Aislamiento y caracterización de carbohidratos.

Bianca Gerona, Francesca Gerónimo, Jacqueline Mae Go,

Jhennie Jaruda, Karen Julao , Kyle Dillan Lansang

Laboratorio de Bioquímica de Farmacia Grupo 4 2C

ABSTRACTO

Los carbohidratos se definen como cualquiera de un grupo de compuestos

orgánicos que incluye azúcares, almidones, celulosas y gomas y que sirven como
una fuente importante de energía. En este experimento, se extrajo almidón de una
papa y luego se realizaron pruebas generales de polisacáridos, pruebas cualitativas
de carbohidratos e hidrólisis enzimática. El resultado positivo de la prueba de
Molisch confirmó la presencia de un carbohidrato. La prueba de yodo se utiliza para
comprobar la presencia de almidón. Se utilizó la prueba de Benedict para detectar
azúcares reductores, la prueba de Barfoed para la presencia de monosacáridos, la
prueba de Seliwanoff para cetohexosas y la prueba de Bial para pentosas.
Posteriormente se realizó cromatografía en capa fina y análisis cuantitativo.

INTRODUCCIÓN Los oligosacáridos, por otro

Los carbohidratos son una de
las cuatro macromoléculas esenciales
en el proceso de la vida. Sirven como
combustible en la producción de
energía. Los carbohidratos tienen una
fórmula general de (CH 2 O) y se
agrupan según la cantidad de
moléculas que tienen.
Los monosacáridos son
azúcares que no se pueden hidrolizar.
Además, se clasifican según la
cantidad de carbonos que contienen.
Las pentosas tienen cinco carbonos
mientras que las hexosas tienen seis.
También se pueden clasificar como
aldosas o cetosas. Las aldosas
contienen un grupo aldehído, mientras
que las cetosas contienen un grupo
cetona dentro de la molécula.
lado, contienen de dos a diez unidades
de monosacáridos. Se subdividen
según la cantidad de unidades de
monosacáridos que los componen.
Los polisacáridos pueden estar
compuestos por cientos de miles de
unidades de monosacáridos
conectadas en varios patrones.
Ejemplos comunes de polisacáridos
son el almidón, la celulosa y el
glucógeno.
El almidón aislado en este
experimento es un polímero de
glucosa. Se encuentra comúnmente
en raíces, semillas, tallos, tubérculos y
cormos de plantas, en forma de
gránulos microscópicos. El almidón
también es esencial para la
alimentación de los animales y del
hombre.
El objetivo del experimento es
aislar polisacáridos de la fuente
vegetal, luego realizar pruebas
generales de carbohidratos y explicar
los principios involucrados en los
procesos.
Metodología
A. Extracción de almidón de patata
La papa se trituró y se molió
usando un cuchillo y una licuadora. La
mezcla se transfirió a un vaso de
precipitados pequeño, se le agregaron
50 ml de agua y se mezcló. Luego se
cuela con una gasa. Se dejó reposar el
almidón. Después de la extracción se
realizaron al aislado pruebas generales
e hidrólisis de polisacáridos.
B. Pruebas generales para
polisacáridos
1. Prueba de Molisch
El reactivo de Molisch está
compuesto de 5% de α-naftol en 95%
de etanol. Se agregaron unas gotas a
una solución de almidón de 1 ml. Por
el costado del tubo, se vertieron
cuidadosamente 2 ml de H2SO4
concentrado para formar una capa.
Luego se observó el color en la unión
de los dos líquidos.
2. Reacción del yodo
Se añadieron unas gotas de
yodo 0,01 M a 1 ml de solución de
almidón. Luego se calentó la mezcla
en un baño de agua. Se observó
cualquier cambio de color. Se enfrió y
se anotó el resultado.
C. Hidrólisis enzimática
Se colocaron 10 ml del
carbohidrato aislado en un vaso de
precipitados y luego se agregaron 2,3
ml de saliva. Luego se dejó reposar a
temperatura ambiente durante 30
minutos. Se anotó cualquier cambio
en la viscosidad de la solución. Se
suponía que a continuación se
utilizaría una bolsa de diálisis, pero
debido a la falta de disponibilidad de
este artículo, se utilizó una bolsa de
plástico transparente. La bolsa se
suspendió durante la noche en un
matraz pequeño con 50 ml de agua
destilada.
D. Pruebas cualitativas para
carbohidratos
1. Prueba de Benedict, Barfoed,
Seliwanoff y Bial-Orcinol
En tubos de ensayo separados,
se mezclaron cinco gotas de cada una
de las soluciones de muestra de
carbohidratos (glucosa 0,1 M,
fructosa, lactosa, sacarosa e
hidrolisado) con 1 ml de reactivo de
Benedict. (Se debe realizar una
prueba con las diferentes soluciones
de carbohidratos al mismo tiempo).
Luego, los tubos de ensayo se
colocaron en un baño de agua
hirviendo y se retiraron cada vez que
las soluciones de una prueba daban un
resultado visible. Se anotó el
resultado y el tiempo que tardó en
formarse el resultado visible en cada
prueba. El mismo procedimiento se
algodón. Posteriormente los tubos de
ensayo se calentaron en un baño de
agua hirviendo durante 30 minutos.
Se observaron cristales formados.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Aislamiento y pruebas generales
para polisacáridos.
Descripció Molisch's yo 2

aplicó con la prueba de Benedict, n

Barfoed, Seliwanoff y Bial-Orcinol. Solución
solidifica
Interfase
2. Prueba de ácido múcico da con
Aislar: sustancia violeta en
una
ALMIDÓN en polvo la capa
En la prueba de ácido múcico de capa
inferior.
galactosa y lactosa, se mezclaron 3 azul
gotas de las muestras de encima.
Tabla 1.1. Resultados del aislamiento
carbohidratos con 3 gotas de HNO 3
y pruebas generales de almidón de
concentrado. Luego se colocó la
patata.
mezcla sobre un portaobjetos de
vidrio y se puso sobre una lámpara de El almidón aislado era de color
alcohol hasta que casi se secó. Se amarillo claro y turbio. El almidón se
enfrió a temperatura ambiente. Los probó adquiriendo resultados positivos
cristales fueron examinados bajo el de las siguientes pruebas anteriores
microscopio. Si no aparecen cristales, que probaron la presencia de almidón
dejar reposar el portaobjetos hasta el en la solución extraída.
siguiente período.
Pruebas cualitativas para
3. Prueba de fenilhidrazona carbohidratos
El reactivo de fenilhidrazina se solución Resultados visibles
preparó mezclando 2 gramos de de
benedi Barfoe Seliw
clorhidrato de fenilhidrazina, 3 gramos carbohi bial
ctino d's anoff
de acetato de sodio y 10 ml de agua dratos
destilada. El reactivo se colocó en un Sol'n Sol'n
Ppt rojo Ppt rojo naranja verde
baño de agua tibia y se agitó hasta Glucosa
ladrillo. ladrillo. , sin oscur
que quedó transparente. En diferentes ppt. o
tubos de ensayo, se mezclaron 2 Ppt
Ppt rojo Ppt rojo
gotas de las muestras de Fructosa rojo --
ladrillo. ladrillo.
carbohidratos con 4 gotas de cereza.
fenilhidrazina recién preparada. Se xilosa -- -- -- Sol'n
mezcló bien y luego se cubrió con un azul
verdo
 Sol'n
rojo Sol'n
ladrillo Sin naranja
Lactosa
con ppt reacción , sin
rojo ppt
ladrillo.
Ppt
Ppt rojo Ppt rojo
sacarosa rojo
ladrillo. ladrillo.
cereza.
Hidroliza Sol'n Sol'n sol
do: azul rojo amarill
Almidón verdoso cereza o

Tabla 2.1. Resultados de pruebas

cualitativas de los carbohidratos. Fig. 1.2 Resultados de la prueba de
Seliwanoff

Para esta parte se utilizaron

diferentes carbohidratos incluido el
almidón hidrolizado. La mayoría de las
pruebas arrojaron resultados positivos
excepto la lactosa en la prueba de
Barfoed. En la prueba de Benedict se
observa un resultado positivo de un
precipitado de color rojo ladrillo que
indica la presencia de azúcares
reductores. Por otro lado, en la prueba
de Barfoed también se observa un
precipitado de color rojo ladrillo que
Figura 1.1. Resultados de la prueba confirma la presencia de
de Benedict monosacáridos. La lactosa tuvo un
resultado negativo en la prueba de
Barfoed, en la que se trata de un
azúcar no reductor y un disacárido. La
prueba de Seliwanoff se utiliza para
las cetohexosas. El ácido clorhídrico
concentrado permite que las cetosas
se deshidraten más que las aldosas,
que se condensan aún más formando
un producto de color rojo cereza. La
prueba de orcinol de Bial muestra un
resultado positivo de una solución azul
verdosa para pentosas y se utiliza COO. Las aldosas y cetosas cuando
para diferenciar pentosas de hexosas. reaccionan con la fenilhidrazina,
forman un producto cristalino que se
Cristales de ácido múcico conoce como (osazonas).

CONCLUSIONES

Azúcar *S *M, *R o *PN *A

oC Oo NR o oK
P HX
Glucosa S MET R HX A
RO
Fructosa S MET R HX k
RO
xilosa S MET R PN A
RO
Lactosa S D R HX A
Figura 2.1. Cristales de ácido
múcico sacarosa S D NR HX k
La prueba del ácido múcico se
utiliza para la galactosa. Un resultado Almidón C PAG NR HX -
positivo de la prueba de ácido múcico
es la formación de un precipitado hidrolizado C PAG R HX -
cristalino insoluble e indicaría la
presencia de galactosa. Tabla 3.1. Tabla de conclusiones.

Cristales de osazona * S = Simple, C= Complejo, M=

Monosacárido, D= Disacárido, O=
Oligosacárido, P= Polisacárido, R=
Reductor, NR= No reductor, PN= Pentosa,
HX= Hexosa, A= Aldosa, K= Cetosa

Cromatografía de capa fina

Estándares hidrolizado
Dex
Malt
trin Glucosa Enzima
osa
a
Figura 3.1. Cristales de osazona Distanci
a
7,7
La prueba de fenilhidrazona recorrid 7.7 7.7 7,7
centímet
detecta azúcares reductores como a por el cm cm centímetros
ros
monosacáridos y disacáridos. El disolven
te.
reactivo de fenilhidrazona consta de
Distanci 1.4 0.7 1,3 0,2
clorhidrato de fenilhidrazina y NaCH 3 a cm cm centímet centímetros
 recorrid Desconocido
Tubo no. absorbancia
a por el ros (mg/tubo)
soluto 1 0.119 --
Valor Rf 0,17 2 2.666 --
0,18 0,09 0,03
centímet 3 2.600 --
cm cm centímetros
ros 4 3.577 --
Identida 5 0.081 --
d de 6 0.084 --
-- -- -- Maltosa
compon 7 máx. --
entes 8 0.051 0.2

Tubo no. Concentración

En TLC, se aplicaron en la placa
de TLC 5 gotas de 3 estándares
diferentes: Dextrina, Glucosa
Maltosa. También se aplicaron 10
gotas del hidrolizado enzimático. Sus
valores Rf se calcularon después de
que la placa haya absorbido el
disolvente. La dextrina alcanzó el
valor Rf más alto y el hidrolizado
alcanzó el más bajo.
1 0 mg/mL
2 0,000385 mg/ml
3 0,000764 mg/ml
y 4 0,00154 mg/ml
5 0,00231 mg/mL
6 0,00308 mg/ml
7 0,00385 mg/ml
8 0,04 mg/ml
4 Quantitative Analysis
3.5
3
2.5
Absorbance

2 f(x) = − 14.7395989974937 x + 2.17558646616541

1.5 R² = 0.0618253606775972
1
0.5
0
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09
Concentration

Figura 5.1. Gráfico para el análisis

cuantitativo

En el gráfico del análisis

Figura 4.1. cromatograma
Análisis cuantitativo
cuantitativo, el experimento arrojó un
resultado del 6,1%, que era muy bajo.
Probablemente esto se debió a las
bajas concentraciones encontradas en
los tubos de ensayo que fueron
analizados. El tubo de ensayo 7 no se
trazó porque se detectó que tenía una
absorbancia máxima.

REFERENCIAS

(1)
http://www2.chemistry.msu.edu/facul
ty/reusch/VirtTxtJml/carbhyd.htm

(2)
http://www.pua.edu.eg/Version2/Cour
ses2/Dentistry%20Courses/Freshmen/
Spring/BCM101/Practical/Week
%202%20practical%20_Chemistry
%20of%20carbohidratos_.pdf

(3)
http://www.academia.edu/10805521/
Isolation_and_Characterization_of_Car
bohidratos

(4) http://vlab.amrita.edu/?
sub=3&brch=63&sim=631&cnt=2