Loria, Luis Guilerme y Dam Jiménez, Ricardo. Avtoradiograa por ‘captura neutrénica (NCR) utilzando la reaccién nuciear B(n a) LU” Tecnologia en Marcha. Vol. 1210, 2. 1993. pp. 61-68 Escuela de Fisica. Univers- dad de Costa AUTORRADIOGRAFIA POR CAPTURA NEUTRONICA (NCR) UTILIZANDO LA REACCION NUCLEAR B" (n, «Li? ‘boro @s un elemento basico en el desarrollo, floracién y fructificacién de las plantas. La deficiencia de este ‘lemento causa la muerte del épice de crec- ‘miento, las flores no legan a desarrollarse, ef crecimiento de las raices se vuelve lento y los Organos de reserva presentan desintegracion de tejidos. En este trabajo se presenta la variacion {ela concentracién de boro natural en funcién del grosor de la pulpa, en el fruto de mango. La concentracién de! boro natural decrece ‘@xponenciaimente desde la pil (83,9 ppm) al interior de la fruta (2,4 ppm, a 5,6 mm de ‘protundidad). Colocando gotas de una solucién de (B") H,BO, en la superticie del fruto, se ‘mide ol cosfciente de ditusion do este ‘elemento, el cual tiene un valor aparente de 1,6x 10" ms", Los resultados se obtienen irradiando con ‘neutrones térmicos, secciones histolégicas de mango, depositadas sobre detectores de ‘estado sélido del tipo CR-39 [Allyl diglicol carbonato}, utiizando la reaccién nuctoar 8 (n, @) LP, provenientes del reactor nuclear de la Universidad de Estrasburgo, Francia. ‘ment, flowering, and fruiting ofthe plants Deficiency of this element causes the {growth canter to dla, the flowers do not develop, the roots develop slowly and the back-up organs demostrate a desintegration of tissues. The method of neutron capture radiography was used to study the distribution ‘of boron in mango frit. There was a regular B ‘ron is a basic element inthe develop Luis Guillermo Loria* Ricardo Jiménez Dam* decrease of the concentration of natural boron ‘rom the skin (83,9 ppm) tothe interior of the ‘nuit (2,4 ppm, 6,6 mm deep in the fut). When drops ofa solution of (8) H,BO, were placed on the fruit surface, boron ‘accumulated in restricted zones, within the fruit ‘skin, wich apparently correspond to skin ‘secretory-glands. The apparent coefficiont of difusion of boric acid from these zones of high ‘boron accumulation to the interior ofthe fruit was of the order of 1,6 x 10" ms! INTRODUCCION Elboro es un elemento requerido por ‘as plantas en pequefias cantidades'. De igual forma, un pequefio exceso puede ser {6xico para las especies. El boro participa en el transporte de Gkicidos, y el ién borato se acompleja {écilmente con los compuestos polihidroxi, tales como los azucares, jugando un papel ‘muy importante en la diferenciacin y desarrollo de las células, en el ‘metabolismo del nitrégeno, fésforo, \ipidos y hormonas, en la absorci6n de sales, asi como también en la fotosintesis yenla sintesis de purinas, pirimidinas y or ende en la formacién de acidos ucleicos y citoquininas. Es particular- ‘mente esencial en elfuncionamiento de los meristemos, y se requiere en grandes cantidades para la elongacién del tubo polinico#9*sea%0:1 ob 12.n0.2 ‘TECNOLOGIA EN MARCHALos sintomas de deficiencia de este elemento en las plantas se observan en la muerte del épice de crecimiento’, las hojas presentan textura gruesa y se ‘vuelven fragiles?, mientras que la florno llega a desarrollarse y el crecimiento de la raiz se vuelve lento. Los érganos camosos ‘ode reserva presentan desintegracién de telidos que conducen a anormalidades tales como podredumbres de la médula y formacién de tejidos suberizados*. EIB" se utiliza como trazador de! boro natural al ser irradiado con neutrones ‘térmicos’®"* bajo la reaccién nuclear B'°(n, ) LP. La concentracién de boro en mues- tras biol6gicas es evaluada mediante la ‘técnica de autorradiogratia por captura neutrénica NCR en detectores de estado ‘s6lido” del tipo CR-38 . Bajo la misma metodologia se deter- mina el coeficiente de difusion del boro desde la piel al interior de la ruta de mango, utilizando microgotas de acido ‘b6rico enriquecido al 90% en B"°, deposita- das sobre la piel del mango. MATERIALES Y METODOS 1 Boro natural El boro no se encuentra libre en la naturaleza. Aparece bajo la forma de Acido ortobérico, con dos isstopos estables, B"* y B" cuyas abundancias isot6picas son respectivamente del 19,9 y 80,1%. CUADRO 1. Caracteristicas de la reaccién nuclear. R.nuclear Particulas emitidas Seccioneficaz Tipo Proporcién Energia "B(no)L? 9805Bamns a 6% 1,78Mev u % 101 Mev a 24% = 147 Mov 7 94% 084 Mev EIB’ es suceptible a la reacci6n nuclear B'° (n, a) Li” al ser irradiado con neutrones térmicos, originando dos particulas alfa y sus respectivos nticleos de retroceso [Li"] como se describe en el Cuadro 1 Por lo expuesto anteriormente y por su alta seoci6n eficaz [3885 barns] es ‘usado como un trazador del boro natural”. Lareaccién nuclear mencionada permite obtener una imagen del contenido de boro de una muestra biol6gica colocada sobre un detector CR-39, a causa del dafio que produce cualquiera de las ouatro particulas ‘que liegan a él". 1 Proparacion de muestras ‘Sobre la cdscara de mangos adultos, ‘se depositaron microgotas con un vvolumen de 5 microlitros de una solucién de Acido bérico 0, 1 M enriquecido en Bal 90%, siendo su contenido de 5 x 10° moles. Después de 24 horas las ‘microgotas fueron removidas utiizando agua bidestilada con el propésito de eliminar el boro que no penetré en la ‘ruta Fragmentos del fruto que contenian cscara sobre la cual se deposit6 la solu- ci6n, de 0,5 om? de superticie y 0,5 om de profundidad, se congelaron dentro de un equeno recipiente de aluminio conte- niendo isopenteno, para luego seccionarlos a un grosor de 10 micrones. Las secciones de mango se depositaron sobre los detectores del tipo CR-39 y fueron lofiizados por un periodo de 24 horas. El mismo procedimiento se siguié para fragmentos de la fruta, situados lejos del sitio en el cual se colocé la soluci6n del ‘boro enriquecido, con el fin de conocer la distribucién de boro natural en las mues- tras de fruta de mango. Las secciones de ‘mango se irradiaron en una fluencia de ‘neutrones térmicos de 10" n m®, Vol12.n0.2, TECNOLOGIA EN MARCHAFinalizada la irradiacion los detecto- ‘es se revelaron en una solucién de NaOH (5M), durante 120 minutos a una tempera- tura de 75°C. El objetivo de este tratamien- to es hacer visibles al microscopio 6ptico {os trazos latentes dejados sobre el detec- tor por las particulas provenientes de la reacoi6n nuclear. | Evaluacion de ta concentracion Sean Ny a, el nimero de trazos y el error estdndar por unidad de Area de visién del microscopio en un sitio de la muestra lejos de la gota siendo N, y c, los corres- Pondientes valores del niimero de trazos de fondo y su respectivo error estandar, medido en 100 reas fuera de la regién de irradiacion de las muestras. Entonces el ‘ntimero de trazos provenientes del boro natural se puede escribir por la relacion: N-N, 1 of +08 2 n con ot La relaci6n entre la concentracién local de boro en una muestra y la corres- pondiente densidad de trazos en el detec- tor, estd dada por la relaci6n: C=Kn 2 donde ©: concentracién de boro en mol kg’ en material fresco. fn: densidad de trazos por campo en ‘tracks m* kk: constante a determinar Elvalor de la constante de proporcio- ‘nalidad entre la concentracién local de! boro y el numero de trazos esté dada por la relacién’: Am Lyd ita (AA) : donde: ©: Seccién eficaz para la reaccién nuclear B" (n, a) L?, la cual tiene un valor de 3,885 x 10 m? ‘= Abundancia isotépica del B", la cual tiene un valor de 0,199 para él boro ‘natural y 0,9 para el boro enriquecido Numero de avogadro (6,022 x 10%) Fluencia neutrénica (10°* n m? en este caso) Densidad del material de referencia (8,83.x 10° kgm?) 4: Densidad de la muestra (1,014.x 10° kgm) P: Factor de calibracion’® (0,69) Tl; Proporcién de reacciones nucleares ‘que producen la particula j (20 L?) @:Grosor de la muestra (10* mmen ‘nuestro caso) ):@l menor de los dos ndmeros ¢ 0 A astna distancia que puede recorrer la particula en el material y todavia ‘con energia suficiente para producir un trazo en el detector razon de masa seca a fresca de la muestra (0,30) ‘A; Masa at6mica media de la muestra ‘seca (6,14 en nuestro caso) ‘Az Masa atémica media del material de referencia (50 en este caso) Siendo el error estandar en la con- centraci6n C: ,= (Cin) on = Ko, ° En general se prefiere expresar la Concentracién del boro en ppm (ppm = artes por millén = mg /kg), entonces ella puede ser expresada por la ecuacién: y= 10° (A /t)C , ‘Sustituyendo la ecuacién (3) en la ecuacién (7), se obtiene: KeQ{sotN,odpd x [l(e, A)}[1-[(e, 42a)" i con Y=10°(KA,/1) . Vol t2.00.2 TECNOLOGIA EN MARCHAquedando el error estandar de la concen- tracién expresado por: 62 10°(KA,/1) 0, . Elndmero total de trazos N, contados una profundidad, x, por 4rea de campo del microscopio, s, en una muestra conte- yndo parte de la gota de Acido bérico enriquecido en B' al 90% representan la suma de la radiacién de fondo local, N,, del ‘ndimero de trazos provenientes del boro natural, n,., de los trazos correspondien- tes ala difusién del B® desde la zona en que se acumul6. Entonces el ntimero de trazos por unidad de dea provenientes de la dfusion, esté dado por: A, Haciendo uso de las ecuaciones (3), (4), (8) y (8) se evalia la concentracién de! boro proveniente de la difusi6n. Lalley de difusi6n'® desde una canti- dad de sustancia con una concentracién superficial, M (moles m*) en el tiempo t, puede escribirse utilizando la relaci6n: ton 1 (A,/1)IM/2 (RD orp f(x) /40N) donde: Xo:Profundidad de la zona de alta conc tracién de boro con respecto a la cAscara D: Coeficiente de difusion medido en m?s* Tiempo transcurrido para la ditusion RESULTADOS 1 La Figura 1 muestra una seccién de mango liofilzada y depositada sobre un detector de estado sélido del tipo CR-33, irradiada en una fluencia de 40 nme. 2- La Figura 2 muestra una microfoto- graffa de la secci6n transversal de los FIGURA 1. ‘Seccién liofilzada FIGURA 2. Trazos nucleares provenientes de! ‘de mango. boro de difusién. Vol12.na.2 TECNOLOGIAENMARCHAtrazos provenientes de la ditusién del boro, La radiacién de fondo en los detecto- res, corresponde a trazos nucleares ‘observados que no provienen de la reaccién nuclear (n, a), con un valor de 1,68 + 0,01 trazos por campo. Los neutrones répidos procedentes del reactor inducen la reaccién ‘nuclear (n, p) con los isétopos de ‘oxigeno y de nitrégeno del detector’. Esta particula, por su alta energia, produce un trazo en un plano por ‘debajo del que contiene a los de las particulas alfa, cuando el detector se revela bajo las condiciones preestablecidas. La Figura 3 muestra la variacion de la ‘concentraci6n, 7 (ppm en material seco) del boro natural con la profundi- dad, x, en la fruta. La curva de mejor ajuste entre la concentracién, y, y la rofundidad, x, corresponde a un ex- oneneial. Simbélicamente la relacién entre las variables se expresa por: Y=, OXP (AX) 12 Los valores de, y 2. obtenidos desde la curva de mejor ajuste son de 79,1 pm y 0,555 x 10° mr' Aplicando el mismo método a otra sseccin de mango se obtuvieron, Para y, y 2, valores de 66,1 ppm y 0,568 x 10° m’ respectivamente. Alagrupar todos los datos de los ‘experimentos, en una sola gratica ‘que no se muestra, se obtuvo para y, 83,9 ppm y 0,537 m* respectiva- ‘mente. A una profundidad de 5,6 mm la concentracién de boro alcanza solamente 2,4 ppm. La Figura 4 muestra la curva de mejor ajuste para la variaci6n de la concen- tracién del boro proveniente de la difusi6n en funcién de la profundidad enel mango. La curva en mencién tiene la forma: Yo™ Yoo PLD (Xx,)] 13 donde: Ye! Concentracién maxima en ppm, para material seco b: —Pardmetro de! modelo (m*) Haciendo uso de las ecuaciones (11) y (13) el coeficiente de difusién queda ‘dado por: D=(10°/4nt)(AM/dty,) 14 De la misma forma, esto es, haciendo so de las mismas ecuaciones, el coeficiente de difusién esta dado por: D=1/4bt 15 Desde el ajuste de la Figura 4, se ‘obtienen los valores de y,, y b, los que son de 13,9 ppmy 1,3x 10° m? respectivamente, y que permiten eva- luar el coeticiente de difusién aparen- te con un valor de 2,1 x 10* m?s", ‘Alustando todos los datos del experi- ‘mento en una misma gréfica, se ‘obtuvo un coeficiente de difusion de 1,6x 10°? ms 7- Elvalor del coeficiente de difusién cealculado no varia mucho del encon- trado por los mismos autores al estu- diar la ditusion del boro lateralmente en la céscara de mango, el cual tiene un valorde 8 x 10"? m?s", CONCLUSIONES 1- Este método permite cuantificar e! boro natural utilizando el B' como un trazador cuando es irradiado con fluencias mayores a 10" n cm?, con tuna cantidad minima detectable para esta fluencia de 0,46 0,02 ppm. 2- Ladesviaci6n esténdar de los datos correspondientes a la concentracién de boro a una misma profundidad en tuna seccién histolégica de mango parece en principio ser alta, pero debe tomarse en cuenta que el boro VoL12.m0.2 TRCNOLOGIA ENMARCHAFIGURA 3. Concentracién de ‘boro natural on ‘mango en fancién 0 la profundldad en lapulpa de | ‘mango 0 05 10 15 20 25 30 35 40 45 Figura No 3. Coneentracion profundiddé on la pulpe do mango. (ppmary) FIGURA 4. Concentacin do bore enriquecido (0%) en union dla protindad ¢ 0B 2 16 XX (mm ‘en pulpa de pt, , Figure 4, Concontracion do boro enriquceide (90%) on funcion de la ‘mango. ‘rofundided en pulpa de mang “ VoL12.m0.2. TRCNOLOGIA EN MARCIIAno esté distribuido uniformemente y esto es lo que provoca la dispersién de los datos. 3+ Elmétodo descrite ademas de ‘cuantificar el elemento en mencién, Permite observar su distribucién, ya que sobre e! detector queda impreso €! sitio del tejido donde estan presen- tes los atomos de boro. 4- Elmodelo exponencial propuesto Para la distribucién del boro natural en la pulpa de mango, es solamente ‘un modelo arbitrario al que todavia no puede darsele una interpretacion biolégica, pero el hecho de conocer los pardmetros yy A, permitiré en un futuro compararlos con los resultados de otros experimentos en la misma fruta. También serd interesante en un futuro conocer la variaci6n de la concentracién del elemento estudia- do, pero cerca de la semilla, con el fin de conocer si el elemento continda decreciendo conforme se avanza hacia ella, de acuerdo con la ley exponencial propuesta. 5- Elconocimiento del coeficiente de ifusién permit, en un futuro, corregir deficiencias del elemento en los frutos mediante aplicaciones foliares con sustancias que conten- gan al elemento. 6 La autorradiogratia por captura neutrénica ha demostrado una vez mas que es el método mejor adapta- do al estudio de! status del boro en plantas, dado que otras técnicas anaiticas nucleares solo cuantiican la concentracién total y no permiten el estudio de las variaciones de concen- tracién, en un mismo truto. AGRADECIMIENTOS Los autores queremos dejar patente ‘nuestro agradecimiento a la Vicerrectoria de Investigacién de la Universidad de Costa Rica, al Organismo Intemacional de Energia At6mica y al Laboratorio de Intercambios Celulares de la Universidad de Rouen, Francia, en la persona del Dr. Michell Thellier, miembro de la Academia de Ciencias, por el soporte brindado. LITERATURA CITADA 1— Thellir, M. Reparttion, absortion et migration de bore. Radioisotopes in Soil Plant Nutrition Studies. IAEA. Vienna. 1962, 2+ Gauch, H. The role of boron in the translocation of sucrose. Plant Physiology. Academic Prose, 28:457, USA, 1975, 3 Jackson, J. The role of boron in plants. In Trace elements in soll -plants— animal systems. Eds. Academic Press, 28:450 U.S.A, 1975. 4 Loneragan, J. The availabity and ‘absortion of trace elements in soil plants system and their relations to ‘movement and concentration of ‘trace elements in plants. Eds. ‘Academic pross, 28480. U.S.A, 1975. ‘5 Nason, A. 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