Vibrio cholerae

Propiedades morfológicas y culturales,

Manifestación clínica,
Patogenia, Factores de Virulencia,
Prevención y Tratamiento
 Vibrio cholerae
• Propiedades de tinción: V.
cholerae es Gram negativo y
tiene forma de coma.
• Los aislados iniciales son
ligeramente curvados,
mientras que pueden
aparecer como varillas
rectas en el cultivo de
laboratorio.
• La bacteria tiene un flagelo
en un polo celular y pili.
 Ecología
• V. cholerae prospera en una ecología acuática,
particularmente en aguas superficiales. La
conexión principal entre los humanos y las
cepas patógenas es a través del agua,
particularmente en áreas económicamente
reducidas que no cuentan con buenos sistemas
de purificación de agua. Cepas no patógenas
también están presentes en las ecologías
acuáticas.
 Bienes culturales
• V. cholerae es un anaerobio facultativo y puede
sufrir un metabolismo fermentativo.
• El medio Cary Blair es ideal para el transporte y
el agar selectivo con tiosulfato, citrato y sales
biliares (TCBS) es ideal para el aislamiento y la
identificación.
Cary Blair Medio

• El bajo contenido de nutrientes del medio

previene el crecimiento excesivo de bacterias y
garantiza la supervivencia bacteriana durante
largos períodos.
 Agar TCBS
El agar tiosulfato-citrato-sales
biliares-sacarosa o agar TCBS
es un tipo de placa de cultivo
de agar selectivo que se
utiliza en laboratorios de
microbiología para aislar
Vibrio spp. TCBS Agar es
altamente selectivo para el
aislamiento de V. cholerae y
otros vibrios.
 Agar
TCBS
• El agar TCBS contiene altas concentraciones de tiosulfato de sodio y
citrato de sodio para inhibir el crecimiento de enterobacterias .
• La inhibición de las bacterias Gram positivas se logra mediante la
incorporación de hiel de buey , que es una sustancia natural que
contiene una mezcla de sales biliares, y colato de sodio, una sal
biliar pura .
• El tiosulfato de sodio también sirve como fuente de azufre y, en
combinación con citrato férrico, detecta la producción de sulfuro de
hidrógeno.
• La sacarosa (sacarosa) se incluye como carbohidrato fermentable
para el metabolismo de los vibrios.
• El pH alcalino del medio favorece la recuperación de V. cholerae e
inhibe el crecimiento de otros.
• El azul de timol y el azul de bromotimol se incluyen como
indicadores de cambios de pH.

Taxonomía
• Dominio: Bacterias
• Filo: Proteobacterias
• Clase: Gamma-proteobacterias
• Familia: Vibrionáceas
• Orden: Vibrionales
• Género: Vibrio
• Especie: Vibrio cholerae
 Manifestaciones clínicas
La mayoría de las infecciones por cólera son de naturaleza asintomática. Sólo entre el
5% y el 10% de los infectados mostrarán los
síntomas graves característicos del cólera.
El cólera aún puede transmitirse a través de
portadores asintomáticos, ya que las
bacterias se eliminan durante 7 a 14 días.
Dos tipos de casos de cólera:
1. Los casos leves son difíciles de
distinguir de las enfermedades
diarreicas normales.
2. Los casos graves (10%) se asocian con
diarrea acuosa e indolora, con una
pérdida de líquido de hasta 20 litros
por día, lo que provoca un shock
hipovolémico.
 Manifestaciones clínicas
Los síntomas típicos del cólera
incluyen diarrea, náuseas, vómitos y
deshidratación. El más grave de estos
síntomas es la diarrea, que .Shock Enfermedad
hipovolémico
Acidosis
provoca deshidratación. Vómitos
La diarrea asociada con el cólera Diarrea
Calambres
es muy distinta y a menudo se la musculares
llama "heces de agua de arroz" debido
a su apariencia pálida y de color blanco
lechoso, que es el aspecto que tiene el
agua después de haber lavado el arroz
con ella. 4. Salida (de uno a
muchos litros de
líquido por día)
 Deshidratación severa
• Los síntomas de la
deshidratación severa.incluir
irritabilidad, letargo, ojos
hundidos, boca seca, sed
extrema, piel seca y arrugada
que tarda en recuperarse
cuando se la pellizca en un
pliegue, poca o ninguna
producción de orina, presión arterial baja y un ritmo
irregular. latido del corazón
(arritmia).
 Dosis infecciosa
• El cólera se contrae por transmisión vehicular
fecal-oral. Esto suele deberse a alimentos o
agua contaminados. El contacto de persona a
persona es poco frecuente debido a la gran
dosis infecciosa.
• La dosis infecciosa es de 10 3 -10 6 células si la
fuente es agua contaminada y de 10 2 -10 4
células si la fuente es alimento contaminado.
• Los humanos son los principales reservorios.
 Casos por año
• El cólera es una enfermedad diarreica aguda
que puede matar en cuestión de horas si no se
trata.
• Los investigadores han estimado que cada año
se producen aproximadamente entre 1,4 y 4,3
millones de casos y entre 28.000 y 142.000
muertes al año en todo el mundo.
• Hasta el 80% de los casos pueden tratarse con
éxito con sales de rehidratación oral.
 Biología molecular
Esquema y virulencia.
de clasificación de V.
cholerae factores
NO TOXIGÉNICO TOXIGÉNICO

¡Puede que no sea O1 u ¡Yo defino Vibrios!

O139! soy un
(pero todavía puedo provocar Cepa O1 u O139
problemas)

A,3X—

GRAMO /\J
www.forth.go.jp/tourist/panf/cholerae.html
 Esquema de clasificación
V. cholerae toxigénico
División en 2 serotipos epidémicos.

O1
División en 2 biotipos O139

Clásico El
Tor
Cada biotipo O1 puede tener 3
serotipos

Diseñado utilizando información presentada en revisión por NS Crowcroft. 1994. Cólera: epidemiología actual. El informe sobre
enfermedades transmisibles . 4(13): R158-R163.
 genoma
• Agosto de 2000: publicación de la secuencia
completa de ADN de V. cholerae , cepa El Tor
• Inusual: 2 cromosomas distintos
 Estructura genómica
■ El genoma del cólera
contiene 2 cromosomas
circulares.
■ El genoma tiene
aproximadamente 4,0 Mb, en
el que la cepa clásica se divide
entre un cromosoma grande
de 2,4 Mb y un cromosoma
pequeño de 1,6 Mb .
■ En la cepa El Tor , el
cromosoma grande contiene
2,96Mb y el cromosoma
pequeño contiene 1,07Mb

Función
 del genoma
• Se ha secuenciado el genoma completo de la cepa virulenta V. cholerae El Tor
N16961 y contiene dos cromosomas circulares.
• El cromosoma 1 tiene 2 millones (2.961.149) pares de bases con 2.770
marcos de lectura abiertos (ORF).
• Es el primer cromosoma más grande el que contiene los genes cruciales para
la toxicidad, la regulación de la toxicidad y funciones celulares importantes,
como la transcripción y la traducción.
• Contiene una isla genómica de patogenicidad y está lisogenizado con ADN de
fago. Eso significa que los genes de un virus se han integrado en el genoma
bacteriano y han convertido a la bacteria en patógena.
• El cromosoma 2 tiene 1 MB (1.072.315) pares de bases, 1.115 ORF. , incluidos
genes esenciales para el metabolismo, proteínas de choque térmico y genes
de ARNr 16S.

Cromosoma 2, ¿es un
 plásmido/megaplásmido?
• Se determina que el segundo cromosoma es diferente de un plásmido o
megaplásmido debido a la inclusión de genes constitutivos y otros genes
esenciales en el genoma.
• También es relevante para determinar si el replicón es un cromosoma si
representa un porcentaje significativo del genoma y si el cromosoma 2 tiene
el 40% del tamaño de todo el genoma .
• Y, a diferencia de los plásmidos, los cromosomas no son autotransmisibles .

*** Sin embargo, se cree que el segundo cromosoma pudo haber sido alguna
vez un megaplásmido porque contiene algunos genes que generalmente se
encuentran en los plásmidos.

Estructura genómica: elementos móviles

(PLÁSMIDOS)
Se han aislado varios plásmidos.
Un plásmido críptico de 4,7 Kb está presente en todas las cepas positivas
para ctx.
Un plásmido de 6,8 Kb (factor P) es capaz de movilizar genes
cromosómicos pero de manera menos eficiente que el factor F en E. Coli .
 Estructura genómica:
Bacteriófago
■ En 1996, Matthew K.
Waldor y John J. Mekalanos
informaron de un
sorprendente
descubrimiento sobre la
toxina.
■ Por primera vez se
demostró que la toxina no
formaba parte de la
bacteria, sino de un
bacteriófago filamentoso
(ctxΦ) que se integró en el
genoma de V. cholerae .
■ Normalmente, este virus
permanece silencioso
dentro de V. cholerae , pero
■ El principal factor de
virulencia del cólera, CTx
(toxina del cólera), está
codificado en el fago PAI,
que es capaz de transducir
el gen ctx a otras cepas de
cólera.
■ Los fagos liberados se
adhieren específicamente a
la bacteria y entran en ella.
■ La vigorosa multiplicación
viral da como resultado la
producción de grandes
cantidades de toxina que
causan diarrea severa.
 Estructura genómica:
Islas de Patogenicidad (PAI)
■ Al transducción, el
El bacteriófago (ctxΦ) aporta la
■ toxina ( Ctx = gen de la toxina),
■ un pilus específico llamado toxina-co
regulado pilo (TCP) [ SIDA
intestinal movilización y
colonización ] y
■ Regulación del gen de virulencia (toxT)
codificado en una isla de patogenicidad
de 40 Kb.
■ Este PAI está presente en cepas
patógenas de cólera. Es un elemento genético grande (alrededor
de 40 kb) flanqueado por dos regiones repetitivas ( sitios
similares a att ).
Factores de virulencia y patogénesis.
 Principales factores de virulencia
• integrones
- Permitir que V. cholerae adquiera genes de otros
organismos y los convierta en genes funcionales.
• Flagelos (motilidad)
• Toxinas
- TC; toxina del cólera. Es la toxina responsable de inducir
diarrea en pacientes con cólera.
• Adherencia/Adhesinas
– Pilus corregulado por toxinas (TCP); ubicado en los extremos polares de la
célula y probablemente contribuya a la colonización mediante adherencia.
– Factores Accesorios de Colonización (FCA); Implicado en la señalización
entre el sistema de motilidad de quimiotaxis y el sistema de ensamblaje
del pilus.
– OmpU y otras proteínas Omp : proteínas de la membrana externa; puede
ser una adhesina, aunque el papel de la proteína no ha sido asignado
definitivamente.
Patogenia: estructura de la toxina del
cólera (CT)
CT es un prototipo de toxina de subunidad
A/B, que consta de una subunidad A y 5
subunidades B.
La subunidad B pesa 11,6 kDa cada una y
se multimeriza para formar un anillo
pentamérico, que une la holotoxina a un
receptor de la superficie de una célula
eucariota.
Patogenia: estructura de la toxina del
cólera (CT)
continuación
■ La subunidad A contiene
intracelular, y un
polipéptido A2 de 5,4 kDa.
un intracelular.
Después de la escisión, los
polipéptidos A1 y A2
ADP-
permanecen unidos por un
actividad
ribosiltransferasa. enlace disulfuro. La
estructura cristalina de CT
■ La subunidad A madura se reveló que las subunidades A
escinde proteolíticamente y B están conectadas a través
para producir un del extremo C de la
polipéptido A1 de 21,8 subunidad A2, que se inserta
kDa, que contiene la a través del poro central del
actividad enzimática pentámero B.
Patogenia: estructura de la toxina del
cólera (CT)
continuación
Patogenia: estructura de la toxina del
cólera (CT)
■
continuación
La CT debe ensamblarse para que tenga actividad, ya que ni
la subunidad A ni la B individualmente pueden causar
diarrea secretora.
■ La holotoxina CT se ensambla en el espacio periplásmico.
■ Las subunidades se exportan individualmente al periplasma
a través de la membrana citoplasmática mediante la vía de
secreción general.

e
n
 Patogenia: Mecanismo de acción cont.
■ La actividad biológica de la CT enterotoxina termolábil (LT) y toxina del cólera (CT)
depende de la unión del
pentámero de la holotoxina B a
receptores específicos de la célula una
subunidad
eucariota.
■ El oligómero B se une con alta
afinidad exclusivamente al subunidad
B5
gangliósido GM1.

GM1-0S superficie celular

intestinal

Las subunidades B se unen al

receptor GM1
 Patogenia: Mecanismo de acción cont.
■ La internalización se inicia una vez
que se agrupan los complejos CT- Receptor de
GM1 que luego se invaginan para superficie de
células
formar vesículas endocíticas pequeñas :
gangliósido GM1

apicales.

Membrana
de plasma
Balsa
lipídica

Vesícula
endocítica

Captación de
proteínas
mediante
Patogenia: Mecanismo de acción cont.
Estas vesículas ingresan a
las vías de tráfico celular
que conducen a la red
trans-Golgi (TGN).
Luego, la toxina retrocede a
través de la cisterna de
Golgi hasta la sala de
emergencias.
Una vez en la sala de
emergencias, la CT se
procesa para activar el
péptido A1, que luego se
dirige a la proteína G de
membrana y a la adenilato
Patogenia: Mecanismo de acción cont.
ciclasa (AC) .
 Patogenia: Mecanismo de acción cont.

■ La adenilato ciclasa (AC) se activa

normalmente mediante una CONDICION NORMAL
proteína reguladora (GS) y GTP; sin
embargo, la activación
atp------------------- > CAMP +
normalmente es breve porque otra —AC-Gs-GTP PPi
proteína reguladora (Gi) hidroliza / activo
el GTP.
GRAM
O
AC-
G" PIB +
 Patogenia: Mecanismo de acción cont.
■ Enzimáticamente, el fragmento A1
cataliza la transferencia del resto
ADP-ribosil de NAD a un
componente del sistema de CÓLERA
adenilato ciclasa.
■ El fragmento A1 cataliza la unión de
ADP-ribosa (ADPR) a la proteína
reguladora formando Gs-ADPR a
partir de la cual no se puede
hidrolizar el GTP.
■ Dado que la hidrólisis de GTP es el
evento que inactiva la adenilato
ciclasa, la enzima permanece
continuamente activada.
■ Por tanto, el efecto neto de la toxina
es hacer que el AMPc se produzca a
un ritmo anormalmente alto, lo que
estimula a las células de la mucosa a
Patogenia: Mecanismo de acción cont.
bombear grandes cantidades de Cl-
al contenido intestinal.
 Patogenia: Mecanismo de acción cont.

■ Le siguen H 2O, Na+ y otros electrolitos, lo que provoca

diarrea, pérdida de electrolitos y
electrolitos debido a los gradientes
osmóticos y eléctricos causados deshidratación, características del
por la pérdida de Cl-. cólera.

■ El H O y los electrolitos perdidos

2
en las células de la mucosa se
reemplazan con la sangre.
■ Así, la toxina Las células dañadas
se convierten en bombas de agua y
 Entonces, ¿qué
pasa?
¿Allá?
Potencial de
virulencia

Faruque, Shah et al. 2004. Diversidad genética y potencial

de virulencia de la población ambiental de Vibrio cholerae
en un área endémica de cólera. PNAS . 101(7); 2123-2129.
 Diagnóstico: síntomas visibles
■ Disminución de la turgencia de la piel.
■ Ojos hundidos, mejillas.
■ Casi no hay producción de orina.
■ Membranas mucosas secas
■ La diarrea acuosa de arroz consiste en:
■ líquido sin glóbulos rojos, proteínas
■ electrolitos
■ enormes cantidades de vibrio cólera
(10 7 vibrios/mL)

Diagnóstico de laboratorio
■ Visualización mediante microscopía de campo
oscuro o de fase
■ Parecen “estrellas fugaces”
■ Tinción de Gram
■ Bastones rojos y curvos de bacterias
■ Aislar V. cholerae de las heces del paciente.
■ Placa sobre agar sacarosa
■ Colonias amarillas forman agar TCBS
 Métodos microbiológicos y moleculares
de Detección

Métodos microbiológicos basados en cultivos

utilizando muestras fecales o de agua.
Pruebas Rápidas
– Microscopía de campo oscuro
– Inmunoensayos rápidos
– Métodos moleculares - PCR
y sondas de ADN

Biotipado
521s ...

• El biotipado (distinguiendo entre biotipo Clásico y El Tor) se puede

realizar mediante las siguientes pruebas:
■ Sensibilidad a la polimixina B: los biotipos clásicos muestran una zona de
inhibición del crecimiento de 12 a 15 mm cuando se someten a polimixina
B, mientras que los biotipos El Tor muestran solo una zona de 1 a 2 mm.
■ Producción de hemolisina: la mayoría de los biotipos de El Tor producirán
hemolisina y lisarán los glóbulos rojos de oveja. Los biotipos clásicos no
producen hemolisina y, por lo tanto, no lisan los glóbulos rojos.
■ Sensibilidad al fago: los biotipos de El Tor no son sensibles al fago IV y no se
lisarán. Los biotipos clásicos son sensibles al fago IV y serán lisados.
■ Aglutinación con glóbulos rojos de pollo: las cepas El Tor aglutinarán
mientras que los biotipos Clásicos no.
Tratamiento: Sales de rehidratación oral
(SRO)
■ Reduce la mortalidad de más del 50% a menos
del 1%
■ Paquetes de sales de
rehidratación oral
■ Distribuido por la OMS, UNICEF
■ Disolver en 1 litro de agua.
■ NaCl, KCl, NaHCO 3 , glucosa
Tratamiento: rehidratación
intravenosa
■Se utiliza cuando los pacientes
han perdido más del 10% de su
 peso corporal debido a la deshidratación.
■No puedo beber debido a los vómitos.
■Único tratamiento para la deshidratación
severa.
 Tratamiento - Antibióticos
■Los antibióticos sólo se prescriben a pacientes con
deshidratación grave. Complemento de la
rehidratación oral
■Reducir la pérdida de líquidos a la mitad.
■Reducir el tiempo de recuperación a la mitad; 2-3 días
en lugar de 4-6
■En condiciones normales no se recomienda -
■ Corta duración de la enfermedad.
■ Resistencia antibiótica
■ Ganancia limitada por el uso
 Tratamiento: antibióticos
El antibiótico de primera elección es la doxiciclina;
también se prefieren tetraciclina y azitromicina. La
eritromicina está aprobada para su uso en
mujeres embarazadas y niños.
 Vacunas
■ Necesita una respuesta inmune mucosa
localizada
■ Vacuna oral
■ No recomendado
■ Los viajeros tienen un riesgo muy bajo de contraer
enfermedades: 1-2 casos por millón de viajes
internacionales
■ No es rentable administrar vacunas en regiones
endémicas
■ Inmunidad breve e incompleta
■ Dos tipos aprobados para humanos:
■ Célula entera muerta
■ Vida atenuada
Vacunas: vacunas de células enteras
muertas

■ Proporciona antígenos para provocar

inmunidad protectora antitóxica y
antibacteriana.
■ Contiene:
■ 1 x 10 11 bacterias inactivadas por calor
 ■ Mezcla de V. cholerae O1 El Tor y cepas clásicas
■ 1 mg de subunidad B de la toxina del cólera

Vacunas: Vivas-Atenuadas
■ Elimina la necesidad de múltiples dosis de
antígenos no vivos.
■ Garantiza que se retengan antígenos cruciales
■ Se espera que imite una amplia inmunidad
conferida por una infección natural.
■ 85-90% de protección contra biovar clásico
■ 65-80% de protección contra el biovar El Tor
Gracias