Magyar Agrár- és Élettudományi Egyetem

Élelmiszertudományi és Technológiai Intézet

Budapest

Állatház

Dr. Nagy András

2022. November 22.

Budapest
 Állatkísérletek és engedélyezés

• 40/2013. (II. 14.) Korm. rendelete az állatkísérletekről

• a 2010/63 EU Irányelv rendelkezéseinek átültetése

• részletesen meghatározza az ÁTET (Állatkísérleti Tudományos Etikai Tanács)

tevékenységét és feladatait az engedélyezés menetében

• a NÉBIH-et jelölte ki, mint az ÁTET működtetését végző szervet

• MÁB – Munkahelyi Állatjóléti Bizottság (állatkísérleti szabályzat elkészítése, ellenőrzése)

• Állatkísérlet un. 3 R (Replacement, Reduction, Refinement)

Replacement - az állati modellek helyettesítése más modellekkel

Reduction - a kísérletekben felhasznált állatok számának csökkentése a lehetőségek

határáig

Refinement – eredmények finomítása, kísérleti körülmények tőkéletesítése, az állati

fájdalom és szenvedés csökkentése
40/2013 Kormány rendelet
Az állatkísérleti projekt engedélyezése iránti kérelem
 Állatkísérletek

Nyúl

• Poliklonális ellenanyag termelés, IgG tisztítás

• Immunanalitikai módszerek fejlesztése (ELISA, immunblott)

• Fehérjék, peptidek mennyiségi meghatározása

5
Nyúl ketrecek
 Poliklonális ellenanyag előállítása

Poliklonális ellenanyag

•több, eltérő specifitású ellenanyag keveréke

•több B-sejt klón termékei
•egy adott antigén eltérő epitópjait ismerik fel

szubkután (bőr alá) immunizálás

antigén
Napok
1 14 28 42 50
25 ug antigén / testtömeg + cFA
Ellenanyag
termelődésének
ellenőrzése indirekt
ELISA-val
25 ug antigén / testtömeg + icFA (1:1)
 Állatetetési kísérletek (patkány)

• Fehérjehasznosulás - testtömegváltozás
(PER, NPR)

• N-egyensúlyi kísérlet (NPU, TD, BV)

anyagcsere ketrec

8
 In vivo fehérjehasznosulás
Testtömegváltozás alapján számított fehérje minőségi mutatók

• Az etetési kísérlet során az állatok testtömeg növekedését vonatkoztatjuk a

diétából származó nitrogén bevitelre.

testtömeg

gyarapodás

növekedés
0
PER NPR

csökkenés
fenntartás

0 N bevitel

Mtv-Mto = a kísérleti állat testtömeg változása (g)

(Mtv – Mto) – (Mkv - Mko) Mkv-Mko = a kontrolcsoport átlagos testtömeg
= NPR változása (g)
I I (Intake nitrogen) = a kísérleti állat által
elfogyasztott nitrogén mennyisége (g)
(Mtv - Mto)
= PER PER = fehérjehatékonysági arány (g / 16 gN)
I NPR = az átlagos nettó fehérjearány (g / 16 gN)
 Fehérjehasznosulás vizsgálata nitrogén-egyensúlyi kísérletben

Mt8-Mt3 = a kísérleti állat testtömeg változása (g)

I - (F - Fk)  100 Mk8-Mk3 = a kontrolcsoport átlagos testtömeg változása (g)
= TD (%) I (Intake nitrogen) = a kísérleti állat által elfogyasztott nitrogén
I mennyisége (g)
F (Faecal nitrogen) = a kísérleti állat légszáraz székletének nitrogén-
NPU  100 tartalma (g )
= BV (%) Fk = a kontrolcsoport légszáraz székletének átlagos nitrogén-tartalma (g)
TD U (Urinary nitrogen) = a kísérleti állat vízeletének nitrogén tartalma (g)
Uk = a kontrolcsoport vízeletének nitrogén tartalma (g)

TD = valódi emészthetőség (%)

I - (F - Fk) – (U-Uk)  100 BV = biológiai érték (%)
= NPU (%) NPU = nettó fehérjehasznosítás (%)
I NPR = az átlagos nettó fehérjearány (g / 16 g N)
Egyedi anyagcsere-ketrec

Vizelet Bélsár
Csoportos anyagcsere-ketrec

Vizelet Bélsár
 In vivo emészthetőség vizsgálata
• Fehérjék, peptidek tápcsatornában
való túlélésének, felszívódásának
vizsgálata, intubálás

• Lektinek – specifikus cukormegkötő

képességük miatt képesek a
tápcsatornával közvetlen kapcsolatba
lépve a tápcsatorna immunválaszát
és metabolizmusát befolyásolni 90 perc
(extrakció)

vékonybél

13
 Imidazol peptidek (karnozin) in vivo emészthetőségének
vizsgálata patkánymodellben

Hús minták

0, 15, 30, 60, 90 perc

Centrifugálás 14000 rpm / 10 perc

plazma

centrifugálás (650 g, 10 perc)

10 ul 100 mM PMSF / ml
vékonybél gyomor centrifugálás (14000 g, 20 perc)
10 ul 100 mM PMSF + 10 ul 1% nátrium-azid / ml
Mosás: aprotinin (0,1 g/L; 4TIU/mg) centrifugálás (14000 g, 20 perc)
tartalmú desztillált vízzel Felülúszó lefagyasztása -20 ºC
Lactobacillus törzsek immunmoduláló hatásának vizsgálata
patkány-modellben

Csoportok Orális érzékenyítés immunizáció

Days
0 8 16 23

LAB+OVA
OVA
LAB OVA specifikus
ellenanyag
Ovalbumin
(OVA) vizsgálata
ELISA-val

Kontroll
Köszönöm a megtisztelő figyelmüket!

Email: nagy.andras.dr@uni-mate.hu