SECȚIUNEA

CONGELATĂ

Dr Snigdha Sinha
Planul lecției:
• Istoric Introducere Principiu Utilizări Procedura
• • Tehnică
•Avantaje
• •Limitări
•

•
Istorie:
• Procedura secțiunii congelate, așa cum este
practicată astăzi în laboratoarele medicale, se
bazează pe descrierea doctorului Louis B. Wilson
în 1905.
 Introducere

• Secțiunea înghețată este un specimen de țesut care

a fost congelat rapid, tăiat cu microtom și colorat
imediat pentru diagnosticarea rapidă a posibilelor
leziuni maligne.
• Denumirea tehnică a acestei proceduri
este criosecția
• Consultatia intraoperatorie - interventia medicului
patolog, include
- Secțiunea înghețată
- Evaluare brută
- preparate pentru citologie (de exemplu, amprente
tactile)
> studii speciale (de ex. tehnici de patologie
moleculară, citometrie în flux).
Principiu
• Când problema este înghețată, apa din țesut se
transformă în gheață - prin urmare țesutul devine
ferm - gheața acționând ca mediu de încorporare.
Utilizări
1)Producție rapidă de secțiuni pentru diagnostic
intraoperator
2) În efectuarea intervenției chirurgicale Mohs -
• Chirurgie pentru cancerele de piele
• Intraoperator -După fiecare îndepărtare de țesut -
țesutul este examinat pentru celule canceroase-
chirurgul este informat astfel încât țesutul suplimentar
poate fi îndepărtat.
• Utilizări- carcinom bazocelular, carcinom spinocelular
3) Dacă o tumoare a metastazat - eșantion din
metastaza suspectată trimisă pentru criosecție.
- Se efectueaza interventii chirurgicale agresive daca
exista sansa de vindecare a pacientului.
- Dacă tumora a metastazat, intervenția chirurgicală nu
este curativă - chirurgul va alege o intervenție mai
conservatoare sau nicio rezecție.
Continuare..
4) După rezecția unei tumori - pentru a verifica dacă
marginile chirurgicale sunt libere de tumoră - pentru a
evalua necesitatea de a face o rezecție suplimentară
pentru curățarea marginilor
5) Într-o procedură de ganglion santinelă - un ganglion
santinelă care conține țesut tumoral determină o
disecție suplimentară a ganglionului limfatic, în timp
ce un ganglion benign va evita o astfel de procedură.
6) Dacă intervenția chirurgicală este explorativă -
examinarea rapidă a unei leziuni pentru a identifica
cauza posibilă a simptomelor unui pacient - urmată de
intervenție ulterioară.
 7) Metodologia imunofluorescenței
8) Tehnici de imunohistochimie - când căldura și fixarea
pot inactiva sau distruge antigenele
9) Diagnosticul și cercetarea histochimiei non-
enzimatice, de exemplu lipide, carbohidrați
Continuare..
10) metode de demonstrare a argintului - în special în
neuropatologie
11)histochimia enzimatică de diagnostic și cercetare
pentru enzimele labile
• instrument cheie pentru
criosecție - criostat
- microtom în interiorul unui
congelator.
• Secțiuni tăiate la 5 - 10
micrometri.
• Proba chirurgicală este plasată pe un disc de țesut metalic
care este apoi fixat într-un mandrina și
congelat rapid la aproximativ –20 până la –30 °C.
Continuare..
• Eșantionul este încorporat într-un mediu
asemănător gelului numit OCT (compus de
temperatură de tăiere optimă) constând din
polietilen glicol și alcool polivinilic - atunci când
este congelat, are aceeași densitate ca țesutul
congelat.
• De obicei, este necesară o temperatură mai
scăzută pentru țesutul bogat în grăsimi sau lipide.
Fiecare țesut are o temperatură preferată pentru
procesare.
• Ulterior se taie congelat
Metode de congelare:
• Secțiunile congelate de cea mai bună calitate
sunt produse din țesut proaspăt nefixat care a fost
înghețat rapid de-
1) Azot lichid (-190°C)
2) Izopentan - răcit cu azot lichid (-150°C)
3) Gheață carbonică (-70°C)
4) Dioxid de carbon gazos (-70°C)
5) Spray-uri cu aerosoli (-50°C)
• Cele mai bune secțiuni congelate se obțin atunci
când țesutul este înghețat foarte repede.
• Metoda de alegere - izopentan și azot lichid.
Tehnică
1) Grosificarea țesutului-
• Toate suprafețele care trebuie examinate notând-
culoare, textura, consistență, noduli, defecte,
țesuturi aderente, suturi și orice abateri de la
anatomia normală
- Margini rezecate de examinat – pentru stadializare și
rezultat terapeutic
 Continu
•are..
Cernelarea marginilor rezecate - pentru a verifica
dacă există invazie
Cerneala neagră de India este folosită în mod
obișnuit
Dacă tumora se extinde până la suprafața cu
cerneală, este raportată ca o marjă pozitivă -
chirurgul va exciza mai mult țesut de pe loc pentru a
asigura o excizie completă a tumorii.
2) Comunicarea corectă cu chirurgii-
• Aceasta înseamnă să știi ce țesuturi au fost
îndepărtate anterior,
• Revizuirea oricărui diagnostic anterior sau diapozitive
asupra pacientului, deoarece procedura prezentă
poate fi legată de cele anterioare.
3) Încorporarea țesutului:
• Țesutul este plasat cu fața în sus pe
mandră și acoperit cu mediu de
încorporare (OCT). Mandrina este
plasată pe o suprafață de înghețare
desemnată în criostat.
• După o perioadă de înghețare parțială,
un extractor de căldură ponderat este
plasat pe partea de sus a mandrinei
pentru a aplatiza suprafața țesutului
pentru a finaliza procesul de congelare.
• 4- Criostat:
• Țesutul este tăiat cu porțiunea de microtom a criostatului prin
setarea grosimii la 10 microni.
Temperatura ar trebui să fie de -
a) Tem 20°F
pentru
majoritatea țesuturilor. Pentru țesuturile
cu o componentă mare de grăsime, este
nevoie de -40°F.
• Prea mare, adică -10°F - țesutul nu va
rămâne înghețat și ferm. Prea rece, adică -
50°F și țesutul se va prăbuși și va deveni
pulbere.
b) Ascuțimea lamei și unghiul:
• Lama trebuie să fie ascuțită, trebuie
schimbată o dată la 2 săptămâni, unghiul
dintre lamă și planul de mișcare al țesutului
trebuie să fie optim (2-4°-parafină, 5-7°-
înghețat)
• Odată ce țesutul este tăiat, o lamă este
plasată cu fața în jos și țesutul este ridicat și
colorat
 ining:
• Odată ce țesutul este pe lamă, poate fi fie uscat la
aer, fie fixat în metanol. Aceasta depinde de procedura
de colorare care va fi utilizată (întârzierea poate cauza
artefacte)
• pași-
• Formalină sau alcool 95%: 45-60 secunde
• Apă: 5-7 secunde
• Hematoxilină: 60 de secunde
• 0,2 % amoniac apos (albăstruire): 15 20 de
secunde
• Eozina: 20-60 secunde
• 95% alcool: 10 secunde
• 100% alcool: 10 secunde
• Xilen, Toluen: 10 secunde
• Suporturi de montare pentru alunecarea
capacului
• Întreaga procedură durează aproximativ 4 minute
 Avantaj Dezavantaj
EL Pare o colorare Durează 3 minute
permanentă a secțiunii
Albastru de Toluidină Durează 10-20 de
secunde Aspect diferit de
permanente
Giemsa Durează 10-20 de
secunde Aspect diferit de
permanente
6) Interpretarea secțiunii înghețate-
• Raportul se limitează la un diagnostic „benign” sau
„malign” și este comunicat chirurgului care operează
prin interfon.
Avantaje:
1) Pregătirea probei este mult mai mult
rapid decât cu tehnica histologică tradițională
(aproximativ 10 minute vs 16 ore).

2) Dacă este nevoie de mai mult țesut pentru a face un

diagnostic precis, chirurgul poate obține o probă
suplimentară, evitând o a doua operație.
3) Dacă țesutul este determinat a fi canceros - masa poate
fi îndepărtată în acel moment.
Continuare..
4) Dacă țesutul este determinat a fi benign – intervenția
chirurgicală se poate termina.
5) Se asigură că masa care este îndepărtată este țesutul
destinat pentru îndepărtare.
6) Se asigură că întreaga masă și granițele din jur sunt
îndepărtate.
7) Permite colectarea de mostre de țesut adecvate
pentru cercetări științifice ulterioare.
8) Chirurgul și patologul sunt capabili să colaboreze
pentru îngrijirea pacientului
 imitatii
1) Artefactul de îngheț - țesuturile edematoase îngheață cu un aspect
asemănător cu bulele de săpun - pe măsură ce apa îngheață - apa în
expansiune - formează cristale rotunjite de gheață care comprimă firele
de țesut fibros dând aspectul de bule.
• Țesuturile edematoase pot fi greu de tăiat fără a se sparge din cauza
consistenței înghețate
• Imaginea din stânga arată artefactul înghețat în stromă, iar imaginea
din dreapta arată natura edematoasă a stromei
 opresiune Artefacte -
țesuturile vor fi comprimate prin extinderea bulelor de
gheață. Acest lucru este cel mai evident în țesuturile
edematoase
• Imaginea din stânga prezintă tubii renali comprimați de
cristalele de gheață limpede. Imaginea din dreapta arată
țesut care nu a fost înghețat.
3) Cristale de gheață nucleare
• Nucleii vor prezenta o tendință diferită de a forma cristale de gheață.
• Nuclei veziculari – au tendinta mai mare de a prezenta cristale de gheata.

4) Grosimea -
• Cu cât țesutul este tăiat mai subțire – mai mult aceste cristale apar ca găuri
• Țesutul din stânga este tăiat la 6 microni, țesutul din dreapta este tăiat la
5) Artefacte de uscare - nucleele unei secțiuni înghețate
lăsate să se usuce mai mult de câteva secunde arată o
pierdere a definiției.
6) Erorile de eșantionare - observarea, examinarea,
cerneala și încasarea trebuie făcute într-o manieră
meticuloasă.
7) Grăsime - greu de congelat.
8) Inconsecvența pregătirii și a performanței- pentru
efectuarea procedurii se poate dovedi o limitare.
• Din cauza calității tehnice slabe a secțiunilor congelate - Un
diagnostic final este rareori oferit intraoperator