản ứng cao với nhóm
chức của chất phân tích. Nhóm sắc đoàn phải có hệ số hấp thụ mol cao. Đối với việc phát
hiện ở mức độ vết (phạm vi nanogam thấp), hệ số hấp thụ mol thường bằng hoặc lớn hơn
10.000 l / mol / cm. Hơn nữa, trong trường hợp oligome, các nhóm mang màu có thể
cung cấp các hệ số hấp thụ mol tương tự cho các dẫn xuất oligome. Do đó, thu được các
yếu tố đáp ứng mol không đổi, cho phép xác định tỷ lệ mol của tất cả các oligomer mà
không cần tất cả các hợp chất làm tiêu chuẩn. Bước sóng hấp thụ cực đại được chọn để
tối đa hóa độ nhạy và hạn chế nhiễu nền.
Một số loại thuốc thử được sử dụng
+Acyl Chlorides
+Arylsulfonyl Chlorides
+Isocyanates và Isothiocyanates
+Ninhydrin
+Phenacyl Bromide
+2,4-Dinitrophenylhydrazine
Đối với đầu dò huỳnh quang
Phát quang xảy ra khi một phân tử hấp thụ một photon, thường là trong vùng UV, làm
thay đổi trạng thái của phân tử thành trạng thái kích thích; việc trở lại trạng thái cơ bản
được thực hiện bằng cách phát ra một photon khác ở bước sóng cao hơn trong khoảng thị
trường. Lợi ích chính của việc phát hiện phát quang là độ nhạy đáng kể cao hơn so với
các phương pháp dựa trên phát hiện UV. Phát hiện phát quang đặc biệt hữu ích cho phân
tích dấu vết. Ngoài ra, các phân tử phát quang không phổ biến nên có thể được xác định
lựa chọn trong một hỗn hợp phức tạp nhờ tính chất phát quang đặc trưng của nó. [1]
Một số loại thuốc thử được sử dụng
+Sulfonyl Chlorides
+ Dẫn xuất cloformate
+DNS-H
+OPA
+Fluorescamnie
Một chất chuyển hóa có thể được xem xét dựa trên 2 phần sau: một nhóm chức phản
ứng có khả năng kiểm soát tốc độ, mức độ và sự chọn lọc của phản ứng hóa học (tạo
dẫn xuất) và một đơn vị cấu trúc cung cấp phản ứng phản ứng thuận lợi với dẫn xuất
và, trong các phản ứng trước cột, sửa đổi tính cách cách ly và tách biệt của các chất
phân tích. Một số nhóm chức của chất chuyển hóa và các nhóm chức năng phân tích
tương ứng mà chúng phản ứng. Trong việc lựa chọn một chất chuyển hóa dựa trên một
trong những nhóm này, các yếu tố quan trọng là thời gian phản ứng, độ hoàn thiện của
phản ứng, điều kiện cần thiết cho phản ứng và liệu chúng có ảnh hưởng đến tính ổn
định của các chất phân tích, tính ổn định của các dẫn xuất (tính chất lưu trữ) và sự dễ
dàng của việc tách chất dư chất chuyển hóa ra khỏi các dẫn xuất. Tùy thuộc vào loại
mẫu, việc phản ứng yêu cầu điều kiện hoàn toàn không chứa nước hay xảy ra trong
dung dịch nước có thể là một yếu tố quan trọng. Mong muốn sử dụng các phản ứng
nhanh và định lượng hạn chế số lượng chất chuyển hóa thường được sử dụng và các
loại nhóm chức phân tích có thể dễ dàng tạo dẫn xuất. [2]
 TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Torgny Fornstedt, ANALYTICAL SEPERATION SCEINCE, 7 December 2015.

[2] C. Poole, Liquid Chromatography, Elsevier Science, 2013.